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单糖组成分析实用指南：有效提高样品分析效率单糖是构成多糖的基本单元，对于生物药物领域的研究和开发具有重要意义。
单糖组成分析是一项关键的技术，可以帮助科研人员了解多糖的结构和特性。
然而，传统的单糖组成分析方法存在着效率低下的问题。
本文将介绍一些提高单糖组成分析效率的方法和技巧，帮助科研人员更加高效地进行样品分析。
1. 选择合适的分析方法在进行单糖组成分析之前，首先需要选择合适的分析方法。
常用的单糖分析方法包括高效液相色谱法（HPLC）、毛细管电泳法（CE）和质谱法（MS）等。
不同的方法具有不同的优缺点，科研人员可以根据实际需求选择最适合的方法。
例如，HPLC 方法适用于分析多样品的情况，而CE方法则适用于分析样品量较少的情况。
2. 优化样品制备过程样品制备是单糖组成分析的关键步骤之一。
优化样品制备过程可以有效提高分析效率。
首先，选择合适的提取方法，例如酶解法、酸水解法或酶联免疫吸附法等。
其次，对样品进行适当的预处理，如去除杂质、浓缩样品等。
最后，选择合适的洗脱剂和溶剂，以提高分离和检测的效果。
3. 优化分析条件在进行单糖组成分析时，合理优化分析条件可以提高分析效率。
首先，选择合适的色谱柱和流动相，以实现对单糖的有效分离。
其次，优化色谱条件，如流速、温度和梯度等，以提高分离和检测的效果。
此外，合理选择检测器和检测波长，可以提高检测的灵敏度和选择性。
4. 使用自动化设备自动化设备可以大大提高单糖组成分析的效率。
例如，使用自动进样器可以实现对多个样品的连续分析，节省了操作时间。
同时，自动化设备还可以减少人为误差，提高数据的准确性和可靠性。
5. 数据分析与解释单糖组成分析的结果需要进行数据分析和解释。
科研人员可以使用专业的数据分析软件，如GlycoWorkbench和GlycoMod等，对分析结果进行处理和解读。
此外，结合文献和数据库的信息，可以更加准确地确定单糖的组成和结构。
单糖组成分析是生物药物领域研究的重要技术之一。
肉苁蓉中多糖的提取及含量测定
赵国丁;董慧清
【期刊名称】《内蒙古医学院学报》
【年(卷),期】2000(022)003
【总页数】2页(P188-189)
【作者】赵国丁;董慧清
【作者单位】内蒙古医学院分析化学教研室,呼和浩特;内蒙古医学院分析化学教研室,呼和浩特
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.肉苁蓉多糖的微波提取及含量测定 [J], 孙萍;李艳;王莉;鲁建江;顾承志;陈宏伟
2.全真一气汤多糖的提取和多糖中总糖的含量测定 [J], 陈虹;张志敏;张大鹏;武志娟;夏鑫华;范萍;杨辉;陈康
3.管花肉苁蓉药渣中多糖含量测定及抗氧化活性研究 [J], 杨婷;艾拉旦·麦麦提艾力;陶义存;姚军
4.管花肉苁蓉药渣中多糖提取工艺及体外抗氧化活性研究 [J], 艾拉旦·麦麦提艾力; 杨婷; 袁洁; 艾拉旦·艾力; 姚军; 游林
5.微波提取肉苁蓉中总黄酮和多糖的含量测定 [J], 孙萍;兰卫;李艳;闫豫君;成玉怀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远 陈 君 李 萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘 要 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。
采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。
对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
关键词 单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱 2001207204收稿;2002201209接受1 引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。
已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。
由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。
Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。
本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。
衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。
色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。
单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。
肉苁蓉多糖的碱提取及其化学分析高明;田子玉;蔡红梅;高峰【期刊名称】《农产食品科技》【年(卷),期】2008(002)003【摘要】用4％NaOH提肉苁蓉多糖，并对其进行分析。
粗提肉苁蓉多糖蛋白含量为7．55％，其中97．12％为游离态，其余部分为结合态；总糖含量为63．84％；大体含有4个分子量级别的组分，平均分子量在67．18万以上，其中分子量在128．29万左右的占48．64％。
肉苁蓉多糖的糖基组成为D-葡萄糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-半乳糖醛酸和D-木糖，它们的摩尔比约为22．77：12．40：8．67：6．56：3．15：2．52：1．00。
此结果显示，碱提取的肉苁蓉多糖是糖基组成比较简单但构型和碳原子数多样的大分子酸性杂多糖。
【总页数】4页(P32-34,37)【作者】高明;田子玉;蔡红梅;高峰【作者单位】吉林省农业科学院,长春130124【正文语种】中文【中图分类】TS245【相关文献】1.肉苁蓉多糖对东莨菪碱所致学习记忆障碍模型小鼠在突触可塑性方面的保护作用[J], 尹若熙;李刚;俞腾飞;马慧;马天宇;郭敏2.肉苁蓉多糖闪式提取工艺及其抗糖基化分析 [J], 张喜峰;邓猛猛;罗光宏;杨生辉;王丹霞3.肉苁蓉多糖超声波提取工艺条件的优化 [J], 连乐;高明波;尹新颖;赵晓倩;胡晓红;张钡4.管花肉苁蓉药渣中多糖提取工艺及体外抗氧化活性研究 [J], 艾拉旦·麦麦提艾力; 杨婷; 袁洁; 艾拉旦·艾力; 姚军; 游林5.循环超声强化提取肉苁蓉中多糖和甜菜碱 [J], 欧阳杰;赵兵;王晓东;韩江勇;王玉春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肉苁蓉和锁阳糖类成分含量测定
章明;薛德钧
【期刊名称】《江西中医学院学报》
【年(卷),期】1995(007)001
【摘要】肉苁蓉和锁阳糖类成分含量测定章明，薛德钧（药学系有机化学教研室）关键词肉众蓉，锁阳，糖类成分，含量测定近代化学药理研究表明，许多中草药的多糖具有明显的促进免疫功能的活性，因此测定其中多糖成分意义重大［１～３］．．我们首次发现肉苁蓉和锁阳的多糖成分具有...
【总页数】2页(P24-25)
【作者】章明;薛德钧
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.苗药大果木姜子总黄酮与糖类成分含量测定 [J], 刘刚;刘育辰;康雪佳;于福来;庞
玉新;李霞;贾金燕
2.补肾中药肉苁蓉,锁阳,淫羊藿和仙茅磷脂成分的红外光谱测定 [J], 许益民;王永
山
3.基于UPLC指纹图谱及多成分含量测定的肉苁蓉药材质量控制研究 [J], 甄亚钦;范帅帅;支雅婧;田伟;麻景梅;牛丽颖
4.黄精中糖类成分的含量测定方法比较及其酒蒸工艺优化 [J], 潘东梅;蔡维珊;梁业
婷;沈颖;史哲铭;易延逵
5.基于酒黄精炮制前后糖类成分的变化探讨《中国药典》酒黄精含量测定指标的合理性 [J], 刁卓;刘军玲;胡冲;王浩;杨青山;张亚中
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荒漠肉苁蓉多糖的研究
麻景梅;宋新波;张丽娟;李薇
【期刊名称】《吉林中医药》
【年(卷),期】2012(032)002
【摘要】荒漠肉苁蓉含有多种化学成分,其中多糖是其主要活性成分之一.近年来,国内外针对荒漠肉苁蓉多糖的化学结构和药理活性开展了大量的研究工作,其中包括均一多糖的分离,分子量的测定,单糖的组成种类及比例关系,糖基的连接方式等；在药理方面对荒漠肉苁蓉多糖的免疫调节,抗氧化、抗衰老、促进造血等的机理进行了进一步的研究.
