德国Zeiss 激光共聚焦显微镜 快速操作手册

(1)用室温下的PBS洗涤细胞三次，弃去PBS；
(2)用4%的多聚甲醛溶液37o C固定细胞15-30min；
(3)用PBS洗三次，每次5min；
(4)用0.2%的TritonX-100透化细胞10min；
(5)PBS洗三次，每次5min；
(6)用含1%的二抗来源血清(消除非特异性影响)的PBS封闭1h；
(7)PBS洗三次，每次5min；
(8)室温孵育一抗1h(用封闭液配制,1:50)；(两个抗体可以一起孵育)
(9)PBS洗三次，每次5min；
(10)室温避光孵育二抗1h(用封闭液配制,1:50)；
(11)用PBS洗三次，每次5min (以下步骤均需避光进行) ；
(可省略)(12)用RNase在37o C下消化细胞30min(使用终浓度为20μg/ml)以除去细胞内的RNA；
(13)PBS洗三次，每次5min；
(14)用Hochest33342对细胞核进行染色(使用浓度为1μg/ml,1:1000),室温避光处理20min；
(15)用PBS洗三次，每次5min；
(16)置于激光共聚焦扫描显微镜下,用100×油镜进行观察,并保存结果。

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser sea nning con focal microscope)，英文简写LSCM，俗称con focal。

LSCM是一种高科技显微镜，属于最先进的细胞生物学分析仪器。

我们学院使用的是瑞士徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。

使用流程1、登陆或5号楼606室公用电脑下载?激光共聚焦预约使用审核表?，打印并填写。

2、联系卢剑清(手机：)审核并签名。

3、持已签名的?激光共聚焦预约使用审核表? 至5号楼610室预约使用时间，及领取钥匙，联系人：窦凯飞(手机：。

4、在熟练使用者的指导下，进行实验。

5、实验结束，及时归还钥匙。

仪器构造和原理LSCM的根本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。

激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源，普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。

而LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度、相干性好等优点,可以防止普通显微镜的缺点。

一般常用的气体激光器如氩(Ar)、氪(Kr)、氦(He)、氖(Ne)。

illu min ati ng pin hole (照明针孔)：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源方向性强、发散小、亮度高、高度的空间和时间相干性以及平面偏振激发等独特的优点。

且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平面形成共聚焦装置。

分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后，通过物镜在样品聚焦。

对标本内焦平面上的每一点进行扫描，Focal plane (焦平面)：激光点光源照射物体在焦平面处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。

该光斑经过物镜和分光镜等一系列装置的处理，分别在照明针孔及探测针孔两处聚焦。

激光共聚焦操作步骤激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，简称LSCM），是一种光学显微镜，利用激光和扫描镜技术，能够对样品进行高分辨、高对比度的三维成像。

