结核菌分枝杆菌涂片抗酸染色

抗酸染色一、原理本试剂盒采用WHO推荐的Ziehl-Neelsen法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。

但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。

齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。

当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。

二、试剂石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液三、方法1.涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2.固定：常用高温进行固定。

即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。

要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色3.染色3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色10分钟或更久，无需加温3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色30秒钟3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块四、结果判定1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野五、注意事项1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥六、临床意义分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。

三种抗酸染色法检测痰结核分枝杆菌结果分析郑浩;柳晓金;齐海亮;冯建纯;朱桂云;郑立恒【摘要】Objective:To assess the value of applying three diverse techniques(direct smear method,flotation smear,centrifuging the liquored sputa and collecting bacteria method) to detection of the mycobacterium in sputum for diagnosis of pulmonary tuberculosis.Methods:The sputum samples were ob-tained from 1 500 suspected tuberculosis patients and respectively detected by the direct smear ,flotation smear and centrifuging the liquored sputa and col-lecting bacteria method for comparison of the positive sputum .Results:Direct smear,flotation smear,and centrifuging the liquored sputa and collecting bac-teria method revealed positive rate of 22.0% (244/1 500),22.0% (330/1 500) and 22.4% (336/1500),respectively.The difference was significant between direct smear and flotation smear,and direct smear and centrifuging the liquored sputa and collecting bacteria method .Of the three techniques,flo-tation smear and centrifuging the liquored sputa and collecting bacteria method led to higher detection rate (χ2 =78.68,P<0.001 for the former;χ2 =2.50,P>0.05 for the latter).However,the positive results were not significant between flotation smear and centrifuging the liquored sputa and collecting bacteria method(χ2 =2.50,P>0.05).Co nclusion:Centrifuging the liquored sputa and collecting bacteria method can be rapid and simple in detection of the mycobacterium in sputum with higher positive findings,thus it is worthy of wider clinical recommendation for diagnosis of pulmonary tuberculosis.%目的：探讨涂片法、漂浮集菌法和夹层杯法三种方法检测痰中结核分枝杆菌对于肺结核的诊断价值。

抗酸染色原理抗酸染色是一种常见的生物组织学技术，广泛应用于医学、生物学、动物学等领域。

它的原理是利用酸性染料与切片中的细胞组织相互作用，并通过特定的处理过程来使染料显色。

本文将介绍抗酸染色的原理、应用及技术流程等方面。

一、抗酸染色的原理抗酸染色的原理是利用酸性染料与细胞中不同的生物化学结构发生反应。

在酸性条件下，酸性染料带有负电荷，能够结合细胞质中的阳离子，如核蛋白、粘多糖等。

这些阳离子结合后，染料被固定在细胞质中，从而形成可见的色彩。

一般来说，抗酸染色会选择一些带有芳香环结构的染料，如苏木精、伊红等，它们能够与细胞核及其他结构中的核酸、蛋白质等有机物结合，从而显色效果更为明显。

二、抗酸染色的应用抗酸染色在医学、生物学及动物学等领域中有广泛应用。

其中，它在组织学领域应用最广泛。

在组织切片染色中，抗酸染色被用于显示特定的细胞和组织结构，如细胞核、细胞膜、细胞质等。

通过观察染色后的组织切片，可以更好地了解细胞内各种结构的分布和形态，进而推断细胞的生理、病理过程。

因此，在组织学研究中，抗酸染色技术是必不可少的。

除此之外，抗酸染色还可以用于检测肿瘤、感染、免疫反应等病理过程中的细胞或病原体。

比如，在肿瘤组织切片染色中，淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的染色可以帮助诊断和分级恶性淋巴瘤。

