培养基及配制
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常用培养基及添加剂的配制
1．牛心脑浸汁-辅助琼脂：（BHI-S）BHI 琼脂100mL氯化血红素-维生素K1 1mL脱纤维蛋白血（兔血）5-10mL 2．胰蛋白水解物-大豆琼脂（TS）胰蛋白水解物（或胰蛋白胨） 1.5g大豆胨0.5gNacl 0.5g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸液0.4mL琼脂 2.0g蒸馏水加至100mL 3．Gifu厌氧培养基：（GAM）胰蛋白胨 1.0g大豆胨0.3g多价蛋白胨 1.0g酵母提取物0.5g肝浸汁10mL VPI盐溶液0.2g牛肉浸膏5mL盐酸半胱氨酸0.4mL 旈基乙醇酸钠0.03g 葡萄糖 1.0g 琼脂 1.8-2.0g 刃天青（0.1%）0.5g 蒸馏水加至100mL 4．Rogosa 乳杆菌选择培养基（LS）胰蛋白水解物（或胰蛋白胨） 2.0g酵母提取物 1.0g琼脂4g葡萄糖 4.0g (储存液)磷酸二氢钾 1.2g 12g枸橼酸三铵0.4g 4g硫酸镁（MgSo4 7H2O） 1.0g 10g硫酸锰（MnSo4 4H2O）0.4g 4g硫酸亚铁（FeSo4 7H2O）0.08g 0.8g醋酸钠（CH3COONa 3H2O）(乙酸钠) 5g 50g冰乙酸（99.5%）0.264mL 2.64mL聚山梨酯-80 0.2g 2gDH2O 200mL 200mL（每100mL培养基加10mL）5．TPY培养基胰蛋白胨 3.0g酵母提取物0.8g葡萄糖 2.0g磷酸二氢钾 1.2gK2HPO4 3H2O 0.4gNaCO30.4gNaCl 0.4gDH2O 200mL琼脂 2.5g /200mL6．普通血琼脂培养基（BA）牛肉浸膏（0.5-1.0）g蛋白胨 1.0gNaCl 0.5gK2HPO4 2.0g酵母提取物0.5g葡萄糖 1.0g琼脂 1.8g蒸馏水加至100mL7．轻唾培养基（MS）胰蛋白胨 1.0g示胨0.5g蔗糖3-5g（可根据需要将蔗糖量增至20g）葡萄糖0.1gK2HPO4 3H2O 0.53g琼脂 2.0g0.1%曲利本蓝7.5mL0.1%结晶紫0.8mL蒸馏水加至100mL8．轻唾-杆菌肽琼脂（MSB）MS琼脂（蔗糖含量为20%）100mL杆菌肽溶液（200U/mL）0.1mL灭菌MS琼脂50℃左右时加入杆菌肽溶液，混匀倒板9．轻唾-磺胺二甲嘧啶琼脂（MS磺胺琼脂）MS琼脂100mL*磺胺二甲嘧啶（5%） 1.0mL*1%的亚碲酸钾溶液0.28mL灭菌MS琼脂冷却至25℃时加入*10．TYCSB琼脂胰蛋白酶水解物 1.0g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸溶液0.4gK2HPO4 3H2O 0.53g蔗糖20g琼脂2gDH2O 100mL灭菌后冷却至50-55℃时加入杆菌肽溶液（200U/mL）0.1mL,混匀倒板11．Rogosa 乳杆菌选择培养基（LS）胰蛋白水解物（或胰蛋白胨） 1.0g酵母提取物0.5g磷酸二氢钾0.6g枸橼酸三铵0.2g葡萄糖 2.0g硫酸镁（MgSo4 7H2O）0.5g硫酸锰（MnSo4 4H2O）0.2g硫酸亚铁（FeSo4 7H2O）0.04g醋酸钠（CH3COONa 3H2O）(乙酸钠) 2.5g冰乙酸（99.5%）0.132mL聚山梨酯-80 0.1g琼脂 1.8gDH2O 100mLLS盐溶液的组成：MgSo4 7H2O 5.57gMnSo4 2H2O 1.20gFeSo4 7H2O 0.34gDH2O 50 mL混合上述成分并加热使之溶解。
培养基及其配制
蛋白：
☺作用：
☺对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用， 但对器官的分化作用不明显。
☺注意：其成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。
2.活性炭
☺作用：活性炭结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作 用它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质。 ☺浓度: 0.5—l0g／L。
BL（Brown和 Lawrene,1968）
成分与MS类似
BM(Button,1975)
成分与MS类似，仅将盐酸硫胺素除 去，蔗糖为3%
ER(Eriksson,1965)
☺形式：MgSO4·7H20
☺Ca：
☺作用：Ca是构成细胞壁的一种成分，对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用 ☺形式：CaCl2·2H2O。
2.微量元素：
☺主要元素：Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。
☺Fe:
☺作用： ☺是某些酶的组成成分：氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶
☺是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和 幼苗转绿有促进作用。
生长。
☺ 作用：
☺ 糖作为碳源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架 ☺ 为细胞的呼吸代谢提供底物与能源 ☺ 同时维持一定的渗透势，并且能够维持一定的渗透压
（一般在1.5～4.1×10５Pa）。
☺ 浓度：在2%—3%，常用3%。高压灭菌时，一部分糖会发
生分解，制定配方时要给予考虑。 ☺ 在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。
☺形式：FeSO4·7H20和Na2—EDTA ☺思考：为何不用Fe2（SO4）3，和FeCl3？
