搅拌气升式生物反应器的研究进展
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生物反应器在模拟细胞微环境中的应用摘要:生物反应器在模拟细胞微环境中的应用非常广泛,是细胞体在外培养的关键技术环节。
本文介绍生物反应器的种类和各自特点,以及在体外模拟细胞微环境中的应用情况。
关键词:生物反应器;体外模拟;细胞微环境重组蛋白、疫苗、单抗等药物具有重要的药用价值,这些药物都是通过体外模拟细胞微环境进行细胞培养而生产的。
现在细胞培养技术无论是在培养规模、培养环境还是产物表达等方面都得到了大幅度的提高,其中生物反应器起了很大的作用。
1生物反应器如何设计才能对体外细胞微环境进行模拟进行生物反应器设计,为更好的模拟细胞微环境中,要综合考虑结构的严密性和可以承受高温的灭菌蒸汽,所以要采用对生物催化剂没有伤害以及耐腐蚀的材料,生物反应器的内壁要光滑,内部附件不宜太多,要留出大量的空间来进行细胞的培养。
要保证良好的气体和液体接触,并且液体和固体要具有好的热量交换性能,可以有效的进行质量和热量的传递,尽量减少能量的消耗和泡沫的产生,设计消沫装置来提高装料系数。
生物反应器是对微小生物的放大生产过程,是从实验室到工业生产的过程,要面临生物反应器的逐级放大问题,并不是简单的体积的放大,而是一个复杂的体系。
在生物反应器中,氧的传递速率要满足于细胞对氧的摄取速率,溶解氧的浓度也要保证。
在进行细胞的培养和发酵时,并释放一些热量,细胞在培养时会与周围环境产生物质的新陈代谢,发生分解和同化作用,分解作用会释放能量,同化作用会吸收能量。
同化作用主要是细胞的生长、繁殖以及生成产物都要需要能量,细胞从培养基吸收营养和基质。
从能量的角度来分析,分解产生的能量会大于同化产生的能量,多余的能量会转化为能量释放到外围环境中,无论是细胞反应还是酶反应,要及时将释放的热量排出去,才能保证细胞培养的正常进行,所以生物反应器会设置冷却装置。
2各种生物反应器的应用介绍2.1搅拌式生物反应器在体外模拟细胞微环境中的应用搅拌式生物反应器工作时,搅拌器旋转使液体在其中流动,类似于微生物发酵罐的工作原理,其主要结构包括培养罐、培养管、阀门、泵、马达、控制仪器。
1. 生物技术制药分为哪些类型?生物技术制药分为四大类:(1)应用重组DNA技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽,蛋白质类治疗剂。
(2)基因药物,如基因治疗剂,基因疫苗,反义药物和核酶等(3)来自动物、植物和微生物的天然生物药物(4)合成与部分合成的生物药物2.生物技术制药具有什么特征?(1)分子结构复杂(2)具有种属特异性(3)治疗针对性强,疗效高(4)稳定性差(5)基因稳定性(6)免疫原性(7)体内的半衰期短(8)受体效应(9)多效性(10)检验的特殊性3.生物技术制药中有哪些应用?应用主要有:(1)基因工程制药:包括基因工程药物品种的开发,基因工程疫苗,基因工程抗体,基因诊断与基因治疗,应用基因工程技术建立新药的筛选模型,应用基因工程技术改良菌种,产生新的微生物药物,基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用,利用转基因动植物生产蛋白质类药物(2)细胞工程制药:包括单克隆抗体,动物细胞培养,植物细胞培养生产次生代谢产物(3)酶工程制药(4)发酵工程制药4.基因工程药物制造的主要程序有哪些?基因工程药物制造的主要步骤有:目的基因的克隆,构造DNA重组体,构造工程菌,目的基因的表达,外源基因表达产物的分离纯化产品的检验5.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些?(1)外源基因的计量(2)外源基因的表达效率:a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、SD序列和起始密码的间距 d、密码子组成(3)表达产物的稳定性(4)细胞的代谢付荷(5)工程菌的培养条件6.质粒不稳定分为哪两类,如何解决质粒不稳定性?质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。
质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象;质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排,缺失所致工程菌性能的改变。