【总页数】3页(P199-201)
【作者】麻景梅;宋新波;张丽娟;李薇
【作者单位】天津中医药大学,天津300193;内蒙古曼德拉沙产业开发有限公司,内蒙古阿拉善盟750300
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.荒漠肉苁蓉中苯乙醇苷类与多糖含量的测定及抗氧化作用研究 [J], 覃文婷;王小明;徐荣;宿美凤;雒晓梅;常晓燕;陈君;石钺
2.新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖对口蹄疫疫苗免疫小鼠的佐剂效应 [J], 巴雪丽;张爱莲;黄炯;曹辉;赵兵;王丹阳
3.荒漠肉苁蓉接种盘制备研究 [J], 张乔森;张治峰;陶永佳
4.新疆荒漠肉苁蓉粗多糖对口蹄疫疫苗抗体和T细胞亚群的影响 [J], 张爱莲;巴雪丽;王丹阳;赵兵
5.荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉的组织结构比较研究 [J], 付桂芳;陈敏;崔光红;肖苏萍;黄璐琦
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白及药材中多糖的含量测定
白及药材中多糖含量的测定，是药用植物开发领域中一个重要的技术指标。
多糖是一种结构复杂、分子量大、含水量大、稳定性差的非淀粉类糖类成分，它具有独特的分子结构和生物活性，广泛存在于植物细胞壁、鞘液和表皮中。
白及药材中多糖含量测定是评价高品质白及药材的重要技术指标。
白及药材中多糖含量测定的常用方法主要有定性法和定量法。
定性法包括毛细管电泳法、溶剂抽提-移液检测法、膜过滤法
及膜调控法等，这些方法可以检测多糖的类型和数量，但精度不高，不能很好地反映多糖量的变化。
定量法包括毛细管电泳定量法、HPLC检测法、总全糖定量法等，这些方法可以准确
快速地测定多糖的含量，反映出多糖组分的变化。
HPLC检测法是测定白及药材中多糖的最常用方法之一。
该方
法通过改变溶剂组成、改变运勋液体相中的色谱剂和保留剂、调整流动速率来改变多糖的分离条件，使多糖分子依次沿不同的时间延迟流出，再采用紫外检测器定量多糖的含量。
在分析白及药材中多糖含量时，要注意提取试样时使用有效的溶剂，以保持提取物的特性。
此外，多糖容易受到外界环境的影响而生成氧化反应，所以必须在提取和测定过程中采取保护措施，以确保实验的准确性。
综上所述，白及药材中多糖含量的准确测定，对于评价药用植物的品质和药效有重要意义，HPLC检测法是测定多糖含量最
常用的方法，但要在提取和测定过程中采取有效的保护措施，以确保实验数据的准确性和可靠性。
毛细管型离子色谱-脉冲安培法检测枸杞多糖的单糖组成李静;李仁勇;梁立娜【摘要】采用ICS-5000毛细管离子色谱仪对枸杞多糖中的10种单糖进行了分离测定.优化了前处理过程中影响多糖水解的酸种类、酸浓度、水解温度和时间等参数,优化条件为使用2 mol/L三氟乙酸溶液在100℃下水解120min,在该条件下,果糖回收率约为50％,其余单糖回收率在84％～104％之间.采用新型淋洗液自动发生装置电解产生淋洗液,Capillary CarborPac PA20色谱柱分离,毛细管安培池检测,10种单糖成分标准曲线线性关系良好,相关系数均大于99.9％；检出限在2.5～75 μg/L之间,为枸杞多糖中单糖组分测定提供了新的可行方法.%A method for the determination of ten kinds of monosaccharide in Lycium barbarum polysaccharide was established using ICS-5000 Capillary IC system. In the pretreatment process, the type and concentration of acid, the hydrolysis temperature and lasting time were selected or optimized. The optimized hydrolysis condition was 100℃ lasting 120 min with 2 mol/L trifluoroacetic acid solution. Under this condition the recovery rate of fructose was about 50%. Recovery rate of the rest monosaccharide was 84% to 104%. In the experiment, new type of Eluent Generator, Capillary CarborPac PA20 column, and improved capillary amperometric detection cell were used. The calibration curves of ten kinds of monosaccharide showed good linearity with correlation coefficient above 0. 