☺B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少 的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。
（二）有机营养成分
☺作用：
☺对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用， 但对器官的分化作用不明显。
☺注意：其成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。
2.活性炭
☺作用：活性炭结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作 用它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质。 ☺浓度: 0.5—l0g／L。
BL（Brown和 Lawrene,1968）
成分与MS类似
BM(Button,1975)
成分与MS类似，仅将盐酸硫胺素除 去，蔗糖为3%
ER(Eriksson,1965)
☺形式：MgSO4·7H20
☺Ca：
☺作用：Ca是构成细胞壁的一种成分，对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用 ☺形式：CaCl2·2H2O。
2.微量元素：
☺主要元素：Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。
☺Fe:
☺作用： ☺是某些酶的组成成分：氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶
☺是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和 幼苗转绿有促进作用。
生长。
☺ 作用：
☺ 糖作为碳源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架 ☺ 为细胞的呼吸代谢提供底物与能源 ☺ 同时维持一定的渗透势，并且能够维持一定的渗透压
（一般在1.5～4.1×10５Pa）。
☺ 浓度：在2%—3%，常用3%。高压灭菌时，一部分糖会发
生分解，制定配方时要给予考虑。 ☺ 在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。
☺形式：FeSO4·7H20和Na2—EDTA ☺思考：为何不用Fe2（SO4）3，和FeCl3？
☺B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少 的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。
（二）有机营养成分
培养基配方
一、哺乳动物培养基1、DMEM培养基DMEM培养基低糖(干粉) D2902 10X1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L的葡萄糖。
不含酚红和和碳酸氢钠。
50L每升培养基含10.0g干粉。
配制时每升加3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖（干粉）D5523 10×1L 含L-谷氨酰胺和1000 mg/L葡萄糖，不含碳酸氢钠。
2×5L每升培养基含10.0g干粉。
配制时每升加3.7g碳酸氢钠。
5L50L DMEM培养基低糖（干粉）D5030 10×1L 不含L-谷氨酰胺，葡萄糖，酚红，丙酮酸钠和碳酸氢钠。
10L每升培养基含8.3g干粉。
配制时每升加1.0g葡萄糖，0.584g 50LL-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖（干粉）D5280 10×1L 可以高压消毒。
10L含1000 mg/L的葡萄糖。
不含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。
50L每升培养基含9.6g干粉。
配制时每升加0.584g L-谷氨酰胺和3.7g碳酸氢钠。
DMEM培养基低糖（液体）D5546 500ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠，不含L-谷氨酰胺。
用盐6×500ML 酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。
使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。
24×500ML1L6×1L DMEM培养基低糖（液体）D5921 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖和碳酸氢钠，不含L-谷氨酰胺和酚红。
500ML用盐酸维生素B6代替盐酸吡哆醛。
使用前每升加入0.584g L-谷氨酰胺。
6×500MLDMEM培养基低糖（液体）D6046 100ML 含有1000 mg/L葡萄糖，L-谷氨酰胺和碳酸氢钠。
用盐酸维500ML 生素B6代替盐酸吡哆醛。
6×500ML1LDMEM培养基低糖（液体）D2429 100ML 1×的培养基含有1000 mg/L的葡萄糖。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基（Culture medium）是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。
常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。
下面列举了一些常用的培养基配方。
