激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录:1 系统得组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统得使用2、1 开机顺序2、2 软件得快速使用说明2、3 显微镜得触摸屏控制2、4 关机顺序3 系统得维护1 系统得组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。

系统组成及光路示意图:电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明:电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统得使用2、1 开机顺序(1)打开稳压电源(绿色按钮)等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关(2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON”(3)打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关](注:具有5 档光强调节旋钮)(4)Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟,将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态,即可正常使用(5)打开[ 电脑开关],进入操作系统注:键盘上也具有[ 电脑开关]2、2 软件得快速使用说明(1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标(2)进入ZEN 界面,弹出对话框:“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、分析等。

“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已存图像数据得处理、分析。

(3)软件界面:1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)2 动作按钮;3 工具组(多维扫描控制);4 工具详细界面;5 状态栏;6 视窗切换按钮;7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块动作按钮:Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用2.1 开机顺序2.2 软件的快速使用说明2.3 显微镜的触摸屏控制2.4 关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。

系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1 开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关]（注：具有5 档光强调节旋钮）（4）Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[ 电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[ 电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。

“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。

（3）软件界面：1 功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2 动作按钮；3 工具组（多维扫描控制）；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser sea nning con focal microscope)，英文简写LSCM，俗称con focal。

LSCM是一种高科技显微镜，属于最先进的细胞生物学分析仪器。

我们学院使用的是瑞士徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。

使用流程1、登陆或5号楼606室公用电脑下载?激光共聚焦预约使用审核表?，打印并填写。

2、联系卢剑清(手机：)审核并签名。

3、持已签名的?激光共聚焦预约使用审核表? 至5号楼610室预约使用时间，及领取钥匙，联系人：窦凯飞(手机：。

4、在熟练使用者的指导下，进行实验。

5、实验结束，及时归还钥匙。

仪器构造和原理LSCM的根本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。

激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源，普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。

而LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度、相干性好等优点,可以防止普通显微镜的缺点。

一般常用的气体激光器如氩(Ar)、氪(Kr)、氦(He)、氖(Ne)。

illu min ati ng pin hole (照明针孔)：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源方向性强、发散小、亮度高、高度的空间和时间相干性以及平面偏振激发等独特的优点。

且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平面形成共聚焦装置。

分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后，通过物镜在样品聚焦。

对标本内焦平面上的每一点进行扫描，Focal plane (焦平面)：激光点光源照射物体在焦平面处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。

该光斑经过物镜和分光镜等一系列装置的处理，分别在照明针孔及探测针孔两处聚焦。

激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程（激光扫描共聚焦荧光显微镜）是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据、先进的分子细胞生物学的分析仪器。

紧要用于察看活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化，定量分析，以及实时定量测定等。

成像原理接受点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。

分光器将荧光直接送到探测器。

光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。

两者的几何尺寸一致，约100—200nm；相对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的透镜，终可同时聚焦于照明针孔和探测针孔。

这样，来自焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。

以激光逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，终在屏幕上聚合成清楚的整个焦平面的共聚焦图像。

每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这个光学横切面总是有确定厚度的，又称为光学薄片。

由于焦点处的光强宏大于非焦点处的光强，而且非焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深貌似为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描，形成待察看样品聚焦光斑处二维的光学切片。

把X—Y平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合，通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机软件处理，可以获得样品的三维图像。

即检测针孔和光源针孔始终聚焦于同一点，使聚焦平面以外被激发的荧光不能进入检测针孔。

激光共聚焦的工作原理简单表达就是它接受激光为光源，在传统荧光显微镜成像的基础上，附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置，通过计算机掌控来进行数字化图像采集和处理的系统。

基本结构（激光扫描共聚焦显微镜系统）紧要包括扫描模块、激光光源、荧光显微镜、数字信号处理器、计算机以及图像输出设备等。

激光共聚焦显微镜操作指南说明书激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope）是一种高分辨率、高对比度的显微镜，广泛应用于生物医学研究、材料科学等领域。

本操作指南将详细介绍激光共聚焦显微镜的操作流程和基本操作技巧，帮助用户正确、高效地使用该设备。

一、设备准备在开始使用激光共聚焦显微镜前，需要进行以下设备准备：1. 检查电源线和数据线是否连接正常，确保设备供电和数据传输正常；2. 检查激光源是否正常工作，激光功率是否稳定；3. 检查镜头和滤光片是否清洁，清除灰尘和污渍，确保成像质量；4. 准备适当的标本样品，并将其固定在载玻片上。

