下载文档原格式
细胞如何计数？(整理自网络)
方法一：血球计数盘
此物一般有二个chambers，分别刻有9 个1 mm²大正方形，4 个角落之正方形再细刻为16 个小格，深度均为0.1 mm。
当chamber 上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1 mm²×0.1 mm=0.1 mL。
计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以10000，即为每mL 中之细胞数目。
操作步骤
1、取少许细胞悬液（约15 μL）自血球计数盘chamber 上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100
倍倒立显微镜下观察；
2、计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数，最后乘以10000，即为每mL 中
细胞悬浮液之细胞数。
若细胞位于刻线上，只计上线与右线之细胞（下线与左线之细胞）。
计算公式为：4个大格细胞总数×稀释倍数×10000/4=细胞数/mL。
注：（1）计数板计数时，最适浓度为5～100000 细胞/mL，此范围外计数误差偏大。
高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。
（2）吸管吸取细胞，让吸管在计数板一侧的凹槽处流出液体，至盖玻片被液体充满为止，不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡；（有人认为，10 uL 就可以被虹吸作用吸入且铺满计数板）。
（3）移液器（20 μL 的微量加样器）吸取20 μL 细胞悬液至计数板边缘，液体经虹吸作用进入凹槽。
（4）静置半分钟再于显微镜下观察。
方法二：粒子计数器自动计数。
细胞计数的方法一、细胞计数简介细胞计数是生物学实验中常用的一种方法，用于确定生物样品中的细胞数量。
它对于研究细胞增殖、细胞死亡、药物毒性等具有重要意义。
目前常用的细胞计数方法包括显微镜计数法、流式细胞术和自动化计数仪。
二、显微镜计数法显微镜计数法是最传统的细胞计数方法之一，其步骤如下：1.准备工作：取出需要计数的样品，将其悬浮在生理盐水或PBS缓冲液中，并充分混合。
2.制备涂片：取出一块干净的载玻片，在玻片上滴上适量的悬浮液，用另一块载玻片将其涂匀。
3.显微镜观察：将制备好的涂片放入显微镜下，选择适当倍率观察，并记录每个视野中出现的细胞数量。
4.计算平均值：随机选择多个视野进行观察，并将每个视野中出现的细胞数量相加，最后除以观察视野总数，即可得到平均值。
5.计算细胞数量：根据平均值和涂片中的面积，可以计算出样品中的细胞数量。
三、流式细胞术流式细胞术是一种高通量的细胞计数方法，它通过将样品中的细胞单个分离并进行检测，可以快速、准确地得到大量数据。
其步骤如下：1.制备单细胞悬液：将需要计数的样品进行消化、分离或剪切等处理，使其成为单个细胞悬液。
2.标记荧光染料：通过荧光染料对单个细胞进行标记，在流式细胞仪中可以对其进行检测。
3.流式细胞仪检测：将标记好的单个细胞悬液注入流式细胞仪中，通过激光束照射和荧光检测器检测，得到每个样本中不同类型的单个细胞数量。
4.数据处理：通过软件对数据进行处理和分析，可以得到每种类型的单个细胞数量以及比例等信息。
四、自动化计数仪自动化计数仪是近年来发展起来的一种新型计数方法，它通过数字化技术和图像处理技术，能够自动识别和计数样品中的细胞。
其步骤如下：1.准备工作：将需要计数的样品制备成单细胞悬液，并将其放入自动化计数仪中。
2.图像采集：自动化计数仪通过高速摄像头拍摄样品中的细胞图像，并对其进行数字化处理。
3.图像分析：通过图像处理软件对数字化后的细胞图像进行分析和识别，得到每个视野中出现的细胞数量。
细胞计数方法——-－-—细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。
具体操作:１. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。
２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
3。
计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。
然后按公式计算:细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。
所以,细胞密度=m×1６×10个／ml)说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。
公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为:１。
0mm(长)×1.0mm(宽)×０。
１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。
)=========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝==细胞计数板得使用一、血球计数板-基本构造血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。
中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。