999. The LOD is between 2. 5 to 75 μg/L. It is suitable for the determination of monosaccharide constituents in Lycium barbarum polysaccharide.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2012(040)009【总页数】6页(P1415-1420)【关键词】毛细管离子色谱;脉冲安培检测;枸杞多糖;单糖【作者】李静;李仁勇;梁立娜【作者单位】赛默飞世尔科技,北京100080;赛默飞世尔科技,北京100080;赛默飞世尔科技,北京100080【正文语种】中文枸杞是一种传统中药材，枸杞多糖是其主要功能活性成分，具有抗癌、增强免疫力、降血糖、防衰老、抑制肿瘤生长和细胞突变等功效［1～3］。
毛细管电泳的基本原理及应用摘要：毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。
该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。
可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等，比HPLC 分析高效、快速、微量。
关键词：毛细管电泳原理分离模式应用1概述毛细管电泳(Caillary Electrophoresis)简称CE，是一类以毛细管为分离通道，以高压直流场为驱动力的新型液相分离分析技术。
CE的历史可以追溯到1967年瑞典Hjerten最先提出在直径为3mm的毛细管中做自由溶液的区带电泳(Capillary Zone Electro-phoresis，CZE)。
但他没有完全克服传统电泳的弊端[1]。
现在所说的毛细管电泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出，他们使用了75mm的毛细管柱，用荧光检测器对多种组分实现了分离。
1984年Terabe将胶束引入毛细管电泳，开创了毛细管电泳的重要分支: 胶束电动毛细管色谱(MEKC)。
1987年Hjerten等把传统的等电聚焦过程转移到毛细管内进行。
同年，Cohen 发表了毛细管凝胶电泳的工作。
近年来，将液相色谱的固定相引入毛细管电泳中，又发展了电色谱，扩大了电泳的应用范围。
毛细管电泳和高效液相色谱（HPLC）一样，同是液相分离技术，因此在很大程度上HPCE与HPLC可以互为补充，但是无论从效率、速度、样品用量和成本来说，毛细管电泳都显示了一定的优势毛细管电泳（C E）除了比其它色谱分离分析方法具有效率更高、速度更快、样品和试剂耗量更少、应用面同样广泛等优点外，其仪器结构也比高效液相色谱（HPLC）简单。
C E只需高压直流电源、进样装置、毛细管和检测器。
毛细管电泳具有分析速度快、分离效率高、试验成本低、消耗少、操作简便等特点，因此广泛应用于分子生物学、医学、药学、材料学以及与化学有关的化工、环保、食品、饮料等各个领域[2]。
管花肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生寄生植物，为新疆特有资源，是传统补肾阳的中药材，具有补肾、益精、润燥、通便的功效。
现代研究表明，苯乙醇苷类是管花肉苁蓉的主要活性成分和含量最高的化合物，是《中国药典》含量测定的指标成分，具有抗氧化、促进物质代谢、改善学习记忆、增强性功能等作用。
苯乙醇苷类化合物包括松果菊苷、毛蕊花糖苷、松果菊苷和麦角甾苷等。
1肉苁蓉中的苯乙醇苷的提取1.1乙醇回流提取肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物李蒙等利用响应面法对瓜州肉苁蓉苯乙醇苷的提取工艺进行优化。
方法是，以肉苁蓉苯乙醇苷提取率为评价指标，探究乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比和提取次数对肉苁蓉苯乙醇苷提取率的影响。
结果表明，肉苁蓉苯乙醇苷的实际最佳提取工艺条件为乙醇体积分数60%、提取温度80℃、液料比12∶1，提取时间2h ，提取2次，此条件下的提取率为76.5880mg/g 。