二、系统启动1. 确保设备处于待机状态，按下电源按钮，等待系统启动；2. 检查系统软件是否正常运行，若出现异常情况，及时联系维修人员进行处理；3. 检查镜头和滤光片的安装是否正确，确保成像时的光路通畅；4. 开启激光源，根据需要选择合适的激光波长和功率；5. 调节扫描镜和物镜的位置，使光线准确聚焦在样品上。

三、图像获取1. 打开激光共聚焦显微镜软件，并根据需要选择合适的成像模式；2. 调节激光功率和增益，确保图像的亮度和对比度适宜；3. 调节扫描镜的扫描速度，根据样品的要求选择合适的扫描速度；4. 调节焦距和聚焦位置，通过手动或自动对焦功能获取清晰的图像；5. 点击图像捕捉按钮，记录当前图像或录制图像序列。

四、图像处理和分析1. 通过激光共聚焦显微镜软件提供的图像处理功能，对图像进行调整和增强，以获得更好的观察效果；2. 根据需要，利用软件提供的计算和分析功能对图像进行进一步处理，如三维重建、光学切片等；3. 对图像进行定量分析时，选择合适的工具和算法，并按照要求设定参数；4. 记录和保存处理后的图像数据，以备后续分析和报告撰写使用。

五、设备关闭1. 停止图像采集和处理工作；2. 降低激光功率，关闭激光源；3. 将扫描镜和物镜返回初始位置，关闭设备；4. 断开电源和数据线，保持设备清洁干燥。

激光共聚焦操作步骤激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，简称LSCM），是一种光学显微镜，利用激光和扫描镜技术，能够对样品进行高分辨、高对比度的三维成像。

下面将介绍激光共聚焦显微镜的操作步骤。

1.准备工作：a.打开显微镜电源，确保仪器处于正常工作状态。

b.打开激光源电源，等待激光系统启动。

c.准备样品，将样品放置在载玻片上，并使用封口膜或密封胶固定。

2.调节孔径光阑：a.打开镜头盖，取下玻璃保护盖。

b.观察显微镜视野，调节孔径光阑的大小，以获得最佳的入射光。

c.用合适的滤光片选择适当激光激发波长。

3.调节激光功率：a.打开激光源的控制面板。

b.选择合适的激光功率，通常初次使用时可选择较低功率。

c.通过目镜观察激光处于合适的位置和方向，避免直接观察激光。

4.调节焦距：a.打开目镜盖，观察样品上的图像。

b.调节目镜的焦距，获得清晰的图像。

c.使用恰当的倍率进行观察，确保所需的细节可见。

5.调节光路：a.打开激光共聚焦显微镜软件，进行光路调节。

b.调节反射镜和聚焦镜，确保激光能够准确地聚焦在样品上。

c.通过调节扫描镜，使激光能够扫描整个样品。

6.设置扫描参数：a.在软件中选择扫描参数，如扫描速度、像素大小等。

b.减至最小的扫描区域，以便首先观察最感兴趣的区域。

c.如有需要，可以进行连续扫描或者多通道扫描的设置。

7.开始扫描：a.点击软件界面上的“开始”按钮，开始扫描。

b.观察扫描时光点在样品上的移动情况，确保图像的获取和处理是正确的。

c.根据需要调整扫描参数，以获得更好的图像质量。

8.界定感兴趣区域（ROI）：a.选择感兴趣的图像区域，用鼠标进行界定。

b.设置参数，如增益、对比度、亮度等，以便获得更好的视觉效果。

c.按下截图按钮，将感兴趣的图像保存下来。

9.分析和处理图像：a.关闭扫描功能，进入图像处理模式。

b.使用软件提供的功能分析和处理图像，如三维重建、图像拼接等。

ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼-°æȨËùÓÐ (c by Foxit Software Company, 2004 - 2007½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£德国Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜快速操作手册制作：制作：Zeiss 光学仪器（光学仪器（上海）上海）国际贸易有限公司2011年6月目录：目录：系统组成及光路示意图实物照片说明实物照片说明2.1 开机顺序2.2 软件的快速软件的快速使用快速使用说明使用说明2.3 显微镜的显微镜的触摸屏控制2.4 关机顺序激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、电动荧光显微镜、扫描检测单元、扫描检测单元、激光器、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。