计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。
但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、计数区边长为１ｍｍ,则计数区得面积为1mm２,每个小方格得面积为1/400mm2。
《临床检验基础》课程中细胞计数的常用方法细胞计数是临床检验中常用的一种方法，用于测量体液或组织中的细胞数量。
细胞计数的结果可以反映出疾病的程度和进展情况，对于疾病的诊断和治疗具有重要的参考价值。
本文将介绍细胞计数的常用方法。
一、直接计数法直接计数法是最常用的一种细胞计数方法。
其原理是将待测液体或组织样本通过显微镜观察，手工计数细胞数量。
该方法操作简单、准确性高，但由于需要手工计数，所以工作量大，速度慢，不适用于大批量样本的计数。
二、电子计数法电子计数法是一种自动化的细胞计数方法，通过电子计数器对待测样本进行计数。
该方法具有快速、高效、准确的优点，适用于大批量样本的计数。
但是，该方法需要设备的支持，成本较高，同时对于不同类型的细胞计数，需要进行不同的设备调整，操作难度较大。
三、显微镜计数法显微镜计数法是一种通过显微镜观察待测样本进行计数的方法。
该方法适用于细胞数量较少的样本，可以进行手工计数或电子计数。
该方法操作简单，准确性较高，但需要使用显微镜进行观察，对于不同类型的细胞计数，需要进行不同的显微镜调整，操作难度较大。
四、流式细胞术流式细胞术是一种通过细胞表面标记物的特异性识别和分离，实现对细胞种类和数量的分析的方法。
该方法具有高准确性、高速度、高通量的优点，适用于大批量样本的计数和分析。
但是，该方法需要设备的支持，成本较高，同时对于不同类型的细胞计数，需要进行不同的设备调整，操作难度较大。
综上所述，细胞计数是临床检验中常用的一种方法，其常用的方法包括直接计数法、电子计数法、显微镜计数法和流式细胞术。
不同的方法适用于不同的样本类型和计数需求，临床医生需要根据实际情况选择合适的方法进行细胞计数，以提高诊断和治疗的准确性和效率。
细胞计数方法有哪些细胞计数对于细胞生物学的研究至关重要。
它可以用于许多不同的应用，例如研究细胞生长、分裂、死亡以及受到不同条件或处理的影响。
在本篇回答中，我将介绍一些常见的细胞计数方法，以及它们的优缺点和适用范围。
1. 显微镜计数法：显微镜计数法是最基本、最直观的细胞计数方法之一。
通过显微镜观察细胞的数量和形态，然后进行统计分析。
这种方法适用于讲究精确度的研究，特别是对于较大和集群生长的细胞，如哺乳动物细胞。
优点是分析过程直观，能够同时观察细胞的形态和数量。
缺点是操作耗时耗力，且可能存在人为误差。
2. 直接计数法：直接计数法是一种快速、简单的方法，适用于细胞密度较低的情况。
它基于将细胞悬浮液均匀分布在已知面积的计数板上，并计算每个小方格内的细胞数量，然后乘以补偿系数得到总细胞数。
这种方法适用于细胞密度在10^2至10^4个/ml之间的情况。
优点是操作简单，且不需要特殊设备，缺点是结果的准确性受到细胞的聚集性和悬浮液的均匀性的影响。
3. 懒汉计数法：懒汉计数法基于细胞在给定时间间隔内通过视图的个数来估计细胞的数量。
对于细胞移动速度较快的情况，这种方法特别适用。
它通过视图的帧数和平均细胞速度来计算细胞的数量。
这种方法适用于类似高速运动的单细胞生物或进化学研究。
优点是操作简单，结果快速。
缺点是对细胞移动速度的变化比较敏感，需要校正因素以提高准确性。
4. 溶解度计数法：溶解度计数法是一种通过测定细胞的光学密度来估计细胞数量的方法。
它基于细胞与显微镜下的颜色反射率之间的关系，通过读取吸光度来计算细胞数量。
这种方法适用于大批量细胞的快速计数，尤其是在医学和工业应用中。
优点是操作简单，结果快速，缺点是结果的准确性受到光条件和细胞的固定性的影响。
5. 流式细胞计数法：流式细胞计数法是一种利用流式细胞仪进行细胞计数的方法。
它基于细胞通过光束射流系统时，通过检测细胞在流式细胞仪的指定光学路径中所散射和/或发射的光信号来计数细胞。
细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。
2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。
然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m ×16即每个格的平均值。
所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。
计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
细胞计数方法--—--—细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。
具体操作:1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板．2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3、计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。
然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×１0个/ml（注：当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数，取平均值m,ｍ×16即每个格得平均值。
