细胞计数方法------细胞计数板法.

细胞计数方法——-－-—细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。

具体操作:１. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3。

计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。

然后按公式计算:细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。

所以,细胞密度=m×1６×10个／ml)说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。

公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为:１。

0mm(长)×1.0mm(宽)×０。

１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)=========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝==细胞计数板得使用一、血球计数板-基本构造血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。

计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。

但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、计数区边长为１ｍｍ,则计数区得面积为1mm２,每个小方格得面积为1/400mm2。

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个格的平均值。

所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

血球计数板‎-基本构造血球计数板‎是一块特制‎的厚型载玻‎片，载玻片上有‎四个槽构成‎三个平台。

中间的平台‎较宽，其中间又被‎一短横槽分‎隔成两半，每个半边上‎面各刻有一‎小方格网，每个方格网‎共分九个大‎格，中央的一大‎格作为计数‎用，称为计数区‎。

计数区的刻‎度有两种：一种是计数‎区分为16‎个大方格（大方格用三‎线隔开），而每个大方‎格又分成2‎5个小方格‎；另一种是一‎个计数区分‎成25个大‎方格（大方格之间‎用双线分开‎），而每个大方‎格又分成1‎6个小方格‎。

但是不管计‎数区是哪一‎种构造，它们都有一个‎共同特点，即计数区都‎由400个‎小方格组成‎。

计数区边长‎为1mm，则计数区的‎面积为1m‎m2，每个小方格‎的面积为1‎/400mm‎2。

盖上盖玻片‎后，计数区的高‎度为0.1mm，所以每个计‎数区的体积‎为0.1mm3，每个小方格‎的体积为1‎/4000m‎m3。

使用细胞计‎数板计数时‎，先要测定每‎个小方格中‎微生物的数‎量，再换算成每‎毫升菌液（或每克样品‎）中微生物细‎胞的数量。

细胞计数板‎-使用方法1．视待测菌悬‎液浓度，加无菌水适‎当稀释（斜面一般稀‎释100倍‎？），以每小格的‎菌数可数为‎度。

2．取洁净的细‎胞计数板一‎块，在计数区上‎盖上一块盖‎玻片。

3．将菌悬液摇‎匀，用滴管吸取‎少许，从计数板中‎间平台两侧‎的沟槽内沿‎盖玻片的下‎边缘滴入一‎小滴（不宜过多），让菌悬液利‎用液体的表‎面张力充满‎计数区，勿使气泡产‎生，并用吸水纸‎吸去沟槽中‎流出的多余‎菌悬液。

也可以将菌‎悬液直接滴‎加在计数区‎上（不要使计数‎区两边平台‎沾上菌悬液‎，以免加盖盖‎玻片后，造成计数区深度‎的升高），然后加盖盖‎玻片（勿使产生气‎泡）。

4．静置片刻，使细胞沉降‎到计数板上‎，不再随液体‎漂移。

将细胞计数‎板放置于显‎微镜的载物‎台上夹稳，先在低倍镜‎下找到计数‎区后，再转换高倍‎镜观察并计‎数。

细胞计数方法------细胞计数板法汇总细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:4细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml(注:当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m 4×16即每个格的平均值。

所以，细胞密度=m×16×10个/ml) 说明:公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

4公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为:331.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm 而 1ml=1000ul=1000mm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开)，而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开)，而每个大方格又分成16个小方格。

细胞计数方法--—--—细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。

具体操作:1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板．2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3、计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×１0个/ml（注：当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数，取平均值m,ｍ×16即每个格得平均值。

所以,细胞密度=m×１6×10个/mｌ)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格得细胞数。

公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为：1、0mm(长）×1、0mｍ(宽）×0、1mｍ(高)=0、1mm 而1ml＝1000ｕl=1０００ｍm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)========＝==＝＝=====＝===＝=＝＝＝=====＝======＝====＝===细胞计数板得使用一、血球计数板-基本构造血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区.计数区得刻度有两种：一种就是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开）,而每个大方格又分成2５个小方格;另一种就是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数板使用方法细胞计数板是一种常用的实验工具，用于在生物学实验中对细胞数量进行计数。

