植物生物反应器的研究进展及发展方向
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生物反应器指以活细胞或酶为生物催化剂进行细胞增殖或生化反应提供适宜环境的设备,它是生物反应过程中的关键设备。
生物反应器的结构、操作方式和操作条件的选定对生物化工产品的质量、收率(转化率)和能耗有密切关系。
生物反应器的设计、放大是生化反应工程的中心内容,也是生物化学工程的重要组成部分。
分类从生物反应过程说,发酵过程用的反应器称为发酵罐;酶反应过程用的反应器则称为酶反应器。
另一些专为动植物细胞大量培养用的生物反应器,专称为动植物细胞培养装置。
发酵罐发酵罐若根据其使用对象区分,可有:嫌气发酵罐、好气发酵罐、污水生物处理装置等。
其中嫌气发酵罐最为简单,生产中不必导入空气,仅为立式或卧式的筒形容器,可借发酵中产生的二氧化碳搅拌液体。
若以操作方式区分,有分批操作和连续操作两种。
前者一般用釜式反应器,后者可用连续搅拌式反应器或管式及塔式反应器。
好气发酵罐按其能量输入方式或作用原理区分,可有:①具有机械搅拌器和空气分布器的发酵罐这类发酵罐应用最普遍,称为通用式发酵罐。
所用的搅拌器一般为使罐内物料产生径向流动的六平叶涡轮搅拌器,它的作用为破碎上升的空气泡和混合罐内的物料。
若利用上下都装有蔽板的搅拌叶轮,搅拌时在叶轮中心产生的局部真空,以吸入外界的空气,则称为自吸式机械搅拌发酵罐。
②循环泵发酵罐用离心浆料泵将料液从罐中引出,通过外循环管返入罐内。
在循环管顶端再接上液体喷嘴,使之能吸入外界空气的,称喷射自吸发酵罐。
③鼓泡塔式发酵罐以压缩空气为动力进行液料搅拌,同时进行通气的气升发酵罐。
目前,世界所发展的大型发酵罐是英国卜内门化学工业公司的发酵罐,它以甲醇为原料生产单细胞蛋白的压力循环气升发酵罐,其直径为7m,高为60m,总容量为 2300m□,自上至下有5000~8000个喷嘴进料。
目前,还有些发酵产品,如固体曲等,使用专门设计的能调节温、湿度的旋转式固体发酵装置。
生产甲烷(沼气)用的是嫌气发酵罐,也称消化器或沼气发生器,这种发酵罐装有搅拌器,顶部有的有浮顶。
《生物工程设备》生物反应器及其生产现状生物反应器是生化工艺过程的核心设备,本案例主要介绍生物反应器的作用、分类、发展历史和研究现状。
并对目前国内生物反应器的突出问题,如检测pH、溶氧传感器性能不稳定需要长期进口等问题展开讨论,通过教师列举日常实例,引出对于核心技术及自主研发能力的思考,学生查找和总结专业产品的相关资料,从专业领域角度引导学生关注我国制造业的发展,并对其进行爱国主义教育,鼓励学生从自身做起,为我国的民族产业出一份力。
一、教学目标(一)课程教学目标该章节的主题是生物反应器概述,主要讲生物反应器的作用、地位、分类、发展历史和研究现状。
课程的教学目标包括:1.掌握生物反应器的作用、地位和分类;2.了解生物反应器的发展历史和研究现状。
(二)思政育人目标1.设计思路本课程绪论部分内容介绍国内外生物反应器产业发展概况,其中主导生物工程产业的生物反应器大多为国外(如美国、德国、日本等)研发生产。
近些年,我国虽然能够研发一些生物反应器,但仍然存在很多问题。
比如生物反应器的核心部件,如检测pH、溶氧传感器性能不稳定需要长期进口。
核心部件的依赖必定导致整个产业的对外依赖,不利于今后提高我国生物产业的整体竞争力。
因此在讲述这部分内容时,应从爱国主义和建设中国特色社会主义强国出发,鼓励学生学好专业知识,为以后掌握核心技术,强大我国民族制造业打下基础。
2.思政育人目标使学生认识到掌握核心技术对于提高我国综合国力的重要性,从提高我国制造业市场竞争力角度培养学生学习专业课程的积极性。
3.育人主题创新,发展民族产业等爱国主义教育。
二、教学实施过程1.教学理念:制造业是国民经济的主体,打造具有国际竞争力的制造业,是我国提升综合国力、保障国家安全、建设世界强国的必由之路。
然而,与世界先进水平相比,我国制造业仍然大而不强,在自主创新能力、资源利用效率、产业结构水平、信息化程度、质量效益等方面差距明显,转型升级和跨越发展的任务紧迫而艰巨。
植物合成生物学的优缺点1.引言1.1 概述概述植物合成生物学是一门新兴的交叉学科,将植物学、合成生物学和生物工程学相结合,旨在通过对植物基因组的分析和改造,实现对植物的精准设计和功能增强。
植物作为地球上最重要的生物资源之一,不仅能提供人类所需的食物、能源和药物,还承担着维护生态平衡和环境保护的重要角色。
植物合成生物学的出现,为我们深入理解植物基因组的复杂网络和调控机制,开辟了新的途径。
随着研究的深入,植物合成生物学已经取得了许多令人瞩目的成就。