电脑工作站及各相关附件组成。

系统组成及光路系统组成及光路示意图组成及光路示意图：示意图：电动荧光显微镜扫描检测单元激光器电脑工作站 ½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£°æȨËùÓÐ (c by Foxit Software Company, 2004 - 2007ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼-实物照片说明：实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO 2培养系统控制器激光器电脑工作站ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼-°æȨËùÓÐ (c by Foxit Software Company, 2004 - 2007½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£2.1 开机顺序（打开稳压电源（ 1）打开稳压电源（或拖线板的电源）（2）打开 [扫描载物台开关 ][ 电动显微镜开关 ]打开 [ 荧光灯开关（注：具有荧光光强调节旋钮具有荧光光强调节旋钮）旋钮）（3）打开 [ 电脑开关 ]，进入操作系统注：键盘上也具有 ]（4）打开激光器电源开关，将激光器上的钥匙转到水平位置ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼-°æȨËùÓÐ (c by Foxit Software Company, 2004 - 2007½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、——分析等。

激光扫描共聚焦显微镜ZEISS 780操作规程本设备属于精密设备，操作人员必须提前熟悉其适用范围、结构、性能及其具体操作方法，未经操作培训者不能进行上机操作。

通过操作培训的人员必须严格按照仪器管理老师的培训要求及设备使用说明书指定的操作进行工作。

1.开机提前进行镜检，确保样本无误；查看空调温度、抽湿机湿度和不间断电源工作情况。

1.1开三相稳压电源。

注意：先开稳压电源后面的黑色扳手开关①，再按下稳压电源前面的绿色按钮②，如果出现报警声，请马上关闭稳压电源，并报告管理人员。

1.2两分钟以后依次打开电源控制板上的三个开关。

先打开主开关MAIN SWITCH③，再依次打开SYSTEMS/PC④和COMPONENTS⑤开关。

注意：各个开关不要同时按下，开机时仪器会进行自检，每按下一个开关，请等待相应的部件自检完毕后再开下一个开关。

1.3打开电脑开关⑨，点击“LSM User”图标，进入桌面；当看到桌面右下角显示“注意安全”图标时，方可点击桌面中央的ZE N软件图标；然后点击“Start System”按钮开启软件。

注意：当桌面右下角始终不显示“注意安全”图标时，不可启动软件。

这时把电脑主机左边那台仪器的盖子掀开，按一下“Reset”按钮，等待电脑桌面右下角出现“注意安全”图标。

1.4打开氩离子激光器（若不使用458nm或488nm或514nm激光线则不需要打开）。

先打开氩离子激光器正面的开关ON⑥，再顺时针旋转钥匙⑦至“—”的方向，等待绿色指示灯亮起方可开启光路(大约5-10min)。

注意：Ar+激光器在启动后，需要1h左右的预热时间才能进入稳定状态。

若闲置时间1h以上，可将激光器扳钮由“laser run”位置扳至“idle power”处⑧，保护激光器，延长使用寿命。

2.找目标2.1在明场下用Transmitted light找目标，点击①、②、③、④注意：如果实验只使用空气镜，放置样品后，建议先选择低倍物镜找细胞，再换用高倍物镜微调即可。

