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激光共聚焦显微镜FV中文说明书完整版

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激光共聚焦显微镜F V中文说明书HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】激光共聚焦显微镜FV1000(倒置显微镜IX81) 简易使用说明书开启系统1.打开计算机.2.打开激光器.(打开钥匙开关.) 2-1.多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) ON2-2氦氖绿 (543 nm) ON 2-3氦氖红 (633 nm) ON 3.打开汞灯电源开关. 4.登陆 Windows XP 系统. User ID: Administrator Password: fluoview5.双击快捷方式：User ID: Administrator Password: Administrator* 系统软件的启动需要等待一定时间.5231显微镜镜下观察微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜.(参照Memo.)2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.4.点击FV10-ASW 软件中的图标.Note1:使用TD 滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“”，如果不是，用手柄按下DICT 图标 5.标本聚焦显微镜镜下观察荧光观察*DIC 元件124手控面板用此旋钮进行微分干涉法对比度的调节 .Memo按照 7-1 的操作转换物镜的倍率之后，对： ●物镜 ●各物镜对应的 D IC 元件 * 进行操作 .1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW 软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照Memo.)4.标本聚焦.123Hand switchNote 2Notes 1 & 3Memo关于荧光滤色片NIBA ： 蓝色激发 / 绿色荧光 （例： FITC 、 EGFP 等） WIG ： 绿色激发 / 红色 荧光 （例： Rhodamine 、 DsRed 等）扫描模式扫描速激光输出的调节明场观察( 显微镜镜下观察 )荧光观察( 显微镜镜下观察 )扫描的按钮 选择 XYZ,XYT 或 X YL 每个通道的调节 共聚焦的孔径大小 卤素灯的光强调节 Kalman 方式染料选择 光路图 取图条件的保存 调出取图条件TwinScanner 设定图像的拇指索引图像显示窗口内存中所显示的文件Lambda 扫描的设定物镜 聚焦时间间隔和时间计数( 用于 XYT或 X T 扫描 ) λ 扫描带宽选择获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光染色（FITC）1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门 .同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)123染料选择后的显示界面Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止 扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )4564. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 FITC ) ( 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .[1探测器的灵敏度调节 HV ( )[2共聚焦的孔径大小调节 ( . ) [3激光输出的调节 ( Laser ) [1[2[3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的 位置 .点击此按钮 或者使用鼠标转轮进行 微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮. (关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)同步扫描 123染料选择后的显示界面44. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 Alexa ( Fluor 488) 图像和红色( Alexa Fluor 546) 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .56Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止 扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )[1探测器的灵敏度调节 ( HV )[2共聚焦的孔径大小调节 ) ( . [3激光输出的调节 ( Laser) [1[2[3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的 位置 .点击此按钮 或者使用鼠标转轮进行 微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)获取单张图像（XY 平面）（荧光图像）78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .例：绿色荧光（ Alexa 488 ）＋红色荧光（Alexa 546 ）二重染色序列扫描 (这里介绍线序列扫描.)1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)123染料选择后的显示界面4 5 6 74.点击序列扫描,并选择线序列方式.5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色(Alexa Fluor488)图像和红色(Alexa Fluor546)图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节)(.[3激光输出的调节Laser)([1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述8.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .(XY 平面-单标+微分干涉差)1. 点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)4.选择TD1.1234(XY平面-单标+微分干涉差)5 5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色()FITC图像和微分干涉差的图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.67Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节.)([3激光输出的调节(Laser)[1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述(XY 平面-单标+微分干涉差)8. 选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.) 891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .1.采用13和14页步骤1到7. 确定Z 轴的上限和下限如下.2.输入StepSize 大小(点击OP 按钮可以使用推荐的值), 并选择 .3.点击XY Repeat 按钮开始扫描.4.点击按钮上移焦点位置.(参照Memo.)5.当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定. 6.点击按钮下移焦点位置.(参照Memo.)7.当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定.8.点击Stop 按钮停止扫描.和和1456728Memo和按钮: 点击移动 μ m. : 点击移动μ m.9.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式.