在感染组织切片染色中，抗酸染色可以检测到结核菌和分枝杆菌等病原体。

在免疫反应研究中，抗酸染色技术也有着重要的应用价值。

三、抗酸染色技术流程抗酸染色技术流程包括以下几个步骤：1. 取得组织样本组织样本可以是活体组织、死亡组织或培养细胞等。

对于取得的组织样本，需要进行必要的处理，如切片、固定、包埋等，以便后续处理。

2. 染色在抗酸染色中，主要选择苏木精、伊红等抗酸性染料。

通常先将切片置于染液中浸泡一定时间，使染料渗入组织样本内部，然后进行洗涤，以去除多余的染料。

洗涤后，还可以进行酸性解剖和再次染色等操作，以增强显色效果。

3. 脱水、清洁与封片通过脱水、透明化和封片等步骤，可以将染色后的切片制成玻璃片，并用石蜡或树脂等物质固定切片。

抗酸染色液说明【产品名称】通用名称：抗酸染色液【包装规格】100ml*2/盒、250ml*2/盒、500ml*2/盒【预期用途】抗酸染色液用于分枝杆菌、诺卡菌等细菌抗酸染色，包括荧光染色。

【检验原理】结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后，酸性酒精的作用亦是不容易把它脱色。

利用此特性并以增强的染色液予以染色，然后再以酸性酒精加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色)，也就易于鉴别。

【主要组成成份】试剂组成：抗酸染色液包括石碳酸复红染色液、亚甲基蓝染色液。

【贮存条件及有效期】有效期：未开封试剂有效期为24个月。

贮存条件：本试剂应贮存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的5~30℃室温环境。

【样本要求】待检标本应为菌株或有菌株的标本。

【检验方法】涂片经固定水洗后或石蜡切片脱蜡水洗后：1、将石碳酸复红染色液滴加于切片上，然后在微火加热至有蒸汽出现，水洗；2、用0.5%盐酸酒精分化至无红色染料脱落，水洗；3、亚甲基蓝染色液作对比染色20～60秒，水洗；4、酒精脱水，二甲苯透明、中性胶封固、镜检。

