肺炎衣原体抗体检测SOP

呼吸道九联检操作程序呼吸道感染概述一、气管和支气管等咽喉呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、、上呼吸道感染常见的分为上呼吸道感染和下呼吸道感染呼吸系统，。

指鼻腔是急性上呼吸道感染、），tract infectionupper（acute respir 常见病因是呼吸道最常见的一种传染病咽或喉部急性炎症的概称。

，不仅性别职业和地区为病毒少数由细菌引起患者不分年龄。

、，、。

下呼吸道感染是最常见具有较强的传染性而且可引起严重并发症。

，肺炎支气管炎慢性支气管炎的感染性疾患包括急性气管——、，、、军团菌等微生物引衣原体由病毒支气管扩张等细菌支原体、、、，、治疗时必及时治疗的原则起其防治应遵循预防为主准确诊断，，、、须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。

免疫荧光法介绍一、又称荧光抗体免疫荧光技术）technique（Immunofluorescence生物化学是标记免疫技术中发展最早的一种它是在免疫学技术、。

，很早以来就有一些学者和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。

利用抗原抗体反应进行组织或试图将抗体分子与一些示踪物质结合，年首次采用荧光素进行标等于细胞内抗原物质的定位1941。

Coons 这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为记而获得成功。

用荧光抗体示踪荧光抗体技术technique）。

fluorescent（antibody 用已或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；这两知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。

因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合种方法总称免疫荧光技术，，用于检测或定也可以与其他蛋白质结合用于检测或定位各种抗原，，位抗体但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用所以人们习惯称，，为荧光抗体技术或称为免疫荧光技术用免疫荧光技术显示和检查。

，细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞或组织）（化学技术。

荧光免疫法按反应体系及定量方法不同还可进一步分做若干种。

，与放射免疫法相比荧光免疫法无放射性污染并且大多操作简便，，，便于推广该技术的主要特点是特异性强敏感性高速度快主。

1. 目的建立支原体灵敏度检测操作规程，保证检测结果的真实可靠。

2. 范围用于自制支原体培养基和外购支原体培养基灵敏度的检测。

3. 职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。

3.2. 质量管理部检验人员：负责本规程的操作。

3.3. 总经理：负责本规程的审批。

4. 定义5. 引用标准无。

6. 材料6.1. 所需材料6.1.1. 菌种：肺炎支原体（ATCC 15531）、口腔支原体（ATCC 23714）购自北京中原公司。

6.1.2. 培养基:6.1.2.1 支原肉汤培养基猪胃消化液 500ml 氯化钠 2.5g牛肉浸出液（1：2） 500ml 葡萄糖 5.0g酵母浸粉 5.0g 酚红 0.02g6.1.2.2 支原体半流体培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂2.5～3.0g。

6.1.2.3 支原体琼脂培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂13.0～15.0g。

6.2. 仪器设备无6.3. 器械、用具6.3.1 灭菌玻璃移液管7. 流程图无8. 内容8.1.变色单位试验法：将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传2代后。

将培养物接种到待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种到支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内，每个稀释度接种3支试管，置36℃±1℃培养7～14天，观察培养基变色结果。

