BDDE交联透明质酸凝胶修饰度的测定

分类号：Ｒ９

密级：公开单位代码：１０４２２

学号：２０１２１４１０５

．０▲东岁，弓

ＳＨＡＮＤＯＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ

硕士学位论文

ＴｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅ

论文题目：ＢＤＤＥ交联透明质酸凝胶修饰度的测定

ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅｉｎＢＤＤＥ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ

ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｈｙｄｒｏｇｅｌ

作者姓名

培养单位

专业名称

指导教师

合作导师杨彪

药学院

制药工程

郭学平研究员

２０１

５年５月２４日

万方数据原创性声明

本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独

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论文作者签名：拉画日期：型匹：玉：奠

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论文作者签名：雅趣导师签名：期：

垄！￡：。坠莶。

万方数据山东大学硕士学位论文

目录

摘要……………………………………………………………………………………ｌ

Ａｂｓｔｒａｃｔ．…………．……………………………………………………………………………………．………．．：；符号说明………………………………………………………………………………５

第一章绪论…………………………………………………………………………．６

１．透明质酸…………………………………………………………………………６

１．１结构…………………………………………………………………………一６

ｌ－２生理作用…………………………………………………………………………７

１．３来源……………………………………………………………………………………………………８

１．４性质……………………………………………………………………………８

１．５应用…………………………………………………………………………．．９

２．交联透明质酸凝胶……………………………………………………………．．１０

２．１羧基交联……………………………………………………………………１１２．２羟基交联……………………………………………………………………１ｌ

２．３ＨＡ与交联剂的连接方式…………………………………………………．１２

３．修饰度测定方法的研究概况…………………………………………………一１２

３．１间接法………………………………………………………………………１３

３．２直接法………………………………………………………………………．１４

４．本课题研究内容………………………………………………………………，．１６

第二章ＢＤＤＥ交联透明质酸凝胶的制备…………………………………………．１７

１．材料………………………………………………………………………………１７

１．１试剂…………………………………………………………………………ｌ７１．２仪器…………………………………………………………………………………………………．１７２．方法………………………………………………………………………………………………………．．１８

２．１ＨＡＦＧ的制备………………………………………………………………１８

２．２结构表征……………………………………………………………………ｌ８２．３吸水膨胀系数测定…………………………………………………………１８２．４流变学特性的分析…………………………………………………………ｌ８

］

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２．５样品形态表征………………………………………………………………１９

２．６ＢＤＤＥ在碱液中的稳定性试验……………………………………………１９

３．结果与讨论……………………………………………………………………～１９

３．１结构表征……………………………………………………………………１９

３．２膨胀系数结果………………………………………………………………２０

３．３流变学参数测定结果………………………………………………………２１

３．４ＳＥＭ形态表征结果…………………………………………………………２２

３．５ＢＤＤＥ在碱液中的稳定性结果……………………………………………２４

４．本章小结………………………………………………………………………一２４第三章ＨＡＦＧ酶艉研究……………………………………………………………．２６

１．材料………………………………………………………………………………………………………．２６

１．１试剂…………………………………………………………………………２６

１．２仪器…………………………………………………………………………２７

２．方法……………………………………………………………………………………………………．．２７

２．１ＨＡＦＧ的酶解………………………………………………………………．２７２．２酶解产物的ＳＥＣ分析………………………………………………………２７

２．３酶解产物的制各与定性分析………………………………………………２７

３．结果与讨论……………………………………………………………………一２８３．１酶解时间的确定……………………………………………………………２８

３．２酶解产物的ＳＥＣ分析结果…………………………………………………２８３．３酶解产物的定性分析………………………………………………………３０

４．本章小结…………………………………………………………………………３４

第四章ＨＡＦＧ修饰度的测定………………………………………………………．３５１．材料…………………………………………………………………………………………………３６

１．１试剂…………………………………………………………………………３６

Ｉ．２仪器…………………………………………………………………………………………………．３６

２．方法………………………………………………………………………………………………………．３６

２．１ｔ．ＭＯＤ的测定………………………………………………………………３６

２．２

ｃ—ＭＯＤ和ｐ－ＭＯＤ的测定…………………………………………………３６

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３．结果与讨论……………………………………………………………………．．３７

