肺炎支原体检测的SOP内容

1. 目的建立支原体灵敏度检测操作规程，保证检测结果的真实可靠。

2. 范围用于自制支原体培养基和外购支原体培养基灵敏度的检测。

3. 职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。

3.2. 质量管理部检验人员：负责本规程的操作。

3.3. 总经理：负责本规程的审批。

4. 定义5. 引用标准无。

6. 材料6.1. 所需材料6.1.1. 菌种：肺炎支原体（ATCC 15531）、口腔支原体（ATCC 23714）购自北京中原公司。

6.1.2. 培养基:6.1.2.1 支原肉汤培养基猪胃消化液 500ml 氯化钠 2.5g牛肉浸出液（1：2） 500ml 葡萄糖 5.0g酵母浸粉 5.0g 酚红 0.02g6.1.2.2 支原体半流体培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂2.5～3.0g。

6.1.2.3 支原体琼脂培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂13.0～15.0g。

6.2. 仪器设备无6.3. 器械、用具6.3.1 灭菌玻璃移液管7. 流程图无8. 内容8.1.变色单位试验法：将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传2代后。

将培养物接种到待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种到支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内，每个稀释度接种3支试管，置36℃±1℃培养7～14天，观察培养基变色结果。

8.2. 结果判定以接种后培养基管数的2/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。

8.3. 液体培养基的灵敏度肺炎支原体（ATCC 15531）应达到10-3，口腔支原体（ATCC 23714）应达到10-4。

9. 注意事项无10. 附录及派生记录无11. 相关文件无12. 修订记录。

1.1规范支原体培养法检查的检验操作程序，确保检验结果的准确有效。

2. 适用范围：2.1本标准规定了本公司支原体培养法检查的SOP。

2.2本标准适用于本公司支原体培养法检验。

3. 职责：3.1 检验人员：严格按照本SOP进行检定，并完成与本SOP相关的记录。

3.2检定组长：按照本SOP组织相关人员进行培训，并监督实施。

3.3质量控制室主任：负责对本SOP的实施进行管理。

4. 材料：4.1供试品：主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞、病毒收获液、原液、牛血清。

4.2 器具：1ml、10ml刻度移液管，180℃干热灭菌2小时。

4.3 仪器：电炉，超净工作台/生物安全柜，37℃生化培养箱4.4 检定用培养基：支原体肉汤培养基（由培养基室提供），支原体半流体培养基（由培养基室提供），精氨酸支原体肉汤培养基（由培养基室提供），精氨酸支原体半流体培养基（由培养基室提供），上述培养基灵敏度应符合要求。

已检定合格血清。

5. 内容：5.1 操作步骤：5.1.1 先将半流体培养基煮沸10～15分钟，然后冷却至56℃左右，再加入新生牛血清（培养基∶血清为8∶2），充分摇匀。

肉汤培养基无需煮沸，但使用前需要按照上述方法添加新生牛血清。

5.1.2 取2种支原体液体培养基各4支、相应的支原体半流体培养基各2支（已冷却至36℃±1℃），每支培养基接种供试品0.5～1.0ml，置36℃±1℃培养21天。

5.1.3 于接种后的第7天从4支支原体液体培养基中各取2支进行次代培养，每一支培养基分别转种至相应的支原体半流体培养基及支原体液体培养基各2支，置36℃±1℃培养21天，每隔3天观察一次。

5.2 结果判定：培养结束时，接种供试品的培养基均无支原体生长，则判供试品合格；如疑有支原体生长，取加倍量供试品复试，如无支原体生长，判供试品合格，如有支原体生长（液体培养基中呈极浅淡均匀浑浊，半流体培养基中呈小彗星状或沙粒状），则判供试品6.健康、安全与环境：6.1所有用过的培养基应灭菌后再废弃。

