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草莓茎尖组培脱毒和种苗三级繁育体系的建立花秀凤1 陈 铣1 许 玲2(1福建省福州市蔬菜科学研究所,福建福州 350012;2福建省农业科学院果树研究所) 收稿日期:2006-07-18 作者简介:花秀凤(1973-),女,农艺师,从事蔬菜育种与推广研究 草莓常通过无性繁殖为生产提供种苗,而长期使用无性繁殖种苗易使品种退化,病毒感染严重,抗病力减弱,产量、质量、效益锐减,成为生产上迫切需要解决的问题。
组织培养(简称组培)技术是草莓脱除病毒的一种最经济有效的途径。
专家证明,草莓脱毒苗生长势强,抗病力提高,大果率增加,能增产30%～80%。
为此,福建省福州市蔬菜科学研究所从2000年开始进行草莓茎尖组培脱毒研究。
经过3年的实践,建立了较为完善的草莓脱毒苗三级繁育体系,产生了显著的社会效益和经济效益。
现总结如下:1 原原种的获得111 培养基的配制草莓茎尖组织培养需要配制2种培养基:Ⅰ,诱导分化和继代增殖培养基MS +6BA 1mg/L +NAA 011mg/L +3%蔗糖+017%琼脂;Ⅱ,壮苗生根培养基MS +115%蔗糖+017%琼脂。
112 接种母株的选择与处理选取生长健壮、能充分表现本品种优良性状的植株为母株。
为了避免因材料带菌而产生污染,须对母株进行杀菌,每周用500倍甲基托布津处理1次。
113 接种、增殖、生根培养5～6月取刚抽生的匍匐茎茎尖约1c m ,用流水冲洗015h,然后在75%酒精中浸泡1m in,再用2%次氯酸钠消毒10m in,无菌水冲洗3遍,在超净工作台上逐层剥去顶芽外面的叶片,用解剖刀切下带一个叶原基(长012～013mm )的生长点,立即接种于培养基Ⅰ上进行光培养。
2个月后愈伤组织周围长满丛生芽,把芽逐个切下,每瓶放5～6个芽继续增殖,每25d 可增殖1代(约5倍),一般增殖3代(约125倍)就可以获得所需的数量。
然后转入培养基Ⅱ进行生根培养。
一个月后根长2～5c m 时即可出瓶移栽。
草莓的组织培养一、茎尖1．概述通过对草莓茎尖离体培养的试验研究表明：取草莓茎尖为外植体，以0．35 mm大小为宜；用MS+0.5 mg/L 6-BA+O.2 mg/L NAA培养基．不定芽再生率高；以1/2 MS+O.1 mg/L IBA 生根效果最好。
2.结论（1）再生途径：草莓刚抽出的匍匐茎的茎尖（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理，最后用无菌水冲洗5～8次，接种于诱导培养基中。
诱导培养基为MS+0．5 mg／L6一BA+0．2mg／L NAA+3 蔗糖(w／v)+0．5﹪卡拉胶，pH值为5.6～5.8。
每个灭菌处理接种2O枚外植体，l5d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。
（3）培养基：①芽诱导试验，于MS培养基附加0．2 mg／L NAA、IAA、IBA不同种类生长素的培养基中，20d后调查记录幼芽分化情况。
②继代培养与扩大繁殖，MS培养基附加0.5 mg/L6-BA、0.01 mg/L NAA。
③根诱导试验, 用1/2 MS附加不同浓度(mg/I )IBA 有0．05、0．1、0．2、0．5及不加IBA的5个处理.（3）条件：培养基均在1～ 1.1大气压下热压灭菌20min。
培养温度(25±2)℃。
每日光照12h，光强2 000Lux。
（1）再生途径：用其花药、花蕾、叶、叶柄、子叶、下胚轴等作外植体进行离体培养。
（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理.（3）培养基：①MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(浓度单位,下同)；②MS+6一 BA0.5+KT 0.5；③MS+BA2.0+IAA 1.0；④MS+BA2.0+NAA0.5+2,4-D0.1；⑤MS+BA2.0+IBA0.1。
以上培养基各加CH 100 mg/L，蔗糖20g/ L(①为30g/ L)。
草莓的组织培养草莓(Fr agaria ananass a Ducde)是蔷薇科草莓属宿根性多年生常绿草本植物，是世界性水果。
草莓还有一定的医疗价值，如对胃肠病、贫血病有一定的疗效。
草莓是一年中成熟最早的水果，春末夏初即可采收投放市场。
草莓产业链较长，可加工成果酱、果汁、果酒、饮料、果糕、果脯及各种食品，同时是“农家乐”项目中的主要水果。