它可以帮助科研人员快速、准确地统计细胞数量，是细胞学研究中不可或缺的工具之一。

下面我们将介绍细胞计数板的使用方法，希望能够帮助大家更好地使用这一实验工具。

首先，准备工作。

在使用细胞计数板之前，需要将细胞悬液充分均匀搅拌，并用移液器吸取适量的细胞悬液。

然后，将细胞悬液滴在计数板的计数室中。

注意不要使得细胞悬液溢出计数室，以免影响计数的准确性。

接下来，将盖玻片轻轻放在计数室上，使得细胞悬液均匀分布在计数室中。

其次，使用显微镜进行观察。

将装有细胞悬液的计数板放在显微镜的载物台上，调节合适的放大倍数和焦距，通过目镜观察计数室中的细胞。

在观察时，可以适当调节光源的亮度和对比度，以便更清晰地观察细胞的形态和数量。

然后，进行计数。

在观察到的视野范围内，选择一个规定的计数格子，例如九宫格中的四个角格子和中央格子，对每个格子中的细胞数量进行计数。

在计数时，需要注意排除边缘效应和重叠效应，确保每个细胞只被计数一次。

根据所选择的计数格子数量和细胞密度，可以计算出单位体积内的细胞数量。

最后，计算细胞浓度。

根据所选择的计数格子数量和所使用的稀释倍数，可以计算出单位体积内的细胞数量。

细胞浓度的计算公式为，细胞数/计数格子数×稀释倍数。

通过这一计算，可以得到细胞悬液的浓度，为后续实验提供参考数据。

细胞计数板的使用方法并不复杂，但需要注意细节和操作规范，以确保计数结果的准确性和可靠性。

希望通过本文的介绍，能够帮助大家更好地掌握细胞计数板的使用方法，为科研工作提供有力的支持。

细胞计数板-实验原理当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

细胞计数板-使用方法1．视待测测细胞悬液浓度，加PBS适当稀释，以每小格的细胞数可数为度。

2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3．将细胞悬液摇匀，吸取少量培养液到1.5ml离心管中进行细胞计数。

各吸取10ul台盼蓝2小滴（A、B）于薄膜上，吸取10ul细胞与A混匀，再从A中吸取10ul 与B混匀，然后从B中吸取10ul于计数板上计数。

从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴，让细胞悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余细胞悬液。

4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。

将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。

5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。

如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。

为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。

如细胞位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。

见下图：即本格中计数细胞为3个。

6．每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）细胞悬液所含细胞数量。

7．测数完毕，取下盖玻片，用水将细胞计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。

洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

细胞计数板-计数公式细胞计数板计算公式：细胞数/ml=四大格细胞总数/4×10000×稀释倍数(4)细胞计数板-注意事项：（1）务必使分散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。

细胞计数板计数方法
嘿，细胞计数板计数那可是超厉害的事儿呢！先说说步骤哈，把细胞悬液小心地滴到计数板上，就像给宝贝找个小窝。

然后在显微镜下观察，数清楚格子里的细胞个数。

这就跟在沙滩上找漂亮贝壳似的，得仔细看。

注意事项可不少呢！滴液的时候不能太多也不能太少，不然咋能数得准呢？那这过程安全不？放心啦！只要操作得当，就没啥危险，不像走钢丝那么让人提心吊胆。

稳定性也不错，只要按规矩来，结果一般都挺靠谱。

这计数方法能用在哪呢？在生物学研究里，那可是大功臣。

研究细胞生长、药物作用啥的，都离不开它。

就像厨师离不开锅铲，画家离不开画笔。

优势是啥呢？简单方便呀，不需要高大上的仪器，就能搞定细胞计数。

就像有个小魔法棒，轻轻一挥，细胞数量就知道啦。

给你讲个实际案例呗！有个实验室用细胞计数板计数，准确地知道了细胞的数量，为实验成功打下了坚实基础。

哇塞，这效果简直太棒啦！
细胞计数板计数方法超实用，能帮咱解决好多问题，大家一定要试试呀！。

细胞计数板的使⽤⽅法⾎球计数板-基本构造⾎球计数板是⼀块特制的厚型载玻⽚，载玻⽚上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间⼜被⼀短横槽分隔成两半，每个半边上⾯各刻有⼀⼩⽅格⽹，每个⽅格⽹共分九个⼤格，中央的⼀⼤格作为计数⽤，称为计数区。