提高质粒稳定性的方法如下:(1)选择合适的宿主细菌2)选择合适的载体(3)选择压力(4)分阶段控制培养(5)控制培养条件(6)固定化7.影响基因工程菌发酵的因素有哪些?如何控制发酵的各种参数?影响因素:(1)培养基(2)接种量(3)温度(4)溶解氧(5)诱导时机的影响(6)诱导表达程序(7) PH值8.什么是高密度发酵?影响高密度发酵的因素有哪些?可采取哪些方法来实现高密度发酵?高密度发酵:是指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上,理论上的最高值可达200gDCW/L 影响因素:(1)培养基(2)溶氧浓度(3)PH (4)温度(5)代谢副产物实现高密度发酵的方法:(1)改进发酵条件:a、培养基 b、建立流加式培养基 c、提高供养能力(2)构建出产乙酸能力低的工程菌宿主菌:a、阻断乙酸产生的主要途径 b、对碳代谢流进行分流 c、限制进入糖酵解途径的碳代谢流 d、引入血红蛋白基因(3)构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌9.分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?它们的原理是什么?方法有离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱及高压液相色谱。
第6章生物反应器生物反应器就是指提供适宜细胞生长和产物形成的各种条件,促进细胞的新陈代谢,在低消耗下获得高产量的一种反应设备。
一个优良的发酵罐应具备的条件:1)结构简单;2)不易染菌;3)良好的液体混合性能;4)较高的传质传热速率;5)单位时间单位体积的生产能力高;6)同时还应具有配套而又可靠的检测和控制仪表。
工业生产用的发酵罐趋向大型化和自动化。
6.1 通风发酵罐一、通用式发酵罐又称机械搅拌通气式发酵罐,使之既有机械搅拌装置,又有压缩空气分布装置的发酵罐。
1、工作原理是利用机械搅拌器的作用,使空气和发酵液充分混合,提高发酵液的溶解氧。
一个好的通用式发酵罐的基本条件:1)具有适宜的径高比;通常H/D = 2~4,罐身长有利于氧的溶解2)能承受一定压力;水压试验压力为工作压力的1.5倍,即0.38MPa3)搅拌通风装置要能使气泡分散细碎,气液充分混合,保证发酵液必须的溶解氧,提高氧的利用率4)具有足够的冷却面积;5)罐内应抛光,尽量减少死角,使灭菌彻底,避免染菌;6)搅拌器的轴封应严密,尽量减少泄漏。
2、结构特点发酵罐主要部件包括罐身、搅拌器、轴封、消泡器、联轴器、空气分布器、挡板、冷却装置、人孔及视镜等。
1) 罐体罐体由圆柱体及椭圆形或碟形封头焊接而成,材料为碳钢或不锈钢2) 搅拌器和搅拌轴其作用一是打碎空气气泡,增加气-液接触界面,以提高气-液间的传质速率;二是为了使发酵液充分混和,液体中的固形物料保持悬浮状态。
3) 挡板其作用是为防止发酵液随搅拌器运转而产生旋涡,以提高混合效果。
4) 空气分布器其作用是将无菌空气引入到发酵液中同时初步分散气泡。
5) 冷却装置在发酵过程中,细胞呼吸和机械搅拌都将产生一定热量,为了保证发酵在一定温度下进行,必须将这些热量及时移去,因此需要设置冷却装置。
6) 消泡器分耙式消泡器和半封闭涡轮消泡器二、机械搅拌自吸式发酵罐利用机械搅拌的高速旋转而吸入空气的一种发酵罐。
搅拌气升式生物反应器的研究进展席仁荣,吴振强(华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510640)摘要:搅拌气升式反应器作为一种新型高效的生物反应器,因为其独特的优势而越来越受到重视,具有良好的研究和应用前景。
概述了搅拌气升式反应器的国内外研究进展,着重评述了搅拌气升式反应器相比于传统机械搅拌式反应器和气升式反应器的所体现出的优点,详细介绍和分析了该新型反应器的基本结构、流体力学性质及相关的重要表征参数,并对其在生物发酵和化工行业中的应用和发展进行了回顾和展望。
关键词:搅拌气升式反应器;传质性能;结构中图分类号:TQ 050.1 文献标识码:A文章编号:1000–6613(2008)02–0218–05 Research progress of mechanically stirred airlift bioreactorsXI Renrong,WU Zhenqiang(Collegy of Bioscience and Bioengineering,South China University of Technology,Guangzhou 510640,Guangdong,China)ABstract:The mechanically stirred air