7、 酶标二抗:稀释HRP标记羊抗猪IgG,每孔100µL, 37℃作用30min; 8、洗涤; 9、显色:加新鲜配制的TMB底物液每孔100µL,室温 避光作用15min; 10、加终止液:加50µL 2mol/L硫酸; 11、读数:用酶标仪检测OD450值。
ELISA的优点:
血清学方法有很多种, 如传统的琼脂扩散( A G ID ) 、 血 凝抑制( H A / H I ) 、 乳胶凝集、 试管凝集、补体结合 等方法,但这些方法不是最合适的检测方法。EILSA技 术与其有着不同的特点: 1、灵敏度高。ELI SA是通过酶促反应放大检测信号, 从 而提高检测的灵敏度, 其检测限可达 ng 甚至pg 水平, 可 做定量测定。 2、特异性强。ELI SA的每一步体的特异性识别过程, 结 构类似物、 有色物质、 荧光物质等对检测的影响很小。 3、样品的预处理过程和 ELI SA的操作步骤简单快捷, 有的试剂盒仅需1~2个小时即可得出检测结果,并且可同 时检测数十甚至上百个样品。 4、设备简单,适用于基层。
ELISA的应用
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用 于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病 等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原 的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵 敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。 不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查 几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。 本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的 循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此 ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大。
+ 固相抗体 标本
+ 酶标抗体
+ 底物