1. LB培养基（Luria-Bertani medium）成分：-牛肉提取物：10克-酵母提取物：5克-热可溶性淀粉：10克-氯化钠：10克-水：1升2. NB培养基（Nutrient broth）成分：-牛肉提取物或肉蔻精：8克-酵母提取物：4克-葡萄糖：4克-水：1升3. MacConkey培养基成分：-水解动物蛋白：17克-中和胆盐：1.5克-中性红：0.03克-水：1升4. TSB培养基（Tryptic soy broth）成分：-大豆胨：17克-酵母提取物：3克-水：1升5. BHIA培养基（Brain Heart Infusion Agar）成分：-脑心汤固体：37克-水：1升6.R2A培养基成分：-水解酵母提取物：0.5克-蛋白胨：0.5克-葡萄糖：0.5克-脱脂乳粉：0.5克-黄豆粉：0.5克-高氯酸钠：0.3克-多聚体1466：0.05克-水：1000毫升7.比尔斯氏培养基（BHI培养基）成分：-大豆胨：37克-脑心汤固体：2克-水：1升8. 培养基199（Medium 199）成分：-高锰酸钾：0.015克-硫酸：1.55克-磷酸一氢钠：0.184克-高氯酸钠：8.0克-溴酚蓝：0.4克-d-葡萄糖：5.55克-l-谷氨酸：40.525克-苏打粉：0.84克-水：1升9. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）成分：-苔藓胶原酸：1克-乳糖：1克- 谷氨酸：584mg- 水：1000ml这只是一小部分常见的培养基配方，实际上有很多种不同的培养基，它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。
不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。
微生物实验室常见20种培养基配方大全
微生物实验室培养基配方大全一、糖发酵管成分：牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠2g0.2％滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLPH 7.4制法1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶1000 mL，121℃高压灭菌15min。
另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。
将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。
蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。
迟缓反应需观察14~30d。
二、乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨 20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖 10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mL制法：将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
三、5％乳糖发酵管成分：蛋白胨 0.2g氯化钠 0.5g乳糖 5g2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL蒸馏水 100mLpH 7.4制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。
将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121 ℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。
在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。
四、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）成分：磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mL制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1mL ，121℃高压灭菌15min。
甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。
滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。
各种培养基的制作方法
配方一萨氏(Sabouraud's)培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。
1、营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克NaCl 0.5克水 100毫升pH 7、0～7、2在烧杯中加水,称取牛肉膏、蛋白胨与NaCl,加热溶化后,调节pH值至7、0～7、2。
分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌即成。
常用于培养细菌。
2、营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。
常用于培养细菌。
3、肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克NaCl 5克pH 7、1～7、2取新鲜牛肉500克,去净脂肪、筋腱后,绞碎或剁碎,加水1000毫升浸泡,15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。
用纱布将肉汁过滤,补足失水。
向肉汁中加入蛋白胨与食盐。
将肉汁加热,放入苏打(碳酸钠)至红色,调整pH值。
分装,高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌得培养基用棉花滤去凝集得蛋白质,制成液体培养基,如需制成固体培养基,可在每100毫升液体中加入2克琼脂,加热溶化后,分装,再次进行高压蒸汽灭菌。