更多的信息，参照附录2.)10.选择Depth 按钮. 11.点击XYZ 按钮取得图像.12.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.13.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)910111213MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .*可以通过调用扫描状态来实现该设置. 更多的信息, 参照附录5.绿色荧光 -1)YOYO ( 双标 1231.点击 F V10-ASW 软件中的按钮 关闭汞灯快门 . 同时 , 点击按钮 关闭卤素灯快门 . 2.点击按钮检查光路 .3.做如下设置 .选择 BS20/80 或DM405/488.选择 488 nm 作为 激发光源 .选择 Mirror.只选择 C HS1.4.点击按钮 , 出现光谱设置窗口.5.设置CHS1光谱带宽为10 nm, 以此为例.(参照附录4关于改变光谱带宽的方法.)6.点击XY Repeat 按钮开始扫描.7.在观察图像的同时, 移动光谱带到图像 最亮的位置状态.(参照附录4关于改变光谱带宽的方法.)注: 移动光谱带位置要保持光谱带宽为10 nm 不变.8.调节图像.(参照附录1.)9.点击Stop 按钮停止扫描.10选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,4567101112131514背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，参照附录2.)11设定要扫描的波长范围, 光谱带宽和步距. Start = 开始波长End = 结束波长Resolution = 光谱带宽StepSize = 步距12选择Lambda按钮.13点击XYL按钮取得图像.14点击SeriesDone按钮, “2DViewLiveImage(x)” 2D界面就出现.15.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像..(保存为“oib” 和"oif"类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.)1. 双击资源管理器中要选择打开的文件.显示状态的切换1:1显示 帧的播放选择结束帧投影的切换3 D 重建 放大调整窗口的大小动画 播放速度选择开始帧文本 不同形状的 ROI 区域Ch1 display Ch2 display点击按钮 转换显示模式1.点击按钮并选择.2.要保存此图像, 右击此图像, 选择SaveDisplay并命名.(比例尺的使用)121.点击按钮 .2.点击图像的同时, 拖放此比例尺到一个特定的位置.3.点击手柄的左端或右端, 移动鼠标. 改变比例尺的大小4.选择比例尺并右击选择属性的设置.5.设置具体的比例尺属性. 改变文本, 颜色, 字体等.12345(3D 图像的重建)以一定的角度观察3D 图像1.点击按钮 .2.创建3D 图像.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像. → 要保存此图像, 进行下一页第6步的操作.观察3D 图像的某个横截面4.点击按钮并选定.5.拖动鼠标观察某个垂直横断面.→ 要保存此图像, 进行下一页第6步的操作.134 5(3D 图像的重建保存上一页中第3、5选项的图像6.点击按钮.7.会创建一个2D 图像 (带文件名).8.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的68MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .图1.点击按钮 .2.创建3D 图像.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.动画的播放4.点击并控制按钮实现图像围绕着 X-轴旋转. 再次点击停止旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着 Y-轴旋转. 再次点击停止旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着Z-轴旋转.再次点击停止旋转.134例:绿色荧光(Alexa Fluor 488)和绿色荧光 (YOYO-1)双标234例 : 绿色荧光 Alexa Fluor ( 488)和 绿色荧光 -1)( YOYO 双标 5 6Unmixed image此处显示分解光谱 的通道分配1. 打开一幅 Alexa Fluor 488 和 YOYO1双标的 X YL 图像 . 2. 分别为 Alexa Fluor 488 和 YOYO1 选 定一个封闭的区域 . 3. 从 P rocessing 下拉菜单中选择Spectral Deconvolution 图标 . 4. 双击 R OI1 和 R OI2 区域 .5. 检查处理类型设置为 “Normal” 并且点击 E xecute 按钮 . 6. 获得图像 .1. 打开一幅 Alexa Fluor 488单标取样的XYL 图像.2. 为 Alexa Fluor 488选定一个封闭的区域.3. 从Processing 下拉菜单中选择 Spectral Deconvolution 图标.4. 双击ROI1区域.5. 点击Save Profile 图标.6. 输入保存的名字并且点击OK 按钮将Alexa Fluor 488的光谱记载到数据库中.7. 对于YOYO1单标, 重复1-6步.4356记载的荧光光谱在此显示8.打开一幅 Alexa Fluor 488和 YOYO1双标的XYL 图像.9.从Processing 下拉菜单中选择 Spectral Deconvolution 图标.10.双击数据库中记载的 Alexa Fluor 488 和 YOYO1图标.11.检查处理类型设置为 “Normal”并且点击Execute 按钮.12获得图像.891011Unmixed image12此处显示分解光谱 的通道分配2345例 : 两种类型荧光标记的样品Unmixed image此处显示分解光谱 的通道分配1. 打开一幅具有两种类型荧光标记的XYL 图像 . 2. 从 P rocessing 下拉菜单中选择Spectral D econvolution 图标 . 3. 选中两个检查框用于计算 .(具有三种类型荧光标记时要选中 三个检查框 .4. 检查处理类型设置为 “Blind 并且 点击 E xecute 按钮 .5. 获得图像 .1.右击图像管理器中显示的图像图标, 选***************************************XY 或者XYZ 图像的每个通道存为 TIFF 格式的文件 XY 或者XYZ 通道合并的图像存为 TIFF 格式的文件带有比例尺的图像存为BMP 格式的文件动态图像存为AVI 格式的文件13保存到 CD-R1.插入一张CD-R 光盘.2.点击OK.3.选择文件并拖放到CD-R 的窗口.4.点击"Write these files to CD."5.点击Next.6.开始刻录.7.点击Finish 按钮结束.关闭系统2345761.选择File/Exit, 退出FV10-ASW 软件.2.退出Windows XP.(1)选择Start/Shut Down.(2)在Shut Down 窗口中, 选择Shut Down 并点击OK 按钮.3. 关闭激光器. (关闭钥匙开关.)3-1. 多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) OFF3-2. 氦氖绿 (543 nm) OFF 3-3. 氦氖红 (633 nm) OFF 4. 关闭汞灯电源.附录1共聚焦的原理和调节原理 附录2获取图像如何降低背景噪音1234降低扫描速度通过降低扫描速度探测器从开始检测就 忽略背景噪音 . 优点 :相比 K alman 方式 , 能够取到更锐的图 .缺点 :单次扫描的速度很慢 .1. 选择扫描速度 .**********************************************************************************Auto ON: 扫描速度变慢时 ,背景噪音被去 除而图像亮度不变 .Auto OFF: 扫描速度变慢时 ,背景噪音被去 除而图像亮度增加 .Kalman 方式通过重复获取一定数量的图像进行平均算法 运算处理 . 从而去除背景噪音和粗糙度 . 优点 :单次扫描的速度很快 . 缺点 :由于图像平均而图像模糊 .1. 点击 K alman 并选择 L ine 或 F rame 方式 .2. 输入累计数字 ( 扫描的次数 )。

