共聚焦显微镜预约和使用注意事项

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser sea nning con focal microscope)，英文简写LSCM，俗称con focal。

LSCM是一种高科技显微镜，属于最先进的细胞生物学分析仪器。

我们学院使用的是瑞士徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。

使用流程1、登陆或5号楼606室公用电脑下载?激光共聚焦预约使用审核表?，打印并填写。

2、联系卢剑清(手机：)审核并签名。

3、持已签名的?激光共聚焦预约使用审核表? 至5号楼610室预约使用时间，及领取钥匙，联系人：窦凯飞(手机：。

4、在熟练使用者的指导下，进行实验。

5、实验结束，及时归还钥匙。

仪器构造和原理LSCM的根本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。

激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源，普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。

而LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度、相干性好等优点,可以防止普通显微镜的缺点。

一般常用的气体激光器如氩(Ar)、氪(Kr)、氦(He)、氖(Ne)。

illu min ati ng pin hole (照明针孔)：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源方向性强、发散小、亮度高、高度的空间和时间相干性以及平面偏振激发等独特的优点。

且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平面形成共聚焦装置。

分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后，通过物镜在样品聚焦。

对标本内焦平面上的每一点进行扫描，Focal plane (焦平面)：激光点光源照射物体在焦平面处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。

该光斑经过物镜和分光镜等一系列装置的处理，分别在照明针孔及探测针孔两处聚焦。

蔡司共聚焦显微镜安全操作及保养规程前言蔡司共聚焦显微镜是一种高分辨率成像设备，广泛应用于生命科学、物质科学等领域。

为保障设备安全、延长设备使用寿命，特制定本文档，介绍该设备的安全操作及保养规程。

安全操作规程1.在操作前，应查询设备的使用说明书，并全面了解设备的性能及操作方法。

2.在使用前，应先检查设备是否正常，确保仪器各部件安装牢固、电线不松动，各部件动作正常。

3.严禁将化学试剂或其他腐蚀性物质放入显微镜中，以免损坏设备。

4.操作中应遵循“先关灯后关机，先开机后开灯”的原则，确保设备正常开启或关闭。

5.切勿使用过大或过小的力量操作显微镜，以免影响设备寿命。

6.当设备因异常情况需要紧急停机时，应使用急停开关，切勿使用电源开关，避免损坏设备。

7.在设备开启状态下，切勿随意更换设备配件或涉及设备内部维修，如有异常情况应立即向厂商或专业技术人员求助。

保养规程1.在设备正常使用期间，应加强对设备的保养和维护，保持设备的清洁和干燥。

2.设备需要接通电源时，在保证电压稳定的情况下，应使用稳定的电源并加装过电压保护装置，避免对设备产生损害。

3.在操作前，应对设备进行彻底清洁，清洁过程中不得直接将水或清洁剂倒在设备上或对设备产生损害的部位。

4.在清洗设备时，应用干燥软布或软毛刷进行擦拭，切勿使用含有酸碱成分的清洁剂或物品，以免对设备产生腐蚀或损害设备表面。

5.在清洗设备表面时，不得将清洁剂或水进入仪器内部，以免对设备产生损害。

6.镜头是设备中最为重要的部分，应特别注意保养，如镜头脱落、变形、磨损或压伤等情况，应及时向专业技术人员进行维修和更换。

7.设备长时间不用时，应及时切断电源并将设备置于安全干燥的地方，保护好设备的各部件，避免设备长时间不用而导致的性能损害。

结语蔡司共聚焦显微镜是一种高精度设备，安装、操作及保养过程中需要严格遵守规程，避免对设备产生不必要的损害。

在设备的日常使用和保养过程中，我们应该掌握正确的操作和保养方法，保证设备在长期使用中保持良好的性能状态。

关机流程基本上是上述过程的反方向。

有钥匙的电源装置开机顺序是先开电源，后关钥匙；关机的顺序是先关钥匙，后关电源。

（没有等待风扇停转过程）
透射光：点击透射
在下预扫，调节焦距、zoom、角度和
调节标本颜色、反差
Kalman 取图
1图像满足要求时，：选择合适的扫描分辨
率。

（如果取时间或Z轴图
像，应选择相应的XYT
××共聚焦显微镜使用注意事项和维护：
1. 使用油镜后要及时用擦镜纸沾擦镜液（30％乙醇、70％乙醚混合液）擦干净。

2. 遵守共聚焦系统的开机和关机流程，并注意严格遵守氩离子激光器关机顺序！
3. 不要用手强行扳动显微镜电动部件，调节显微镜手动部件时，用力要轻，遇到阻力时不要强行调节。

4. 尽量不要直接接触显微镜光学部件，不要弯折光纤。

5. 不要随意插拔电源。

6. 不要直视激光，以免损伤眼睛。

7. 使用完毕后，等待仪器（尤其是光源部分）冷却后再盖上防尘罩。

8. 如果外露光学部分如目镜、物镜和聚光镜被灰尘等污染，需要用擦镜液擦拭干净。

激光共聚焦操作步骤激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，简称LSCM），是一种光学显微镜，利用激光和扫描镜技术，能够对样品进行高分辨、高对比度的三维成像。

下面将介绍激光共聚焦显微镜的操作步骤。

1.准备工作：a.打开显微镜电源，确保仪器处于正常工作状态。

b.打开激光源电源，等待激光系统启动。

c.准备样品，将样品放置在载玻片上，并使用封口膜或密封胶固定。

2.调节孔径光阑：a.打开镜头盖，取下玻璃保护盖。

b.观察显微镜视野，调节孔径光阑的大小，以获得最佳的入射光。

c.用合适的滤光片选择适当激光激发波长。

3.调节激光功率：a.打开激光源的控制面板。

b.选择合适的激光功率，通常初次使用时可选择较低功率。

c.通过目镜观察激光处于合适的位置和方向，避免直接观察激光。

4.调节焦距：a.打开目镜盖，观察样品上的图像。

b.调节目镜的焦距，获得清晰的图像。

c.使用恰当的倍率进行观察，确保所需的细节可见。

5.调节光路：a.打开激光共聚焦显微镜软件，进行光路调节。

b.调节反射镜和聚焦镜，确保激光能够准确地聚焦在样品上。

c.通过调节扫描镜，使激光能够扫描整个样品。

6.设置扫描参数：a.在软件中选择扫描参数，如扫描速度、像素大小等。

b.减至最小的扫描区域，以便首先观察最感兴趣的区域。

c.如有需要，可以进行连续扫描或者多通道扫描的设置。

7.开始扫描：a.点击软件界面上的“开始”按钮，开始扫描。

b.观察扫描时光点在样品上的移动情况，确保图像的获取和处理是正确的。

c.根据需要调整扫描参数，以获得更好的图像质量。

8.界定感兴趣区域（ROI）：a.选择感兴趣的图像区域，用鼠标进行界定。

b.设置参数，如增益、对比度、亮度等，以便获得更好的视觉效果。

c.按下截图按钮，将感兴趣的图像保存下来。

9.分析和处理图像：a.关闭扫描功能，进入图像处理模式。

b.使用软件提供的功能分析和处理图像，如三维重建、图像拼接等。