通过对植物基因的编辑和改造,可以增加农作物的产量和抗逆性,提高食物品质和可持续性;还可以利用植物的天然代谢途径,生产出各种天然产物和高附加值的化合物,如药物、化妆品和生物材料等。
此外,植物合成生物学在生物能源开发、环境修复和生态保护等方面的应用潜力也越来越受到关注。
然而,植物合成生物学也存在一些挑战和限制。
首先,植物基因组的复杂性和多样性使得对其进行精准改造变得困难,需要更加精细和高效的基因组编辑技术。
其次,植物的生长和发育过程受到多种内外部因素的调控,因此在进行基因编辑和调控时需要考虑到它们的影响。
此外,植物合成生物学的研究需要大量的时间和资源,包括对植物进行大规模的基因组测序、功能验证和产物分析等。
在未来,植物合成生物学有望取得更大的突破和应用。
随着技术的进步和方法的改进,我们将能够更好地理解植物的基因调控网络和代谢途径,实现对植物的更精准改造和设计。
同时,通过加强植物合成生物学与其他学科的交叉和合作,可以拓展其在农业、医药和环境领域的应用。
例如,结合植物合成生物学和基因编辑技术,可以培育出更适应气候变化和病虫害的作物品种;利用植物的天然代谢途径,可以开发出更安全有效的药物和生物材料。
总之,植物合成生物学作为一门新兴的学科,具有巨大的潜力和发展前景。
通过深入研究植物的基因组和调控机制,我们将能够更好地利用植物的天然资源和功能,促进可持续发展和生态平衡的实现。
植物次生代谢初步相关研究进展摘要:植物次生代谢与植物的生长发育及其对环境的适应密切相关,由初生代谢派生参与植物防御反应相关的萜类、生物碱类、苯丙烷类为植物次生代谢物的主要类型,其代谢途径多以代谢频道形式存在种属、生长发育期等特异性。
重点介绍这三类具有防御作用的次生代谢产物的生物合成途径、参与介导植物防御反应的相关信号分子及其转录调控机制,为正确认识植物次生代谢防御反应提供理论依据。
关键词:次生代谢;调控机制;限速酶Preliminary research progress of plant secondarymetabolitesAbstract:Plant secondary metabolism is closely related to the growth and development of plants and their adaptation to the environment, participate in related terpene derived from the primary metabolism of plant defense responses, alkaloids, phenylpropanes main types of plant secondary metabolites, metabolic multi-channel metabolic pathways exist species, such as specific growth period. Focuses on the biosynthetic pathway of these three defensive role of secondary metabolites involved in plant defense responses mediated signaling molecules and transcription regulation related mechanisms to provide a theoretical basis for a correct understanding of plant secondary metabolites defense response.Keywords:Secondary metabolism; regulatory mechanisms; rate-limiting enzyme植物次生代谢(secondary metabolism)是由初生代谢(primary metabolite)派生的一类特殊代谢过程[1](见图1),是植物在长期进化中与环境相互作用的结果。
植物科学研究现状及发展趋势年级: 2010学号: 2202040319姓名: 朱家钰专业: 音乐学二零一二年七月摘要植物科学与技术专业是新兴专业,综合了传统的农学、园艺和植保三大内容,在科研和应用上均具有重大意义:在科研上,它属于应用基础学科,可以为国家生态建设、粮食生产安全以及能源结构调整等方面做出重大贡献;在应用上,它主要研究现代生物技术及植物遗传改良、农业信息技术及植物生产管理、生态环境及植物产品质量安全、植物保护和植物产品贮藏与加工等,同时,综合了农业科技示范园区等现代农业设施和推广体系的建设和发展,在未来的国家生态环境建设及新农村发展中,将呈现广阔的发展远景。