常用于培养细菌。
4、高氏一号培养基(淀粉琼脂培养基)可溶性淀粉 2克K2HPO4 0.05克MgSO4·7H2O 0.05克KNO3 0.1克NaCl 0.05克FeSO4 0.001克琼脂 2克水 100毫升pH 7、2～7、4在烧杯中加水95毫升,加热至沸腾,取可溶性溶粉2克,用5毫升水调成糊状,倒入沸水中与匀。
再称取其它药品,陆续加入烧杯内(待一种药品溶解后,再加入第二种药品)。
待全部药品溶解后,停止加热,补足失水,调pH值至7、2～7、4。
分装后,高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。
5、马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH称取200克马铃薯片,加水1000毫升,煮沸半小时,用纱布过滤,补足失水。
培养基配方及配置
培养基配方及配置
一般来说，培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分，包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分，如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分，如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置：
1.基础培养基成分：
- 水：900ml
-蛋白胨：10g
-酵母提取物：5g
-NaCl：5g
2.添加剂：（可根据实验需求进行必要的添加）
- 抗生素（如氨苄青霉素）：100μg/ml
- 抗菌剂（如氯霉素）：25μg/ml
3.配制方法：
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中，并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中，加水至1000ml，并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2（一般使用缓冲液进行调节）。
-用自制滤纸过滤器滤过，将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂，将相应的药物加入培养基中，并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌，或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程，不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时，需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度，并注意配制和保管过程中的无菌操作，以确保培养基的质量和有效性。
常用25种培养基详细配方
一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl 5g琼脂15—20g水1000mlpH 7．0—7．21．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
二、淀粉琼脂培养基(高氏1号培养基，培养放线菌用)可溶性淀粉20gKNO31gNaCl 0．5gK2HPO40．5gMgSO40．5gFeSO40．01g琼脂20g水1000mlpH 7．2—7．4配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅拌边加水及其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。
1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
三、查氏培养基(培养霉菌用，实验16)NaNO32gK2HPO41gKCl 0．5gMgSO40．5gFeSO40．01g蔗糖30g琼脂15—20g水1000mlpH 自然1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用)葡萄糖10g蛋白胨5gKH2PO41gMgSO4·7H2O 0．5g1/3000孟加拉红(rose bengal，玫瑰红水溶液)100ml琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800ml0．56kg/cm2(8磅/英寸2)，112．6℃灭菌30分钟。
临用前加入0．03%链霉素稀释液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
五、马铃薯培养基(实验16)马铃薯200g蔗糖(或葡萄糖) 20g琼脂15—20g水1000mlpH 自然马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml。
1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。
六、麦芽汁琼脂培养基(实验15)1．取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，置15℃阴暗处发芽，上盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
2．将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴锅中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于细菌、真菌、酵母等微生物的生长和繁殖的基质。
不同的微生物对培养基的要求不同，因此配方也会有所差异。
下面是一种常用的培养基配方及配制方法。
1.碳源：常见的碳源包括葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
