湖 北 生 物 科 技 职 业 学 院
课 时 教 案
讲 授 人 张薇 课 时 学时 序 号
课题内容 实训一 花粉生活力的测定 教学时间
设计思路 先讲后做，了解花粉生活力贮藏及生活力的测定方法和原理。
教学目标 知识目标：掌握花粉生活力测定的意义和测定方法
能力目标：会进行花粉生活力的测定
素质目标：培养学生的团队精神和动手能力
教学重、难点
及解决办法 教学重点：花粉生活力测定的原理和意义。
解决办法：通过多媒体结合案例讲解后学生动手操作，教师指导。
教学方法及手段 演示、学做
教学准备 多媒体课件、植物花粉、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、TTC
教学过程及内容
讲解花粉生活力测定的原理和方法
实际操作蔗糖琼脂培养法和染色法
教学过程 教师活动 学生活动 教案设计说明 时间分配
教学内容 讲解实训原理演示实训过程，布置实训任务 观看多媒体 结合实训过程讲解 20min
教学内容 指导实训 蔗糖琼脂培养法 学生练习思考 90min
教学内容 指导实训 染色法 学生练习思考 45min 教学内容 检查实训内容的掌握 记录实训结果完成实训报告 25min
教学反思
湖北生物科技职业学院教案附页
一、花粉生活力测定的意义
在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处 (地)而必须预先收集花粉。花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。
二、实训材料及仪器药品
园艺植物的雄花 、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、TTC
三、花粉生活力的测定方法
1.是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；
实验一 花粉收集、贮藏及花粉生活力测定
一、实验目的
1.掌握鲜花粉收集、储藏的方法及原理。
2.观察花粉在人工配制的培养基上的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程，为理解植物的生殖过程奠定基础。
二、实验原理
花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过延长花期解决，有的不得不进行花粉储藏，花粉贮藏对某些园林植物杂交育种具有重要的意义。通过花粉贮藏，它可以使一些迟开花的园林植物和早开花的园林植物进行杂交，或到较远的地方给母本授粉，花粉的贮藏与运输可以打破杂交育种中双亲时间上和空间上的隔离，扩大育种的范围。
花粉在贮藏期间的稳定性，与花粉壁外层（外壁）的性质和贮藏期间花粉原生质的代谢有关。在贮藏期间代谢调较少可溶性糖类和有机酸的花粉能够在较长期间保持其活力。花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。如一般木本植物花粉寿命很长，如在干燥凉爽的条件下，柑橘花粉能存活40～50d，椴树45d，苹果10～70d，樱桃30～100d，麻栎一年，叶培忠教授试验发现杉木的花粉可存活17年之久；而在草本植物中，如棉属花粉采下后24h存活只有65％，超过24h很少存活；多数禾本科植物的存活时间不超过一天，如玉米1～2d，水稻花粉在田间条件下3min就有50％丧失生活力，5min后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。一般在自然条件下自花授粉植物花粉寿命比常异花、异花授粉植物为短。花粉的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命要比二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。据亚达姆斯试验，苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。维霍夫试验中，丁香的花粉贮藏在干燥器中，15d以后发芽率降到50％；至20d时，仅有个别花粉发芽；到30d时，即全部死亡。因此，暂时不用的花粉，应立即在适宜的条件下贮藏，妥善保存。为保持花粉生活力则人为采取减低其代谢强度，保持其纯洁性，将其贮存于低温、干燥、黑暗，并较为稳定的环境条件下，以保持其活力。近年来，在贮藏花粉方面利用超低温（-192℃的液态空气或-196℃的液氮）、真空或降低氧分压以及快速冷冻干燥等方法，延长花粉生活力取得良好的效果及应用。 了解花粉的生活力对于农林生产和育种工作具有重要意义。在生产和杂交工作中需要进行的人工辅助授粉的杂交授粉，都需要收集和贮藏具有生活力的花粉，花粉的生活力除受植物本身的遗传决定外，同时受环境影响。不同来源的花粉生活力高低存在很大差异，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关健。在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时在植株开花时在用于授粉；为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或 一段时间储藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。
花粉生活力测定方法研究进展
摘要:总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉 法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词:花粉 花粉活力 测定方法
花粉是高等植物的雄性配子体,在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。 花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象,也是孢粉分析、蜂群培育、 药物制造、医疗及生理实验的重要材料。花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能 力。在农业生产及农业常规杂交育种的中,研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础 性工作。农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难,为解决这一难题,保 存花粉的活力成为重要手段,而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。不同种类植物 花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。因此,掌握花粉活 力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果,花粉生活力的检测方法可以分为四大类:①染色法;②萌发
测定法;③田间授粉检测法;④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法
1.1TTC 染色法
TTC 即 2,3,5-氯代三苯基四氮唑,它是一种氧化还原染料,水溶液无色。基本原理 是 [1]:当 TTC 渗入细胞后, 遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子,由无色的氧化型变成红 色还原型不溶于水的化合物,由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤:①配制 PH 为 7.17的磷酸缓冲液。 称取 0.832克磷酸氢二钠和
0.273克的磷酸二氢钾溶于 100ml 的蒸馏水中,调整 pH 为 7.17。② TTC 溶液配制。依据不同 植物称取 0.02~1.0g 的 TTC 溶于 100ml 的磷酸缓冲液中, 于棕色瓶中黑暗处保存。 ③染 色。取少量花粉置于载玻片上,加上一滴 TTC 溶液,用镊子搅拌均匀,盖上盖玻片,然 后放置于 35℃的恒温箱中染色 15~20min 。④镜检。于 10×10倍镜下观察,凡具有活 力的花粉被染成红色,部分丧失活力的呈现粉红色,无色的是的或不育的花粉粒。 凌春英 , 肖恩等的研究 [2]得出常温、黑暗条件下用 TTC 染色 12h 可达到较好的观察
精心整理
实验16?花粉活力的测定
在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法
【原理】
正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。
【器材与用具】
载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。
【试剂】
培养基：10%蔗糖，10mg/L硼酸，0.5%的琼脂。称10g蔗糖、1mg硼酸、0.5g琼脂与90ml水放入烧杯中，在100℃水浴中熔化,冷却后加水至100ml备用。
????【方法】
???1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。
2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱（或室温20℃条件下）中孵育，5~10min后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
????【注意事项】
???1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法 精心整理
【原理】
多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】
???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】