下面将介绍激光共聚焦显微镜的操作步骤。

1.准备工作：a.打开显微镜电源，确保仪器处于正常工作状态。

b.打开激光源电源，等待激光系统启动。

c.准备样品，将样品放置在载玻片上，并使用封口膜或密封胶固定。

2.调节孔径光阑：a.打开镜头盖，取下玻璃保护盖。

b.观察显微镜视野，调节孔径光阑的大小，以获得最佳的入射光。

c.用合适的滤光片选择适当激光激发波长。

3.调节激光功率：a.打开激光源的控制面板。

b.选择合适的激光功率，通常初次使用时可选择较低功率。

c.通过目镜观察激光处于合适的位置和方向，避免直接观察激光。

4.调节焦距：a.打开目镜盖，观察样品上的图像。

b.调节目镜的焦距，获得清晰的图像。

c.使用恰当的倍率进行观察，确保所需的细节可见。

5.调节光路：a.打开激光共聚焦显微镜软件，进行光路调节。

b.调节反射镜和聚焦镜，确保激光能够准确地聚焦在样品上。

c.通过调节扫描镜，使激光能够扫描整个样品。

6.设置扫描参数：a.在软件中选择扫描参数，如扫描速度、像素大小等。

b.减至最小的扫描区域，以便首先观察最感兴趣的区域。

c.如有需要，可以进行连续扫描或者多通道扫描的设置。

7.开始扫描：a.点击软件界面上的“开始”按钮，开始扫描。

b.观察扫描时光点在样品上的移动情况，确保图像的获取和处理是正确的。

c.根据需要调整扫描参数，以获得更好的图像质量。

8.界定感兴趣区域（ROI）：a.选择感兴趣的图像区域，用鼠标进行界定。

b.设置参数，如增益、对比度、亮度等，以便获得更好的视觉效果。

c.按下截图按钮，将感兴趣的图像保存下来。

9.分析和处理图像：a.关闭扫描功能，进入图像处理模式。

b.使用软件提供的功能分析和处理图像，如三维重建、图像拼接等。

激光共聚焦显微镜操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!以下是激光共聚焦显微镜的一般操作流程：1. 样品制备根据实验要求，准备好待观察的样品。

激光共聚焦显微镜中文说明书12020年4月19日激光共聚焦显微镜FV1000(倒置显微镜IX81) 简易使用说明书2 2020年4月19日32020年4月19日开启系统 1.打开计算机.2.打开激光器.(打开钥匙开关.) 2-1.多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) ON2-2氦氖绿 (543 nm) ON2-3氦氖红 (633 nm) ON 3.打开汞灯电源开关. 4.登陆 Windows XP 系统.User ID: Administrator Password: fluoview5.双击快捷方式：打开 FV10-ASW 应用软件.5231文档仅供参考，不当之处，请联系改正。

42020年4月19日User ID: AdministratorPassword: Administrator* 系统软件的启动需要等待一定时间.显微镜镜下观察 微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜. (参照Memo .)2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.*DIC元13 24手控面板用此旋钮进行微分涉法对比度的调.4.点击FV10-ASW软件中的图标.Note1:使用TD滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“6.DICT”，如果不是，用手柄按下DICT 图标5.标本聚焦Memo显微镜镜下观察荧光观察52020年4月19日619日1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW 软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照Memo .)4.标本聚焦.2Hand switchMemo 关于荧光滤NIB ： 蓝色激/ 绿色荧（FIT 、 EGFP 等WIG ： 绿色激/红 色 荧（Rhodamin 、 DsRed 等72020年4月19日扫描模式扫激光输出的调节明场观察( 显微镜镜下观察) 荧光观察( 显微镜镜下观察 ) 扫描的按钮 选择 XYZ,XYT 或 XYL 每个通道的调节 共聚焦的孔径大小 卤素灯的光强调节 Kalman方式 染料选择 光路图取图条件的保存 调出取图条件TwinScanner设定图像的拇指索引图像显示窗口内存中所显示的文件Lambda扫描的设定 物镜 聚焦时间间隔和时间计数( 用于 XYT 或 XT 扫描)λ 扫描带宽选择描速82020年4月19日文档仅供参考，不当之处，请联系改正。

共聚焦显微镜操作入门指南(仅供内部使用)文档作者：李宇(liyu@) 日期：2012-12-04文档校对：李宇日期：2012-12-04卡尔蔡司中国版权所有不得复制目录1开机 (1)1 .1接通总电源 (1)1 .2打开激光器 (1)1 .3打开控制器、主控电脑 (1)2使用激光共聚焦扫描软件Zen 2010 (2)2 .1打开软件 (2)2 .2切换到明场观察模式（目镜筒） (2)2 .3放入样品并在明场模式下找到焦平面 (3)2 .4切换到共聚焦扫描模式 (6)2 .5设置激光扫描参数，找到样品最亮的焦平面位置 (6)2 .6设置Z-stack扫描上下限 (8)2 .7开始扫描 (10)2 .8分析扫描结果，进行三维观测 (11)3关机 (15)4附：目镜中，使用明场、暗场和偏光模式观察样品 (16)4 .1明场模式 (16)4 .2暗场模式 (17)4 .3偏光模式 (17)5附：使用相机（CCD）拍摄明场、暗场和偏光图 (18)5 .1拍摄明场图 (18)5 .2拍摄暗场图 (19)5 .3拍摄偏光图 (19)1 开机1 .1接通总电源图 1 从左至右依次为：墙体总电源、稳压器电源、激光器和电脑电源1 .2打开激光器图 2 转动激光器钥匙，打开激光器，LED指示灯亮1 .3打开控制器、主控电脑图 3 依次打开左图显微镜主机控制器电源、右图电脑主机电源提示：当仅使用CCD拍图，或者长时间不用机器时，建议关闭激光器，以延长其寿命。