【检验结果的解释】抗酸杆菌呈红色，其他组织呈浅蓝色。

【检验方法的局限性】有些细菌有染色嗜变性，不一定完全是染色原因，应根据菌体形态加以确定。

【注意事项】1.该该染色液仅用于体外诊断。

2.涂片厚薄要均匀，自然干燥后再加热固定。

3.试剂贮存时，尽量避免高温及光亮环境，以免影响品质和效果。

标示有效期过后，请不要使用。

4.本品应由专业人士使用及进行结果的判断。

5.所用标本应视为具有传染性物质。

结核病诊断细菌学检验规程一、样本采集结核病诊断细菌学检验的样本主要包括痰液、肺泡灌洗液、血液等。

采集样本时应遵守无菌操作原则，避免交叉感染。

样本采集后应尽快送检，并注明采样时间、病人姓名、年龄、性别、疾病等信息。

二、样本处理1.痰液处理：将痰液放入无菌容器中，加入等量1%氢氧化钠溶液，混合均匀，作用15分钟后用无菌水冲洗2～3次，再取沉淀物涂片检查。

2.肺泡灌洗液处理：将肺泡灌洗液过滤后，离心沉淀，取沉淀物涂片检查。

3.血液处理：抽取病人静脉血5～10毫升，离心沉淀，取沉淀物涂片检查。

三、抗酸染色涂片染色采用萋-尼氏染色法，涂片干燥后用萋-尼氏染色液染色，然后用碳酸钠溶液冲洗，最后用无水乙醇脱色，晾干后镜检。

抗酸染色阳性表明涂片中有抗酸菌存在，可用于初步诊断结核病。

四、培养法将处理后的样本接种在罗氏培养基或改良罗氏培养基上，置37℃恒温箱中培养。

结核分枝杆菌在此培养基上生长缓慢，需时约6～8周。

培养阳性表明有结核分枝杆菌生长，可用于确诊结核病。

五、药敏试验药敏试验用于检测结核分枝杆菌对药物的敏感性。

试验方法有多种，如纸片法、比例法等。

药敏试验结果可作为选择和调整抗结核药物的依据。

六、鉴定与分型通过形态学、生化反应和基因鉴定等方法对结核分枝杆菌进行鉴定与分型。

这些方法有助于了解结核病的传播途径和特点，为预防和治疗提供依据。

七、质控与报告发放结核病诊断细菌学检验的质控包括室内质控和室间质评。

室内质控主要是对检验过程进行质量控制，包括试剂质量、仪器校准等；室间质评则是通过参加实验室间的比对试验来评估检验结果的准确性。

检验结果经审核后发放给临床医生或病人。

报告应包含样本采集时间、病人信息、检验方法、检验结果等内容。

细菌常用的染色方法细菌是一类微生物，它们在自然界中广泛存在，包括空气、土壤、水体等各种环境中。

为了研究细菌的形态、结构和功能，科学家们发明了各种染色方法。

本文将介绍细菌常用的染色方法，包括革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色。

一、革兰氏染色革兰氏染色是最常用的细菌染色方法之一，它是根据细菌细胞壁的组成差异来区分细菌的。

革兰氏染色的步骤包括：将细菌涂片烘干，然后用碘酒浸泡，再用乙醇洗涤，最后用碱性颜料（如紫色染料）染色。

通过革兰氏染色，细菌可分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类。

革兰阳性菌的细胞壁较厚，能保持紫色，而革兰阴性菌的细胞壁较薄，易被乙醇洗去紫色染料，然后再染红色。

革兰氏染色可以帮助科学家们快速区分细菌的类型，对于细菌的鉴定和分类具有重要意义。

二、抗酸染色抗酸染色是一种特殊的染色方法，用于检测结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌。

这些细菌具有特殊的脂质组分，使它们不易被一般染色方法染色。

抗酸染色的步骤包括：将细菌涂片加热，然后用碱性染料（如碱性红染料）染色，再用酸洗去多余染料，最后用蓝色染料（如甲基蓝）染色。

通过抗酸染色，结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌可呈现红色，而其他细菌则呈现蓝色。

这种染色方法对于抗酸杆菌的检测非常重要，可以帮助医生快速诊断结核病等疾病。

三、吉姆萨染色吉姆萨染色也是一种常用的细菌染色方法，它可以帮助科学家们观察细菌的形态和结构。

吉姆萨染色的步骤包括：将细菌涂片用吉姆萨染料（由蓝色和红色组成）染色，然后用水洗去多余染料，最后在显微镜下观察。

通过吉姆萨染色，细菌的细胞壁、细胞质等结构可以呈现出不同的颜色，帮助科学家们研究细菌的形态和结构特征。

吉姆萨染色在细菌学研究中应用广泛，对于揭示细菌的性状和特性非常重要。

细菌染色方法的研究和应用对于细菌学的发展和医学诊断具有重要意义。

除了上述介绍的革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色，还有许多其他的染色方法，如苏木精-伊红染色、格拉姆-玛尔基纳染色等。

这些方法都有各自的特点和适用范围，在细菌学研究和临床诊断中起到重要的作用。

痰抗酸染色法实验报告
痰抗酸染色法实验报告
引言：
结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，在全球范围内都有一定的感染率。

痰液中的结核分枝杆菌是结核病的主要致病因素，因此及早检测结核菌的存在对于疾病的预防与治疗都具有重要意义。

本实验通过痰抗酸染色法，对痰液样本中的结核分枝杆菌进行检测。

实验器材与试剂：
1. 应用气浮式石英炉
2. 血涂片镜片
3. 尼氏染色液
4. 碘酒
5. 脱色液
6. 新精巫微机控制带状电热器
7. 灭菌显微盖片
8. 生化气体培养蓄压针
实验步骤：
1. 首先，将痰液样本加热至80°C，保持30分钟，以杀灭其中的非结核分枝杆菌。

