酵母tRNA溶液
产品编号 产品名称 品牌 规格 说明书
GT0265-A 酵母tRNA溶液（粗提） WindowsBio 2ml 点击下载GT0265-A 酵母tRNA溶液（精提） WindowsBio 2ml
保存：低温运输，-20℃保存
核酸助沉剂，核酸杂交，RNA为探针的实验封堵剂！
组分说明：
成 份 GT0265-A GT0265-B
tRNA溶液粗提液
(10mg/mL) 2 mL -
tRNA溶液精提液
(10mg/mL) - 1.5 mL
使用手册 1份 1份
产品及特点：
本产品分A和B两个规格，浓度均为10mg/mL。A是酵母tRNA粗提液，用作制备更高纯度（如分子生物级）酵母tRNA的原材料。B是精提液，是经过本公司RNA纯化试剂盒纯化的分子生物学级别的酵母tRNA溶液，不含蛋白质和DNA污染，OD260/OD280在1.9左右，可直接用作微量RNA提取和回
收的助沉剂，也可以用作原位杂交、Northern杂交的封堵剂，对于探针为RNA的杂交试验尤其适用。
酵母转化
1、配TE/LiAc和PEG/LiAc.
TE/LiAc (2ml)：200ul 10XBuffer
200ul 10XLiAc
1600ul H2O
PEG/LiAc(2ml) :1.6ml PEG
200ul 10XTEBuffer
200ul 10XLiAc
2、挑菌斑。（Y187、AH109）用500ul ddH2O稀释。
3、6000rpm离心、去水，加50ul TE/LiAc。
4、将Carrier DNA沸水煮5min，立即放在冰上几分钟。
5、取1.5ml离心管按顺序加入以下试剂：
质粒：plasmid 100ng
Carrier DNA 5ul
酵母 50ul（TE/LiAc）
PEG/LiAc 500ul
30℃水浴30min，每10min摇一次。
6、加20ul二甲基亚砜（DMSO），42℃水浴20min，中间摇一次。
7、离心，加入500ul0.8%生理盐水，重悬，涂缺素皿（150-250ml），涂匀，30℃培养箱生长2-3天。
酵母RNA的提取和含量测定
一、实验原理
1、RNA的提取
工业上提取RNA通常选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法，这两种方法提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料，工艺较简单。
酵母细胞富含核酸，且核酸主要为RNA，含量为干菌体的2.7%-10%，而DNA含量较少，仅为0.3%-0.5%，故常用酵母作提取RNA的原料。
稀碱法是用NaOH使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和。偏酸性条件下RNA进入水相，而蛋白质和菌体沉淀。除去蛋白质和菌体的溶液用乙醇沉淀RNA或调pH至等电点（2.5）附近使RNA沉淀。
2、RNA含量的测定（苔黑酚法）
RNA与浓盐酸共热时，即发生降解。分子中的核糖转变为α-呋喃甲醛（糠醛），后者在氯化铁催化下与苔黑酚（3,5-二羟甲基苯）作用生成绿色复合物，可在670nm下用比色法测定含量。在RNA浓度为10~100μg/mL范围内，产物浓度与吸光度呈线性关系。
本法特异性较差，凡属戊糖均有此反应。某些己糖在持续加热后生成的羟甲基糖醛也能与苔黑酚反应，产生显色复合物。微量DNA无影响，较多DNA存在时，亦有干扰作用。可以利用RNA和DNA显色复合物的最大吸光吸收不同，且在不同时间显示最大色度加以区分。反应2min后，DNA在600nm呈现最大光吸收，而RNA在反应15min后，在670nm呈现最大光吸收。
二、实验器材
1、仪器：电子天平、抽滤瓶、布氏漏斗、离心机、烧杯若干、量筒(10mL、50mL)、pH试纸（1~14）、5mL吸管；试管*8、紫外分光光度计、水浴锅。
2、试剂：市售干酵母粉、0.2%氢氧化钠溶液、乙酸（A.R）、95%乙醇、无水乙醚（A.R）；标准RNA溶液（100μg/mL）、苔黑酚-三氯化铁试剂。
三、操作记录
1、RNA的提取
称取8.05g干酵母粉于100mL烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40mL，沸水浴加热30min，加热过程中经常搅拌冷却，加入乙酸数滴，使提取液呈微酸性（pH5~6），离心10~15min（4000r/min）。取上清液，加入两倍体积的95%乙醇，边加边搅。加毕，静置，待完全沉淀，离心5min（4000r/min），彻底去除上清液，可将离心管倒扣以彻底去除水分。沉淀用10mL95%乙醇悬浮，抽滤。滤渣先用95%乙醇洗涤2次，每次约10mL，继而用无水乙醚洗两次，每次约10mL，洗涤时可用细玻棒小心搅动沉淀。乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA。
1 0×TE Buffer
1M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)
组份浓度 1 M Tris-HCl
配制量 1L
配制方法 1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl
7.4 约70 ml
7.6 约60 ml
8.0 约42ml
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异
大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度 1.5 MTris-HCl
配制量 1 L
配制方法 1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.用浓HCl调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
0.5M EDTA 组份浓度 0.5 M EDTA (pH8.0)
配制量 1L
配制方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离水充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。 注意：pH值至8.0
时，EDTA才能完全溶解。
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试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成 保存 50次 100次 200次
酵母裂解液 室温 15 ml 30 ml 60 ml
蛋白沉淀液 室温 5 ml 10 ml 20 ml
DNA溶解液 室温 5 ml 5 ml 10 ml
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1. 环境温度低时酵母裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2. 蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：
本试剂盒用于快速的从酵母中提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下， 酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
产品特点：
1. 不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。
2. 快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。 杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://
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3. 结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
1. 吸取1.5ml 酵母培养物到一个1.5ml离心管； 12,000rpm离心2分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。
2. 高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。
3. 加入300μl酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1毫升的枪头反复吹打混匀。