2 使用激光共聚焦扫描软件Zen 20102 .1打开软件双击图标，然后点击“Start System ”进入软件。

2 .2切换到明场观察模式（目镜筒）2 .2.1 在共聚焦软件中切换为明场观察模式：点击“Locate ”标签，选择“Online ”，点击“BF ”（Bright Field 的缩写）。

此时系统打开卤素灯，并将明场光学模块转入光路。

图 4 切换为明场观察模式提示：如果出现硬件通讯问题，软件左下角会弹出信息对话框，此时一般的解决方法是：1）重启Zen 软件；2）如果仍无效，关闭整个系统，过5分钟后再重启系统。

Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用对于使用激光扫描共聚焦显微镜的研究者来说，实验设计、样品准备、仪器操作和后期图片处理是一个实验至关重要的四步，前两步是任何一个研究者都必须具备的能力，否则无从谈起上机实验，后期图片处理无非就是修饰润色使图片从视觉上更美观，而对大多数从事生物学医学领域的研究者来说，仪器的操作可能是最关键的一步，而仪器操作中光路的设置和不同扫描模式的选择可能是最难掌握和最难学习的模块，因为这部分可能涉及一些物理光谱学的知识。

文章就以自己实验室Zeiss LSM 780激光扫描共聚焦显微镜为例，简要介绍其三种光路设置和五种不同扫描模式如何选择使用，希望对使用者有所帮助。

标签：激光扫描共聚焦显微镜；光路设置；扫描模式引言随着现代科学技术的飞速发展，各种荧光蛋白、荧光染料和精密光学元件不断出现[1-5]，激光扫描共聚焦显微镜技术得到了极大的发展，各种公司，各种型号的共聚焦系统不间断问世或完善，广泛应用在细胞生物学医学领域[6-8]。

广泛的应用使得这一设计精密又操作复杂的仪器必须让有需要的研究者方便学习和掌握。

就以蔡司公司为例，科学技术的发展和适应市场的需要，不同型号的共聚焦系统逐步上市和使用，LSM 510、510 Meta、700、710、780等在硬件技术提高的同时，操作软件也在一步步简化。

文章以华南农业大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室的一台超高灵敏度检测Zeiss LSM 780系统为例，介绍其光路设置和不同扫描模式的选择，因为它是目前蔡司公司推出的上述普通激光扫描共聚焦显微镜中型号最高的一款，它的光路设置和扫描模式的配置将集上述所有型号系统的内置设置于一身，希望能给实验者提供较全面的指导。

1 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜三种光路设置（1）最“傻瓜式”一键操作：Zeiss LSM 780使用Zen 2011软件，软件操作界面有一个Resue按钮。

德国Zeiss活细胞工作站标准操作规程部门：药学院仪器测试中心实施日期：2012年12月25日1 2 3目录：系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明系统的使用2.1开机顺序2.2软件的快速使用说明2.3显微镜的触摸屏控制2.4关机顺序系统的维护1系统组成及光路示意图：系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。

电动荧光显微镜 扫描检测单元 激光器 电脑工作站实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[电动显微镜开关]打开[荧光灯开关]（注：具有5档光强调节旋钮）（4）Ar离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[扳钮]由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN图标（2）进入ZEN界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。

“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。

（3）软件界面：1功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理Processing）、维护Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2动作按钮；3工具组（多维扫描控制）4工具详细界面；5状态栏；6视窗切换按钮；7图像切换按钮；8图像浏览/预扫描窗口；9文档浏览/处理区域；10视窗中图像处理；Start 。