计数区的刻度有两种：⼀种是计数区分为16个⼤⽅格（⼤⽅格⽤三线隔开），⽽每个⼤⽅格⼜分成25个⼩⽅格；另⼀种是⼀个计数区分成25个⼤⽅格（⼤⽅格之间⽤双线分开），⽽每个⼤⽅格⼜分成16个⼩⽅格。

但是不管计数区是哪⼀种构造，它们都有⼀个共同特点，即计数区都由400个⼩⽅格组成。

计数区边长为1mm，则计数区的⾯积为1mm2，每个⼩⽅格的⾯积为1/400mm2。

盖上盖玻⽚后，计数区的⾼度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个⼩⽅格的体积为1/4000mm3。

使⽤细胞计数板计数时，先要测定每个⼩⽅格中微⽣物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微⽣物细胞的数量。

细胞计数板-使⽤⽅法1．视待测菌悬液浓度，加⽆菌⽔适当稀释（斜⾯⼀般稀释100倍），以每⼩格的菌数可数为度。

2．取洁净的细胞计数板⼀块，在计数区上盖上⼀块盖玻⽚。

3．将菌悬液摇匀，⽤滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻⽚的下边缘滴⼊⼀⼩滴（不宜过多），让菌悬液利⽤液体的表⾯张⼒充满计数区，勿使⽓泡产⽣，并⽤吸⽔纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻⽚后，造成计数区深度的升⾼），然后加盖盖玻⽚（勿使产⽣⽓泡）。

4．静置⽚刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。

将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换⾼倍镜观察并计数。

由于⽣活细胞的折光率和⽔的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5．计数时若计数区是由16个⼤⽅格组成，按对⾓线⽅位，数左上、左下、右上、右下的4个⼤⽅格（即100⼩格）的菌数。

细胞计数方法--细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m ×16即每个格的平均值。

所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数板使用方法
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：
1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104
说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而 1ml=1000mm3
（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）
细胞计数板的使用
血球计数板-基本构造
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数的实验报告细胞计数的实验报告细胞计数是生物学研究中常见的实验操作，通过对细胞数量的准确测定，可以为后续的实验设计和数据分析提供重要依据。

本次实验旨在探究不同细胞计数方法的准确性和可行性，并比较它们在不同实验条件下的适用性。

一、实验目的本次实验的主要目的是比较常用的细胞计数方法，包括显微镜计数法和细胞计数仪法在细胞计数中的应用优势和局限性，探究它们在不同实验条件下的准确性和可行性。

二、实验材料与方法1. 实验材料：- 显微镜- 细胞计数板- 细胞培养物- 小型离心机- 细胞计数仪2. 实验方法：- 显微镜计数法：a. 取适量细胞培养物，将其均匀悬浮于一定体积的培养基中。