碳源的添加能够提供微生物的能量和碳原子。
2.氮源：常见的氮源包括氨基酸、尿素、硝酸盐等。
氮源的添加能够提供微生物生长所需的氮元素。
3.矿物质：常见的矿物质包括钠、钾、氯等。
矿物质的添加能够提供微生物生长所需的微量元素。
4.生长因子：一些微生物对特定的生长因子具有依赖性，例如维生素和氨基酸等。
5.pH缓冲剂：常见的pH缓冲剂有磷酸盐缓冲液、琼脂等，用于调节培养基的pH值。
6. 凝固剂：常见的凝固剂包括琼脂、Agar等，用于使培养基变成固体状。
培养基配制方法：1.按照配方将所需的各种成分加入适量的蒸馏水中。
注意要先将一些难溶的固体成分溶解后再加入。
2.配制的过程中要注意无菌操作，使用无菌的容器和仪器，避免细菌及其他微生物污染。
3.将配制好的培养基混合均匀，使各个成分充分溶解。
可以通过搅拌或加热溶解等方法进行混合。
4.调节培养基的pH值。
使用酸碱试剂（如盐酸和氢氧化钠）进行调节，直到达到适合所需微生物生长的pH值范围。
5.如果需要固体培养基，可以加入适量的凝固剂（如琼脂）。
溶解后加入培养基中，然后将培养基煮沸消毒使凝结。
6.将配制好的培养基装入适量的培养皿或试管中。
7.灭菌处理。
使用高压灭菌器或自动培养箱等设备进行灭菌处理，以杀死培养基中的微生物。
通过以上步骤，就可以得到配制好的培养基。
根据不同的微生物要求和实验需要，可以调整培养基的成分和浓度，以获得最适合微生物生长和繁殖的环境。
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No MS salts 没有任何生长特征
MS salts 0.47 g. l-1 长出更多的根
MS salts 9.52 g. l-1
长大量的再生苗而 无根
**
愈伤组织缺无机营养表现症状
N----某些愈伤组织出现花青甙，没有导管形成
N、P或K----细胞过度增大且形成层减少
S----愈伤组织非常明显褪绿
Fe----细胞分裂停止
B----细胞分裂和细胞伸长迟缓
Mg和Mn----影响细胞伸长
2.1维生素 2.2 肌 醇
2 有 机 物
2.3天然复合物
2.4 氨基酸
2.1 维
Hale Waihona Puke 生素种类： 硫胺素---维生素B1 VB1 吡哆素---维生素B6 VB6 烟 酸---维生素B3 Vpp 抗坏血酸---维生素C Vc 以及B5、生物素、叶酸。 浓度：0.1－1.0mg/L 作用： VB1 VB6 Vpp Vc 促愈伤组织产生，提高活力 促根生长 与代谢和胚发育有关 防组织褐变
（4）母液配制的药品与器材
1）药品：配制MS培养基所需的药品、生长调节物 质、蒸馏水、1mol/L的NaOH，1mol/L的HCl 2）器材：各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、 母液瓶、标签、冰箱等。
（5）母液配制（以MS培养基为例）
无机大量 母液 有机物母液
激素母液
无机微量母液
铁盐母液
配制MS培养基时母液的计算
4.2 细胞分裂素（CTK）
（1）种类：Kt---激动素
BAP---苄氨基嘌呤 2－iP---异戊烯腺嘌呤 ZT-玉米素 TDZ
（2）作用：启动脱分化、细胞增殖，诱导愈伤组织芽
分化、芽增殖，丛生芽。
（3）浓度：0.05－10.0mg/L （4）配制：溶于稀酸或稀碱
激素配比模式
生长素与细胞分裂素：它们的比例决定着发育的方向，是愈伤 组织、长根还是长芽。
一、培养基
成分
配制 技术
培养基
种类
1 无机盐 培 养 基 的 成 分 2 有机物 3 碳源和能源 4 植物激素 5 琼脂
6 辅助物质
1 无 机 盐
元素名称 N 大量 P 元素 K (≥0.5mmol/L) Ca Mg S Fe 微量 B 元素 Mn (≤ 0.5mmol/L) Cu Mo Cl 添加形式 KNO3, NH4NO3 KH2PO4 NaH2PO4 KCl KNO3 CaCl2 · 2H2O Mg2SO4 ·7H2O FeNa2-EDTA H3BO3 MnSO4 CuSO4 Na2MoO4 ·2H2O CaCl2 · 2H2O
• pH值对不同植物的影响会有差异，如玉米胚乳愈 伤组织在pH值7.0时鲜重增加最快，在pH值6.1时 干重增长最快。
不同植物对培养基最适pH值的要求不同(见表)
种类
杜鹃
越桔 蚕豆 番茄
最适pH值
种类
最适pH值
4.0
4.5 5.5 5.7
月季
胡萝卜、石刁柏 桃
5.8
6.0 7.0
二、 培养基的制备
天然复合物
水解酪(乳)蛋白：
浓度100-200mg/L， 多用于微茎尖培养。
马铃薯提取液： 对pH值缓冲大，用量 150-200g/L，使苗壮。
其它：
2.4 氨基酸
种类：甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、丝氨酸、丙
氨酸、半胱氨酸以及酰胺类物质（如天门冬酰胺）
和多种氨基酸的混合物（如水解酪蛋白、水解乳蛋
2）微量元素 在微量元素中，铁的使用最大，铁 是一些氧化酶的组成成分。同时又是叶 绿素形成的必要条件。 由于培养基的pH较高，所以培养中 几乎都使用不易分解的乙二胺四乙酸铁 这种鳌合物来防止铁的沉淀。
• 硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关 系； • 铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根 的生长； • 锰参与植物的光合、呼吸代谢； • 钼参与氮素的代谢； • 氯是光合作用水光解的活化剂。 • 微量元素的主要作用是作为酶的辅助 因子或激活剂参与代谢的调节。
1 水和药品
• 水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过 程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少 的物质。 • 配制培养基母液时要用蒸馏水或重蒸馏水，以保 持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发 霉变质。 • 大规模生产时可用自来水。 • 但研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不 良效果。