共聚焦显微镜操作步骤共聚焦显微镜操作步骤:共聚焦显微镜是一种高分辨率显微镜，用于观察细胞、组织和其他微观结构。

以下是共聚焦显微镜的操作步骤：1. 打开显微镜：首先，确保显微镜连接到电源，并打开电源开关。

然后，打开电镜控制软件并启动仪器。

2. 准备样品：将待观察的样品放置在显微镜的载物台上。

确保样品已经固定并适当准备好观察。

3. 调整激光：选择适当的激光波长，并通过调整激光源的控制器来获得所需的激光功率。

4. 调整物镜：选择适当的物镜，并使用显微镜的转盘来安装它。

然后使用显微镜调焦手轮将样品移动到所需的焦平面。

5. 调整探测器：根据需要，选择适当的探测器和滤光片，并将其安装在探测器路径上。

确保探测器的位置和角度正确。

6. 设置扫描参数：根据需要，调整扫描参数，例如扫描速度、像素大小和图像采集模式。

这些参数将影响图像质量和获取速度。

7. 开始扫描：通过点击软件界面上的“开始扫描”按钮，启动共聚焦显微镜的扫描过程。

仪器将开始进行扫描并采集图像。

8. 观察图像：在扫描过程中，您可以实时观察到正在生成的图像。

通过调整放大倍率、对比度和亮度等参数，优化图像质量。

9. 数据保存和分析：在完成扫描后，您可以选择将图像保存到计算机上的特定文件夹中。

然后，您可以使用图像处理软件进行进一步的分析和处理。

10. 关闭显微镜：在完成观察和保存图像后，关闭共聚焦显微镜。

首先，停止扫描过程，然后关闭电镜控制软件和电源开关。

以上是共聚焦显微镜的一般操作步骤。

请注意，在使用共聚焦显微镜之前，您应该熟悉特定仪器的操作手册，并按照制造商的指示进行操作。

激光共聚焦显微镜操作规程一、准备工作a)打开计算机。

依次打开激光器电源、钥匙开关。

多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) ON、氦氖绿(543 nm) ON、氦氖红(633 nm) ON。

打开汞灯电源开关。

b)登陆Windows XP系统。

双击快捷方式：FV10-ASW 1.1。

User ID: Administrator ; Passeword: Administrator。

注意区分大小写。

二、显微镜镜下观察１.微分干涉差观察a)使用手控面板选择物镜。

插入起偏镜。

插入微分干涉滑块。

b)点击FV10-ASW软件中的图标。

标本聚焦.２.荧光观察：c)使用手控面板选择物镜。

d)打开汞灯的机械快门，拉出DIC滑块，点击FV10-ASW软件中的图标e)使用手控面板选择荧光滤色片。

标本聚焦。

３.获取单张荧光图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮。

b)关闭汞灯快门，点击按钮，关闭卤素灯快门。

c)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。

点击Apply按钮。

d)点击XY Repeat按钮开始扫描。

调节图像。

点击Stop按钮停止扫描。

e)选择AutoHV,，并选择扫描速度。

f)点击XY按钮取得一幅图像。

g)点击SeriesDone按钮，“2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。

h)保存该幅图像:右图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像。

(保存为“xml”类型是击FV10-ASW软件专用的图像格式。

)４.获得单张（荧光+微分干涉）图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。

点击按钮，关闭卤素灯快门。

b)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。

点击Apply按钮。

c)选择TD1。

d)点击XY Repeat按钮开始扫描。

调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像。

点击Stop按钮停止扫描。

e)选择AutoHV, 并选择扫描速度。

激光扫描共聚焦显微镜使用说明标签：激光扫描共聚焦显微镜使用说明激光扫描共聚焦显微镜可以：（1）光切片扫描、3D图像处理、时间序列拍摄成像；（2）细胞、绿荧光蛋白、生物荧光样品观察分析；（3）荧光原位杂交分析。

详细实验方法共聚焦显微镜激光扫描法实验方法原理激光共聚焦扫描显微镜（Confocal laser scanning microscope，CLSM）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。

