猪蓝耳病病毒快速检测方法在北京通过专家鉴定

简述猪蓝耳病（PRRS）的诊断技术作者：黎先伟译来源：《兽医导刊》 2015年第10期黎先伟译迄今为止，无论花费了多大的成本和努力，我们仍没有建立一套有效的预防、控制和清除猪繁殖与呼吸综合征（蓝耳病，PRRS）的策略。

不过，对我们兽医工作者来说，掌握最佳的诊断方法来准确的提前预判猪场蓝耳病稳定与否是非常重要的。

目前，有什么工具和/ 或手段来协助我们呢？下面我们将一一阐述。

猪繁殖与呼吸综合征是一种病毒性、灾难性的传染病。

其临床表现为母猪严重的繁殖障碍、断奶仔猪普遍发生肺炎、生长迟缓以及死亡率增加等症状。

猪蓝耳病是一个全球性的问题，对世界养猪业和经济造成非常重要的影响。

单单在美国，每年由于猪蓝耳病对养猪业所造成的损失估计可达到6.64 亿美元。

为了应对这些挑战，研发和实施一种可靠的、准确的和及时的诊断措施是有效防控猪蓝耳病的一个重要组成部分。

随着诊断技术的日益发展，对于兽医和养猪业的利益相关者来说，继续采取最佳的措施以协调应对疾病的发展，从而保持整个行业的稳定是非常重要的。

一、选择合适的诊断方法选择一种合适的猪蓝耳病诊断方法最为关键的第一步是，确定实施检测的目标。

这些目标可能包括在一个群体中检测出至少一头受感染的动物；判断病毒在群体中的流行情况；确定分离的是野毒还是疫苗毒，或评估感染的时间。

这些因素将取决于待检测的动物、需求样品的数量以及合适组织的使用。

此外，个别动物的检测结果可能不能很好的反应整个群体的状态，因为每个动物感染的状态都有所差异，所以我们在分析结果时必须多加注意。

二、选择合适的样本数当选择合适的用于诊断猪蓝耳病的样本数时，需要考虑到多种因素。

为了从一个群体中鉴定出至少一份阳性样本，需要考虑的因素包括群体大小、群体内疾病的预期流行率、所需确定性的程度，以及所采用的检测方法的敏感性和特异性。

检测的时机也是非常重要的，因为感染和免疫反应的多种方面，包括病毒血症、病毒释放、抗体应答和特征性病变仅会在特定的时间内出现。

母猪群猪蓝耳病感染状态的评估作者：陈鹏强来源：《兽医导刊》 2019年第5期陈鹏强/ 硕腾（上海）企业管理有限公司猪繁殖与呼吸综合征（蓝耳病，PRRS）仍是危害当前养猪业的重大疾病之一，各种年龄的猪均可感染，主要引起母猪流产、产死胎、繁殖障碍，仔猪和生长猪表现为呼吸系统症状。

母猪群的感染状态决定了选择蓝耳病防控方法的有效性，不稳定的母猪群会让小猪带毒，并不断在生长猪群中循环。

猪蓝耳病的防控首先应了解本场母猪的感染状态、感染了哪些毒株，做好综合防控措施，才能有的放矢。

随着时间的推移猪场感染状态也会发生变化，评估母猪群的稳定状态不是凭借眼观的临床表现判定，而是要通过严谨的监测评估。

一、美国的评估方法美国猪兽医协会（AASV）和美国农业部PRRS-Cap 委员会制定了猪场中所处蓝耳病病毒（PRRSV）的四个感染状态，即根据PRRSV 在猪群中Shedding（排毒）和Exposure（暴露）的情况可将蓝耳病在猪场中所处的状态可分为：阳性不稳定场、阳性稳定场、暂定阴性场和阴性场。

该标准由已故明尼苏达大学最著名的猪病教授Bob Morrison，堪萨斯州立大学Raymond （Bob）Rowland 及爱荷华州立大学教授、第十版猪病学主编Jeff Zimmerman 等多位著名的PRRSV 专家审议通过（见表1）。

美国的猪蓝耳病感染状态的判断通过两个核心指标即猪只的排毒状况和暴露情况，排毒状态一般通过PCR 检测，暴露即猪只是否暴露于病毒之中，主要是检测抗体情况，一般用ELSIA 评估。

