杀菌剂联合毒力测定演示文稿

七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定方案，为番茄早疫病的防治提供科学依据，制定出切实可行的防治措施。

1 材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株番茄早疫病病原菌株采集于豫北地区番茄种植大棚中的病果，经组织分离、纯化获得病原菌［10］。

1.1.2试验药剂50%异菌脲（病可丹）可湿性粉剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%氯溴异氰尿酸（比秀）可湿性粉剂为以色列海法作用保护有限公司生产，80%丙森锌（好锌泰）水分散粒剂为陕西美邦农药有限公司生产，10%苯醚甲环唑（病可丹）水分散粒剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%醚菌酯（信赖）可湿性粉剂为陕西美邦农药有限公司生产，32.8%烷基腈氧基醌（凯银）水分散粒剂、35%腐霉利悬浮剂为宜宾川安高科农药有限责任公司生产。

1.2方法1.2.1杀菌剂单剂毒力测定将7种杀菌剂单剂与PDA培养基充分混匀，配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00mg/L系列浓度的平板。

采用菌丝生长速率法测定，用5mm打孔器在培养6d后的番茄早疫病菌平板上打孔，用镊子取菌丝面向下接种在含药PDA培养基上，每皿1个菌碟，28℃倒置培养，以去离子水作为对照组，每个处理设3次重复，于接种后第3天检查菌丝生长情况并用十字交叉法测量菌落生长直径，通过菌丝生长抑制率值和各药剂浓度对数值间的线性回归性进行分析，求出各菌株EC50并计算相对抑菌率。

抑菌率计算方法为每个菌落使用十字交叉法测量2次，取其平均数作为菌落的大小。

计算7种杀菌剂对菌丝生长的抑制百分率，公式如下：菌落增长直径=菌落测量直径-菌盘直径抑菌率=（对照菌落增长直径-含药培养基上菌落增长直径）/对照增长菌落直径x100%[11]以浓度对数为横坐标（x）,相对抑制率几率值为纵坐标（丫），求出各药剂对供试菌株的毒力回归曲线方程y=a+bx、相关系数r与有效抑制浓度（EC50）。

根据EC50分析比较不同杀菌剂对供试病菌菌丝生长的影响[12]。

中国园艺文摘 2018年第3期5种杀菌剂对桃炭疽病菌的毒力测定胡晓颖，赵 杰（上海市浦东新区农业技术推广中心，上海 201201）摘 要：以桃炭疽病菌为试验菌，采用生长速率法，测定5种杀菌剂对病菌的毒力，结果表明：咪鲜胺锰盐、氟啶胺、多菌灵、苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯5种杀菌剂都具有较高的毒力。

咪鲜胺锰盐与氟啶胺的联合毒力测定结果表明：咪鲜胺锰盐和氟啶胺按3∶1和6∶1复配表现为增效作用，咪鲜胺锰盐和氟啶胺按1∶6、1∶3和1∶1复配表现为相加作用。

关键词：杀菌剂；桃炭疽病菌；毒力测定水蜜桃是我国的主要果品之一，也是上海市浦东新区的主要果树，常年种植面积0.2…万余hm2。

桃炭疽病是水蜜桃的主要病害，能侵染桃树枝梢、叶片和果实[1]，在上海市浦东新区以秋季叶片受害最重，造成叶片穿孔或枯焦，严重时导致大量叶片枯死和早落，影响花芽和结果枝充实，从而影响翌年结果产量。

科技工作者在桃树炭疽病菌生物学特性和防治方面开展大量工作[2-5]，但不同地区和寄主存在差异。

本文以当地桃炭疽病菌为试验材料，通过开展杀菌剂的毒力测定，筛选出高效低毒药剂，为防治该病害提供技术参考。

1 材料与方法1.1 供试病菌从浦东新区盛果期桃树病叶上分离获得桃炭疽病菌[Colletotrichum gloeosporioides…(Penz.)…Sacc.]，病菌于PDA培养基上25℃培养5…d后用于毒力测定。

1.2 供试药剂50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂(江苏辉丰农化股份有限公司)、50…g/L氟啶胺悬浮剂(浙江石原金牛农药有限公司)、50%多菌灵悬浮剂（江苏龙灯化学有限公司）、30%吡唑醚菌酯悬浮剂(深圳诺普信农化股份有限公司)、10%苯醚甲环唑水分散粒剂(江苏丰登农药有限公司)。