激光共聚焦扫描显微镜操作规程一．开机程序1．开启总电源，确认所有仪器电源状态正常工作2．开启电脑，双击桌面上的LSM510图标，开启显微镜。

3．在初始平面上点击Start Expert Mode 键开启专家拍摄模式。

4．在主菜单中点击File New键，建立新的数据库。

二．软件拍摄1．在主菜单上点击Acquire Laser键，开启需要使用的激光2．在主菜单上点击VIS键，开启显微镜观察模式3．把需要观察的玻片放到载物台上选择需要观察的平面4．在主菜单上点击LSM键，开启进入显微镜激光扫描模式5．在主菜单上点击Config键，选择所需要扫描的模式及参数6．在主菜单上点击Scan Find键，进行图像参数自动校正7．在Scan子菜单下点击Fast X键，进行层面选择8．在连续扫描中调节放大器增益、补偿；激光强度等图像参数来优化图像9．点击图像子菜单上的Save键存储优化好的图像三．关机程序1．完成所有操作后，关掉激光开关，冷却5分钟后，点击主菜单上Exit键，退出所有程序2．关闭电脑3．关闭电源ZEISS 510 MET A二维扫描程序1.在Acquire → config →确定扫描所需的波长，（如果已作过相同方法的扫描，可直接调出一张相同条件的图像，用图像窗中的Reuse确定有关的扫描条件）2.在Acquire → micro →在低倍镜(透射光或荧光)下找到要观察的图像3.在Scan control → mode → find →在显示器上找到图像，选定扫描需用的分辨率4.调节物镜到适当的放大倍数5.Scan control → mode →New，打开一新图像窗6.在Scan control → mode → cont →用zoom将图像大小调至最佳，用Pinhole（一般选1）、Detector Gain（650左右，不宜时间超过800，也不宜低于500）、Amplifier offset（不宜过低），以及选择作算术平均值次数、调节激光强度（488nm不超过25%）等调节图像质量至最佳。

激光共聚焦显微镜方法步骤
激光共聚焦显微镜（简称CLSM）是一种高分辨率的显微镜技术，常用于生物学、医学和材料科学领域。

下面我将从多个角度全面介
绍激光共聚焦显微镜的方法步骤。

1. 样品准备：
在进行CLSM观察之前，首先需要准备样品。

样品的准备包
括固定、染色和清洁等步骤。

固定样品可以使用化学试剂或生理盐水，染色则可以使用荧光染料或荧光蛋白等方法，以增强样品的对
比度和可见性。

2. 仪器设置：
在进行CLSM观察之前，需要对显微镜进行仪器设置。

这包
括选择合适的激光波长、光学滤波器和放大倍数等参数，以确保获
得清晰的荧光信号和高分辨率的图像。

3. 成像扫描：
接下来是进行成像扫描。

CLSM使用激光束来扫描样品，并
收集样品发出的荧光信号。

通过逐点扫描和逐层堆叠，可以获得样
品的三维图像。

4. 数据分析：
获得图像后，可以进行数据分析。

这包括图像处理和三维重
建等步骤，以获取更多关于样品结构和组织的信息。

5. 结果解释：
最后是结果的解释。

根据获得的图像和数据，可以对样品的
结构和功能进行解释和分析，从而得出科学研究或临床诊断的结论。

总的来说，激光共聚焦显微镜的方法步骤包括样品准备、仪器
设置、成像扫描、数据分析和结果解释。

这些步骤需要精确操作和
细致处理，以获得准确、可靠的显微镜图像和数据。

一、实验环境观察仪器是否有外表明显损坏，如需开启空调，一般控制在25度。

拉上窗帘，避免标本荧光淬灭及杂光干扰。

二、开机查看实验记录，确认是否马上能开机（注意：汞灯必须在关机20分钟以后才能再开启，一般为30分钟）。

确认后可执行以下操作：（务必先开电源，后开钥匙！！！）。

1、打开PSU（主电源）2、打开激光器（只开启需使用的激光器）1）、氩离子多线激光器（458/488/515，应用染料：GFP/FITC/Fluo3/Alexa488/CFP/YFP 等）。

2）MCPSU半导体综合激光器（LD405应用染料：DAPI/Hoechst/BFP等；LD635应用染料：CY5/ Alexa647等）。

3）LD559激光器（注意：电源打开后不要马上开钥匙，等待TEMP指示灯不闪烁后，再开钥匙，红色指示灯不闪烁后，可正常使用）。

3、打开显微镜电源IX2-UCB4、打开荧光汞灯（注意：开启后，“15分钟内勿关”）5、打开电脑主机、显示器，登陆windows xp系统，双击共聚焦软件，打开FV10-ASW应用软件。