b. 取一块细胞计数板，将悬浮液滴于计数板的特定区域。

c. 使用显微镜观察计数板上的细胞数量，计数细胞数量并记录。

- 细胞计数仪法：a. 取适量细胞培养物，将其均匀悬浮于一定体积的培养基中。

b. 使用小型离心机离心细胞悬浮液，以沉淀细胞。

c. 倒掉上清液，用适量缓冲液洗涤细胞沉淀。

d. 将细胞沉淀重新悬浮于缓冲液中。

e. 使用细胞计数仪准确测定细胞数量。

三、实验结果与讨论在本次实验中，我们选取了两种常用的细胞计数方法，即显微镜计数法和细胞计数仪法。

通过对比它们在实验中的应用情况，我们可以得出以下结论：1. 显微镜计数法的优势：显微镜计数法是一种传统且常用的细胞计数方法，其优势在于操作简单、成本低廉。

只需要使用显微镜即可对细胞数量进行直接观察和计数。

此外，显微镜计数法适用于各种类型的细胞，无需特殊处理。

2. 显微镜计数法的局限性：显微镜计数法的局限性主要体现在对细胞数量的准确性和可重复性方面。

由于人眼的视觉限制和主观性，显微镜计数法在高密度细胞计数时容易出现误差，并且对于小型细胞的计数也存在困难。

此外，显微镜计数法需要操作者具备一定的经验和技巧，否则可能导致计数结果的不准确。

3. 细胞计数仪法的优势：细胞计数仪法是一种自动化的细胞计数方法，其优势在于高度准确和可重复性。

细胞计数板使用方法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目;具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板;2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中;3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的;然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104说明：公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数;公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm长×1.0mm宽×0.1mm高=0.1mm3 而1ml=1000mm3注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液细胞计数板的使用血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台;中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区;计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格大方格用三线隔开,而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格大方格之间用双线分开,而每个大方格又分成16个小方格;但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成;计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2;盖上盖玻片后,计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3;使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液或每克样品中微生物细胞的数量;细胞计数板-使用方法1．视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释斜面一般稀释100倍,以每小格的菌数可数为度;2．取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片;3．将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴不宜过多,让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液;也可以将菌悬液直接滴加在计数区上不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高,然后加盖盖玻片勿使产生气泡;4．静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移;将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数;由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度;5．计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格即100小格的菌数;如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央1个大方格的菌数即80个小格;为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定;如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差;即位于本格上线和左线上的细胞计入本格,本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中;见下图：即本格中计数细胞为3个;6．对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算;每个样品重复计数2-3次每次数值不应相差过大,否则应重新操作,按公式计算出每mLg菌悬液所含细胞数量;7．测数完毕,取下盖玻片,用水将细胞计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度;洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存;细胞计数板-计数公式1、16格×25格的细胞计数板计算公式：细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数1、25格×16格的细胞计数板计算公式：细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面应如何尽量减少误差,力求准确血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差;其中由于操作人员采血不顺利,器材处理、使用不当,稀释不准确,细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器计数板、盖片、吸管等不够准确与精密带来的误差称仪器误差,由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差filed error;仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差;技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正,但细胞分布误差却难于彻底消除;因此,搞好红细胞计数的质量控制一般需采用以下措施;1．避免技术误差,纠正仪器误差1所用器材均应清洁干燥,计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正;①计数板的鉴定：要求计数室的台面光滑、透明,划线清晰,计数室划线面积准确;必要时采用严格校正的目镜测微计测量计数室的边长与底面积,用微米千分尺测量计数室的深度;美国国家标准局NBS规定每个大方格边长的误差应小于1%,即1±0.01mm,深度误差应小于2%,即0.1±0.002mm;若超过上述标准,应弃之不用;②血盖片应具有一定的重量,平整、光滑、无裂痕,厚薄均匀一致,可使用卡尺多点测量至少在9个点,不均匀度在0.002mm之内;必要时采用平面平行仪进行测量与评价,要求呈现密集平行的直线干涉条纹;最简单的评价方法是将洁净的盖片紧贴于干燥的平面玻璃上,若能吸附一定的时间不脱落,落下时呈弧线形旋转,表示盖片平整、厚薄均匀;同时,合格的盖片放置在计数室表面后,与支持柱紧密接触的部位可见到彩虹;精选出的盖片与其他盖片紧密重合后,在掠射光线下观察,如见到完整平行的彩虹条纹表示另一枚盖片质量也符合要求;③目前临床实验室多采用一次性微量采血管采集毛细血管血,除注意定点购买使用信誉较好厂家的产品外,还应对每一批量的采血管进行抽样检查,可通过水银称重法或有色溶液比色法进行校正,误差不应超过±1%;2红细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒;3严格操作,从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规范,尤其应注意的是血样稀释及充池时既要作到充分混匀,又要防止剧烈震荡为破坏红细胞;必须一次性充满计数室,防止产生气泡,充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜;4报告法定计量单位;2．缩小计数域误差或分布误差由于血细胞在充入计数室后呈随机分布或称Poisson分布,而我们所能计数的细胞分布范围是有限的,由此造成的计数误差称为计数域误差或分布误差;缩小这种误差的有效方法就是尽量扩大细胞计数范围和计数数目,一般先进行误差估计,然后决定所需计数的数目和计数范围,只要能将误差控制在允许范围内即可;Berkson指出,当使用同一支吸管、同一面计数室,计数0.2mm2面积的细胞数,有望将CV控制在可接受的7%以内;对于红细胞计数而言,由于红细胞数量较多,在计数室中显得比较“拥挤”,根据Poisson公式推断, ;欲将误差控制在变异百分数5%以内,至少需要在计数室中计数400个红细胞,因此要求计数五个中方格的红细胞;事实上Berkson还通过实验证明,红细胞的计数域误差为s=0.92 ,较理论误差Poisson分布误差要小;3．