1.3 试验方法1.3.1 毒力测定方法…采用生长速率法[6]：将以上第一作者简介：胡晓颖(1979-)，女，农艺师；从事作物栽培研究。

通讯作者：赵 杰，硕士，高级农艺师。

－　１２２　－上海农业科技 ２０１５－１５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力测定李 斌 赵 杰（上海市浦东新区农业技术推广中心 ２０１２０１）黄玉人　（上海市浦东新区农业服务中心 ２０１２０１）水稻恶苗病（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ　Ｓｈｅｌｄ）又名徒长病、白秆病，在水稻苗期至穗期均可发生，在全国稻区普遍发生。

由于浦东新区水稻栽培模式正处于人工插秧向机械插秧转变的过渡阶段，再加上主栽品种的抗病性不强，导致恶苗病急剧上升，并已成为浦东新区水稻上的主要病害，苗期自然发病率高达１５％～２０％，少数重病田块甚至毁耕重种。

为有效防治该病，笔者选用５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌进行了抑菌试验，以期为水稻生产提供高效低毒的杀菌剂。

１ 材料与方法１．１ 供试病原菌水稻恶苗病病菌从浦东新区惠南镇发病的水稻田中采集，经室内组织分离、纯化，病原菌于ＰＤＡ培养基上培养５ｄ后备用。

１．２ 供试药剂供试药剂为９８％恶霉灵原药（吉林省延边绿州化工有限责任公司，简称恶霉灵）、８０％代森锰锌可湿性粉剂（江苏省南通市德斯益农化工有限公司，简称代森锰锌）、６５％代森锌可湿性粉剂（上海生农生化制品有限公司，简称代森锌）、５０％多菌灵可湿性粉剂（上海升联化工有限公司，简称多菌灵）、１０％二硫氰基甲烷乳油（广东植物龙生物技术有限公司，简称二硫氰基甲烷）。

１．３ 试验方法采用生长速率法，测定５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力。

根据试验需要，先将各供试药剂配制成５～７个有效成分浓度梯度的药液；于灭菌好的４９　ｍＬ　ＰＤＡ培养基内，加入１　ｍＬ配好的药液，充分摇匀，分装到３个直径为９　ｃｍ的培养皿中，冷却凝固；将直径为１　ｃｍ的菌丝块放在含药培养基中央，每皿１块，于２５　℃培养箱内培养５　ｄ，测量菌落直径，计算抑制率，以各药剂有效成分在培养基中的浓度，为测试浓度计算回归方程和抑制中浓度ＥＣ５０。

２ 结果与分析试验结果表明，５种杀菌剂对水稻恶苗病菌菌丝生长的抑制作用差异较大，二硫氰基甲烷和多菌灵的抑制作用最高，ＥＣ５０分别为３．５１４８、６．８８１７　ｍｇ／Ｌ。

11种杀菌剂对白术根腐病病菌的室内毒力测定白术（Atractylodes macrocephala Koidz.）属菊科草本植物，被列为中医四大名贵药材之一，主要以根入药，具有健脾益气、燥湿利水之功效[1]。

近年来，贵州省白术种植面积不断扩大，由于连作，导致白术根腐病发生日趋严重，成为白术生产栽培中主要的病害之一。

白术根腐病主要病原菌为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）[2-4]，引起干腐。

然而，刘英慧等[3]、臧少先等[4]、段明华等[5]报道还包括半裸镰刀菌（F.semitectum）、茄病镰刀菌（F.solani）、燕麦镰刀菌（F.avenaceum）、木贼镰刀菌（F. equiseti）、串珠镰刀菌（F. moniliforme Sheldon）和立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）等病原，常引起根茎腐烂致死苗，重病田块死苗率高达80%以上，严重制约了贵州白术产业的发展。

为了筛选出防治白术根腐病的杀菌剂，本试验在室内选择了几种杀菌剂对F. osysporum进行了毒力测定，为田间防治提供依据。

1 材料方法1.1 供试病原菌白术根腐病标样采自贵州省开阳县，用组织分离法[6]获得病原菌。

在PDA培养基上进行培养，纯化后将试管保存于4 ℃下备用。

经鉴定为尖孢镰刀菌F. oxysporum。

1.2 供试药剂供试药剂共11种，药剂名称、生产厂家及试验浓度详见表1。

1.3 毒力测定利用生长速率法对菌丝生长进行室内毒力测定。

确定药剂试验浓度后并配制供试药剂母液，按照系列稀释的方法将供试药剂加入溶化并冷却至60 ℃左右的PDA培养基中，摇匀后制成不同浓度梯度（表1）的含药平板。

将待测定菌株接种于PDA平板上于28 ℃培养4 d，用打孔器在菌落边缘打块，菌饼直径为5 mm，将这些菌饼转接于有毒培养基中央，带菌丝一面朝下，以加等量无菌水的PDA培养基为空白对照。