支原体检验标准操作规程记录
支原体是一种细菌，可以引起一些疾病，例如支原体肺炎。

支原体检验通常是通过采集患者的呼吸道分泌物样本进行检测。

下面是支原体检验的标准操作规程记录：
1. 样本采集，首先，医务人员需向患者解释采集支原体样本的过程，并确保患者理解并同意。

然后，使用标本采集棒从患者的咽部或鼻腔采集分泌物样本。

确保采集的样本足够用于后续的检测。

2. 样本保存和运输，采集完样本后，将其置于适当的容器中，并尽快送往实验室进行检测。

在运输过程中，需要确保样本的稳定性和完整性，避免样本污染或损坏。

3. 样本检测，实验室技术人员根据标准操作规程，使用适当的检测方法对支原体样本进行检测。

常见的检测方法包括PCR（聚合酶链反应）和培养法。

在检测过程中，需要严格遵守操作规程，确保结果的准确性和可靠性。

4. 结果记录和报告，一旦检测完成，实验室应当及时记录检测结果，并按照相关规定向医务人员报告。

检测结果应当包括阳性或
阴性的判定，以及可能的数量或浓度信息。

5. 结果解读和处理，医务人员在收到检测结果后，应当结合患
者的临床症状和其他检查结果进行综合分析和判断。

根据检测结果，及时采取相应的治疗措施，并告知患者相关信息。

以上是支原体检验的标准操作规程记录，这些步骤和规程的严
格执行对于确保支原体检验的准确性和可靠性非常重要。

希望这些
信息能够对你有所帮助。

中美冠科生物技术有限公司1目的规范MycoAlert试剂盒检测支原体污染实验操作。

2职责采用MycoAlert试剂盒检测支原体污染的实验人员需执行此SOP。

3适用范围3.1 Cell bank建库细胞每批冻存前都需取样进行支原体检测。

（不要复苏检查冻存质量时再送样，避免传代麻烦。

）3.2 Cell support每次供给细胞前取样检测。

冻存任何一批细胞前都必须取样检测。

平时有时间追踪已检测阳性的细胞，若阴性，则及时扩大冻存。

3.3Cell-based assay已知支原体情况、培养时间短（3周内）、又不需回冻的细胞，可以不检测。

未知支原体污染情况的，需取样检测。

3.4 Primary cell culture符合取样条件的，立即取样送检。

不要等冻存时再取样。

因为早发现，早隔离，尽量避免交叉污染。

3.5Cell selling复苏的细胞为支原体阴性的批次，因几天后就售出。

就视为阴性，不检测。

若复苏的细胞，不知道支原体污染情况，则售出前取样检测。

（无论客户要求检测支原体）4内容/流程4.1 主要材料MycoAlert Mycoplasma Detection Kit, LT07, Lonza.微孔板分光光度计4.2 步骤4.2.1样品准备待测样品的准备：将细胞在无抗生素的培养液中传代两次，使其汇合率达到90-100%，并且三天之内（如11月4日换液，11月7日可以取样）不更换培养液。

这样的细胞培养液在无菌条件下用无菌离心管收集上清液。

阳性对照样品的准备：将已知支原体阳性的细胞，在无抗生素的培养液中传代两次，使其汇合率达到90-100%，且三天之内不更换培养液。

取培养物上清，离心，分装，-20℃保存。

4.2.2 试剂准备准备MycoAlert试剂（LT07-318）a. 向标有LT27-216的试剂瓶加入10ml McoAlert缓冲液b. 盖上白色的盖子，轻柔的混匀，c. 室温静置15分钟配制MycoAlert底物a. 向标有LT27-224的试剂瓶加入10ml McoAlert缓冲液b. 盖上绿色的盖子，轻柔的混匀，c. 室温静置15分钟d. MycoAlert试剂和MycoAlert底物分装冻存于-20度，6个月内使用。

支原体检测操作规程
首先，支原体检测操作规程通常包括以下内容：
1. 样本采集，根据不同的病情和病人的具体情况，支原体检测通常需要采集相应的生物样本，比如咽拭子、尿液或生殖道分泌物等。