所以,细胞密度=m×１6×10个/mｌ)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格得细胞数。
公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为：1、0mm(长）×1、0mｍ(宽）×0、1mｍ(高)=0、1mm 而1ml＝1000ｕl=1０００ｍm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。
)========＝==＝＝=====＝===＝=＝＝＝=====＝======＝====＝===细胞计数板得使用一、血球计数板-基本构造血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。
中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区.计数区得刻度有两种：一种就是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开）,而每个大方格又分成2５个小方格;另一种就是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。
但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
细胞计数方法细胞计数是生物学和医学领域中非常重要的实验技术之一。
它用于确定细胞数量，评估细胞增殖率，研究细胞生长和细胞死亡等。
在科研实验室、临床诊断和药物研发中，细胞计数方法被广泛应用。
本文将介绍几种常用的细胞计数方法，包括显微镜计数法、血细胞计数仪法和流式细胞仪法。
显微镜计数法是最传统的细胞计数方法之一。
它通过在显微镜下直接观察和计数细胞来确定细胞数量。
首先，将待计数的细胞悬浮液均匀涂布在载玻片上，然后在显微镜下使用细胞计数室或九宫格计数。
通过计算细胞在特定面积内的数量，再乘以稀释倍数，即可得到总细胞数。
这种方法简单直观，但需要较长的操作时间，并且受到操作者主观因素的影响。
血细胞计数仪法是一种自动化的细胞计数方法，主要用于血液细胞计数。
它利用血细胞计数仪对待测样品进行自动计数和分类，可以快速准确地得到各类血细胞的数量。
这种方法操作简便，结果准确可靠，适用于大批量的细胞计数工作。
但是，血细胞计数仪的价格较高，使用和维护成本也较高，因此在一般实验室中并不常见。
流式细胞仪法是一种高通量、高灵敏度的细胞计数和分析方法。
它利用流式细胞仪对细胞进行快速连续检测和计数，可以同时获取细胞数量、大小、形状、表面标记物等多种信息。
流式细胞仪广泛应用于细胞免疫学、细胞生物学、肿瘤学等领域，可以帮助研究人员深入了解细胞的特性和功能。
但是，流式细胞仪的价格昂贵，操作复杂，需要专业的技术人员进行操作和数据分析。
总的来说，不同的细胞计数方法各有优缺点，适用于不同的实验需求和场景。
在选择细胞计数方法时，需要根据实验目的、样品特性、实验条件等因素综合考虑，选取最适合的方法进行细胞计数。
随着科技的不断进步和发展，相信会有更多更高效的细胞计数方法出现，为科研工作者和临床医生提供更多选择。
图为：25中格Ｘ16小格的细胞计数板血球计数板血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.血细胞计数板的使用改良牛鲍氏血细胞计数板的使用血细胞计数板的规格较多，在我国多采用改良牛鲍氏血细胞计数板，用于目视法细胞计数。
其构造如图所示（图1、2 ）。
该器材是由长方形无色厚玻璃制成，正面观察，可见中央刻有两个计数室平台，由“H”型沟槽相隔。
与计数板长轴垂直的沟槽外侧各有一条与之平行的凸出的支持柱，用以承载血盖片，支持柱的外侧仍为与长轴垂直的沟槽。
沿计数板长边侧面观察，可见支持柱略高于计数室平台（落差0.1mm），如将血盖片搭载于支柱上，盖片与计数室平台之间即形成0.1mm的缝隙。
此时将液体充入盖片与计数室之间，则液层的厚度（或深度）也为0.1mm。
在显微镜下，可见每个计数室平台上均刻有清晰的网格划线。
由网格线围成的正方形区域为细胞计数区，最大正方形边长3mm，分为9个大方格，每个大方格边长1mm，面积1mm2，若覆以盖片并充满液体，液体的体积为0.1mm3（0.1μl），四角的四个大方格分别以单划线分为16个方格，用作计数白细胞。
位于中央的大方格，以双线分成25个中方格，每个中方格又以单线划分为16个小方格，则中央大方格共分为400个小方格。
用作计数红细胞及血小板。
划分中央大方格的划线向其四周延伸，则除四角大方格之外的四个大方格均为条形格所分隔（图3）。
各计数区的计数对象、范围和换算方法见表（表2-1）。
覆盖计数室的盖玻片为专用的血盖片，长25 mm，宽20mm，厚0.6 mm，透明、均匀一致。
使用时，用水稍微沾湿计数室两侧的支持柱，以推压法将盖片平放在计数室表面，尽量减少盖片与支柱之间的空气。
用吸管吸取制备后的细胞悬液，沿盖片与计数室之间的缝隙充入计数室。
在光线稍暗的视野中高倍镜下计数中央大方格的四角及中间5个中方格的红细胞数。
由于划线部分也占有计数室的总面积，因此对压线细胞也应列入计数，为避免重复计数或漏计，一般遵循数上不数下，数左不数右的原则（（图4））。
改良Neubauer血细胞计数板的构造1．俯视图 2.长轴剖面图3计数室划线4细胞计数原则表2-1 血细胞计数室各计数区的计数对象、范围和单位换算【质量控制】血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。
