氯化铒和氯化镝对小鼠免疫细胞作用的体外实验

氯仿的免疫毒性作用邹　梅　赵生友　王　玮　孙　兰　(吉林省卫生监测检验中心,长春130021) 中国图书分类号　R392111 文献标识码　A 文章编号　10002484X(2002)0320178202 氯仿(CF)是工业上广泛使用的强挥发性物质,是一种常见的环境污染物。

高剂量的氯仿能抑制中枢神经系统,并可造成肝肾损害及肿瘤。

但氯仿对机体免疫功能毒性作用的报道尚少。

因此,我们采用单一动物复合免疫测定法,研究氯仿的免疫毒性,一方面可对氯仿的毒性做出全面的评价,另外还可以从对免疫功能的检查中寻求氯仿对机体损伤的早期指标。

1　材料与方法111　实验动物及分组　健康昆明种雌性小鼠由长春生物制品所提供。

体重18～22g,6～8周龄。

共分1个对照组(A组)及B、C2个剂量组〔250、500 mg/(kg・wb)〕。

112　试剂11211　氯仿　无色透明易挥发的液体,分子量113139,比重为11484。

11212　绵羊红细胞(SRBC)　取自解放军兽医大学动物室健康绵羊血,经脱纤维抗凝,4℃冰箱保存备用,使用无菌生理盐水洗3次,每只鼠尾静脉免疫用量5×107个/012ml绵羊红细胞。

11213　补体　取新鲜豚鼠血清,用靶细胞(SRBC)吸收后,置-20℃冰箱保存备用,用时以S A缓冲液1:10稀释。

113　实验方法11311　外周血T淋巴细胞ANAE阳性率测定　采用酸性а2醋酸萘酯酶确定法。

11312　抗体形成细胞数(PFC)测定　用Jerne改良片法。

11313　迟发性变态反应(DTH)　采用微尺测足垫厚度法。

2　结果211　氯仿对小鼠外周血T淋巴细胞ANAE阳性率的影响　从表1可见,低剂量组与对照组比较差异作者简介:邹　梅,女,43岁,副主任医师,主要研究免疫毒理学。

无显著性(P>0105),T淋巴细胞ANAE阳性率均在正常范围内;而高剂量组与对照组比较T淋巴细胞ANAE阳性率明显降低(P<0105)。

b16f16细胞用法B16F16细胞是一种小鼠黑色素瘤细胞系，常用于研究肿瘤生物学和药物筛选等领域。

以下是B16F16细胞的用法及拓展：1.体外培养：B16F16细胞可以在培养皿中体外培养。

常用培养基包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）等，添加10%胎牛血清。

细胞可以在37°C、5% CO2的恒温培养箱中培养，并定期更换培养基，以维持细胞的健康生长。

2.细胞增殖和细胞周期研究：B16F16细胞可以用来评估药物或其他因素对细胞增殖和细胞周期的影响。

通过细胞计数或细胞增殖试剂盒等方法，可以定量测量细胞的增殖速率和细胞周期的变化。

3.肿瘤形成模型：B16F16细胞可以在小鼠体内形成肿瘤模型，用于评估药物的抗肿瘤活性和研究肿瘤的发展机制。

通过种植B16F16细胞到小鼠皮下或静脉注射，可以观察和分析肿瘤生长、转移和治疗效果等指标。

4.免疫研究：B16F16细胞可以用于免疫学研究，如抗体荧光标记、细胞因子释放等。

通过诱导或抑制细胞免疫应答等方法，可以探究免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用和免疫调控机制。

5.转基因研究：B16F16细胞也可以用于转基因研究，通过基因敲除、过表达或基因突变等手段，探究特定基因在肿瘤发生和发展过程中的功能和作用机制。

6.药物筛选和耐药性研究：B16F16细胞可用于药物筛选和耐药性研究。

研究人员可以利用B16F16细胞模拟体内抗肿瘤药物的作用，在不同浓度下观察药物对细胞的生长抑制作用，并评估细胞的耐药性和潜力。

需要注意的是，B16F16细胞是小鼠黑色素瘤细胞系，应该在合适的实验条件下进行使用，并遵循相应的实验室操作规范和伦理规定。

在使用该细胞系进行研究时，还需要结合具体实验目的和需求，设计合适的实验方案和控制组。

•18•实用临床医药杂志Journal of Clinical Medicine in Practice2022,26(11)：18-21,33.重建人类表皮模型医疗器械体外皮肤刺激试验中白细胞介素和白细胞介素的表达变化刘佳，范春光，孙立魁，赵增琳(山东省医疗器械和药品包装检验研究院/国家药品监督管理局材料器械安全性评价重点实验室/山东省医疗器械生物学评价重点实验室，山东济南，250101)摘要：目的探讨以体外皮肤刺激试验作为家兔皮肤刺激的替代试验，检测皮肤刺激性,分析试验模型相关分子标记物。