1. 阳性不稳定。

临床有PRRS相关问题并在组织病料中PCR 检出PRRSV。

2. 阳性稳定。

断奶日龄的仔猪持续90 d 没有病毒血症和种猪群无PRRS 临床表现。

一般每个月采集断奶日龄的仔猪血液30 份，PCR 检测PRRSV 阴性且种猪群无PRRS 相关的临床症状，即判定为阳性稳定场。

3. 暂定阴性。

引进的阴性后备母猪60 d 后，ELISA 检测抗体仍为阴性，生长猪ELISA 抗体也为阴性。

一、实训目的通过本次实训，掌握猪蓝耳病的病原学检测方法，了解蓝耳病的流行病学特点、临床症状、病理变化和防控措施，提高猪场兽医对蓝耳病的诊断能力和防控水平。

二、实训内容1. 猪蓝耳病病原学检测（1）样品采集：采集疑似蓝耳病猪的血液、组织、分泌物等样品。

（2）病毒分离与鉴定：将采集的样品接种于猪肾细胞或猪肺细胞，观察细胞病变。

（3）RT-PCR检测：提取病毒RNA，进行RT-PCR扩增，检测病毒核酸。

2. 猪蓝耳病流行病学调查（1）了解猪场的基本情况，包括猪场规模、饲养模式、疫病发生史等。

（2）收集猪场的疫病监测资料，分析蓝耳病的流行趋势。

3. 猪蓝耳病临床症状观察（1）观察疑似蓝耳病猪的临床症状，如发热、厌食、沉郁、呼吸困难、咳嗽等。

（2）对疑似病例进行详细记录，为后续诊断提供依据。

4. 猪蓝耳病病理变化观察（1）采集疑似病例的病变组织，进行病理切片。

（2）观察病理切片，分析蓝耳病的病理变化特点。

5. 猪蓝耳病防控措施（1）制定合理的猪场生物安全措施，防止蓝耳病的传播。

（2）加强猪群的免疫接种，提高猪群免疫力。

（3）加强猪场的环境卫生和消毒工作，降低疫病发生风险。

三、实训过程1. 猪蓝耳病病原学检测（1）采集疑似蓝耳病猪的血液样品，进行病毒分离与鉴定。

（2）提取病毒RNA，进行RT-PCR扩增，检测病毒核酸。

2. 猪蓝耳病流行病学调查（1）了解猪场的基本情况，收集疫病监测资料。

（2）分析蓝耳病的流行趋势，为防控提供依据。

3. 猪蓝耳病临床症状观察（1）观察疑似蓝耳病猪的临床症状，记录详细病情。

（2）对疑似病例进行详细记录，为后续诊断提供依据。

4. 猪蓝耳病病理变化观察（1）采集疑似病例的病变组织，进行病理切片。

（2）观察病理切片，分析蓝耳病的病理变化特点。

5. 猪蓝耳病防控措施（1）制定合理的猪场生物安全措施，防止蓝耳病的传播。

（2）加强猪群的免疫接种，提高猪群免疫力。

（3）加强猪场的环境卫生和消毒工作，降低疫病发生风险。

猪蓝耳病病毒感染野猪病例的实验室检测龙汉林;程振涛;尹鑫;赵福友;周碧君;李如举【摘要】应用猪蓝耳病、猪瘟RT-PCR检测试剂盒对疑似猪蓝耳病病毒、猪瘟病毒混合感染野猪病料进行检测,并对阳性材料进行病原特征基因序列测定与分析,结果显示:送检病料存在猪蓝耳病病毒感染,但不存在猪瘟病毒感染；对猪蓝耳病病毒流行株NPS2基因分析表明,野猪源蓝耳病病毒NPS2基因与家猪源同源性达95.2％以上,是存在基因缺失的高致病性猪蓝耳病病毒.研究结果说明,高致病性猪蓝耳病病毒可引起野猪发病,应采取相应疫苗免疫进行防控.【期刊名称】《贵州畜牧兽医》【年(卷),期】2013(037)001【总页数】3页(P4-6)【关键词】猪蓝耳病;猪瘟;野猪;诊断【作者】龙汉林;程振涛;尹鑫;赵福友;周碧君;李如举【作者单位】贵州瑞特新科农牧有限公司,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】S828.28猪蓝耳病(猪繁殖与呼吸综合征)和猪瘟是我国防控的猪重大疫病，均被列为强制免疫疫病。