操作规程会详细说明如何正确采集样本，以确保样本的准确性和完整性。

2. 样本保存和运输，操作规程会规定样本的保存方法和运输要求，包括保存温度、保存时间和运输条件等，以确保样本在检测前的质量和完整性。

3. 实验室操作，操作规程会详细说明实验室人员在进行支原体检测时应该遵循的操作步骤，包括样本处理、试剂使用和设备操作等，以确保检测结果的准确性和可靠性。

4. 质控要求，操作规程通常还会包括质控要求，包括内部质控和外部质控的要求，以确保实验室的检测结果符合质量标准。

其次，支原体检测操作规程的制定和执行对于医疗机构和实验
室来说非常重要。

遵循规程可以保证检测结果的准确性和可靠性，
有助于医务人员正确判断病情并采取相应的治疗措施，从而保障患
者的健康和安全。

此外，支原体检测操作规程的执行也需要严格遵守相关的法律
法规和标准，比如医疗器械管理条例和实验室质量管理规范等。

医
务人员在执行操作规程时需要严格按照规定的步骤和要求进行操作，确保检测过程的合法性和规范性。

总的来说，支原体检测操作规程是保障支原体检测质量和结果
准确性的重要保障措施。

医务人员应该严格遵守规程，确保检测过
程的科学性和规范性，从而为患者的诊断和治疗提供可靠的实验室
支持。

赛润ELISA classic肺炎支原体IgG/IgM/IgA目录1.用途2.诊断意义3.赛润ELISA classic-检测原理4.试剂盒组成5.检测所需物质，试剂盒未提供6.储存和稳定性7.赛润ELISA classic的检验步骤7.1注意事项7.2样品准备和储存7.3试剂盒反应试剂的准备7.4检测程序概要7.5检测过程8.检测结果评估8.1 4PL单点定量法8.2检验有效性标准8.3计算赛润ELISA classic肺炎支原体IgG/IgM/IgA（定量）8.4检测结果分析9. 性能特性9.1重复性9.2 敏感性和特异性10.警告10.1警告和安全措施10.2废料处理11.参考文献赛润ELISA classic肺炎支原体IgG/IgM/IgA酶联免疫法测定人体抗体（IgG/IgM/IgA）- 只限用于体外诊断-IgG试剂盒（定量）编号ESR127GIgM试剂盒（定量）编号ESR127MIgA试剂盒（定量）编号ESR127A检测评估标准: BEP 2000, BEP III, DSX, 手动操作1.用途赛润ELISA classic肺炎支原体IgG/IgM/IgA用于定性和/或定量检测人血清或血浆内肺炎支原体。

抗肺炎支原体病毒IgG，IgM和IgA联合使用会有助于对肺炎支原体感染做出确切的诊断。

IgA-Elisa的使用特别在诊断再感染时，对于IgG 和IgM诊断是一个重要的补充。

2.诊断意义支原体肺炎病毒的感染会导致许多有可能引起严重并发症的呼吸系统疾病。

在这些疾病中首先值得一提的是初级非典型肺炎，咽炎以及呼吸道支气管炎。

在美国支原体肺炎病毒的感染要占每年门诊肺炎的20%。

肺炎支原体感染的临床症状具备多样性并且与其它原因引起的呼吸道感染（如呼吸道合孢病毒，流感-感染等）很难区别。

肺炎支原体可使气管、支气管以及细支气管上皮细胞增生。

感染后10-20天之后才出现一些非特异症状，如头疼、发烧、无痰干咳等。

支原体肺炎血清学试验（测抗体）作业指导书1. 原理斑点反应板是固相MP抗原特异地与血清中抗MP抗体结合形成复合物，胶体金标记的抗人IgG或M、A抗体（试剂B）再与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑。

2.标本采集2.1标本种类：血清2.2标本要求：新鲜，无溶血，无脂血。

2.3标本存放：室温﹤8小时，4℃—8℃存﹤48小时。

3.试剂组合3.1斑点反应板：40板，含固相MP抗原。

3.2试剂A：1瓶（～10ml）含TBJ缓冲液等。

3.3试剂B：1瓶（～6ml）含胶体金标记抗（IgG或IgM、A）。

3.4标本吸管：40支，每滴约50ml。

3.5阴阳性对照卡，一张。

4.操作方法4.1取出斑点反应板，室温10分钟。

4.2加试剂A（2滴）于反应板孔中，待充分吸入。

4.3用样品吸管加样品0.5ml（4滴）于反应板孔中，待体液充分吸入。

4.4去除蓝色过滤盖。

4.5加试剂B（3滴）于反应板孔中，待液体充分吸入。

4.6加试剂A（1～2滴）于反应板孔中，待液体吸入后观察结果。

5.结果判断：3分钟内与对照卡阴性阳性对照，读取结果。

6.操作性能：快速简便，特异性好，灵敏度高，重复性好。

7.结果处理7.1若结果失败，则重复测试，并作质控校正。

7.2若失控，则重检试剂盒。

8.方法局限性8.1溶血、脂血结果有影响。

8.2观察结果对弱阳性存在差异。

9.临床意义：肺炎支原体（MP）是引起呼吸道感染的常见病原微生物，它除可引起非典型肺炎外，常可引起呼吸道感染、气管炎、支气管炎、淋巴结炎，也可引起肺大泡、肺脓肿，另外，它还可引起其他系统并发症，如心肌炎、心包炎、脑膜炎、关节炎、胃炎、溶血性贫血等，由于MP对一般治疗肺炎的药物有耐药性，因此，及时进行检查有助于诊断及治疗。