三、取图1、DIC（微分干涉差）明场立体图（1）、插入起偏镜、检偏镜（DIC滑块）。

（2）、FV10-ASW软件中点击透射光观察按钮，打开卤素灯快门，使用TD滑块（软件TD lamp项）控制卤素灯的光强，倒置显微镜下观察标本，进行标本聚焦。

1）、使用手控面板选择合适倍率的物镜下观察（注意若用60×油镜时，检偏镜部位要推上弯杆），并检查各物镜对应的DIC元件。

2）、可在检偏镜部位用旋钮进行对比度的调节。

（需要时可使用，一般勿调）（3）、FV10-ASW软件中点击透射光观察按钮，关闭卤素灯快门。

打开DIC通道，执行取图操作。

1）、调节扫描速度至最快（2.0us/pixel），size为512by，点击，进行快速预扫，寻找焦平面。

步骤：适当调节HV、gain及offset参数（一般为能看到图像即可），快速调节寻找焦平面，如需放大光学倍数，可适当调节。

激光扫描共聚焦显微镜操作指南说明书[激光扫描共聚焦显微镜操作指南说明书]引言：本操作指南为用户提供激光扫描共聚焦显微镜的详细操作流程及相关注意事项。

在使用本设备之前，请仔细阅读本指南，以确保能够正确、安全地操作设备，并获得最佳的成像效果。

一、设备介绍激光扫描共聚焦显微镜是一种先进的显微镜技术，结合了共聚焦成像和激光扫描技术，可以实现高分辨率、三维成像及活细胞观察等功能。

本设备由以下主要部分组成：1. 共聚焦显微镜主体：包括光源系统、光学系统、扫描系统、探测器等核心部件。

请勿对主体进行任何未经授权的拆卸或修改。

2. 控制系统：用于控制设备的开关、成像参数设置、图像采集及处理等功能。

在操作设备之前，请确保控制系统处于正常工作状态。

二、准备工作在操作激光扫描共聚焦显微镜之前，请进行以下准备工作：1. 检查设备：确保设备的电源线、信号线、光纤等连接线路良好，无损坏或松动情况。

2. 准备标本：根据需要观察的样本类型，准备适当的标本片，并在标本片上施加适当的荧光染料。

3. 调整镜片：根据需要选择适当的镜头，并按照设备说明进行安装和调整。

三、操作步骤以下为基本的操作流程，具体步骤可能会因设备型号和厂家而有所不同，请根据实际情况进行操作：1. 打开设备电源：将电源开关置于“开启”位置，待设备启动完全后，检查设备各部分是否正常。

2. 设置成像参数：通过控制系统，设置激光波长、放大倍数、成像模式等参数。

根据标本类型及观察需求，合理选择参数设置。

3. 校准镜片：根据设备说明书，进行扫描头和标本之间的焦距调整，保证成像过程中的清晰度和准确度。

4. 开启激光：根据标本需要，选择相应的激光波长，并逐一打开相应激光。

5. 定位标本：通过显微镜目镜进行初步观察，调整位置和焦距，使标本位于成像区域。

6. 开始扫描成像：在控制系统中选择扫描图像模式，点击“开始扫描”按钮，启动扫描成像过程。

7. 图像采集和处理：根据需要，可设置图像采集的帧数、分辨率等参数，并在采集图像后进行必要的图像处理和分析。

激光扫描共聚焦显微镜操作说明书操作说明书激光扫描共聚焦显微镜是一种高端的显微镜设备，具有高分辨率、高灵敏度的特点，广泛用于生物学、医学、材料科学等领域。

为了正确且有效地操作激光扫描共聚焦显微镜，本操作说明书将为您提供详细的指导。

一、设备介绍激光扫描共聚焦显微镜由以下主要部分组成：1. 显微镜主体：负责接收样本的光信号，并进行扫描成像。

2. 激光系统：提供高能量、高稳定性的激光光源，用于激发样本的荧光信号。

3. 探测系统：用于接收样本的荧光信号，并将其转化为图像信号。

4. 控制系统：提供对显微镜参数进行调节和设置的功能。

二、注意事项在操作激光扫描共聚焦显微镜之前，请确保您已熟悉以下注意事项：1. 安全操作：激光光源具有较强的激光辐射，请佩戴适当的激光防护眼镜并避免直接暴露于激光光束下。