由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。

系统经一次调焦，扫描限制在样品的一个平面内。

调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品的立体结构。

实验材料细胞试剂、试剂盒荧光染料水培养基仪器、耗材激光扫描共聚焦显微镜载玻片洗瓶滴管试管实验步骤一、观察及仪器操作1. 开启仪器电源及光源一般先开启显微镜和激光器，再启动计算机，然后启动操作软件，设置荧光样品的激发光波长，选择相应的滤光镜组块。

以便光电倍增管(photo multiplier tube，PMT)检测器能得到足够的信号结果。

使用汞灯的注意事项同普通荧光显微镜。

2. 设置相应的扫描方式在目视模式下．调整所用物镜放大倍数，在荧光显微镜下找到需要检测的细胞。

切换到扫描模式，调整双孔针和激光强度参数，即可得到清晰的共聚焦图像。

3. 获取图像选择合适的图像分辨率，将样品完整扫描后，保存图像结果即可。

4. 关闭仪器仪器测定样品结束后，先关闭激光器部分，计算机仍可继续进行图像和数据处理。

若要退出整个激光扫描共聚焦显微镜系统．则应该在激光器关闭后，待其冷却至少10分钟后再关闭计算机及总开关。

二、获取三维图像激光扫描共聚焦显微镜具有细胞“CT”功能，因此，它可以在不损伤细胞的情况下，获得一系列光学切片图像。

激光共聚焦显微镜操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!激光共聚焦显微镜操作流程如下：1. 开启显微镜电源和激光电源，等待仪器预热。