猪蓝耳病病毒于2005年发生变异后引起高致病性猪蓝耳病，发病率、致死率均显著增高。

2012年9月，贵州省某野猪养殖合作社发生以高热、皮肤红疹为主要临床特征的疾病，发病率、死亡率均高，对猪场造成极大损失。

综合流行病学信息、临床表现及剖检病变怀疑为猪蓝耳病病毒或猪瘟病毒感染，也可能为二者混合感染，为对该病例作出确切性诊断，特进行实验室检测。

1 材料与方法1.1 病料来源临床病例材料采自贵州省某野猪养殖合作社。

1.2 试剂 RNA提取试剂盒、PCR试剂(TaqDNA聚合酶、dNTP等)、pMD18－T 克隆载体、Gel Extract Kit胶回收试剂盒等，均购自大连宝生物工程有限公司;猪蓝耳病诊断试剂盒、猪瘟诊断试剂盒，购自世纪元亨(北京)有限公司。

1.3 猪群流行病学调查该养殖专业合作社主要饲养特种野猪，现存栏量300头左右。

猪群于2012年9月初开始发病，至采样时共有25头左右发病，死亡3头。

猪蓝耳病的诊断及防治措施
猪蓝耳病是一种由蓝耳病毒感染引起的猪传染病，严重危害养猪业发展和猪肉安全。

如何进行猪蓝耳病的诊断及防治成为关键。

诊断：
（一）症状虚弱、体温升高：猪蓝耳病早期症状与其他猪传染病相似，表现为食欲不振、发热、全身无力等。

发病后5-7天，病猪腮腺肿大成为独特的表现。

当病猪耳轮、喉咙、前额或者同侧眼球周围出现蓝色斑点或者瘀点时，诊断更为明确。

（二）血清学检测：血清学检测是猪蓝耳病的重要诊断手段，主要包括病毒抗体检测
和病毒抗原检测。

（三）病理学检查：在病理学检查中，病猪的腮腺、淋巴结、脾脏、肺等组织表现为
出血性坏死和淋巴细胞增生，辅以电镜、PCR法等分子生物学方法，可更明确确诊。

防治措施：
（一）做好卫生防疫：加强猪圈卫生、消毒，避免污染环境导致病毒扩散。

隔离病猪，封锁猪场。

在疫情高发时，停止引进活畜。

（二）疫苗预防：猪蓝耳病疫苗在疫苗接种后7-14天内达到保护力，能够有效地预防猪蓝耳病的发生。

疫苗接种前应先检测种猪的体内是否存在病毒抗体，确保接种效果。

（三）加强营养管理：营养不良是病毒入侵的重要因素。

为猪群提供优质饲料、增加
营养含量，增强猪群的免疫力，提高疾病的抵抗力。

（四）及早治疗：发现猪蓝耳病病猪后，应在疫苗接种的基础上进行药物治疗，促进
病猪的康复。

常用药物包括抗病毒药物和生物制剂。

总之，猪蓝耳病的诊断及防治需要多方面的措施，从卫生防疫、营养管理、疫苗预防、药物治疗等多个方面综合进行，才能保证猪群健康，提高养猪业的经济效益。

猪蓝耳病的诊断及防治措施猪蓝耳病是一种由猪蓝耳病病毒引起的急性传染病，主要影响猪的呼吸系统和神经系统，同时也会导致生长缓慢和生产力下降，给养猪业带来了严重的经济损失。