方法选取2种医疗器械产品，通过重建人类表皮模型(RhE模型)体外皮肤刺激试验检测皮肤刺激性。

收集皮肤组织培养基，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养基中白细胞介素(IL)-laJL-8含量。

结果组织病理学显示，使用4%乳酸处理，上皮细胞萎缩,角质层脱落；采用其他方式处理的上皮组织未见明显异常。

氯化钠注射液配制的1%的十二烷基硫酸钠(SDS)极性阳性对照和芝麻油制备1%的SDS非极性阳性对照中,上皮细胞变性坏死。

EUSA结果显示，培养基中IL-la表达与皮肤刺激指数呈正相关，IL£与皮肤刺激指数呈负相关。

结论IL-la可作为RhE模型体外皮肤刺激试验的分子标记物，以分析医疗器械产品的皮肤刺激性。

关键词：重建人类表皮模型；白细胞介素-la；白细胞介素皮肤刺激；医疗器械；分子标记物中图分类号：R197.39；Q81文献标志码：A文章编号:1672-2353(2022)11-018-04D0I：10.7619/jcmp.20214815Expression changes of interleukin-la and interleukin-8in vitro skin stimulation test of medical devicesfor medical devices with reconstructed humanepidermis modelLIU Jia,FAN Chunguang9SUN Likui,ZHAO Zenglin(Shandong Institute of Medical Device and Pharmaceutical Packaging Inspection,NationalMedical Products Administration Key Laboratory far Safety Evaluation of Biomaterials andMedical Devices,Shandong Key Laboratory of Biological Evaluation for Medical Devices,Jinan Shandong,250101)Abstract:Objective To explore the skin irritation test in vitro as a substitute test for rabbit skin irritation to detect skin irritation,and to analyze the molecular markers related to the test model. Methods Two kinds of medical devices were selected,and skin irritation was detected by recon­structing human epidermis(RhE)model in vitro skin stimulation test.Skin tissue substrates were col­lected,and the contents of interleukin(IL)-la and IL-8in the substrate were determined by en­zyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results The histopathology showed that the epithelial cells with4%lactate were atrophied and the cuticle was exfoliated；there was no obvious abnormality in epithelial tissue by other methods.Epithelial cells were degenerate and necrotic in1%sodium do­decyl sulfate(SDS)polar positive control with sodium chloride injection and1%non-polar nonpolar positive control with sesame oil.ELISA results showed that IL-la expression in substrate was positive­ly correlated with skin irritation index,but IL-8was negatively correlated with skin irritation index. Conclusion IL-la can be used as a molecular marker for RhE model skin irritation test in vitro to analyze skin irritation of medical devices.Key words:reconstruction of human epidermis model;interleukin-1a;interleukin-8;skin irritation；medical device;molecular marker收稿日期：2021-12-07基金项目：国家重点研发计划(2016YFC1103205)；山东省医疗器械产品质量检验中心内部课题基金资助项目(ZX201801)表面接触医疗器械使用过程中与人体皮肤接触,其材料本身和（或）其可沥滤物可能会导致皮肤产生刺激反应。

益气解毒方水提物对RAW264.7细胞免疫功能的影响廖雪;蔺婷;罗晶婧;田道法;廖端芳;曾嵘;林丽美;何迎春【摘要】目的：研究益气解毒方水提物对小鼠巨噬细胞系 RAW264.7细胞免疫功能的影响，并探讨其可能的作用机制。

方法用不同浓度益气解毒方水提物处理RAW264.7细胞，MTT 法检测细胞增殖活性，ELISA法检测细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-12（IL-12）、一氧化氮（NO）的分泌水平，Western blot 法检测细胞核转录因子 NF-κBp65蛋白的表达水平。

结果与空白对照组比较，益气解毒方水提物在10~320 mg·L -1范围内明显促进 RAW264.7细胞增殖，且10 mg·L -1浓度效果最佳（P ﹤0.05）；与空白对照组比较，益气解毒方水提物能促进 TNF-α、IL-12及 NO 的分泌（P ﹤0.05），显著诱导细胞内 NF-κBp65蛋白的表达（P ﹤0.05）。