2. 样本准备：样本应事先处理好并放置在适当的载玻片上，确保样本表面平整，避免气泡或杂质的干扰。

3. 导入样本：轻轻将载玻片插入显微镜主体的样本台中，并用调节旋钮精确定位样本。

4. 参数设置：根据实验需要，设置合适的激光功率、放大倍数和扫描速度等参数，确保获得清晰的图像。

5. 镜头清洁：定期清洁显微镜镜片，避免灰尘或污渍影响成像质量。

注意使用专用的镜头清洁纸和清洁液。

三、操作步骤基于激光扫描共聚焦显微镜的特点，以下为一般操作步骤的指导：1. 打开设备电源，等待设备启动并进行自检。

2. 调节放大倍数：通过显微镜主体上的放大调节旋钮，调节适当的放大倍数，以便观察到合适大小的图像。

3. 确定激光功率：在控制系统中，设置合适的激光功率以激发样本的荧光信号，避免过高的功率导致样本损伤。

4. 调整扫描速度：通过控制系统中的扫描速度调节器，设置合适的扫描速度，以获得清晰且稳定的图像。

5. 对焦样本：使用显微镜主体上的对焦调节旋钮，将样本调焦至最清晰状态。

6. 开始扫描：通过控制系统中的扫描启动按钮，启动扫描功能，并观察图像显示区域是否居中和清晰。

激光扫描共聚焦显微镜（A1R-si）操作指南目录第一章：Ti-E 显微镜操作2-7 显微镜光路调节和照明注意事项 6Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC 棱镜对照表7第二章：共聚焦开关机8-10 第三章：共聚焦图像拍摄1-38NIS-Elements C 软件开启和操作界面简介1-15NIS-Elements C 的实时图像获得基本操作16-23图像拍摄24-27探测模式（标准探测器）设置28-38 第四章: 图像的保存和查看39-42 第五章：图像分析43-46 附件一、多维拍摄功能和操作方式介绍47-51附件二：图像格式批量转换操作52-53第一章Ti-E 显微镜操作指南（一）认识显微镜各个部件（1）滤光片：包括D---毛玻璃；NCB---色温（8）滤色块转盘（包括DIC 检偏器）；平衡片；ND---减光片；“G IF”---绿色滤（9）手动荧光光闸；光片和用于PFS 的红外滤光片；（10）电动焦距调节旋钮；（2）视场光阑；（11）ND 减光片；（3）聚光器升降旋钮；（12）遥控器；（4）起偏器（DIC 用）；（13）透射光电源；（5）聚光器对中旋钮；（14）汞灯荧光光源；（6）孔径光阑；（15）PFS 控制器（7）聚光器模块（包括明视场，DIC）；（16）HUB 控制器遥控器示意图(根据具体配置有些图标可能不显示)1）物镜切换按钮；2）滤光块，DIC 检偏器切换按钮；3）DIC 检偏器快速切换按钮；4）光路端口切换按钮；5）PFS 开关控制按钮；6）聚光器转盘切换按钮；7）透射光源控制按钮*。

*请注意：CNTL 按钮灯亮，则可以通过遥控器或电脑控制软件来调节透射光源强度，此时显微镜底座左侧光源开关和调节旋钮锁定；CNTL 功能关闭，可以通过显微镜底座开关和旋钮来控制透射光源。

前面板示意图1）状态显示屏；2）PFS 开关按钮和PFS 聚焦状态指示灯（需要选购PFS 部件）；3）光路端口切换按钮；4）中间变倍旋纽；侧面板示意图1）调焦旋钮2）粗微调切换按钮3）物镜切换按钮；4）滤光块，DIC 检偏器切换按钮5）透射光光源开关（当遥控器透射光源控制按钮打开时，此按钮无效）；6）透射光量度调节旋钮（当遥控器透射光源控制按钮打开时，此旋按钮无效）；7）物镜复位；8）物镜向下移动2 毫米；注意：在使用显微镜之前，要把主机底座右后端的黑色HUB 控制器（显微镜示意图15 位置）右侧的电源开关打开。

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用2.1 开机顺序2.2 软件的快速使用说明2.3 显微镜的触摸屏控制2.4 关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。

系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1 开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关]（注：具有5 档光强调节旋钮）（4）Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[ 电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[ 电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。

“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。

（3）软件界面：1 功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2 动作按钮；3 工具组（多维扫描控制）；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。