8.2. 结果判定以接种后培养基管数的2/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。

8.3. 液体培养基的灵敏度肺炎支原体（ATCC 15531）应达到10-3，口腔支原体（ATCC 23714）应达到10-4。

9. 注意事项无10. 附录及派生记录无11. 相关文件无12. 修订记录。

支原体肺炎血清学试验被动凝集法作业指导书1.原理本试剂是一种检测肺炎支原体抗体的体外诊断试验，它用肺炎支原体细胞膜成分致敏人工明胶粒子制造而成。

本试剂试验室基于如下原理：致敏粒子与人血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应。

2.标本采集2.1标本种类：血清2.2标本要求：新鲜，无溶血，无脂血。

2.3标本存放：室温﹤8小时，4℃—8℃存﹤48小时。

3.试剂组合3.1U型微量反应板：FASTEC。

3.2血清稀释液（液体）：30ml*1瓶。

3.3致敏粒子（冻干）：1.5ml*5瓶。

3.4未致敏粒子（冻干）：1.5ml*5瓶。

3.5阳性对照（液体）：0.5ml*1瓶。

4.操作方法4.1用一支校准的滴管，向第1孔加100ul，向第2-第8孔各加25ul血清稀释液。

4.2用微量移液管向第1孔中滴加25ul样品。

4.3用加样器或移液管，从第1孔至第8孔进行对倍稀释。

4.4用试剂盒中提供的一支滴管向第2孔中滴加25ul未致敏粒子，用试剂盒中提供的另一支滴管向第3孔至第8孔各滴加25ul致敏粒子。

4.5用平板混合器混合各孔中内容物约30秒，以便充分混匀。

给反应物加盖。

5.结果判断：在室温下静置3小时，然后在平板观测器上读取凝集图像。

6.操作性能：特异性，灵敏度，重复性，相关性。

7.结果处理7.1若结果失败，则重复测试，并作质控校正。

7.2若失控，则重检试剂盒。

8.方法局限性8.1溶血、脂血结果有影响。

8.2观察结果对弱阳性存在差异。

9.临床意义：肺炎支原体（MP）是引起呼吸道感染的常见病原微生物，它除可引起非典型肺炎外，常可引起呼吸道感染、气管炎、支气管炎、淋巴结炎，也可引起肺大泡、肺脓肿，另外，它还可引起其他系统并发症，如心肌炎、心包炎、脑膜炎、关节炎、胃炎、溶血性贫血等，由于MP对一般治疗肺炎的药物有耐药性，因此，及时进行检查有助于诊断及治疗。

广州市医院检验科免疫室（SOP）文件撰写人：审核人：批准人：批准日期：2011年8月8日启用日期：2011年8月8日二零一一年八月八日制文件编号: HDHY-MYJY-P001-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 1页批准页根据《临床检验操作规程》(2006年,第三版)，九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒使用说明书；免疫检验有关试剂盒、质控品的使用操作说明书；《消毒技术规范》以及医院内部有关管理制度、生物安全制度的规定和要求，临床免疫检验操作规程文件NO.2版经实际运行，现予以批准通过，于 2011年 8月8日起生效并开始实施。

免疫室和检验科有关工作人员必须认真学习，严格遵照执行。

（NO.2版依据检验技术和我科工作发展及管理工作的需求进行的补充完善和改进另行通知）。

任何个人不得更改，实际工作中如发现不妥之处，请按程序以文字形式向审核人汇报；在未经批准人同意/批准新文件之前，仍执行此文。

2011年8月8日编写人修改内容及修改人批准人生效日期文件编号: HDHY-MYJY-P003-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 2页呼吸道九联检操作规程1.项目中英文名称：九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）2.实验原理与方法：2.1 原理：间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。

样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。

在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。

用免疫荧光显微镜观察结果。

2.2 方法：间接免疫荧光法3.标本的要求：需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。

使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。

血清样本采集后如不在8小时内检测应2~8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。

呼吸道五联检（胶体金法）产品评估实验报告1.实验目的：考察北京英诺特生物技术有限公司研制的《肺炎支原体IgM抗体、肺炎衣原体IgM抗体、呼吸道合胞病毒IgM抗体、腺病毒IgM抗体、柯萨奇病毒IgM抗体联合检测试剂盒（胶体金法）》---简称“呼吸道五联检”的灵敏度和特异性，对临床收集的具有明显呼吸道症状的样本进行对比实验，评价该产品的临床适用性提供依据。

2.实验方案：分别采用英诺特公司考核试剂《肺炎支原体IgM抗体、肺炎衣原体IgM抗体、呼吸道合胞病毒IgM抗体、腺病毒IgM抗体、柯萨奇病毒B组IgM抗体联合检测试剂盒（胶体金法）》和郑州安图代理的VIRCELL公司对比试剂《九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）》对临床收集的具有明显呼吸道症状的样本进行同步检测，并在试剂规定的时间内判读结果。

测试后将考核试剂检测结果与对比试剂检测结果进行比较分析，对结果不一致的样本，采用EUROIMMUN公司相对应的酶免产品进行复核确认。

3.实验试剂：3.1考核试剂：产品名称：肺炎支原体IgM抗体、肺炎衣原体IgM抗体、呼吸道合胞病毒IgM抗体、腺病毒IgM抗体、柯萨奇病毒IgM抗体联合检测试剂盒（胶体金法）规格：40人份/盒来源：北京英诺特生物技术有限公司注册证号：国械注准20163401650保存条件：室温（10-30℃）3.2对比试剂：名称：九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒(间接免疫荧光法)规格：10人份/盒来源：VIRCELL,S.L.（郑州安图代理）注册证号：国食药监械(进)字2013第3404276号保存条件：2-8℃3.3复核试剂名称：抗肺炎衣原体抗体IgM检测试剂盒（酶联免疫吸附法）抗呼吸道合胞病毒抗体IgM检测试剂盒（酶联免疫吸附法）、抗腺病毒抗体IgM检测试剂盒（酶联免疫吸附法）规格：96人份/盒来源：欧蒙医学诊断（中国）有限公司注册证号：国食药监械（进）字2014第3402485号、国械注进20163401396、国食药监械（进）字2013第3404543号保存条件：2-8℃4.实验样本：儿研所2016.12.07当日临床具有明显呼吸道症状的随机血清样本，共计37例。