关键词:植物科学;现阶段发展;重要性;发展前景第1章绪论1.什么是植物科学随着农业技术高新化、领域扩大化、生产规模化、经营产业化、管理信息化,将传统农业生产技术与现代生物技术有机结合的专业——植物科学与技术专业由此而生。
2.植物科学的意义本专业学生主要学习农业生物科学、农业生态科学、农业经济和管理科学、植物生产学、植物育种学和植物保护学等基本理论和基本知识,受到植物生产、植物育种和植物保护工作需要的科研、管理等方面的基本训练,具有组织管理种植业生产、进行植物生产技术开发和推广、经营管理农业企业等方面的基本能力。
3.植物科学的研究方向1.植物生理学研究农作物植物激素代谢及其调控、植物激素作用机制、植物激素测定技术、新型植物生长调节剂的研制;植物对矿质离子的吸收与运转及其机制,新型肥料和营养剂的研制;逆境对植物伤害的机制以及农业防灾与减灾。
2.植物生物化学与分子生物学研究植物初生及次生物质代谢规律及其应用;植物生长发育过程中重要大分子的分离纯化、性质、结构及功能;基因工程技术及应用;植物细胞信号转导的分子生物学。
3.环境植物学研究环境因子对植物生长过程的影响、环境污染物对主要农作物的毒性及作用机制、污染土壤及水体植物修复技术及应用、植物生理生化指标对环境污染水平的指示。
生物反应器生物反应器是一种生物技术设备,主要用于生物发酵、生物转化和生物固定化等过程的实现,是生物技术学领域中的核心设备之一。
生物反应器按规模大小可分为实验室规模、小型工业规模、大型工业规模及超大型规模,广泛应用于生物制药、食品工业、环保工程、化工领域及实验室研究等不同领域。
本文主要介绍生物反应器的基本概念、分类、结构、功能与应用等方面的内容。
一、生物反应器的基本概念生物反应器是一种专门用于维持和促进生物体生长繁殖,并对物质能量进行转化的设备。
是利用微生物生长代谢的能力,进行化学制品或生物制品的生产。
反应器内部常温度、氧气含量、pH值、营养物浓度等参数进行监测与控制,以维持接近理想的生长环境,从而提高微生物总体产量和单独化合物的产量。
二、生物反应器的分类按微生物名称分为真菌反应器和细胞反应器两种;按操作条件分为常压和高压反应器两种;按反应器内混合方式分为不同类型,如机械混合反应器、气液混合反应器、液相连续搅拌反应器、固相悬浮式反应器等;按生产工艺分则有批量式反应器、半连续式反应器和连续式反应器等。
三、生物反应器的结构生物反应器结构包括传质层、反应层和生物活性层三个部分。
传质层由反应器外壳和传质器件(气体传输系统与吸收液传输系统)组成,热量传递和质量传递的效率决定于传质器件的选择和设计。
反应层由反应器罐体、搅拌器、传热器、控制仪等组成,其内部环境的压力、温度、营养物浓度、气相浓度、氧含量、pH值等参数决定了反应的产物和效率。
生物活性层是一个重要的环节,是水生生物或微生物参与反应的主要部分。
其中,微生物是生物活性层的核心,它们根据营养状态发生生长、代谢和能量转换等复杂的反应,完成指定的反应目的。
四、生物反应器的功能生物反应器的主要功能是实现微生物生长代谢和化学过程,从而获得所需的生物制品或化学成品。
其次,需要满足反应器内环境的生物学和物理学参数要求,如空气、水、营养物、pH、pO2、温度、压力、流量等参数,确保最大的反应效率和最佳的反应条件。
微藻及其生物反应器研究进展张林存生技0911 0920212115摘要:生物反应器是微藻大量培养的一场革命,它使微藻高效、大规模化生产成为可能。
本文对微藻的研究历史、应用现状,特别是微藻生物反应器以及作为新型可再生能源的微藻柴油作了简要综述。
关键词:微藻、生物反应器、微藻柴油Microalgae and Its Research Progress in BioreactorZhang Lin-cun Biotech0911 0920212115Abstract: Bioreactor is a revolution in large scale culture of microalgae. It makes the efficient, large scale production of microalgae possible. This paper makes a brief summary about the study history and the current application of microalgae, especially the bioreactor of microalgae and a new renewable energy——microalgae biodiesel.Keywords: microalgae, bioreactor, microalgae biodiesel微藻是一类在陆地、海洋分布广泛,营养丰富、光合利用度高的自养单细胞生物,是地球上最早诞生的重要生命类群,不少种类有数万年甚至十亿年发展的演化。