lift bioreactors are a kind of novel and high-performance bioreactors,which are paid more attention due to their excellent merits in recent years and may have agood prospest. The corrent research progress of mechanically agitated airlift bioreactors at home andabroad is summarized. The paper also compares the mechanically stirred air lift bioreactors with mechanically stirred bioreactors and air lift bioreactors and points out its strengths. Besides,the basicstructure ,hydromechanics characteristics and relevant parameters of the novel bioreactors are introduced and analyzed in detail as well as their applications in fermentation and chemical industry inthe future.Key words:mechanically stirred airlift bioreator;mass transfer performance;structure 气升式反应器和机械搅拌式反应器在生物发酵、化工等领域中得到了广泛应用[1]。
气升式反应器在流体黏度相对不高、需要温和的搅拌[2]和氧传质要求较低[3-4]时非常有效,但操作弹性小、轴向梯度高径比(H/D)大、高黏度时相间传质差等不利因素制约了其发展。
与其相比,传统的机械搅拌式反应器则有更广泛的操作应用范围,混合程度较高,但它们没有确定的混合模式、不能高速的通气、快速机械搅拌的剪切力对于丝状菌和动植物细胞的培养不利。
为了扩展反应器的应用范围,许多研究者通过多种途径来改善它们的性能,包括改进反应器型式、结构、增加内构件等,其中,将搅拌式反应器与气升式反应器结合形成的新型机械搅拌气升式反应器因其能够同时解决传统搅拌和气升式反应器的一些限制而引起了国内外学者的广泛注意。
在气升式反应器中合理设置搅拌,可有效地破碎细胞,扩大传质面积并增加循环速度及扰动,强化传递性能,获得足够高的氧传质效率和热传递性能,并且能耗可以缩减至传统搅拌系统的30%。
Moo-Young等[5]较早地指出在气升式反应器的导流筒中加上一个低剪切力轴流搅拌桨,这可能是搅拌气升式反应器的最初模型,其性能优于单纯的气升式反应器。
同样,这种搅拌气升式反应器已经被证明比传统的单层六平叶圆盘涡轮桨需氧发酵罐具有更高效率[4-6]。
LüXiaoping 等[7]认为在高黏度介质的气升式反应器中,机械搅拌比静态混合器对传质的改善更有效。
目前国内对这种新型混合反应器甚少有系统的研究,主要的理论研究和应用开发基本限于南京工业大学。
本文作者就这种新型的搅拌气升式反应器的传质特性以及在高黏度需氧发酵、动植物细胞培养、带有固体颗粒的三相反应以及污水处理中的相关应用进行了综述和分析。
1 搅拌气升式生物反应器搅拌气升式反应器的基本特征是将搅拌式生物反应器和气升式反应器耦合成一个生物反应器。
基本构造为发酵罐体、换热器、搅拌器和进气室。
通常,基础的混合式反应器是通过在气升式反应器的导流筒中安装搅拌桨来实现的。
图1 是3 种较为典型的搅拌气升式反应器结构[8-10]。
在这些混合结构中,图1(c)结构因为气体在环状上升区中通气而不是在搅拌桨下面,故能有效解决搅拌桨的“气阻”问题[11]。
常用的搅拌桨类型有Prochem®hydrofoil 型搅拌桨[9,11]、船用搅拌桨[12-14]、平叶桨[15-16]以及斜桨[17-18]。
其中Prochem® hydrofoil 型搅拌桨能耗、剪切力较低而用于大规模生产[11]。
2 搅拌气升式生物反应器的流体力学特性及相关参数机械搅拌气升式生物反应器产生的流体力学现象比较复杂,与气升式反应器相比,具有相似高度规则的流型却能得到更高的液体循环速度。
高度分散及强化循环的液体意味着对悬浮物能力的改善并且降低了营养物质和氧气浓度的轴向梯度。
这种轴向梯度存在于较高的气升式反应器中并且会产生不利影响[1,15,19-21]。