本研究为瓜州肉苁蓉苯乙醇苷资源开发及工业化生产提供理论依据。
1.2乙醇浸出提取肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物戴海蓉等优化肉苁蓉提取工艺，为肉苁蓉制剂生产研究提供科学依据。
方法是，采用L9（34）正交试验，以提取溶剂、料液比、提取次数为考察因素，出膏率、松果菊苷和毛蕊花糖苷含量为指标，优选肉苁蓉提取工艺。
结果显示，肉苁蓉最佳提取工艺为肉苁蓉饮片以8倍量30%乙醇提取2次，每次1h 。
孔征等优化管花肉苁蓉中毛蕊花糖苷的提取工艺，为该药材的深入开发和综合利用提供参考。
方法是，采用高效液相色谱法对管花肉苁蓉中的毛蕊花糖苷进行含量测定；色谱柱为Inertsil-ODS-3V ，流动相为甲醇-0.2%甲酸水溶液(40∶60，V/V ），流速为1mL/min ，柱温为30℃，检测波长为330nm ，进样量为10μL ；以毛蕊花糖苷的提取率为考察指标，分别对浸泡时间、乙醇浓度、液料比、提取时间、提取次数进行单因素试验，根据上述试验结果，采用Box-Behnken 响应面法对乙醇浓度、液料比、提取时间等条件进行优化，并对优化后的提取工艺进行验证试验。
2019年5月| 1111.3 木脂素苷类张杰等[9]利用制备液相色谱和Sephadex LH-20的方法在管花肉苁蓉中得到了丁香树脂酚葡萄糖苷(+)-SyringaresinolO-β-Dglucopyranoside 。
张开梅[6]采用正、反相硅胶柱层析技术从肉苁蓉总苷中分离得木质素类化合物，香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
1.4 糖类杨太新等[10]对华北平原管花肉苁蓉进行研究，绘制标准多糖含量曲线，提取不同时期的不同部位的肉苁蓉的多糖，用紫外-分光光度法测定其含量，结果表明1、2年生肉苁蓉年内均以10月的多糖含量最高，分别为11月、12月呈下降趋势，9月最低。
2年生多糖总含量总是大于同期1年生的多糖总含量。
不同部位中的多糖含量：基部＞中部＞顶部，不同时期多糖含量：10月＞11月＞12月＞9月。
王力伟[11]利用反相硅胶层析、凝胶层析、HPLC 制备等分离纯化技术，从肉苁蓉的甲醇提取物中分离得到了2-乙酰-3-鼠李糖基-4-咖啡酰葡萄糖。
2 药理作用2.1 神经保护作用蔡克瑞等[12]将小鼠随机分为青年对照组，衰老模型组，肉苁蓉多糖组，其中肉苁蓉多糖组和衰老模型组均注射射 D-半乳糖使小鼠致衰，青年对照组注射相同剂量的生理盐水，肉苁蓉多糖组小鼠灌服肉苁蓉多糖，其余两组注射生理盐水，检测结果表明，灌服肉苁蓉多糖组SOD 活性、GSH-Px 活力、神经细胞 DNA 损伤的修复能力均有所提高，MDA 含量降低，肉苁蓉多糖对致衰小鼠的神经有保护作用。
张开梅[6]构建构建化合物-靶点-疾病网络，在通路水平上分析相关靶蛋白之间的关系，发现肉苁蓉能够通过调节CTNNBI 、APP 、MAPT 、PTGS2、CASP3及HMOXI 等潜在的靶点及Wnt 、P13K-AKT 和VEGF 等14条信号通路起到神经保护作用，防治和治疗AD 、帕金森等神经系统疾病。
苗鑫等[13]在研究中发现，肉苁蓉毛蕊花糖苷作用24h 后，P-CREB 表达增加，PKA 、CAMP 、BDNF 和SOD 水平提高，0 引言肉苁蓉(Cistanchedeserticola Ma)，别名疆芸、寸芸。
毛细管电泳电化学检测法研究肉苁蓉多糖的单糖组成龚立冬,曹玉华3,侯建霞,汪 云(江南大学化学与材料工程学院,江苏无锡214122)[收稿日期] 2006207227[通讯作者] 3曹玉华,Tel:(0510)85800939,E 2mail:yuhuacao @yahoo 肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生高等寄生植物,具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年之功效[1]。
本属植物全世界约有18个种,我国约有4种1变种,分别为肉苁蓉C istanche deserticola Y .C .Ma 、盐生肉苁蓉 C.salsa (C .A.Mey .)G .Beck,管花肉苁蓉 C.tubulosa (Schenk )R.W ight 、白花盐肉苁蓉C.salsa var .a lbiflora P .F .Tuet Z .C .Lou 及沙苁蓉 C.sinensis G .Beck,《中药大辞典》收载有3种:盐生肉苁蓉、肉苁蓉、迷肉苁蓉 C.am bigua(Bge .)B.Beck [2]。
《中国药典》仅收载了肉苁蓉C.deserticola 为药用肉苁蓉[3]。