排除异常标本的干扰白细胞数量在正常范围时,相对于红细胞数量来讲,其影响可忽略,但如白细胞过高>100×109/L,则应对计数结果进行校正;方法是：①实际RBC=计得RBC-WBC;如当红细胞换算后为3.5×1012/L、白细胞换算后为100×109/L时,病人实际红细胞数应为3.4×1012/L;②在高倍镜下计数时,避开有核细胞;有核细胞体积比正常红细胞大,中央无凹陷,无草黄色折光,可隐约见到细胞核;此外,当病人急性严重贫血时网织红细胞可提前大量释放,也给红细胞计数带来一定的干扰,而且影响网织红细胞绝对值计算结果;其校正方法有待探讨;Using a Counting ChamberFor microbiology, cell culture, and many applications that require use of suspensions of cells it is necessary to determine cell concentration. One can often determine cell density of a suspension spectrophotometrically, however that form of determination does not allow an assessment of cell viability, nor can one distinguish cell types.A device used for determining the number of cells per unit volume of a suspension is called a counting chamber. The most widely used type of chamber is called a hemocytometer, since it was originally designed for performing blood cell counts.To prepare the counting chamber the mirror-like polished surface is carefully cleaned with lens paper. The coverslip is also cleaned. Coverslips for counting chambers are specially made and are thicker than those for conventional microscopy, since they must be heavy enough to overcome the surface tension of a drop of liquid. The coverslip is placed over the counting surface prior to putting on the cell suspension. The suspension is introduced into one of theV-shaped wells with a pasteur or other type of pipet. The area under the coverslip fills by capillary action. Enough liquid should be introduced so that the mirrored surface is just covered. The charged counting chamber is then placed on the microscope stage and the counting grid is brought into focus at low power.It is essential to be extremely careful with higher power objectives, since the counting chamber is much thicker than a conventional slide. The chamber or an objective lens may be damaged if the user is not not careful. One entire grid on standard hemacytometers with Neubauer rulings can be seen at 40x 4x objective. The main divisions separate the grid into 9 large squares like a tic-tac-toe grid. Each square has a surface area of one square mm, and the depth of thechamber is 0.1 mm. Thus the entire counting grid lies under a volume of 0.9 mm-cubedSuspensions should be dilute enough so that the cells or other particles do not overlap each other on the grid, and should be uniformly distributed. To perform the count, determine the magnification needed to recognize the desired cell type. Now systematically count the cells in selected squares so that the total count is 100 cells or so number of cells needed for a statistically significant count. For large cells this may mean counting the four large corner squares and the middle one. For a dense suspension of small cells you may wish to count the cells in the four 1/25 sq. mm corners plus the middle square in the central square. Always decide on a specific counting patter to avoid bias. For cells that overlap a ruling, count a cell as "in" if it overlaps the top or right ruling, and "out" if it overlaps the bottom or left ruling.Here is a way to determine a particle count using a Neubauer hemocytometer. Suppose that you conduct a count as described above, and count 187 particles in the five small squares described. Each square has an area of 1/25 mm-squared that is, 0.04 mm-squared and depth of 0.1 mm. The total volume in each square is 0.04x0.1 = 0.004 mm-cubed. You have five squares with combined volume of 5x0.004 = 0.02 mm-cubed. Thus you counted 187 particles in a volume of 0.02 mm-cubed, giving you 187/0.02 = 9350 particles per mm-cubed. There are 1000 cubic millimeters in one cubic centimeter same as a milliliter, so your particle count is 9,350,000 per ml.Cells are often large enough to require counting over a larger surface area. For example, you might count the total number of cells in the four large corner squares plus the middle combined. Each square has surface area of 1 mm-squared and a depth of 0.1 mm, giving it a volume of 0.1 mm-cubed. Suppose that you counted 125 cells total in the five squares. You then have 125 cells per 0.5 mm-cubed, which is 250 cells/mm-cubed. Again, multiply by 1000 to determine cell count per ml 250,000.Sometimes you will need to dilute a cell suspension to get the cell density low enough for counting. In that case you will need to multiply your final count by the dilution factor. For example, suppose that for counting you had to dilute a suspension of Chlamydomonas 10 fold. Suppose you obtained a final count of 250,000 cells/ml as described above. Then the count in the original undiluted suspension is 10 x 250,000 which is 2,500,000 cells/ml.。