肺炎链球菌鉴定流程肺炎链球菌是一种革兰阳性菌，可引起肺炎、脑膜炎和败血症等严重感染。

其识别需要准确可靠的实验室检测。

以下是肺炎链球菌鉴定的综合流程：显微镜检查：将疑似标本制成涂片，革兰染色。

在显微镜下观察革兰阳性球菌，通常呈卵圆形或兰氏链球菌排列。

培养和形态学特征：疑似标本接种于适当的培养基上，如血琼脂平板。

培养 24-48 小时，观察菌落形态、溶血性（α、β、γ）。

α溶血菌落周围出现绿色透明晕环。

生化反应：进行生化反应，如 katalase 试验、optochin 敏感性试验。

Katalase 阳性菌产生气泡，optochin 敏感菌在含 optochin 的培养基上生长受抑制。

抗原检测：利用免疫学方法检测肺炎链球菌荚膜多糖 (CPS) 抗原。

常见的技术包括乳胶凝集试验和酶联免疫吸附测定 (ELISA)。

不同血清型荚膜多糖抗原可用于区分不同的肺炎链球菌株。

分子检测：利用聚合酶链反应 (PCR) 等分子技术检测肺炎链球菌特异性基因。

PCR 可快速灵敏地检测出肺炎链球菌，即使在标本量少或菌载量低的情况下。

血清分型：根据肺炎链球菌荚膜多糖抗原的不同，将其分为 90 多种血清型。

血清分型对于流行病学调查和疫苗接种策略至关重要。

耐药性检测：检测肺炎链球菌对常用抗生素的耐药性。

常见的抗生素包括青霉素、头孢菌素和宏观内酯类。

耐药性检测结果指导临床治疗方案的选择。

综合解读：结合上述检测结果，综合解读以确定疑似标本中是否含有肺炎链球菌。

准确的鉴定有助于指导患者的管理和控制肺炎链球菌感染的传播。

优势和局限性：肺炎链球菌的鉴定流程提供了准确可靠的结果。

综合方法提高了检测的灵敏性和特异性。

分子检测技术在标本量少或难以培养的情况下尤为有用。

培养时间和抗生素耐药性检测结果的等待时间可能是局限性。

1.目的建立血清BVDV中和抗体检验操作规程，以确保抗体水平检测效果。

2.适用范围初制、精制血清的BVDV中和抗体检验操作。

3.职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。

3.2. QC：负责本程序的操作。

4.3. 总经理：负责本规程的审批。

5.定义无6.引用标准《中华人民共和国兽药典》2010版7.材料及设备8. 1 试剂9. 1.1. 标准毒株OregOnC14V9.1.2, 标准阳性血清、标准阴性血清6.1.3. 犊牛原代•肾细胞、睾丸细胞和牛肾细胞系（MBDK）细胞。

6∙2 实验器材9.2.1. 微量细胞培养板（简称微量板）96孔平底板。

6・2.2,加样器：100μ1单通道和多通道的可调加样器。

9.2.3.相应的吸尖6∙2.4. 培养基6.2.5. 稀释液及营养液（DMEM或MEM），pH7.0〜7.2,每毫升加100μg链霉素和IOOIU青霉素,按说明书配制。

6. 2.6. 生长液：营养液加10%犊牛血清。

7. 2.7. 维持液：营养液加2%〜5%犊牛血清。

8. 2.8. 细胞消化液：EDTA-胰酶9. 2.9. 被检血清：常规分离血清，56℃灭活30位11。

10.流程图无11.内容8.1 定量试验8.1.1. 血清稀释8.1.1.1. 用多通道加样器于96孔微量板中每孔加稀释液50μ1o8.1.1.2. 用单通道加样器取50μ1灭活的被检血清加于微量板的第一排孔中，每份样品加4个孔。

8.1.1.3, 用多通道加样器（调至50H1）从第一排孔开始作连续倍比稀释，直至最后一个孔，并从最后孔中弃去50U1稀释物。

8.1.2.加病毒/50μ1的工作液。

8.1.2.1. 用稀释液将标准毒株0regonC24V稀释成含100TCID508.1.2.2. 用多通道加样器从第二排孔开始每孔加病毒工作液50μ1,第一排孔中加50μ1稀释液作为被检血清对照。

8.1.3.将微量板盖严，置于37C 5%二氧化碳培养箱中中和2小时。