３．１ｔ－ＭＯＤ测定结果……………………………………………………………３７

３．２ｃ－ＭＯＤ和ｐ－ＭＯＤ的测定…………………………………………………３９４．本章小结…………………………………………………………………………４３

第五章上市ＨＡＦＧ产品的修饰度测定……………………………………………４４

１．材料………………………………………………………………………………………………………．４４

１．１试剂…………………………………………………………………………４４

１．２仪器…………………………………………………………………………………………………．４４

２．方法………………………………………………………………………………………………………．４５

２．１ｔ－ＭＯＤ的测定………………………………………………………………４５

２．２ｃ－ＭＯＤ和ｐ－ＭＯＤ的测定…………………………………………………４５２．３抗酶解实验…………………………………………………………………４５

２．４粘弹性实验…………………………………………………………………４５

３．结果与讨论……………………………………………………………………一４５

４．本章小结………………………………………………………………………一４７总结与展望…………………………………………………………………………～４９

１．本论文的研究成果……………………………………………………………一４９２．创新与不足……………………………………………………………………～５０

３．展望………………………………………………………………………………………………………．５０附图…………………………………………………………………………………．５１参考文献……………………………………………………………………………．６３

致谢……………………………………………………………………………………………………～６７

硕士期间发表论文…………………………………………………………………．６８

３

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ＣＡＴＡＬＯＧＵＥ

ＣｈｉｎｅｓｅＡｂｓｔｒａｃｔ………………………………………………………………………………………………１

Ａｂｓｔｒａｃｔ……………………．…………………………．．………………．……………………………．．………．．３

ＳｙｍｂｏｌｉｃＤｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．…．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．………．．…………．５

ＣｈａｐｔｅｒＩＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ……．．．…．．……．．…………．．．………．…．．……．……．．……．、…．……．…．．…。…．．６

１．ＨＡ……………………．……………………………．……………………………．………………………．．６

１．１ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＨＡ．………．．．……．．………．．…．…．…．……．．．…．．……．…．………．…．……．．…．．６

１．２ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌＦｕｎｃｔｉｏｎｏｆＨＡ………………………………………………………………．．７

１．３Ｓｏｕｒｃｅｏｆ】ｊＩＡ……………………………………．……………………………．…………………．．８

１．４Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ…．．…．…．．…………．…．……．．．…．．…．…．……．．．．………．……．．…．…．……．．…．…．．８１．５Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．．．…．．……．…．……………．．…．…．．．…．…．．．……．……．…，．…．…．……．．……．…．．９２．ＣｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄＨＡｈｙｄｒｏｇｅｌ…………………………………………………………………………１０

２．１ＣｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄｂｙＣａｒｂｏｘｙｌ……………………………………………………………………．．１ｌ２．２ＣｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄｂｙＨｙｄｒｏｘｙｌ……………………………………………………………………．．１１

２．３ＴｙｐｅｏｆＣｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ．……．。…．．．……．…．………．，…．，……．…．，…．……．……．…………．．１２３．Ｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．１２３．１ＩｎｄｉｒｅｃｔＭｅｔｈｏｄｓ…………………………………………………………………………………１３３．２ＤｉｒｅｃｔＭｅｔｈｏｄｓ．………．．……．．…………．……．．．…．．……．…．．．…．…．…．．……………．…．．．１４

４．ＣｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ……．……．．．…．…．…．．．……，．…．．…．…．．…．．…．…．．…．…．…．……．．１６

ＣｈａｐｔｅｒＩＩＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＢＤＤＥｍｏｄｉｆｉｅｄＨＡｈｙｄｒｏｇｅｌ……………．．………………………１７１．Ｍａｔｅｒｉａｌｓ…………………………………………………………………………ｌ７

１．１Ｒｅａｇｅｎｔｓ……………………………………………………………………………………………１７１．２Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ…．…．………．．…．……．…．…．．…………．………………．…．………．………．…．．．１７２．Ｍｅｔｈｏｄｓ．………．……．…．．…．…．…．……．…………．．…．…．…．…．…．…．．…．…．．…．．………．…．…．１ｌ；

２，１ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＨＡＦＧ…………………………………………………………………………．１８

２．２Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ………………………………………，………………．…………………．．……１８

２．３ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＳＲ………．…………………………．……………………………………．…ｌ８２．４ＲｈｅｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈ……………………………………………………………………………．．１８２．５ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈ………………………………………………………．………………．．１９

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