2.1 总体积传质系数KLa总体积传质系数KLa 是反应器的传质性能的重要表征,可以利用溶氧电极动态法测定。
它与传质推动力的浓度成正比。
KLa 主要取决于通气速率和搅拌速率,流体的湍动与液体中气泡的数量及气液表面积增加都能使KLa 提高。
吕效平等[17]研究了表观气速、固含率及桨速对总体积传质系数KLa 的影响。
结果表明,KLa 随气体表观气速和搅拌速度的增加而增加。
在低表观气速下,机械搅拌可较好地促进传质;在高表观气速率时,机械搅拌促进传质的作用减小。
固体颗粒的加入也可以提高总体积传质系数,但存在一个最优固体加入量。
Chisti 等[21]也考察了不同强度的通气速率和搅拌速率对KLa 的影响,得出单独利用通气模式进行操作的混合效果弱于配置搅拌浆的反应器,且与其它鼓泡式和气升式反应器中规律相似,在搅拌气升式反应器中的KLa 与比气含率εg/(1-εg)为线性关系,与使用的流体无关。
与气升式反应器相比,在气升式反应器内部设置了合适的机械搅拌,很大程度上提高了总体积传质系数KLa。
混合型反应器改进传质性能的主要途径有:(1)可以使气液分散均匀,而且产生的气泡小,增大了气液表面积,明显克服了普通气升式反应器的气泡分散不均这一致命弱点;(2)搅拌器对罐底的料液有环流作用,使最易发生物料沉淀的地方不沉淀,而且使环流加速,提高了氧传质效率;(3)多相混合反应器中,可以促进固体的悬浮,延长了和液体接触的时间,进而促进传质。
2.2 液体循环速度UL液体循环速度UL 也是反应器设计中重要的流体力学参数,不但影响了反应器中流体混合特性、颗粒悬浮、温度和浓度的均匀性,而且与传质、传热系数密切相关[22]。
吕效平等[10]在考察黏度、搅拌速率和表观气速对液体循环速度的影响时发现,黏度的增加或者固体粒径、固含率增加均会降低液体的循环速度;表观气速的增加也可明显增加UL。
而混合反应器中搅拌转速与表观气速则有相互制约的作用,转速较大时,反应器内会产生“气阻”现象。
在相同表观气速下,液体循环速度随转速的增加而增加而搅拌转速大于1000 r/min 时,液体循环速度随转速的增加而下降,最后趋近某一值。
Chisti 等[19]也发现随着桨速的增加液体循环速度增加,但对通气速率并不敏感,除非进行单独气升式操作。
可以看出,搅拌转速对液体循环速度的影响是不可忽视的,而且新型反应器也增大了换热器传热面积,且分布均匀,换热器内外的水流及料液流动均作强湍流运动,因此换热效率极高。
相比而言,新型反应器确实可以有效改善反应器的液体循环速度。
2.3 气含率εg气含率和液体循环速度一样是表征气升式环流反应器流体力学特性的基本参数,与气泡的大小和气液两相接触面积直接有关。
与所有流体类似,在搅拌气升式反应器中,气含率随通气速率和搅拌速率的增加而增加。
通常,低速时气含率快速增加;通气速率过大会出现气泡聚并,降低气含率的增加[12,17,19]。
在搅拌速率和通气速率一定时,气含率随浆液中介质浓度的增大而降低,最大幅度降低到60%[19]。
搅拌桨的形状也会影响反应器的气含率[23],所以为了增加反应器的气含率,需根据生产实验的需要选择合适的搅拌桨。
除此之外,还可以在反应器内添加静态混合器,结合机械搅拌桨,可以很大程度地提高气含率,强化高黏度、非牛顿流体体系中的反应器传递性能,进而提高总体积传质系数KLa。
2.4 混合时间随着通气速率和搅拌转速的提高混合时间会得到改善,在搅拌气升式反应器中,通气速率只有在桨速很低或停止时才对混合时间有影响。
混合时间对浆液中固体浓度不敏感[19]。
吕效平等[13]发现黏度的增加会增加混合时间,在表观气速相同的情况下,混合时间随转速的增加而下降;但在某一较大转速(1000 r/min)有一转折点,随后混合时间继续下降,表观气速越大,此现象越显著。
对于多相搅拌气升式反应器,固含率也是表征反应器性能的一个重要参数。
无论是搅拌式反应器还是气升式反应器,能耗一直是一个不容忽视的问题。
气升式反应器一般操作弹性小,很难在不改变通气的条件下改善混合状况。
在大型的气升式反应器中,需要较高的气速才能达到满意的效果,而高速通气也带来一系列的问题,与机械搅拌相比,其能耗优势不明显。
这也是为什么机械搅拌式反应器目前仍受到广泛欢迎的原因[9]。
而新型反应器的机械搅拌及其主要装置主要起着分散压缩空气作用,需要的能耗相对而言较低,所以这种气升搅拌式新型反应器有着很大的研究价值和应用前景。
吕效平[17]曾研究了能量耗散速率与总体积传质系数KLa 的影响。
结果表明,搅拌转速一定时,单位反应器体积的机械搅拌能量耗散速率随表观气速的增加而降低,通气耗散速率随表观气速的增加而增加。