但是草莓生产长期以来，都依靠传统的分株繁殖法生产种苗，病毒病成为草莓生产的瓶颈，以茎尖培养法结合脱毒，用试管苗进行繁殖，是解决草莓生产中这一问题的途经。
1草莓茎尖培养之一（1）材料与方法品种为“丰香”，自田问选取健壮草莓母株上生长充实而小叶尚未展开的匍匐茎顶端约3～4 cm长的顶芽，用自来水冲洗2～3 h后，在超净台上进行灭菌处理。
先用小镊子将匍匐茎的外部大叶摘除，再用70％酒精处理30s，用饱和漂白精液浸泡15min，然后用无菌水冲洗3～5遍。
在双筒解剖镜下由外向内逐层剥去幼叶，直至半圆球的顶端分生组织充分暴露出来，切取0．2 mm、0．5 mm、1．0 m m左右大小茎尖接种于诱导培养基上，所有培养基均含有3％蔗糖，0．8％琼脂，pH值为 5.6。
培养条件：光照31．25 μm ol／m ／s，14 h／d，温度25±2 0C。
将分化的组培苗转接到增殖培养基上，增殖继代40 d或更长时间继代1次。
将生长健壮的组培苗转接到生根培养基上。
试管苗驯化，生根培养20 d后，将生根试管苗瓶口打开，培养室内放臵2～3 d取出后洗净其根部的培养基，移栽到炼苗基质上，温度保持在15～25~C，相对湿度85％-90％，适当遮荫，后期逐渐通风，增加光照，常规管理。
（2）结果激素配比：草莓茎尖的成活与生长都需要BA的参与，而对NA A并无要求。
B A的最适浓度在0．2～0．5 mg／L，而以BA 0．5 m g／L的成活率高，达66．7％茎尖大小：草莓茎尖成活率受剥取茎尖大小的影响非常大。
草莓营养液配制
草莓营养液的配制
名称用量（mg/L）扩大倍数称取量（mg）
硝酸钙2094180
硝酸钾3306600
硝酸铵7020*1400
硝酸氢二铵951900
硫酸镁2865720
硫酸锰·H2O 1.10651106.5
硫酸铜·5H2O0.0648746.875
硫酸钾0.111000*110
硼酸 3.53500
钼酸钠0.11110
硫酸亚铁13.9200*2780
乙二胺四乙酸二钠18.653730
Knop营养液配制
名称用量（mg/L）扩大倍数称取量（mg）
硝酸钙80016000
硝酸钾2004000
硫酸镁20020*4000
磷酸二氢钾2004000
硫酸亚铁13.9200*2780
注意事项：1、每盆草莓必须浇营养液200ml/次每次隔2-3天/次 2、品种一：共
3、池中草莓共51盆全喷用自配营养液
4、这星期前把池中的草莓
（mg）母液体积（mL）配1L培养基吸取量（mL）
100050用时调PH=6.0
2500.25用时调PH=6.0
10005用时调PH=6.0
称取量（mg）母液体积（ml)配1L培养基吸取量（mL）
100050用时调PH=6.0
10005用时调PH=6.0天/次2、品种一：共75盆自配营养液（红牌）18盆 Knop营养液（白牌）38盆这星期前把池中的草莓移栽入盆。
一、实验所需的仪器设备和用具。
二、实验安排与要求：将全班若干小组（6-7人），每小组配制500 mlMS固体培养基，三、边示范边讲解实验方法和步骤1、计算并填写培养基成分单计算公式：∨母液＝∨配制÷母液倍数∨激素＝∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2. 每组取500ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，用天平称4g琼脂放入蒸馏水中，在电炉上加热溶解。
称15g蔗糖放入溶解的琼脂中。
3. 按配方取出各种母液，放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中，用玻璃棒搅动混合，并加蒸馏水定容至500ml。
4. 用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8，可用PH精密试纸或酸度计测定。
5. 用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中。
6. 用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口，并做好标记。
7. 把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水至水位线。
盖好锅盖，上好螺丝，接通电源升温。
待锅内温度达100。
C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右时，打开排气阀排净锅内冷空气，然后关闭排气阀，继续加热至温度达到121。