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激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解

激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser sea nning con focal microscope)，英文简写LSCM，俗称con focal。

LSCM是一种高科技显微镜，属于最先进的细胞生物学分析仪器。

我们学院使用的是瑞士徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。

使用流程1、登陆或5号楼606室公用电脑下载?激光共聚焦预约使用审核表?，打印并填写。

2、联系卢剑清(手机：)审核并签名。

3、持已签名的?激光共聚焦预约使用审核表? 至5号楼610室预约使用时间，及领取钥匙，联系人：窦凯飞(手机：。

4、在熟练使用者的指导下，进行实验。

5、实验结束，及时归还钥匙。

仪器构造和原理LSCM的根本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。

激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源，普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。

而LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度、相干性好等优点,可以防止普通显微镜的缺点。

一般常用的气体激光器如氩(Ar)、氪(Kr)、氦(He)、氖(Ne)。

illu min ati ng pin hole (照明针孔)：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源方向性强、发散小、亮度高、高度的空间和时间相干性以及平面偏振激发等独特的优点。

且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平面形成共聚焦装置。

分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后，通过物镜在样品聚焦。

对标本内焦平面上的每一点进行扫描，Focal plane (焦平面)：激光点光源照射物体在焦平面处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。

该光斑经过物镜和分光镜等一系列装置的处理，分别在照明针孔及探测针孔两处聚焦。

OlympusFV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册

OlympusFV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册

Olympus FV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册一、开关机步骤1、开机步骤1）打开计算机2）打开汞灯电源开关3）打开显微镜开关4）打开载物台控制器开关5）打开显微镜触屏面板开关6）打开扫描头开关（先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置）7）打开激光器①405nm，633nm：打开开关键即可②559nm：先开开关键，绿色指示灯闪烁（约两分钟），停止闪烁后将钥匙顺时针拧到on位置（红灯闪烁，停止闪烁后即开启完成）③多线氩离子（458nm，488nm，514nm）：先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置8）双击电脑桌面上打开 FV10-ASW 4.0应用软件。