每个药剂设6个处理，4次重复，28 ℃恒温培养5 d，待对照的菌落接近长满培养皿，用“十”字交叉法测量各处理菌落直径，取平均值，计算抑制率。

3种杀菌剂对葡萄霜霉病菌的毒力测定和田间药效试验收稿日期：2013-05-22基金项目：国家公益性行业（农业）科研专项（编号：201203035）。

1材料与方法1.1供试药剂88%代森锰锌原药、97.4%烯酰吗啉原药和98%嘧菌酯原药均由山东省农业科学院提供。

80%代森锰锌可湿性粉剂（大生-M45）为陶氏益农农业科技（中国）有限公司产品；50%烯酰吗啉可湿性粉剂（安克）为德国巴斯夫贸易股份有限公司产品；25%嘧菌酯悬浮剂（阿米西达）为瑞士先正达作物保护有限公司产品。

1.2室内抑菌活性测定1.2.1孢子悬浮液的配制取田间自然发病的新鲜葡萄病叶，用自来水冲洗净表面的孢子后，将病叶置于25 ℃条件下保湿24 h来培养新鲜的孢子；用干净的毛笔将新鲜孢子刷于无菌蒸馏水中，配成孢子悬浮液；在显微镜下调整孢子悬浮液浓度至5×105 个/mL用于试验测定。

1.2.2接种方法将88%代森锰锌原药依次稀释为800、400、100、50、25 mg/L；97.4%烯酰吗啉原药依次稀释为80、40、20、10、5 mg/L；98%嘧菌酯原药依次稀释为12.5、6.25、3125、1.563、0.781 mg/L。

试验采取叶盘法[3]，将葡萄新枝条上健康无病的4～5位叶片喷洒相应的药液后自然晾干，用打孔器打取直径1 cm的叶盘，叶背面朝上置于铺有无菌湿润滤纸的培养皿中，每皿放置15个叶盘；在叶盘中央滴20 μL孢子悬浮液，置于生物培养箱中培养，培养条件为温度25 ℃、湿度保持在80%左右、光照12 h/d。

对照叶片喷施等量清水，晾干，打取叶盘后滴加等量的菌液。

每处理重复4皿，5～7 d后调查发病情况。

1.2.3统计方法病情调查采用6级记载法[4]，根据病斑面积占叶盘面积的百分率划分病级：0级，无病斑；1级，病斑面积占整个叶面积的5%以下；3级，病斑面积占整个叶面积的6%～25%；5级，病斑面积占整个叶面积的26%～50%；7级，病斑面积占整个叶面积的51%～75%；9级，病斑面积占整个叶面积的75%以上。

第一单元：农药生物测定与田间药效试验1.杀菌剂生物测定（Bioassay of fungicides）利用病原菌或感菌生物体对杀菌剂的反应，来确定杀菌剂效力（毒力，药效）的农药生物测定。

2.杀菌剂的毒力测定方法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法（2）活体测定法（3）组织筛选测定法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法①孢子萌发测定法原理：在载玻片或平板上，通过滴加、喷施等方法将药液施于其上，然后滴加一定浓度的孢子悬浮液，经过一定时间培育后在显微镜下观察孢子的萌发率。

一般在低倍镜下，每处理随机检查200个孢子。

毒力越大的药剂，孢子萌发抑制率也越大。

%100⨯=检查孢子数萌发孢子数孢子萌发率%100-⨯=对照萌发率处理萌发率对照萌发率孢子萌发抑制率（1）基于离体平板培养的毒力测定方法②抑菌圈法此法先将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与培养基混匀，待混合物冷却后，在培养基表面利用各种方法（管碟法、滤纸片法、孔碟法）使药液和培养基接触，培养一定时间后，由于药剂的渗透扩散作用，施药部位周围的病原菌被杀死或生长受到抑制，从而产生抑菌圈。

毒力越大的药剂，抑菌圈也越大。

该方法所用药剂需有较好的水溶性。

（1）基于离体平板培养的毒力测定方法③生长速率测定法此法的原理是趁热在培养基中加入药液，混合均匀后冷却，然后在无菌条件下将病原菌接入装有培养基的培养皿中央，经过一定时间培育后观察病原菌菌丝的生长情况。

毒力越大的药剂，菌丝的生长越缓慢。

此法多用于不产孢子或产孢子量少而菌丝较密的真菌。

病原菌生长速率的表示方法有2种：①菌落达到一定大小所需的时间；②单位时间内菌落的直径大小。

该方法的优点是操作简便，适用范围广，重复性好。

但对病原菌要求严格，病菌易于培养，生长较快且边缘整齐，产孢子缓慢；供试药剂遇热不易分解。

（1）基于离体平板培养的毒力测定方法④对峙培养法将天然提取物及病原菌同时放在同一个有培养基的培养皿的两边，经过一定时间培育后观察菌丝生长的情况。