激光共聚焦显微镜F V中文说明书HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】激光共聚焦显微镜FV1000(倒置显微镜IX81) 简易使用说明书开启系统1.打开计算机.2.打开激光器.(打开钥匙开关.) 2-1.多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) ON2-2氦氖绿 (543 nm) ON 2-3氦氖红 (633 nm) ON 3.打开汞灯电源开关. 4.登陆 Windows XP 系统. User ID: Administrator Password: fluoview5.双击快捷方式：User ID: Administrator Password: Administrator* 系统软件的启动需要等待一定时间.5231显微镜镜下观察微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜.(参照Memo.)2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.4.点击FV10-ASW 软件中的图标.Note1:使用TD 滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“”，如果不是，用手柄按下DICT 图标 5.标本聚焦显微镜镜下观察荧光观察*DIC 元件124手控面板用此旋钮进行微分干涉法对比度的调节 .Memo按照 7-1 的操作转换物镜的倍率之后，对： ●物镜 ●各物镜对应的 D IC 元件 * 进行操作 .1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW 软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照Memo.)4.标本聚焦.123Hand switchNote 2Notes 1 & 3Memo关于荧光滤色片NIBA ： 蓝色激发 / 绿色荧光 （例： FITC 、 EGFP 等） WIG ： 绿色激发 / 红色 荧光 （例： Rhodamine 、 DsRed 等）扫描模式扫描速激光输出的调节明场观察( 显微镜镜下观察 )荧光观察( 显微镜镜下观察 )扫描的按钮 选择 XYZ,XYT 或 X YL 每个通道的调节 共聚焦的孔径大小 卤素灯的光强调节 Kalman 方式染料选择 光路图 取图条件的保存 调出取图条件TwinScanner 设定图像的拇指索引图像显示窗口内存中所显示的文件Lambda 扫描的设定物镜 聚焦时间间隔和时间计数( 用于 XYT或 X T 扫描 ) λ 扫描带宽选择获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光染色（FITC）1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门 .同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)123染料选择后的显示界面Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止 扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )4564. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 FITC ) ( 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .[1探测器的灵敏度调节 HV ( )[2共聚焦的孔径大小调节 ( . ) [3激光输出的调节 ( Laser ) [1[2[3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的 位置 .点击此按钮 或者使用鼠标转轮进行 微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮. (关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)同步扫描 123染料选择后的显示界面44. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 Alexa ( Fluor 488) 图像和红色( Alexa Fluor 546) 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .56Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止 扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )[1探测器的灵敏度调节 ( HV )[2共聚焦的孔径大小调节 ) ( . [3激光输出的调节 ( Laser) [1[2[3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的 位置 .点击此按钮 或者使用鼠标转轮进行 微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)获取单张图像（XY 平面）（荧光图像）78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .例：绿色荧光（ Alexa 488 ）＋红色荧光（Alexa 546 ）二重染色序列扫描 (这里介绍线序列扫描.)1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)123染料选择后的显示界面4 5 6 74.点击序列扫描,并选择线序列方式.5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色(Alexa Fluor488)图像和红色(Alexa Fluor546)图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节)(.[3激光输出的调节Laser)([1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述8.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .(XY 平面-单标+微分干涉差)1. 点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)4.选择TD1.1234(XY平面-单标+微分干涉差)5 5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色()FITC图像和微分干涉差的图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.67Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节.)([3激光输出的调节(Laser)[1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述(XY 平面-单标+微分干涉差)8. 选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.) 891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .1.采用13和14页步骤1到7. 确定Z 轴的上限和下限如下.2.输入StepSize 大小(点击OP 按钮可以使用推荐的值), 并选择 .3.点击XY Repeat 按钮开始扫描.4.点击按钮上移焦点位置.(参照Memo.)5.当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定. 6.点击按钮下移焦点位置.(参照Memo.)7.当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定.8.点击Stop 按钮停止扫描.和和1456728Memo和按钮: 点击移动 μ m. : 点击移动μ m.9.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式.更多的信息，参照附录2.)10.选择Depth 按钮. 11.点击XYZ 按钮取得图像.12.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.13.