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标准曲线法测定芦丁含量

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实验三十六 标准曲线法测定芦丁含量
一、目的要求
1．掌握标准曲线制备的方法。
2．掌握标准曲线法测定药物成分的方法。
二、实验原理
显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性，因此必须控制反应的条件，主要
是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时问等。芦丁为黄酮苷，
能与 Al3+生成黄色配合物，在NaNO2的碱性溶液中呈红色，在510nm波长处有
最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁含量，应注意控制反应时间、显色时
间以及试剂用量等条件。

显色法的定量方法可采用标准曲线法。
三、仪器与试剂
1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。
2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，
10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原
料药)。
四、实验内容与步骤
1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，
置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，
摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中
含无水芦丁0．1mg)。
2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、
3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，
各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各精密加入10％
硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，
用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长
处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标
准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。“起依法操作直至测定出样品的
吸光度。
五、注意事项
1．加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。
2．本显色反应为配位反应，反应速度较慢，故每加入一种试剂后应充分振摇，
以利反应完全。
六、数据处理
1．根据测得的对照品的数据，绘制A—C标准曲线或计算回归方程。
2．根据测得的试样的数据，从标准曲线上读出或由回归方程计算出试样溶液中
芦丁的重量(rag)，按下式计算：

参考文献：
黄世德，梁生旺主编. 分析化学实验 北京市：中国中医药出版社，2005

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“分光光度法测定芦丁含量”测定方法的改进

“分光光度法测定芦丁含量”测定方法的改进

ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ． Ｋ ｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ｓ ｐｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ；ｒ ｕ ｔ ｉ ｎ； ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ；ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｓ ｔ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ； ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ；ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ
吸道 也有 刺激 ，吸 入人 体后 ，可 引起 胸部不 适和 咳嗽 】 。
２ 改进后 的测定方法——标准曲线法
由于 原测 定 方法 存 在上 述 不足 之 处 ， 因此 很 有 必要 对 测定 芦 丁含 量 的方 法进 行 适 当的 改进 。笔者 所在 的 实验 教
１ 原测定方法 的不足
关键 词
分光光度 法 ；芦丁 ；测定方法 ；显 色对比 法；标 准曲线法 ；改进
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａｃ ｔ Ｔｈ ｉ ｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ｐ ｕ ｔ ｆ ｏ ｒ ｗａ ｒ ｄ ａ ｎ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ， ｔ ｈ ａ ｔ ｉ ｓ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｉ ｎ ｒ ｅ ｇ ａ ｒ ｄ ｔ ｏ ｔ ｈ ｏ ｓ ｅ ｄ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｃ ｉ ｅ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｓ ｔ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ‘ ‘ Ｓ ｐｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｒｕ ｔ ｉ ｎ Ｃｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ’ ＇ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｏ ｎ ． Ｗｅ ｍａ ｄ ｅ ｕ ｐ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｃ ｉ ｅ ｓ
槐米中芦丁含量的测定解析

槐米中芦丁含量的测定解析


BREAD PPT Hale Waihona Puke ESIGN芦丁的提取率测定
取干燥芦丁粗品约1g，精密称定，加甲醇溶解后移入100mL容量 瓶，再加甲醇洗涤并入容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀。精取10mL置 100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀。精密量取3mL置25mL容量瓶中， 按照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度， 从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，计算即得槐米中芦丁的 提取得率。
利用超声波的空化效应、湍 流效应、微扰效应、界面效 应和聚能效应等物理作用， 加速被破碎物细胞壁的破裂， 促进细胞内含物的溶出，从 而实现天然产物低温、快速 提取的目标。具有杂质含量 低、有效成分含量高、提取 时间短的优点。
BREAD PPT DESIGN
因素设计
水平 A 料液比 因素 B 提取时间 C 温度
BREAD PPT DESIGN
芦丁对超氧阴离子O2÷清除作用
原理
用邻苯三酚自氧化法,利用O2÷清除剂能使邻苯三酚自氧化产物 在325 nm处的吸收峰受到抑制这一特点,用紫外分光光度计进行 检测,间接测得O2÷生成及O2÷的清除率。
超声提取
酸沉 用盐酸将PH调至3
离心过滤 滤液静置、干燥
芦丁粗提产品
BREAD PPT DESIGN
芦丁标准曲线的绘制
精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁标准品200mg，置 100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲 醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度， 摇匀即得（每1mL中含无水芦丁0.2mg）。精密量取上述标准溶液 0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL分别置 25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL使混匀，放 置6分钟，加10％硝酸铝溶液1mL摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试 液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；按照分光光度法，在 500nm的波长处比色测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为 横坐标，绘制标准曲线。
生物制药实验(1)

生物制药实验(1)

实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。

槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。

除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。

槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。

芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。

芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。

；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。

易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。

其结构如下图：一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2、通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法二、实验原理芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水。

溶解度：冷水1:10000；热水1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。

微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。

利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。

三、实验器材研钵，500mL烧杯，广泛试纸，四层纱布，滤纸，漏斗，10mL试管，5mL移液管，波棒，洗耳球，温控烘箱石灰乳，浓盐酸，镁粉，10%α-萘酚乙醇溶液，浓硫酸，乙醇，2%二氯氧锆甲醇溶液，2%柠檬酸甲醇溶液四、实验流程pH8～9滤液药渣10分钟，维持pH8～9pH至4～5沉淀低温（60℃）干燥，称重。

测定方法

测定方法

(2)实验试剂制备1.5%C6H6O：称取3 g的C6H6O，用去离子水定容至60mL；2.0.2µg/µL芦丁：称取6 mg芦丁，向其中加入30 mL的C2H5OH；3.5%亚硝酸钠：称取2.066 g 亚硝酸钠，加入39.254 mL的去离子水；4.5%硝酸铝：称取2.014 g 硝酸铝，加入38.266 mL 的去离子水；5.20% 三氯乙酸：20 g 三氯乙酸，用去离子水定容至100 mL；6.4%氢氧化钠：称取2.048 g 氢氧化钠，加入49.152 mL 去离子水溶解；7.0.5mg/mL BHT：称取20mgBHT,用无水甲醇定容至40 mL；8.HEPES：称HEPES 0.952 g用去离子水定容至200 mL；9.0.6mg/mL EDTA：称固态EDTA 0.012 g用去离子水定容至20 mL；10. 2 mol/L 硫酸：称量200 g 98%的H2SO4 ,加去离子水定容至1000 mL；11. 2.25mM Ferrozine：称取Ferrozine 24 mg，用去离子水定容至20 mL；12.0.2M PBS (pH6.6) (磷酸盐缓冲液): 称3.66 g 磷酸氢二钠，0.538 g 磷酸二氢钠和0.9g 氯化钠，用去离子水定容至100mL.13.1% K3[Fe(CN)6]：称取K3[Fe(CN)6] 200 mg，用超去离子水定容至20 mL；14. 6 mmol/L VC: 称取VC 0.0212 g，加入去离子水定容至20 mL;15.5mmol/L 硫酸亚铁：称取FeSO4•7H2O 0.139 g，并用去离子水定容至100 mL；16.0.1mM 过氧化氢:称取0.2mL 50mM 的过氧化氢，并用去离子水定容至100 mL；17.30%乙醇：量取95% C2H5OH 30 mL，用去离子水定容至95 mL；18. 1 mg/mL 氯化铁：称取氯化铁0.02 g，用去离子水定容至20 mL；19. 5 mM邻二氮菲:称取198 mg邻二氮菲，加入C2H5OH 20mL，混匀，取2 mL加水稀释至20 mL。