本试剂可方便快速地检测血清中抗MP抗体（MP-A6），在临床上可作为支原体感染的辅助诊断，并可作为MP感染的流行病学研究的有效方法。

肺炎支原体操作规程
贮存条件：试剂应置0℃以下冷冻保存。

（-14℃冰箱）
标本要求：标本为患者咽拭子或痰液，采集标本前，用生理盐水漱口，在所采集标本为痰时，当痰标本粘度比较大需要用无菌拭子蘸取进行接种培养，当痰标本比较稀时可以用无菌拭子蘸取或用移液器量取100μl进行培养，所采集的标本应尽快接种，室内放置不得超过四小时。

检验方法：
1、取出培养液及药敏试验板，使其在接种样本前接近室温，旋开培养液瓶
盖，用吸嘴吸取100μl培养液加入C-对照孔；
2、接种咽拭子（痰拭子或痰液100μl）于剩余的培养液中，加盖摇匀使之
混匀；
3、将含样本的培养液加入其余微孔中，每孔100μl，轻轻震荡药敏试验板；
4、所有微孔滴加1滴试剂盒所附矿物油（使矿物油覆盖液面，否则培养液
蒸发，结果不准）；
5、将药敏试验板加盖后，置培养箱中，35-37℃培养24-48小时观察结果。

检验结果的解释：
1、培养24-48小时培养液由桔红色变成黄色且澄清，表示有肺炎支原体生
长，用（+）表示；培养液保持红色不变，表示没有肺炎支原体生长，用（-）表示；培养液由桔红色变成黄色但浑浊，不能作为阳性结果。

2、药敏试验板抗生素结果判定：依托红霉素（EST）孔培养液桔红色为敏感
（S），黄色为耐药（R）;其他13种抗生素如药敏试验板上孔培养液变黄而下孔桔红色判为中介（I）,如上下两孔均为桔红色判为敏感（S）,如上下两孔均为黄读为耐药（R）。

检验科
2011-9-5。

SOP_15-13 支原体与支原体药敏培养鉴定标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：支原体与支原体药敏培养鉴定操作三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 支原体分离鉴别培养1.1标本采集男性：可取尿道分泌物、前列腺液、精液或中段尿培养（中段尿需取尿10ml，经2000r/min 离心10分钟，取沉渣接种）；女性：用扩阴器扩阴后，取宫颈口分泌物培养，也可用羊水培养。

不推荐用尿液。

1.2操作步骤1、从冰柜中取出液体培养基小瓶，复温，登记标本号。

2、打开瓶盖，揭开胶塞，将标本棉签伸入，紧靠培养液上方瓶壁挤压棉签，使标本渗入，丢弃棉签，盖上胶盖，摇匀小瓶；3、将小瓶置35-37℃培养24-48小时，观察结果。

1.3结果判定培养基澄清透明并呈明显得玫瑰红色者为有支原体生长；解脲支原体24小时，人型支原体、混合支原体48小时后培养基无任何变化，可报阴性结果。

培养明显浑浊变红者应判断无支原体生长。

必要时可做支原体固体培养，低倍镜下观察，有油煎蛋样菌落者为支原体阳性。

1.4注意事项1、用后得培养物用高压锅消毒后丢弃；2、本品仅供体外诊断用；3、本品仅供一次性使用。

4、先兆流产、月经期妇女禁用；阴道用药或灌洗后禁用。

2 支原体药敏2.1试剂盒说明本试剂盒集泌尿生殖道支原体UU、MH分离培养，鉴定计数以及10种抗生素的药敏试验于一体。

药敏抗生素：强力霉素（DOX）、美满霉素（MIN）、环丙沙星（CPE）、氧氟沙星（OFL）、司帕沙星（SPA）、罗红霉素（ROX）、阿齐霉素（AZI）、克拉霉素（CLA）、交沙霉素（JOS）、壮观霉素（SPE）、螺旋霉素（AXP）、左旋氧氟（LEV）。

2.2试剂盒组成3.5mlUU-MH 培养液20支，药敏试验板20只，无菌吸咀40个（嵌在试验板底座后面），无菌矿物油2瓶，药敏试验报告签20张，说明书1份。

2.3标本采集男性：可取尿道分泌物、前列腺液、精液或中段尿培养（中段尿需取尿10ml ，经2000r/min离心10分钟，取沉渣接种）；女性：用扩阴器扩阴后，取宫颈口分泌物培养，也可用羊水培养；阳性培养液（普通支原体培养基获得）：用无菌吸咀吸取30ul 。