使用激光共聚焦显微镜进行实验的主要流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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激光共聚焦显微镜图像分析的基本步骤激光共聚焦显微镜是一种高分辨率、高对比度的显微镜技术，广泛应用于细胞生物学、药物研发、材料科学等领域。

本文将介绍激光共聚焦显微镜图像分析的基本步骤。

第一步：数据采集激光共聚焦显微镜通过集焦光束扫描样本，得到连续的光学切片图像。

图像采集是整个分析过程的基础步骤，关系到后续图像处理和分析的准确性。

在进行图像采集前，需要根据样本的特点和研究目的选择合适的显微镜镜头、激发波长和检测滤光片等。

第二步：图像预处理由于样本的荧光信号受到自然光和背景噪声的影响，采集到的图像往往不够清晰。

因此，在进行图像分析之前，通常需要对图像进行预处理来增强信号。

预处理的具体方法包括去噪、反淡化和图像增强等。

去噪可以使用平滑滤波算法，反淡化可以通过图像锐化算法来实现，图像增强则可以通过直方图均衡化等方法来提高对比度。

第三步：图像分割图像分割是将图像中的目标物体与背景相分离的过程。

在激光共聚焦显微镜图像中，可以根据样本的荧光强度、颜色以及形态学特征等信息进行分割。

常用的图像分割算法包括阈值分割、边缘检测和区域生长等。

分割后的图像可以更清晰地显示样本的形态和结构。

第四步：目标识别与定量分析经过图像分割后，可以对图像中的目标进行识别和测量。

目标识别可以通过计算图像中连通区域的特征参数来实现，如面积、周长、形状等。

目标的定量分析可以根据研究需求进行不同的统计和计算，如细胞数量统计、染色体长度测量等。

这些定量分析可以提供更精确的结果，帮助研究者深入理解样本的特性和变化。

第五步：数据可视化与结果呈现图像分析得到的结果通常以图表或图像的形式展示。

数据可视化可以让研究者更直观地理解和分析分析结果。

常用的可视化方法包括直方图、散点图、线图等。

此外，图像的后处理和调整也是结果呈现的重要环节，可以通过调整亮度、对比度和色彩平衡等参数，使图像更加美观和易于理解。

综上所述，激光共聚焦显微镜图像分析是一个复杂的过程，包括数据采集、图像预处理、图像分割、目标识别与定量分析以及数据可视化等多个步骤。

Leica TCS SP2 激光共聚焦显微镜系统操作手册一、荧光显微镜Leica DMRE的使用A：步距调节B：电动升台按钮C：电动降台按钮D：微调E：上限设置F：下限设置1、观察、扫描转换拉杆2、卤素灯开关3、透射光探测器开光横档4、荧光光路开关5、荧光滤镜转盘1：DAPI；2：TRITC；3：FITC；4：SCAN6、镜头侧DIC棱镜转盘7、与镜头相配DIC滤块8、起偏器9、检偏器10、镜头侧DIC棱镜微调旋钮11、光强调节纽12、减光滤光片13、孔径光阑14、视场光阑选择合适的镜头Leica TCS SP2 镜头配置镜头类型使用介质放大倍率/数值孔径编号HC PL APO CS DRY 10X /0.4 506511HC PL APO CS DRY 20X/ 0.7 506513HC PL APO CS DRY 40 X 0.85/ CORR 506140HC PL APO Ibd.BC OIL 63X /1.4 506192Leica TCS SP2 AOBS 镜头配置镜头类型使用介质放大倍率/数值孔径编号HC PL FLUOTAR DRY 10X/0.3 506505HC PL FLUOTAR DRY 20X/0.5 506503HCX PL APO OIL 40X/1.25-0.75 506176HC PL APO Ibd.BC OIL 63X/1.4 506192 HCX PL APO CS OIL 100X/1.40-0.70 506038 WATER HCX APO L U-V-I WA TER 63X/0.9 506148荧光观察荧光光路开关至“O”位，转轮至“1.0×”位，转换拉杆完全推进，荧光滤块换到相应号位（1：DAPI；2：TRITC；3：FITC；4：SCAN）图像输出扫描荧光光路开关至“I”位，转轮至“UV”位，转换拉杆完全拉出，荧光滤块换到4：SCAN）荧光观察（以油镜观察为例）1、样品正面朝上正确放在显微镜样品台上，点上镜油。