结论益气解毒方水提物对 RAW264.7细胞的免疫功能具有调节作用，其作用可能与激活NF-κBp65蛋白通路相关。

%Objective To investigate the immunomodulating effects of yiqijiedu formula onRAW264. 7 cells and its possible mechanisms. Methods RAW264. 7 cells were treated with different concentrations of yiqijiedu formu-la,cell proliferation was measured by MTT assay;concentration of tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin-12 (IL-12)and nitric oxide(NO)were determined by ELISA method;production of NF-κBp65 protein was detected by Western blot. Results Yiqijiedu formula(10-320 mg·L - 1 )possessed the stimulation effect on macrophages prolif-eration in a dose-dependent manner(P ﹤ 0. 05);the production of TNF-α,IL-12 and NO were increased in a dose-dependent manner when pretreated with yiqijiedu formula(P ﹤0. 05);the expression level of NF-κBp65 was significantly increased afteryiqijiedu formula treatment(P ﹤ 0. 05). Conclusion Yiqijiedu for-mula could enhance the immune regulation of RAW264. 7 cells,which may be relatedto the ac-tivation of NF-κBp65 pathway.【期刊名称】《肿瘤基础与临床》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P473-476)【关键词】益气解毒方;RAW264. 7 细胞;免疫功能;鼻咽癌【作者】廖雪;蔺婷;罗晶婧;田道法;廖端芳;曾嵘;林丽美;何迎春【作者单位】湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学中西结合学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学中西结合学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学医学院，湖南长沙 410208【正文语种】中文【中图分类】R739.63;R73-36巨噬细胞是组成机体免疫体系的重要免疫效应细胞之一，具有吞噬、代谢、产生细胞因子及抗肿瘤免疫等多种功能，在宿主防御机制及维持机体内环境等方面有重要作用[1-2]。

实验某些（10分）1、计算胸腺指数、脾指数公式：单位mg/10 g胸腺指数=胸腺重量/（小鼠体重×10）脾脏指数=脾脏重量/（小鼠体重×10）2、（1）白细胞（WBC）计数公式：X/4×10 ×20 ×106/L=白细胞/LX：为4个大方格内白细胞总数。

÷4：为每大方格（即0.1ul）内白细胞平均数。

×10：1个大方格容积为0.1ul，换算成1ul。

×20：血液稀释倍数。

×106：将ul换算成L（2）计数办法：自小鼠尾静脉采血0.02mL将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，混匀。

用微量吸管或玻璃棒取混匀细胞悬液1滴，充入计数池与盖片缝隙中，静置2-3min，使白细胞下沉。

在显微镜下用低倍镜（10×）计数四角4个大方格白细胞总数。

注意事项：①在大方格内压线细胞应按“数上不数下，数左不数右”原则计数。

②稀释液要过滤，小试管、计数板须清洁，以免杂质、微粒等被误以为细胞。

③冲池前要摇匀，要注意，冲池时不可气泡，否则应重新冲池。

（3）血液稀释液用是3%稀乙酸3、腹腔巨噬细胞实验（1）实验原理：巨噬细胞是机体非特异性免疫功能重要构成某些，可非特异吞噬较大颗位性异物如鸡红细胞、白色念珠菌等，称为大吞噬现象。

将鸡红细胞注入小鼠腹腔中，巨噬细胞由于具备趋化性，便向鸡红细胞处汇集，将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将鸡红细胞消化分解一段时间后取巨噬细胞，运用巨噬细胞贴壁特性观测吞噬现象，作为鉴定其吞噬活性指标。

(2)染料及染色办法：Giemsa（姬姆萨应用液）染色5min后再用蒸馏水漂洗晾干（3）淀粉肉汤作用：诱导腹腔内产生较多巨噬细胞4、肝脏DNA提取实验，（1）研磨抽提各步所用试剂：研磨肝脏先用冰冷生理盐水水洗3次再置于加入2ml匀浆液研钵中，研磨至无明显组织块存在。

离心弃上清加消化液55℃水浴酶解过夜，沉淀加Rnase。

第23卷 第6期 2021 年 6 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 23 No. 6 Jun .，20214种不同中药单体对诺如病毒感染性肠炎小鼠细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平及PKR/p-PKR 影响华云玮1，朱凌宇2，林俊儒2（1.上海中医药大学附属上海市中西医结合医院，上海 200082；2.上海中医药大学附属龙华医院，上海 200003）基金项目：上海市自然科学基金（16ZR1433800）作者简介：华云玮（1985-），女，上海人，主治医师，硕士，研究方向：中医药治疗胃肠病。