2、关机步骤1）关闭FV10-ASW 4.0应用软件2）关闭激光器（注意: 多线氩离子458nm，488nm，514nm需先关钥匙，等风机散热20分钟后再关闭开关键）3）关闭扫描头（先将钥匙拧到off位置，再关开关键）4）关闭显微镜触屏面板5）关闭载物台控制器6）关显微镜开关7）关汞灯，先关前面off按钮，倒计时30s，再关后方开关键8）关计算机二、显微镜观察1、用触屏面板选择物镜；2、点击触屏面板EPI，选择需要的荧光滤片，如下图：紫外激发/蓝色光蓝色激发/绿色荧光绿色激发/红色荧光）打开，显微镜目镜下观察样品，推动载物台控制手柄可水平方向移动样品，转动调焦旋钮可调节焦距；三、获图XY多通道扫描1、镜下调好之后，点击软件中的按钮，关闭汞灯快门。

2、首先进行软件设置：在Acquisition Setting里将扫描速度设置为8us/Pixel，像素数一般设置为1024*1024。

在Image Acquisition Control里点击Dye List按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料（注：再次双击已选项目可取消），然后点击Apply按钮。

3、将Image Acquisition Control面板中Filter Mode里Kalman 打钩选中，设置线平均Line 2次，这样可以降低图像的噪声。

激光共聚焦显微镜操作规程

激光共聚焦显微镜操作规程

激光共聚焦显微镜操作规程一、准备工作a)打开计算机。

依次打开激光器电源、钥匙开关。

多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) ON、氦氖绿(543 nm) ON、氦氖红(633 nm) ON。