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)910111213MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .*可以通过调用扫描状态来实现该设置. 更多的信息, 参照附录5.绿色荧光 -1)YOYO ( 双标 1231.点击 F V10-ASW 软件中的按钮 关闭汞灯快门 . 同时 , 点击按钮 关闭卤素灯快门 . 2.点击按钮检查光路 .3.做如下设置 .选择 BS20/80 或DM405/488.选择 488 nm 作为 激发光源 .选择 Mirror.只选择 C HS1.4.点击按钮 , 出现光谱设置窗口.5.设置CHS1光谱带宽为10 nm, 以此为例.(参照附录4关于改变光谱带宽的方法.)6.点击XY Repeat 按钮开始扫描.7.在观察图像的同时, 移动光谱带到图像 最亮的位置状态.(参照附录4关于改变光谱带宽的方法.)注: 移动光谱带位置要保持光谱带宽为10 nm 不变.8.调节图像.(参照附录1.)9.点击Stop 按钮停止扫描.10选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,4567101112131514背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation方式. 更多的信息，参照附录2.)11设定要扫描的波长范围, 光谱带宽和步距. Start = 开始波长End = 结束波长Resolution = 光谱带宽StepSize = 步距12选择Lambda按钮.13点击XYL按钮取得图像.14点击SeriesDone按钮, “2DViewLiveImage(x)” 2D界面就出现.15.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像..(保存为“oib” 和"oif"类型是 FV10-ASW软件专用的图像格式.)1. 双击资源管理器中要选择打开的文件.显示状态的切换1:1显示 帧的播放选择结束帧投影的切换3 D 重建 放大调整窗口的大小动画 播放速度选择开始帧文本 不同形状的 ROI 区域Ch1 display Ch2 display点击按钮 转换显示模式1.点击按钮并选择.2.要保存此图像, 右击此图像, 选择SaveDisplay并命名.(比例尺的使用)121.点击按钮 .2.点击图像的同时, 拖放此比例尺到一个特定的位置.3.点击手柄的左端或右端, 移动鼠标. 改变比例尺的大小4.选择比例尺并右击选择属性的设置.5.设置具体的比例尺属性. 改变文本, 颜色, 字体等.12345(3D 图像的重建)以一定的角度观察3D 图像1.点击按钮 .2.创建3D 图像.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像. → 要保存此图像, 进行下一页第6步的操作.观察3D 图像的某个横截面4.点击按钮并选定.5.拖动鼠标观察某个垂直横断面.→ 要保存此图像, 进行下一页第6步的操作.134 5(3D 图像的重建保存上一页中第3、5选项的图像6.点击按钮.7.会创建一个2D 图像 (带文件名).8.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的68MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建 “ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像 ” 和 “ 一个附属 文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进 行其它的操作 .图1.点击按钮 .2.创建3D 图像.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.动画的播放4.点击并控制按钮实现图像围绕着 X-轴旋转. 再次点击停止旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着 Y-轴旋转. 再次点击停止旋转.点击并控制按钮实现图像围绕着Z-轴旋转.再次点击停止旋转.134例:绿色荧光(Alexa Fluor 488)和绿色荧光 (YOYO-1)双标234例 : 绿色荧光 Alexa Fluor ( 488)和 绿色荧光 -1)( YOYO 双标 5 6Unmixed image此处显示分解光谱 的通道分配1. 打开一幅 Alexa Fluor 488 和 YOYO1双标的 X YL 图像 . 2. 分别为 Alexa Fluor 488 和 YOYO1 选 定一个封闭的区域 . 3. 从 P rocessing 下拉菜单中选择Spectral Deconvolution 图标 . 4. 双击 R OI1 和 R OI2 区域 .5. 检查处理类型设置为 “Normal” 并且点击 E xecute 按钮 . 6. 获得图像 .1. 打开一幅 Alexa Fluor 488单标取样的XYL 图像.2. 为 Alexa Fluor 488选定一个封闭的区域.3. 从Processing 下拉菜单中选择 Spectral Deconvolution 图标.4. 双击ROI1区域.5. 点击Save Profile 图标.6. 输入保存的名字并且点击OK 按钮将Alexa Fluor 488的光谱记载到数据库中.7. 对于YOYO1单标, 重复1-6步.4356记载的荧光光谱在此显示8.打开一幅 Alexa Fluor 488和 YOYO1双标的XYL 图像.9.从Processing 下拉菜单中选择 Spectral Deconvolution 图标.10.双击数据库中记载的 Alexa Fluor 488 和 YOYO1图标.11.检查处理类型设置为 “Normal”并且点击Execute 按钮.12获得图像.891011Unmixed image12此处显示分解光谱 的通道分配2345例 : 两种类型荧光标记的样品Unmixed image此处显示分解光谱 的通道分配1. 打开一幅具有两种类型荧光标记的XYL 图像 . 2. 从 P rocessing 下拉菜单中选择Spectral D econvolution 图标 . 3. 选中两个检查框用于计算 .(具有三种类型荧光标记时要选中 三个检查框 .4. 检查处理类型设置为 “Blind 并且 点击 E xecute 按钮 .5. 获得图像 .1.右击图像管理器中显示的图像图标, 选***************************************XY 或者XYZ 图像的每个通道存为 TIFF 格式的文件 XY 或者XYZ 通道合并的图像存为 TIFF 格式的文件带有比例尺的图像存为BMP 格式的文件动态图像存为AVI 格式的文件13保存到 CD-R1.插入一张CD-R 光盘.2.点击OK.3.选择文件并拖放到CD-R 的窗口.4.点击"Write these files to CD."5.点击Next.6.开始刻录.7.点击Finish 按钮结束.关闭系统2345761.选择File/Exit, 退出FV10-ASW 软件.2.退出Windows XP.(1)选择Start/Shut Down.(2)在Shut Down 窗口中, 选择Shut Down 并点击OK 按钮.3. 关闭激光器. (关闭钥匙开关.)3-1. 多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) OFF3-2. 氦氖绿 (543 nm) OFF 3-3. 氦氖红 (633 nm) OFF 4. 关闭汞灯电源.附录1共聚焦的原理和调节原理 附录2获取图像如何降低背景噪音1234降低扫描速度通过降低扫描速度探测器从开始检测就 忽略背景噪音 . 优点 :相比 K alman 方式 , 能够取到更锐的图 .缺点 :单次扫描的速度很慢 .1. 选择扫描速度 .**********************************************************************************Auto ON: 扫描速度变慢时 ,背景噪音被去 除而图像亮度不变 .Auto OFF: 扫描速度变慢时 ,背景噪音被去 除而图像亮度增加 .Kalman 方式通过重复获取一定数量的图像进行平均算法 运算处理 . 从而去除背景噪音和粗糙度 . 优点 :单次扫描的速度很快 . 缺点 :由于图像平均而图像模糊 .1. 点击 K alman 并选择 L ine 或 F rame 方式 .2. 输入累计数字 ( 扫描的次数 )。