其中由于操作人员采血不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差，由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。
仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。
技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。
因此，搞好红细胞计数的质量控制一般需采用以下措施。
1．避免技术误差，纠正仪器误差（1）所用器材均应清洁干燥，计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正。
①计数板的鉴定：要求计数室的台面光滑、透明，划线清晰，计数室划线面积准确。
必要时采用严格校正的目镜测微计测量计数室的边长与底面积，用微米千分尺测量计数室的深度。
美国国家标准局（NBS）规定每个大方格边长的误差应小于1%，即1±0.01mm，深度误差应小于2%，即0.1±0.002mm。
若超过上述标准，应弃之不用。
②血盖片应具有一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致，可使用卡尺多点测量（至少在9个点），不均匀度在0.002mm之内。
必要时采用平面平行仪进行测量与评价，要求呈现密集平行的直线干涉条纹。
最简单的评价方法是将洁净的盖片紧贴于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的时间不脱落，落下时呈弧线形旋转，表示盖片平整、厚薄均匀。
同时，合格的盖片放置在计数室表面后，与支持柱紧密接触的部位可见到彩虹。
精选出的盖片与其他盖片紧密重合后，在掠射光线下观察，如见到完整平行的彩虹条纹表示另一枚盖片质量也符合要求。
③目前临床实验室多采用一次性微量采血管采集毛细血管血，除注意定点购买使用信誉较好厂家的产品外，还应对每一批量的采血管进行抽样检查，可通过水银称重法或有色溶液比色法进行校正，误差不应超过±1%。
（2）红细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒。
（3）严格操作，从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是血样稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。
必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。
（4）报告法定计量单位。
2．缩小计数域误差或分布误差由于血细胞在充入计数室后呈随机分布或称Poisson分布（），而我们所能计数的细胞分布范围是有限的，由此造成的计数误差称为计数域误差或分布误差。
缩小这种误差的有效方法就是尽量扩大细胞计数范围和计数数目，一般先进行误差估计，然后决定所需计数的数目和计数范围，只要能将误差控制在允许范围内即可。
Berkson指出，当使用同一支吸管、同一面计数室，计数0.2mm2面积的细胞数，有望将CV控制在可接受的7%以内。
对于红细胞计数而言，由于红细胞数量较多，在计数室中显得比较“拥挤”，根据Poisson公式（）推断，。
欲将误差控制在变异百分数5%以内，至少需要在计数室中计数400个红细胞，因此要求计数五个中方格的红细胞。
事实上Berkson还通过实验证明，红细胞的计数域误差为s=0.92 ，较理论误差（Poisson分布误差）要小。
3．排除异常标本的干扰白细胞数量在正常范围时，相对于红细胞数量来讲，其影响可忽略，但如白细胞过高（>100×109/L），则应对计数结果进行校正。
方法是：①实际RBC=计得RBC-WBC。
如当红细胞换算后为3.5×1012/L、白细胞换算后为100×109/L时，病人实际红细胞数应为3.4×1012/L。
②在高倍镜下计数时，避开有核细胞。
有核细胞体积比正常红细胞大，中央无凹陷，无草黄色折光，可隐约见到细胞核。
此外，当病人急性严重贫血时网织红细胞可提前大量释放，也给红细胞计数带来一定的干扰，而且影响网织红细胞绝对值计算结果。
其校正方法有待探讨。
4．积极搞好室内及室间质量评价（IQC和EQA）一般用两差比值法或双样试验标准差评价法进行质量评价或工作人员自我考核；变异百分数法通常用于评价白细胞计数的结果。
（1）两差比值法用于考核实验结果的精密度。
采用同一稀释血样间隔2h后进行重复计数，求出两次镜下计数值之差（取绝对值）与两次计数值标准差的比值，即两差比值（r）。
评分：score==100-20.1r，20.1为失分系数（40/1.99）。
评级：90-10 0 为优秀，80-89为良好，70-79为中等，60-69为及格，<60时为不及格。
X1和X2分别为前后两次镜下计数值，而非换算后的细胞浓度，r<2为合格，r≥2说明两次计数值的差异具有显著意义。
也可以用这种方法评价治疗效果是否显著，方法是采用该公式计算同一患者治疗前和治疗一段时间后两次镜下计数值的差异。
（2）双样试验标准差评价法WHO要求同一实验室每天至少完成1 0例标本的双样测定（duplicate test），求出双样测定的标准差[S(du p)]，以评价实验结果的精密度，双样测定结果之差（d）≤2S(dup)为合格。
n为测定例数，∑d2为双样之差的平方和。