由于肉苁蓉珍贵稀少,目前有大量人工栽培的代用品。
肉苁蓉中的主要活性成分为苯乙醇苷类化合物、肉苁蓉多糖、甜菜碱、D 2甘露醇等[4]。
对肉苁蓉多糖的研究大都集中在多糖的提取分离、总糖含量测定及其理化性质的研究方面[5,6]。
对肉苁蓉多糖的单糖组成及其摩尔比研究的报道少见[1]。
常见的多糖中单糖含量测定的方法有薄层色谱法、气相色谱法、分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳2紫外检测等[7211],这些方法往往检测灵敏度不高,或需柱前衍生,操作繁琐。
毛细管电泳2电化学检测系统(CE 2ED )对糖类的测定具有快速、灵敏、选择性好的特点,由于糖类物质在结构上具有多羟基的特性,碱性条件下,易在铜电极上发生氧化还原反应,使用电化学检测器进行检测,不需衍生直接测定[12],可以得到较高的灵敏度。
且采用铜电极,安培检测糖类物质,具有高的选择性,肉苁蓉中大多数物质在铜电极上没有响应,肉苁蓉粗多糖不需严格纯化。
本研究采用CE 2E D 对不同种肉苁蓉粗多糖中单糖的组成及其各单糖相对摩尔比进行了初步的研究。
1 仪器和试剂毛细管电泳2电化学检测系统(CE 2E D )为自组装,包括±30k V 高压电源(上海原子核研究所),BASLC -3D 安培检测器(B i oanalytical Syste m s,US A ),H W -2000色谱软件(上海千谱软件有限公司)。
长熔融石英毛细管(70c m,25μm,河北永年仪器厂)。
半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、蔗糖、棉子糖均为分析纯(上海试剂一厂)。
其他试剂均为分析纯,水为重蒸水。
半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、蔗糖、棉子糖标准储备液质量浓度分别为9×10-4,912×10-4,912×10-4,715×10-4,9×10-4,1×10-3,1×10-3g ・mL-1,用蒸馏水配制,再用运行缓冲液稀释至所需浓度。
本试验所用药材为内蒙产肉苁蓉、新疆产管花肉苁蓉、人工栽培管花肉苁蓉均由洛阳高新开发区陆生天然植物研究所王忠东教授鉴定。
具体药材来源见表1。
表1 药材产地及来源品种来源产地C istanche deserticola 内蒙古无锡中药采购供应站C .tubulosa 新疆 甘肃兰州安泰堂药店C .tubulosa新疆 新疆民丰浴丰生态科技有限公司(人工栽培)2 方法2.1 肉苁蓉粗多糖的制备 将肉苁蓉原药材切成片状,置于60℃烘箱中烘60m in 。
药材粉碎,精确称取药材约20g,置150mL 锥形瓶中,加入50mL 石油醚(60～90℃)超声提取约20m in,过滤得滤渣,重复以上操作3到4次;滤渣加入80%乙醇50mL,超声提取20m in,过滤得滤渣,重复此操作3到4次;滤渣挥干溶剂后,置250mL 圆底烧瓶中,加入蒸馏水150mL,90℃水浴加热1h,超声提取30m in,过滤,重复操作4次,滤液合并约600mL 减压浓缩至约100mL,活性碳脱色,以sevag 法脱蛋白,此过程重复数次,至静置后无蛋白析出。
浓缩溶液至20mL,加入乙醇至溶液含醇量达80%以上,静置过夜析出固体物质,过滤,沉淀相继以无水乙醇、丙・3702・酮、乙醚反复洗涤干燥,即得肉苁蓉棕褐色粗多糖固体。
60℃烘干备用。
2.2 肉苁蓉粗多糖的水解方法 采用盐酸、硫酸稀酸溶液进行肉苁蓉粗多糖的水解研究,以不同比例的盐酸、硫酸混合,在100℃水浴条件下水解。
方法1 肉苁蓉多糖0106g,加入6mL2mol・L-1硫酸及2mL蒸馏水,在沸水浴下回流水解5h,取水解液2mL,用氢氧化钠中和至pH7～8,然后以011mol・L-1氢氧化钠稀释至6mL,测定前加运行缓冲液稀释。
方法2 肉苁蓉多糖0106g,加入4mL1mol・L-1硫酸及4mL1mol・L-1盐酸,沸水浴下回流水解6h,以下步骤同方法1。
方法3 肉苁蓉多糖0106g,加入3mL1mol・L-1盐酸,2mL2mol・L-1硫酸及3mL蒸馏水,沸水浴下回流水解8h,以下步骤同方法1。
方法4 肉苁蓉多糖0106g,加入2mL1mol・L-1盐酸,4mL015mol・L-1硫酸及2mL蒸馏水,沸水浴下回流水解4h,以下步骤同方法1。
方法5 肉苁蓉多糖0106g,加入6mL1mol・L-1盐酸,2mL蒸馏水,沸水浴下回流水解6h,以下步骤同方法1。
2.3 毛细管电泳测定方法 使用自组装的CE2E D 装置,电化学检测为三电极体系:01328mm直径的铜圆盘电极为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝为辅助电极。