及早诊断并采取有效的防治措施对于控制和预防猪蓝耳病至关重要。

一、猪蓝耳病的临床表现1. 急性期表现猪蓝耳病的急性期表现多为突发性高热、食欲减退、咳嗽、鼻涕增多、呼吸困难等症状。

病猪在行走时常出现跛行、跌倒等症状，有时还会出现眼睛水肿、皮肤发红和瘀血点等症状。

2. 慢性期表现猪蓝耳病的慢性期表现主要为生长退缩、体重下降、毛色变浅以及猪苗呼吸迅速等情况。

有些猪甚至会出现不断发作的抽搐或癫痫症状。

二、猪蓝耳病的诊断方法1. 临床诊断根据猪蓝耳病的临床表现，可以初步怀疑猪蓝耳病的存在。

例如出现高热、咳嗽、鼻涕增多、呼吸困难等症状的猪，很可能患有猪蓝耳病。

但临床诊断并不十分准确，还需要进行实验室检测。

2. 实验室检测目前主要通过血清学检测方法来确诊猪蓝耳病。

血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、补体结合试验（CFT）和中和试验。

其中ELISA方法是目前检测猪蓝耳病最常用的方法，具有敏感度高、特异性强的特点。

三、猪蓝耳病的防治措施1. 疫苗接种疫苗接种是预防猪蓝耳病最有效的措施之一。

目前市面上有多种猪蓝耳病疫苗可供选择，可以根据当地疫情情况和养殖规模选择合适的疫苗进行接种。

疫苗接种后，猪只有出现轻微症状，一般不会有严重症状，同时在猪群中形成免疫屏障，有效控制疫情的蔓延。

2. 环境卫生管理良好的环境卫生管理对于预防猪蓝耳病也是非常关键的。

要定期清理猪圈，保持猪圈内的通风和卫生条件，避免猪舍潮湿，减少病原体的滋生和传播。

还需要定期对猪圈和器具进行消毒，有效降低猪蓝耳病病毒的传播和感染风险。

3. 生物安全措施严格的生物安全措施也可以有效预防猪蓝耳病的发生。

要加强对猪群的进出管理，做好隔离和检疫工作，及时发现患病猪，并迅速隔离治疗或处置。

还要控制野生动物和病原体的传播途径，减少交叉感染的风险。

兽医实验室理论考试题库一、法律、法规和管理制度（一）动物疫病防控法规等A 选择题1、不属于我国尚未发现的动物疫病有？（A ）Ａ. A型口蹄疫Ｂ。

疯牛病Ｃ。

非洲猪瘟Ｄ。

非洲马瘟2、我国已消灭的动物疫病有（B ）Ａ。

口蹄疫Ｂ. 牛瘟Ｃ。

新城疫Ｄ. 猪链球菌病3、以下哪些为二类病原微生物( C ）A。

口蹄疫病毒 B. 牛海绵状脑病病原C. 炭疽芽孢杆菌D。

高致病性禽流感病毒4、动物防疫监督机构在接到报告后，怀疑是高致病性禽流感的，应在（B )小时以内将情况逐级报到省级畜牧兽医行政管理部门。

A. 1小时B。

2小时C。

3小时 D. 4小时5、重大动物疫情分为几个级别（C ）。

A. 2 级B。

3级C。

4级D。

5级6、疫区内不必要采取的措施是( B ）。

A. 在疫区周围设置警示标志B。

扑杀并销毁疫区内所有易感动物C。

关闭动物及动物产品交易市场D。

对易感染的动物进行监测7、自疫区内最后一头(只）发病动物及其同群动物处理完毕起,经过（C ）的监测，未出现新的病例的，彻底消毒后，经上一级动物防疫监督机构验收合格，由原发布封锁令的人民政府宣布解除封锁，撤销疫区。

A. 7天B. 20天C. 一个潜伏期以上D。

两个潜伏期以上8、重大动物疫情的报告内容不包括（D ）。

A。

疫情发生的时间、地点、发病的动物种类和品种 B.临床症状、发病数量、死亡数量、是否有人员感染C.已采取的控制措施、疫情报告的单位和个人、联系方式等D.控制疫情所需资金预算9、以疫点为中心的一定范围内的区域划定为疫区，疫区划分时不需要考虑的因素为（D ）。

A.当地的饲养环境B.天然屏障（如河流、山脉）C。

交通因素 D.当地居民的人口数量10、有下列情况之一的，可定为口蹄疫一级疫情（A )A.在相邻省份的相邻区域14天内有10个以上县发生疫情B。

在1个省级行政区域内有同时2个以上地(市）发生疫情C.在1个省级行政区域内同时有5个以上县连片发生疫情D.在1个地(市)行政区域内同时发生疫情11、有下列情况之一的,可定为口蹄疫二级疫情( D ）A。