C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）时，维持20~30min即可切断电源，让锅内气压自然下降，当压力降到零点后，打开排气阀，排出剩余蒸汽，再打开锅盖取出培养基及灭菌物品。
8. 培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后，存放于阴凉干燥洁净处待用。
四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验试验一：培养基的配制学号：200730030120 班级专业：07茶学姓名：张晓菊联系电话：136****3981实验目的：1、了解培养基的组成，掌握培养基的配制原理和步骤。
2、了解影响培养基配制的因素。
3、了解灭菌基本操作。
4、为植物的离体培养创造营养条件。
实验原理：培养基的类别，依据培养基中是否加有固化剂可分为固体培养基和液体培养基，前者因加有固化剂如琼脂或卡拉胶而呈固体状态，后者不加固化剂，培养基为液体。
草莓组织培养组织培养法是培养草莓茎尖分生组织，诱导出幼芽，然后通过腋芽的增殖迅速扩大繁殖，幼株经训化培育后，移栽到草莓园中使用。
组织培养不受环境影响，可进行工厂化生产。
优点是可有效脱除病毒，获得无病毒种苗；并且繁殖快，1年内一个分生组织可产生几千甚至数万株优质组培苗，可迅速推广新品种。
组织培养繁殖的操作程序如下：一、取材和消毒在植株生长季节，最好8月份，取园中建苗的匍匐茎4～5cm长，先用1％洗衣粉水洗刷表面污物及绒毛，再用流水冲洗1小时。
在超净工作台或无菌室无菌条件下，将冲洗后材料再截成2～3cm长，先浸入70％酒精中半分钟，再浸入10％漂白粉上清液或0.1％升汞水中消毒15～20分钟，然后用无菌水冲洗3～5遍。
将消毒后的材料用摄子夹到盛有滤纸的培养皿中（已经过高压灭菌），置于双目解剖镜下剥取茎尖分生组织，一般保留1～2个叶原基，切取0.2mm左右。
若草莓植株经过40～41℃热处理4～6周，可剥取0.3mm左右的茎尖分生组织。
切取茎尖分生组织后立即置于培养基中。
二、诱导芽分化（初代培养）切取草莓茎尖分生组织，接种在含有0.1×10-6赤霉素，0.2×10-6吲哚丁酸、1×10-6BA （6－苄氨基嘌呤、30g／L蔗糖，6～7.5g／L琼脂，pH值5.8左右，经1.1kg／cm2高压消毒15分钟的MS培养基上。
在温度25～30℃、光照强度1500～2000勒克司、每日光照10小时左右的培养条件下，20～30天后即开始分化新芽，新芽不断生长和增殖，形成小芽丛。
接着小芽丛萌发，约经3个月，培养基上的一簇无根小植株即可长成2～3cm高。
将附加6-苄氨基嘌呤浓度控制到（0.2～0.4）×10-6，也可以获得较好的芽分化。
三、小植株增殖（继代培养）切取芽丛上小植株，在芽分化培养基上继代培养即可达到小植株增殖效果。
在培养基上适当提高6-苄氨基嘌呤浓度可提高增殖效果。
植株的增殖倍数因品种和培养基的不同有所差异。
草莓的花药培养摘要草莓传统繁殖易受病毒感染，使产量大幅度下降。
而利用组织培养中的花药培养技术使其脱毒率可达100%。
概述了草莓花药培养的一般方法，影响草莓花药培养的各种因素，如基因型、培养基成分、培养方式和环境、预处理等；还探讨了各种因素的最佳应用。
关键词草莓花药培养；发病症状；影响因素草莓（Fragari aananassa Duch）是蔷薇科草莓属多年生草本植物，果实鲜艳美丽、芳香浓郁、柔软多汁，且富含糖、蛋白质、磷、钙、铁及大量维生素和有机酸。
除鲜食外，还可加工成果浆、果汁、果酒、糖水罐头及各种冷饮和速冻食品，深受广大消费者欢迎。
由于传统繁殖方法病毒感染严重，产量低下，而且繁殖系数低、速度慢，不能满足大规模生产的需求。
而采用组织培养方法，既可快速繁殖，满足大规模生产的需求，又可以减少病毒、恢复种性、提高产量等。
培育草莓无病毒苗的主要方法有热处理法、茎尖培养法和花药培养法等。
其中花药培养法脱毒率可达100%。
利用花药组培再生植株，主要基于植株在形成性器官、性细胞时，部分或全部病毒被脱离。
其优点是从愈伤组织形成到分化出茎叶过程中，可以脱除病毒，并且脱毒率比较高。
国内外研究表明，草莓花药培养所获植株不带病毒，其生长发育表现优于母株，可省去病毒鉴定程序，可以在病毒种类不清和缺乏指示植物鉴定条件下使用[1]。
1草莓病毒病的症状及发病条件1.1症状及为害情况草莓感染病毒后，特别是感染单种病毒，大多症状不显著或者难以看出症状，称为隐症。