通讯作者：林俊儒（1982-），男，上海人，主治医师，硕士，研究方向：中医药治疗胃肠病。

摘要：目的 分析黄芪苷、绿原酸、儿茶素以及马钱酸4种不同中药单体对诺如病毒感染性肠炎小鼠细胞血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素6（interleukin-6，IL-6）水平及双链核糖核酸依赖的蛋白激酶R（ribonucleic acid kinase repoter，PKR）/p-PKR 的影响。

方法 该研究采用小鼠小肠黏膜上皮细胞（mice intestinal epithelial cells，MIECs）作为研究对象，小鼠诺如病毒感染小鼠小肠黏膜上皮细胞，Western blot 方法分析4种不同中药单体对感染性肠炎模型PKR、p-PKR 水平的影响；ELISA 方法检测黄芪苷和儿茶素两种中药单体对感染性肠炎模型TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影响。

结果 感染性肠炎模型的PKR、p-PKR 随着时间的延长，其水平呈现显著升高趋势；其中黄芪苷组和儿茶素组抑制PKR 的磷酸化（p-PKR）。

通过对感染性肠炎模型TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影响分析，发现黄芪苷组和儿茶素组显著抑制感染性肠炎模型的TNF-α、IL-1β和IL-6水平。

体外短期培养可提高伯氏疟原虫成熟裂殖体获得率贾晶;王振生;高宇辉;刘娟;王恒【摘要】在观察了正常状态下ICR小鼠体内伯氏疟原虫PbANKA1596cl1发育特征的基础上,从采血状态、培养环境及时间等多方面优化伯氏疟原虫PbANKA1596cl1 (Pb1596)体外培养方法,增加成熟裂殖体比例,为提高转染效率打下良好基础.当小鼠体内原虫率达到5％～ 15％时,经梯度离心富集滋养体期感染红细胞,再用0.01 L小体积完全培养基、缩短培养时间至8～10 h体外培养,观察成熟裂殖体的生长状态及比例.结果表明,与传统方法相比,优化后的体外培养方法在保证细胞90.27％的高存活率同时,有效增加成熟裂殖体的比例从0.97％上升至24.37％ (P ＜0.05),且单个裂殖体平均裂殖子数由13增加至16 (P＜0.05),缩短实验周期至11 ～13 h,并可避免游离裂殖子的流失,从而为进一步的鼠疟转染实验奠定良好基础.%In order to increase the proportion of mature schizonts and improve the efficiency of rodent malaria parasite transfection,the in vitro culture conditions of the Plosmodium berghei ANKA1596cl1 (Pb1596) were optimized in many aspects,for example,the state of the parasites when we collected,the culture environment and the period of experiment,and so on,all of which based on the observation of the characteristics of Pb1596 in a growth cycle.In the experiment,trophozoites infected erythrocytes were collected by density-gradient centrifugation when parasitemia is in the range of 5％-15％,and then they were cultured in small volume of complete medium (0.01 L) for 8-10hours.Finally,proportion of mature schizonts was counted and compared with the traditional method,and the growth state of parasites wasobserved.The data shows that the in vitro culture conditions of Pb1596 were optimized,which resulted in a remarkably increasing of mature schizont proportion from 0.97％ to 24.37％ compared with the traditional method,and also increased the average number of merozoites in a schizont from 13 to 16,shorten the experimental period to 11-13 hours,and avoided the loss of free merozoites.At the same time,a high survival rate of 90.27％ of the blood cells was guaranteed.So in brief,we have improved the in vitro culture conditions of Pb1596,and provide the possibility to increase the efficiency of the rodent malaria parasite transfection for the further research.【期刊名称】《寄生虫与医学昆虫学报》【年(卷),期】2013(020)002【总页数】5页(P75-79)【关键词】伯氏疟原虫;体外培养;优化;转染【作者】贾晶;王振生;高宇辉;刘娟;王恒【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院,北京100005;中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院,北京 100005;中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院,北京 100005;中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院,北京 100005;中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院,北京 100005【正文语种】中文疟疾是世界上最严重的寄生原虫感染性疾病之一，一直以来都威胁着人类健康(WHO，2012)。

凝结芽胞杆菌对免疫功能影响的实验研究房志仲;李璐;杨金荣;严海鸿【期刊名称】《中国微生态学杂志》【年(卷),期】2005(17)4【摘要】目的研究凝结芽胞杆菌(TQ33)对实验动物免疫功能模型的影响。