激光共聚焦显微镜FV中文说明书完整版激光共聚焦显微镜F V中文说明书HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】激光共聚焦显微镜FV1000(倒置显微镜IX81) 简易使用说明书开启系统1.打开计算机.2.打开激光器.(打开钥匙开关.) 2-1.多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) ON2-2氦氖绿 (543 nm) ON 2-3氦氖红 (633 nm) ON 3.打开汞灯电源开关. 4.登陆Windows XP 系统. User ID: Administrator Password: fluoview5.双击快捷方式：User ID: Administrator Password: Administrator* 系统软件的启动需要等待一定时间.5231显微镜镜下观察微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜.(参照Memo.)2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.4.点击FV10-ASW 软件中的图标.Note1:使用TD 滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“”，如果不是，用手柄按下DICT 图标 5.标本聚焦显微镜镜下观察荧光观察*DIC 元件124手控面板用此旋钮进行微分干涉法对比度的调节 .Memo按照 7-1 的操作转换物镜的倍率之后，对：●物镜●各物镜对应的 D IC 元件 * 进行操作 .1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW 软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照Memo.)4.标本聚焦.123Hand switchNote 2Notes 1 & 3Memo关于荧光滤色片NIBA ：蓝色激发 / 绿色荧光（例： FITC 、 EGFP 等） WIG ：绿色激发 / 红色荧光（例： Rhodamine 、 DsRed 等）扫描模式扫描速激光输出的调节明场观察( 显微镜镜下观察 )荧光观察( 显微镜镜下观察 )扫描的按钮选择 XYZ,XYT 或 X YL 每个通道的调节共聚焦的孔径大小卤素灯的光强调节 Kalman 方式染料选择光路图取图条件的保存调出取图条件TwinScanner 设定图像的拇指索引图像显示窗口内存中所显示的文件Lambda 扫描的设定物镜聚焦时间间隔和时间计数( 用于 XYT或 X T 扫描) λ 扫描带宽选择获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光染色（FITC）1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门 .同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)123染料选择后的显示界面Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )4564. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 FITC ) ( 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .[1探测器的灵敏度调节 HV ( )[2共聚焦的孔径大小调节 ( . ) [3激光输出的调节 ( Laser ) [1[2 [3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的位置 .点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮. (关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)同步扫描 123染料选择后的显示界面44. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 Alexa ( Fluor 488) 图像和红色( Alexa Fluor 546) 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .56Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )[1探测器的灵敏度调节 ( HV )[2共聚焦的孔径大小调节 ) ( . [3激光输出的调节 ( Laser) [1[2[3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的位置 .点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)获取单张图像（XY 平面）（荧光图像）78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .例：绿色荧光（ Alexa 488 ）＋红色荧光（ Alexa 546）二重染色序列扫描 (这里介绍线序列扫描.)1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)123染料选择后的显示界面4 5 6 74.点击序列扫描,并选择线序列方式.5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色(Alexa Fluor488)图像和红色(Alexa Fluor546)图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节)(.[3激光输出的调节Laser)([1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述8.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .(XY 平面-单标+微分干涉差)1. 点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)4.选择TD1.1234(XY平面-单标+微分干涉差)5 5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色()FITC图像和微分干涉差的图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.67Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节.)([3激光输出的调节(Laser)[1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述(XY 平面-单标+微分干涉差)8. 选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.) 891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .(XYZ 扫描-双标)1.采用13和14页步骤1到7. 确定Z 轴的上限和下限如下.2.输入StepSize 大小(点击OP 按钮可以使用推荐的值), 并选择 .3.点击XY Repeat 按钮开始扫描.4.点击按钮上移焦点位置.(参照Memo.)5.当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定. 6.点击按钮下移焦点位置.(参照Memo.)7.当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定.8.点击Stop 按钮停止扫描.和和1456728Memo和按钮: 点击移动μ m. : 点击移动μ m.。