6.4 其它成分： AgNO3 ： • 作用：吸附乙烯，促进茎芽分化，防玻璃 化苗、早衰、落叶；只能短期培养， • 用量 1~10mg/L，需过滤灭菌
pH值
• 在灭菌之前培养基的pH值一般都是调节到5.0-6.0。
• 一般来说，当pH值高于6.0时培养基将会变硬；
• 低于5.0时，琼脂不能很好地凝固。
白）等。 注意：氨基酸类物质只有在含有无机氮的情况 下，对离体组织生长才有较好的效果。
1 无机盐 培 第养 一基 节的 成 分 2 有机物 3 碳源和能源 4 植物激素 5 琼脂
6 辅助物质
3 碳源和能源
作用： 作为离体组织赖以生长的碳源 使培养基维持一定的渗透压（一般在1.5-4.1MPa） •种类：蔗糖或葡萄糖、果糖、砂糖等。 •蔗糖浓度：1-5%，胚培养为4-15%。 注意： •高压灭菌部分糖会分解。 •大生产时可用白砂糖。
不凝原因：①pH<5不凝；②长时间高压灭菌； ③长期存放，易变质；④厂家不同，杂质含量不同 ⑤配制时融解不充分，分装不均匀；
5.2.其它
玻璃纤维 滤纸桥 海绵、卡拉胶等
6 辅 助 性 物 质
6.1 活性炭 6.2 抗氧化物 6.3 抗生素
6.1 活性炭
1)作用：具吸附作用； • 茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 -0.2%）； • 促进生根,根避光生长； • 防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）； • 有利于胚胎培养。 2)常用浓度：0.5－10g/L 3)注意：活性炭具副作用。选择 吸附性差，导致营养损耗和 pH↓， 应适当调高营养物质与激素水平， 并加大Agar用量。
有机物和激素类等。其中维生素、氨基酸类可以分别
配制，也可以混在一起 配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和SO42-， Ca2+、Mg2+和PO43- 一起溶解后，会产生沉淀，一定 要充分溶解再放入母液中。 各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。 母液配好后放冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
成分
称量工具
万分电子天平
C 铁盐（扩大100倍1000ml）
铁盐
硫酸亚铁， Na2-EDTA
注意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它 溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。
在装有800ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒氢氧化钠。溶解后 加入3.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢 慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解，冷却后定容至 1000ml，置于冰箱中备用。
4.3 赤霉素（GAs）
（1）种类：GA3
（2）作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打 破休眠；一般在器官形成后加入。 • 注意：不耐热；生理活性5－15d，时间太长 有抑制作用。 • 较生长素和细胞分裂素少用，可溶于水。
ABA →因物种不同，能促进或抑制愈伤组织生长；
5 琼脂/培养体支持材料
5.1.琼脂 (1)用量 6－10g/L (2)种类 琼脂粉 琼脂条 (3)作用 固化作用 注意：琼脂使用有优缺点；新买应试凝固力。
药品：
• 应选取等级较高的化学纯（CP）或分析纯 (AR)； • 药品的称量一定要准确、正确，防止药勺 之间的交叉污染。
2 培养基母液的配制和保存
2.1 母液（贮备液，stock solution)配制的目的
1）方便配置其他培养基； 2）保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取 3）便于低温保藏。
NAA 0.1 mg. Poor shoot development and no roots. Extensive callus generation
l-1
NAA 5.0 mg. l-1 Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus
生长素 细胞分裂素
高：有利于根的形成和愈伤组织的形成； = 适中：有利于根芽的分化； 低：有利于芽的形成
如：为了促进芽器官的分化，应除去或降低生长素 的浓度，或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比 例。
细胞 分裂 素与 生长 素对 器官 或愈 伤组 织的 影响
No BAP
Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
BAP 0.1 mg. l-1
More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
No NAA Poor shoot development and no roots
6.2 抗生素
作用：抑制内生菌； 种类：青霉素、链霉素、庆大霉素、利福平、 卡那霉素等， 用量：用量5~20mg/L 注意：抗生素对组织生长有抑制作用，使 用要慎重。
多数需过滤灭菌。
6.3 抗氧化物
1)常用抗氧化剂：半胱氨酸、VC 2)用量：50－200mg/L， 3)作用：防止氧化 4)注意：可用抗氧化剂洗 涤外植体伤口表面。