方法以鸡红细胞混悬液对小鼠腹腔注射,观察TQ33对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;制备绵羊红细胞(SRBC),观察血球凝集程度,测定血清溶血素;以靶细胞(YAC-1细胞)与脾细胞(效应细胞)的反应检测TQ33对小鼠NK细胞活性的影响;采用淋巴细胞转化法观察TQ33对细胞免疫的影响;计算小鼠胸腺/体重及脾脏/体重为脏器系数观察TQ33对小鼠脏器的影响。

结果与对照组比较,TQ33显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;对小鼠体液免疫功能有一定的增强作用;可增强小鼠NK细胞活性;对ConA诱导下的小鼠淋巴细胞转化有增强作用;对脏器系数没有显著的影响。

结论凝结芽胞杆菌具有明显的免疫调节作用,预示有良好的应用前景。

【总页数】3页(P263-265)【关键词】凝结芽胞杆菌;细胞免疫;体液免疫【作者】房志仲;李璐;杨金荣;严海鸿【作者单位】天津医科大学药学院;中国医学科学院血液病医院药剂科【正文语种】中文【中图分类】R378.992【相关文献】1.凝结芽孢杆菌对小鼠免疫功能和粪便胺值及肠道氨值影响的研究 [J], 刘洋;彭珊瑛;万阜昌;王文杰2.凝结芽胞杆菌(TBC169)片治疗便秘的实验研究和临床疗效 [J], 崔云龙;万阜昌;李长龄;吴恩融3.凝结芽胞杆菌对大鼠降血脂作用的实验研究 [J], 房志仲;李璐;杨金荣;朱学慧4.凝结芽胞杆菌对小鼠免疫功能和粪便胺含量及肠道中氨含量的影响 [J], 王文杰;刘洋;彭珊瑛;万阜昌;崔云龙;李雄彪5.凝结芽胞杆菌对大鼠降糖作用的实验研究 [J], 房志仲;杨金荣;李璐;朱学慧;严海泓因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

益肺散结颗粒肿瘤免疫作用的实验研究标签：益肺散结颗粒；瘤细胞株；免疫作用中图分类号R73.3 文献标识码 B 文章编号1674—6805（2012）27—0148—02益肺散结颗粒由无花果、木蝴蝶、白人参、灵芝、清半夏等十多味中药组成，具有清肺益气、止咳化痰、散结止血的作用，临床作为肺癌的辅助治疗药，主要用于气阴两虚、痰毒积肺肺癌患者及减轻放疗、化疗的不良反应。

本文对其肿瘤免疫作用进行实验研究，现报告如下。

1 材料与方法1.1 一般材料1.1.1 药物与试剂益肺散结颗粒：由湖南省中医药研究院中药研究所制剂研究室提供，浸膏，1.72 g生药/g，批号：20061128。

参莲胶囊：阳性对照药，中国吉林通化金马药业股份有限公司生产，批号：20060402。

伊文思蓝：上海化学试剂采购供应站试剂厂生产（进口分装），批号：20030320。

Giemsa染色素：上海试剂三厂生产，批号：20040121。

Wright’s染色素：上海试剂三厂生产，批号：200040125。

1.1.2 动物C57BL/6J清洁级小鼠：体重18～22 g，雌雄兼用，由上海西普尔必凯实验动物有限公司提供，合格证号：沪动合证字153号。

1.1.3 瘤细胞株小鼠Lewis肺癌均由中国医学科学院药物研究所提供，两周传代1次。

1.2 方法每次实验取C57BL/6J雄性小鼠50只，体重18～22 g，按无菌操作于右腋皮下接种小鼠Lewis肺癌和生理盐水（1∶4）无菌稀释液0.2 ml/只，24 h后称重，随机分为5组：荷瘤对照组、益肺散结颗粒23.92、11.96、5.98 g/kg组（分别称为高、中、低益肺散结组）和参莲胶囊1.17 g/kg组，每组10只，另取正常动物10只接种等量生理盐水作为正常对照组。

1.2.1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的实验分组当日对荷瘤小鼠进行上述方法给药，1次/d，连续8 d，对照组给予等体积蒸馏水。

末次给药后1 h，各鼠ip 5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.5 ml，5 h后处死，腹腔注射生理盐水2 ml，转动鼠体1 min，然后抽取腹腔洗液，分滴于两片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒中，于37 ℃温育30 min，取出玻片，于生理盐水中漂洗，晾干后1∶1丙酮—甲醇液固定5 min，用4%（v/v）Giemsa—Wright’s染液染色3 min，蒸馏水漂洗，晾干，油镜下观察，按公式计算吞噬百分率和吞噬指数[1—2]。