铜电极使用前先用砂纸打磨再超声清洗2m in,通过三维定位调节器时使之与毛细管出口在一条直线上,并尽可能靠近毛细管的末端。
试验条件:分离电压16kV;进样时间6s;电极电位0165V;电泳运行液011mol・L-1氢氧化钠。
3 结果与讨论3.1 肉苁蓉多糖中单糖组分的鉴定 半乳糖(514×10-5g・mL-1)、葡萄糖(515×10-5g・mL-1)、鼠李糖(515×10-5g・mL-1)、阿拉伯糖(415×10-5g・mL-1)、果糖(514×10-5g・mL-1)以及蔗糖(516×10-5g・mL-1二糖)、棉子糖(6×10-5g・mL-1三糖)在上述电泳条件下进行CE2E D 测定,混合标样的CE图谱如图1所示。
将肉苁蓉粗多糖按2.2所述方法进行水解,相同电泳条件下测定,粗多糖水解液的CE2ED图谱见图2。
以加入单糖标准溶液记录峰高及峰面积变化的方法对水解液中的单糖组分的进行定性,确定内蒙产正品肉苁蓉 C.deserticola粗多糖水解液中的单糖为半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖;新疆产管花肉苁蓉 C.tubulosa粗多糖水解液中单糖为半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、果糖;新疆人工栽培管花肉苁蓉C.tubulosa粗多糖水解液中的单糖为半乳糖、葡萄糖、鼠李糖。
结果表明,3种样品肉苁蓉粗多糖的单糖种类有明显差异。
3.2 5种单糖定量方法研究3.2.1 精密度试验 对5种单糖混合标准溶液重复进样7次,半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖的峰高、峰面积的相对标准偏差(RS D)分别为0123,0161;0136,1166;0145,0184;1100,2143;1129,2167,结果表明,该法具有很好的重复性。
3.2.2 回归方程、线性范围、检测限 将以上5种糖的混合标准溶液进行毛细管电泳电化学测定,以电泳峰的峰面积(Y)对单糖的质量浓度(X)做工作曲线,得到5种糖的回归方程、线性范围、检测限(S/N=3)见表2。
・472・表2 5种糖的回归方程、线性范围、检测限标样回归方程r线性范围/g・mL-1检测限/g・mL-1半乳糖 Y=11368×104+51327×1010X01998415×10-6～910×10-5415×10-7葡萄糖 Y=41051×104+41061×1010X01997912×10-6～912×10-5317×10-7鼠李糖 Y=41207×104+21126×1010X01997912×10-6～912×10-5912×10-7阿拉伯糖Y=01766×104+61400×1010X01998318×10-6～715×10-5318×10-7果糖 Y=-11118×105+41501×1010X01998910×10-6～910×10-5111×10-63.3 肉苁蓉粗多糖水解液中单糖的测定3.3.1 水解方法选择 采用内蒙产肉苁蓉多糖,按2.2所述方法进行水解,按2.3所述方法进行CE2 ED测定。
5种水解方法测得的单糖的浓度见表3,由此可以得出方法3的水解较为彻底,所得水解液中的各单糖浓度均较高。
表3 水解条件的选择×10-4g・mL-1 水解方法半乳糖葡萄糖鼠李糖阿拉伯糖果糖111621419214310211419412211217321228*********4116214162133105118255142183153.3.2 样品测定 精确称取不同种肉苁蓉粗多糖样品各0106g,按2.2方法水解,取水解液2mL用氢氧化钠中和至pH7～8,然后以运行缓冲液稀释至适量浓度,按2.3所述方法进行毛细管电泳测定,平行测定3次,测定结果见表4。
内蒙产肉苁蓉粗多糖单糖相对摩尔比为葡萄糖∶半乳糖∶鼠李糖∶阿拉伯糖∶果糖(10∶0175∶2134∶1129∶1131);新疆产管花肉苁蓉为葡萄糖∶半乳糖∶鼠李糖∶果糖(10∶0181∶5119∶2114);新疆人工栽培管花肉苁蓉为葡萄糖∶半乳糖∶鼠李糖(10∶2160∶1133)。
3.3.3 回收率试验 在上述内蒙产肉苁蓉粗多糖水解样品中分别加入10μL半乳糖、葡萄糖、鼠李表4 肉苁蓉多糖水解样品测定(n=3)×10-4g・mL-1 样品半乳糖葡萄糖鼠李糖阿拉伯糖果糖内蒙C istanche deserticola211±010728±0124610±0113310±0113317±0117新疆C.tubulosa115±010318±0119816±0122-319±0121栽培C.tubulosa017±0102216±0108013±0101--糖、阿拉伯糖、果糖储备液溶液进行测定。