打开汞灯电源开关。

b)登陆Windows XP系统。

双击快捷方式：FV10-ASW 1.1。

User ID: Administrator ; Passeword: Administrator。

注意区分大小写。

二、显微镜镜下观察１.微分干涉差观察a)使用手控面板选择物镜。

插入起偏镜。

插入微分干涉滑块。

b)点击FV10-ASW软件中的图标。

标本聚焦.２.荧光观察：c)使用手控面板选择物镜。

d)打开汞灯的机械快门，拉出DIC滑块，点击FV10-ASW软件中的图标e)使用手控面板选择荧光滤色片。

标本聚焦。

３.获取单张荧光图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮。

b)关闭汞灯快门，点击按钮，关闭卤素灯快门。

c)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。

点击Apply按钮。

d)点击XY Repeat按钮开始扫描。

调节图像。

点击Stop按钮停止扫描。

e)选择AutoHV,，并选择扫描速度。

f)点击XY按钮取得一幅图像。

g)点击SeriesDone按钮，“2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。

h)保存该幅图像:右图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像。

(保存为“xml”类型是击FV10-ASW软件专用的图像格式。

)４.获得单张（荧光+微分干涉）图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。

点击按钮，关闭卤素灯快门。

b)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。

点击Apply按钮。

c)选择TD1。

d)点击XY Repeat按钮开始扫描。

调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像。

点击Stop按钮停止扫描。

e)选择AutoHV, 并选择扫描速度。

Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作手册

Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作手册

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用开机顺序软件的快速使用说明显微镜的触摸屏控制关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成;系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用开机顺序1打开稳压电源绿色按钮等待2 分钟电压稳定后,再开其它开关2主开关MAIN SWITCH “ON”电脑系统SYSTEMS/PC “ON”扫描硬件系统COMPONENTS “ON”3打开电动显微镜开关打开荧光灯开关注：具有5 档光强调节旋钮4Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟,将激光器扳钮由“Standby”扳至“Laser run”状态,即可正常使用5打开电脑开关,进入操作系统注：键盘上也具有电脑开关软件的快速使用说明1电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标2进入ZEN 界面,弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、分析等;“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已存图像数据的处理、分析;3软件界面：1 功能界面切换：扫描取图Acquisition、图像处理Processing、维护Maintain注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用2 动作按钮；3 工具组多维扫描控制；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示;Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程1组图片,如XYZ、XYT 等;Stop ——暂停/结束扫描;New ——建立一个新图像扫描窗口/文档;激光连接状况检查眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换ZEN软件界面右上角：Ocular ——通过观察筒用眼睛观察;激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛; Camera ——光路切换至相机;LSM ——共聚焦扫描成像光路;显微镜设置：“Ocular”——>“Light Path”——>点击物镜图标,选择物镜——>样品聚焦;透射光控制Transmitted Light Control反射光光闸控制Reflected Light Shutter荧光激发块选择Reflector共聚焦LSM 扫描设置点击“LSM”ZEN软件界面右上角,系统切换至共聚焦扫描光路：光路设置：Smart Setup ——自动预设光路选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法,应用“Apply”;注：Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫描;Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺序扫描;Best compromise 为兼顾速度与信号的折中式扫描;扫描图像参数设置：每个通道的精细调节：包括：1Pinhole的调节一般设为1AU;该值越大,则信号越强,但共聚焦图像效果会降低;原则上, 在保证图像质量的前提下,该值越接近于1AU 越好；2Master Gain的调节增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小;原则上,在保证图像质量的前提下,Gain值越小越好；3Digital Offset的调节可扣除背景噪音,但标本信号也有一定程度的扣除;原则上,在保证图像质量的前提下,Digital Offset值越接近于0越好；4Digital Gain的调节增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小;原则上,在保证图像质量的前提下,Gain值越接近于~越好；5另外,对于每个通道,需要灵活调节激光的强度激光强度越高,则信号越强,但噪音也相应增强,同时标本更容易被漂白或淬灭;原则上,在保证图像质量的前提下,激光强度越低越好; 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数;如果预览图像的效果可以,则先“Stop” ,再点击“Single” 或“Start”即可完成图像的扫描;图像的保存：三种方法：1“File”菜单下,“Save”或者“Save AS”;2点击右下角按钮;3点击工具栏按钮;如图所示另外,通过“File”菜单下的“Export”,也可将图像以其它格式输出;显微镜的触摸屏控制显微镜可由TFT 液晶触摸屏进行控制：由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面,触摸屏常用控制界面：TFT触摸屏控制直观、便捷;Objectives物镜控制TL透射光光闸RL反射光光闸Reflector荧光激发块控制荧光观察时,需要选择相应的荧光激发块或者激发波长、发射波长相近的荧光激发块Light path光路设置触摸控制,可将光路切换至“Eyepiece”目镜观察筒,或者将光路切换至左侧共聚焦光路“Sideport L”,或者将光路切换至前侧“Frontport”相机;关机顺序：1关闭软件：主菜单“File”——>“Exit”,退出共聚焦软件ZEN;2关闭主电脑操作系统、显示器电源;3关闭荧光灯电源;4关闭电动显微镜电源;5关闭Ar 激光器：先将扳钮从“Laser run” 扳到“Standby” 状态；再将钥匙逆时针从“—”旋转到“O”状态；等待约8-10分钟、激光器风扇停止转动后切记,将主开关按钮按到“OFF”;6扫描硬件系统COMPONENTS “OFF”电脑系统SYSTEMS/PC “OFF”主开关MAIN SWITCH “OFF”7等灯箱充分冷却后,再放防尘罩;8如果系统长时间超过5个小时不使用,则关闭稳压电源;3 系统的维护主要注意事项如下：1打开稳压电源时,应等待2 分钟电压稳定后,再开其它开关;2严格遵守激光器的开、关流程详见“、开/关机顺序”;3如果使用过油镜,或者物镜表面较脏,则需用擦镜纸擦干净物镜的前表面清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液,混合比例：无水乙醇30%、无水乙醚70%;4不使用荧光时,不打开荧光灯;避免频繁开/关荧光灯;5必须等灯箱充分冷却后,再小心地盖上防尘罩;6显微镜可由TFT触摸屏控制,使用触摸屏时注意：①手指保持清洁、干燥状态,并且为了保证他人使用安全,触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套；②触摸屏已足够灵敏,不要大力按压触摸屏；③不要旋转、插拔触摸屏;7刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录,实验前应准备好刻录光盘; 切记：为了防止计算机病毒,严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或者上网8未经授权,严禁自行安装任何软件9实验室温度应保持在22℃±2℃,湿度40%-60%;10避免空调直接对着显微镜吹风;11整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁;。