简述蓝耳病的诊断流程
蓝耳病的诊断流程一般包括以下几个方面：
1. 了解蓝耳病的流行病学特点：蓝耳病是一种高度接触性传染病，了解蓝耳病的流行病学特点是诊断蓝耳病的第一步。

要了解该地区是否为蓝耳病疫区，是否有蓝耳病疫情发生，了解当地生猪养殖密度、养殖场的规模、养殖方式、防疫措施等信息。

2. 观察临床症状：蓝耳病的临床表现为高热、呼吸困难、食欲减退、消瘦、流产等症状。

在诊断时，要根据这些症状的出现情况和持续时间，结合其他检查结果进行综合判断。

3. 进行病理剖检：病理剖检是诊断蓝耳病的重要手段之一。

在剖检过程中，要观察生猪的病理变化，包括肺脏、肝脏、肾脏等器官的病变情况，以及淋巴结的肿大和出血情况等。

4. 进行实验室检测：实验室检测是确诊蓝耳病的金标准。

在实验室检测中，可以采用病毒分离鉴定、核酸检测、抗体检测等方法进行确诊。

5. 进行鉴别诊断：蓝耳病与其他猪病如猪瘟、猪流行性感冒等在临床上有相似之处，因此需要进行鉴别诊断。

在鉴别诊断中，需要根据其他猪病的特异性症状和实验室检测结果进行区分。

6. 进行预防和控制：在确诊蓝耳病后，需要采取相应的
预防和控制措施，包括采取隔离措施、消毒处理、扑杀病猪等措施，以防止疫情扩散和传播。

总之，在诊断蓝耳病时，需要结合流行病学、临床症状、病理剖检、实验室检测、鉴别诊断等方面的信息进行综合判断，并采取相应的预防和控制措施。

猪蓝耳病诊断技术研究进展作者：李永萍，温书香来源：《畜牧兽医科学》 2018年第1期摘要：猪繁殖与呼吸综合征，又称猪蓝耳病，是由尼多病毒目，动脉炎病毒科，动脉炎病毒属引起的一种通过接触传播的疾病。

该病可引起怀孕母猪在妊娠初期流产，妊娠后期产死胎或者产木乃伊胎。

本文主要针对猪蓝耳病诊断技术研究进展做详细介绍。

关键词：猪蓝耳病；病毒分离鉴定；血清学检测；分子生物学检测中图分类号：S858. 28文献标识码：BDOI: 10. 3969/j．issn．2096-3637. 2018. 01. 0451病毒分离鉴定就目前来说，鉴别诊断病毒种属最有效、最准确的方法是病毒的分离鉴定。

常用于猪蓝耳病的分离培养的细胞主要有猪肺泡巨噬细胞、非洲绿猴肾细胞MA104以及其克隆株，不同的毒株类型对细胞系具有选择性，例如欧洲型毒株更适合于在猪肺泡巨噬细胞上生长。

鉴于不同的毒株对生长条件的选择性，在病毒分离的同时，可以准备接种两种以上的细胞。

猪蓝耳病病毒对温度和PH也比较敏感，因此对病料的保存和运输要求比较严格，对于急性发病的猪只来说，采集病料成功分离病毒的概率比较大。

在病猪的感染早期，肺组织、血清样品常用于分离病毒。

在病猪感染的中期，采集猪的肺组织比血清样品更易于病毒的分离。

此外，猪的口腔分泌物、精液等也可以作为病毒分离的材料。

2病毒抗原的检测单克隆抗体因其具有较高的特异性、不易发生交叉反应等优点常常被用来做猪蓝耳病病毒抗原的检测，用全病毒抗原或者多肽免疫产物作为免疫原获得了5种特异性的单抗，其中N蛋白的免疫原性最强。

用猪蓝耳病全病毒免疫动物获得的单抗多半是针对N蛋白的抗原表位的，这些单抗中有的是针对欧洲型和美洲型共同的抗原表位，有的只对一个毒株类型起反应。

因此，在对猪蓝耳病进行检测的同时还可以达到分离欧洲型和美洲型的目的。

病毒抗原的检测主要用于对病毒分离物进行鉴定或者研究猪蓝耳病病毒的一个动态分布。

猪感染蓝耳病病毒后，体内产生的抗体长期存在，再加上抗原检测时对病料的处理较为繁琐，因此血清学检测更适合于猪蓝耳病的检测和诊断。