主要表现为长势衰弱、退化，如新叶展开不充分，叶片小型化、无光泽，失绿变黄，叶缘部位失绿更严重，叶片皱缩、扭曲、群体矮化、坐果少、果型小、产量低。
草莓病毒种类繁多，现约有28种，我国产区普遍存在有4种，即草莓斑驳病毒（SMoV）、草莓皱缩病毒（SCrV）、草莓轻型黄边病毒（SMYEV）和草莓镶脉病毒（SVBV）。
我国草莓产区这4种病毒单一品种带毒率在80%以上，2种病毒复合感染率在20%～30%，3种病毒复合感染率也有3%左右，单一病毒感染植株可使草莓减产20%～30%，2种病毒复合感染减产可达50%，栽培年限越长，感染病毒种类越多，发病受害程度越重。
草莓组织培养与快速繁殖技术作者：于超，孙秀霞，薛琳来源：《新疆农垦科技》 2017年第2期摘要：以“红颜”草莓的匍匐茎尖为外植体，选择附加不同激素组合的MS培养基为诱芽培养基和继代培养基，以1/2MS为生根培养的基本培养基，对“红颜”草莓的组织培养及快繁进行研究。
结果表明：草莓茎尖在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L培养基上能很好地诱导不定芽形成，其诱导率高达80％；继代增殖培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+IAA0.5mg/L+GA1.0mg/L时增殖系数较高；生根培养基为1/2MS+IAA0.5mg/L时生根率可达99％，移栽至田间后，成活率高且匍匐茎繁殖能力强。
关键词：“红颜”草莓；组织培养；激素；快繁技术草莓是蔷薇科多年生草本植物，营养丰富、果实鲜艳、柔软多汁，且富含糖、蛋白质、磷、钙、铁及大量维生素和有机酸，被誉为“水果皇后”，是一种具有医疗价值的高档水果佳品，深受人民喜爱[1]。
草莓繁殖主要靠匍匐茎分株提供种苗，效率低，速度慢，不能满足大规模生产的需求；而且在长期无性繁殖中，容易导致病毒感染严重，表现为植株矮化、畸形果比例增加，多伴随有花叶、黄边、斑驳等多种症状，产量低下，种苗退化，产量和品质下降。
利用组织培养对草莓进行快速繁殖获得大量脱毒苗是解决这一问题的有效途径，它不仅可以快速繁殖大量优质草莓种苗，更有利于品种提纯和更新，减少病毒感染，提高产量和品质，是促进草莓产业化的有效途径[2]。
目前，有关草莓组培的报道很多，但不同品种草莓的特性不同，培养方法也有差异[3-5]。
“红颜”草莓因其具有耐低温能力强、连续结果性强、抗病性强、产量高、果型大、口味佳、外观漂亮、商品性好等优点，普遍被认为是一个很有发展前途的优良品种。
本文以“红颜”草莓的茎尖为外植体，进行组织培养，观察了草莓组织培养各个阶段的最佳生长条件，以期为“红颜”草莓试管苗的工厂化生产奠定基础。
草莓育秧过程实验报告一、实验背景草莓是一种常见的水果，深受人们喜爱。
在日常生活中，我们经常购买到的草莓大多是通过育秧之后种植而来的。
草莓育秧是种植草莓的重要环节，对于草莓的品质和产量具有重要影响。
为了深入了解草莓育秧的过程，本次实验旨在通过观察和记录草莓育秧的具体过程，探究它的培养条件以及如何提高草莓的成活率和生长速度。
二、实验材料和方法1. 实验材料- 草莓种子- 培养基：蛋白胨、维生素C、蔗糖、琼脂- 无菌耗材：试管、培养皿、移液器、金属钳等- 实验设备：显微镜、恒温培养箱、实验室天平等2. 实验方法1. 制备培养基：将蛋白胨、维生素C、蔗糖、琼脂按一定比例混合，加入适量的蒸馏水溶解，制成培养基。
2. 制备培养皿：将培养基倒入培养皿中，约占据容积的三分之二，待凝固。
3. 种植草莓种子：取适量的草莓种子，使用无菌移液器，将种子均匀地播撒在培养皿上。
4. 观察草莓种子的发芽和生长情况：将培养皿放置在恒温培养箱中，设置适宜的温度、湿度和光照条件，定期观察和记录草莓种子的发芽和生长情况。
5. 统计实验数据并分析：根据观察和记录的数据，对草莓种子的发芽率、生长速度等进行统计和分析。
三、实验结果和分析1. 草莓种子的发芽情况经过观察和记录，我们发现草莓种子在适宜的温度、湿度和光照条件下，在培养基上发芽生长良好。
发芽率较高，约为80%。
2. 草莓种子的生长速度草莓种子在培养基上的生长速度较快，大约经过5天左右，种子的根部开始生长，6-7天后出现幼苗。
10天后，草莓幼苗具备一定的生长能力，可进行移栽。
3. 影响草莓种子生长的因素在本次实验中，我们对草莓种子的生长进行了观察，并发现以下因素可能影响草莓种子的发芽和生长：- 温度：温度过高或过低，都会影响草莓种子的发芽和生长速度。
过高的温度会导致种子变干，无法发芽；过低的温度则会使种子无法生长。
- 湿度：适宜的湿度能够提供充足的水分供给，促进草莓种子的发芽和生长。