2. 用无菌无毒玻璃棒将痰液涂抹于血涂片上。

3. 放置血涂片于加热石英炉中，以100°C加热5分钟，以使细菌附着于玻璃片上。

4. 将玻璃片放入尼氏染色液中浸泡10分钟。

5. 将玻璃片除去超出染色液的部分后，放入碘酒中浸泡1-2分钟。

6. 用脱色液冲洗玻璃片2-3次。

7. 吹干玻璃片表面的液体，然后在显微镜下观察。

实验结果及分析：
通过显微镜观察，在痰液样本中，我观察到许多红色染色的结核分枝杆菌。

根据这些结构的形态特点以及对病原学、生理学的综合判断，可以确定这些结构确实是结核分枝杆菌。

结论：
本实验通过痰抗酸染色法，成功检测到痰液样本中的结核分枝杆菌。

该实验方法简单、方便且准确，可用于临床检测及结核病的诊断。

抗酸染色步骤及注意事项制片：（1）涂片：左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈）即可，或先滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一薄层。

拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

（2）干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰。

（3）固定：常用高温进行固定。

即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。

要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。

染色：（1）初染：滴加石炭酸复红溶液2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热5分钟，待标本冷却后用水冲洗。

（2）脱色：（3）复染：用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察: 1、油不要滴太多2、在调节焦距的时候要特别注意与载玻片之间的距离不要弄坏工具3、调节时应该从下往上调节4、在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。

5、用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。

如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。

在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。

6、油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。

结果判定:1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野质量控制：每次用卡介苗做阳性对照大肠埃希菌ATCC25922做阴性对照注意事项：1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥临床意义：分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。

抗酸染色法acid－fast staining method 1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．Ehrlich）
齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。

其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（Ziehl－Neelsen）染色法和齐尔-加贝特（Ziehl－Gabbet）染色法。

用染色后，用盐酸乙醇
分色，再用进行对比染色，即不再脱色而呈现的红色。

抗酸染色的原理：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。

但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难
被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。

齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也
不脱色。

当再加染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。

抗酸染色的染液配制：
1、
碱性复红酒精饱和溶液 10mL
5%石炭酸 90mL
2、3%盐酸酒精
浓盐酸 3mL
95%酒精 97mL
3、
美兰酒精饱和液 30mL
氢氧化钾（1:10000） 100mL
染色结果：
抗酸菌被染成红色，为抗酸阳性；其它细菌染成蓝色，为抗酸阴性。

背景细胞及杂质也被
染成蓝色。

注意事项：
1.染色程度可通过改变染色时间或染色温度做适当调整。

2.每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。

3.对皮肤、粘膜有强列刺激性和腐蚀性，使用时请穿实验服并戴一次性操作。

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版本号：161214
抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)
【产品组成】
【保存条件】
室温,避光,12个月
【产品概述】
分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般丌易着色。

传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。

分枝杆菌中的分枝菌酸不染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。

其中最具代表性是结核杆菌Ziehl －Neelsen 染色法，该法是WHO 推荐热染的方法。

抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)属于冷染色液，无需加热，相对较抗酸热染液安全。

其染色原理是在室温条件下，分枝菌酸不复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。

该染色法较改良Kinyoun 冷染法要深，更适用于常规抗酸染色，推荐该Kinyoun 冷染法作为实验室或临床上标准抗酸染色法。

【使用方法】
1、接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥。

2、滴加Kinyoun 复红染色液，染色5～10min 。

3、不必加热，蒸馏水冲洗。

4、用Kinyoun 脱色液脱色至无红色为止。

5、蒸馏水冲洗。

6、用亚甲蓝染色液染色30～60s 。

7、蒸馏水冲洗。

8、轻轻吸干水分，自然干燥。

9、油镜镜检。

【染色结果】
【注意事项】
1、每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。

2、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。