血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片， 载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的 平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网， 每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻 度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方 格 又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线 分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它 们 都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

计数区边长为1mm 则计数区的面积为1mA ，每个小方格的面积为1/400口吊。

盖 上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm 所以每个计数区的体积为0.1mA,每个小 方格的体积为1/4000mm 。

使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量， 再换算成每毫升 菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量细胞计数板-使用方法1 •视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度2•取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片3•将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许， 从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入“！抽囂耳 Hil4k #* il Vi - h 屮■ If r 破板霁觸鈕一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区, 勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

4•静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。

将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。

由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5.计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。

细胞计数板使用方法
细胞计数板是一种常用的实验室工具，用于快速而准确地计算细胞数量。

以下是详细的使用方法：
1. 准备细胞计数板及相关材料：细胞计数板、细胞悬液、显微镜、移液器、吸头、生理盐水或细胞培养基。

2. 从细胞培养物中取出适量悬浮细胞，使用移液器将细胞悬液滴在细胞计数板的数格中。

3. 注意避免气泡，确保细胞悬液充分填满数格。

可以稍微轻轻摇晃细胞计数板，使细胞均匀分布在数格内。

4. 将细胞计数板放在显微镜下，使用10倍或20倍的物镜放大倍数。

调整焦距以清晰地观察数格中的细胞。

5. 在显微镜下，以一个正方形的数格为单元，计数该数格中的细胞数量。

遵循计数板上线计数规则，即计数板的四条边（上下左右）的数格细胞只计算该边上线格的细胞，而中央任意一格线格的细胞都要计数。

6. 将所计数的细胞数除以该数格的体积（通常为0.1或0.2 mm³），得到细胞的浓度。

7. 选取不同的数格进行计数，通常建议计数至少3个数格，以提高数据的准确性。

将多个数格的计数结果求平均，得到最终的细胞浓度。

8. 根据实验需要，可以根据细胞计数得到的浓度调整细胞悬液的体积，以达到所需的细胞数目。

9. 清洗细胞计数板，用生理盐水或细胞培养基反复冲洗数格，确保细胞悬液完全清除。

细胞计数板是一种简单而实用的细胞计数方法，但需要注意的是，在操作过程中要严格遵守无菌和安全操作规范，以确保实验结果的准确性和可靠性。

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m ×16即每个格的平均值。

所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。