也是地球有机资源的初级生产力。
迄今已知的藻类约有3万余种,其中微藻约占70%。
藻类不仅富含蛋白质、脂肪和碳水化合物这三大类人类所必需的物质,而且还含有各种氨基酸、维生素、抗生素、高不饱和脂肪酸以及其它多种生物活性物质,是人类向海洋索取食品、药品、生化试剂、精细化工产品、燃料以及其它材料的一种重要途径。
植物组织培养技术应用研究进展一、概述植物组织培养技术,作为一种在无菌条件下,通过人工操作将离体的植物组织、细胞或器官培养在适当的培养基上,以进行繁殖或生产次生代谢产物的生物技术,自20世纪初诞生以来,已经取得了显著的进展。
该技术的出现不仅极大地推动了植物科学研究的深入,也为农业、林业、园艺、医药等领域的发展带来了革命性的变革。
近年来,随着生物技术的不断发展,植物组织培养技术也得到了不断的优化和创新。
从培养基的改良、外源激素的应用到基因工程的介入,植物组织培养技术已经逐步从传统的形态学观察迈向了分子水平的研究。
同时,该技术在植物脱毒、快速繁殖、遗传转化、次生代谢产物生产等方面也取得了显著的应用成果,为现代农业和生物产业的发展提供了强有力的技术支撑。
尽管植物组织培养技术已经取得了显著的进展,但仍存在许多亟待解决的问题和挑战。
例如,如何提高培养效率、优化培养条件、减少培养过程中的污染和变异等,都是当前植物组织培养技术面临的重要问题。
进一步加强植物组织培养技术的研究和应用,不仅有助于推动植物科学研究的深入,也将为农业、林业、园艺、医药等领域的发展注入新的活力。
本文旨在综述近年来植物组织培养技术应用的研究进展,重点介绍该技术在植物脱毒、快速繁殖、遗传转化、次生代谢产物生产等方面的应用成果,同时探讨当前存在的问题和挑战,以期为植物组织培养技术的进一步发展和应用提供参考和借鉴。
1. 植物组织培养技术的定义与重要性植物组织培养技术,又被称为植物细胞工程或植物离体培养,是一种在无菌条件下,通过人工控制环境,使植物细胞、组织或器官在离体状态下进行再生和分化,最终形成完整植株的现代生物技术。
此技术自20世纪初诞生以来,已逐渐发展成为现代生物技术的重要组成部分,对植物科学研究、农业生产和生物工程等领域产生了深远的影响。
定义上,植物组织培养技术主要涉及到植物细胞的离体培养、脱分化、再分化以及植株再生等多个关键步骤。
离体培养是指将植物组织或细胞从母体中分离出来,在人工控制的环境中进行培养脱分化是指离体细胞失去原有的结构特性和生理功能,转变为具有分生能力的细胞再分化则是指这些分生能力强的细胞进一步分化成具有特定形态和功能的细胞或组织通过适宜的培养条件和调控手段,这些细胞或组织能够再生成为完整的植株。
植物转基因技术及其应用摘要:综合介绍了植物转基因的主要技术与其在各个领域的主要应用;对转基因植物的安全性进行了一些讨论,并对植物转基因技术的发展前景进行了展望。
自1983 年第一株转基因植物问世以来,转基因植物的研究和应用在世界各国蓬勃开展。
所谓转基因植物就是植物细胞或组织经遗传转化后,进行组织培养长出愈伤组织,再经诱导所分化出来的完整植株。
转基因可以使优良的生物基因在不同种生物之间进行交流, 从而弥补单一生物种类中的遗传资源不足,丰富种质库。
转基因植物的研究在目前的生物技术领域中最为活跃,具有十分广泛的应用前景。
1. 植物转基因技术1.1 土壤农杆菌介导转化技术革兰氏阴性菌根瘤农杆菌是一种植物病原菌,通常只能感染双子叶植物的受伤部位。
农杆菌携带一种称为Ti 的质粒,该质粒含有一段NDA ,称T-DNA(transfer-DNA) ,它能转移并整合到植物组织中,并导致冠瘿瘤的形成。
不含有Ti 质粒的土壤农杆菌不能诱导冠瘿瘤产生。
利用Ti 质粒对植物进行遗传转化的最基本方法是将目的DNA 片段插入T-DNA 区,然后通过土壤农杆菌和Ti 质粒将其送入受体植物并整合到植物细胞的基因组内,使之得到遗传转化。
2 土壤农杆菌介导的基因转移是目前最常用的获得转基因植物的方法。
由于近几年来在载体系统和转化方法上的不断完善,土壤农杆菌介导的基因转移不仅局限于其天然寄主双子叶植物范围内,在转化水稻、玉米和小麦等单子叶植物上也取得了重大的突破。
例如,Ishida 等1996 年在玉米上获得了 5 %~30 %的转化率,Hiei 等1994年在水稻上获得了29 % 的转化率。
就目前的情况看,土壤农杆菌介导的基因转化关键在于找到合适的组织培养和再生技术。
1.2基因枪技术由于土壤农杆菌转化技术在单子叶植物上的局限性,目前,多数研究者倾向于使用基因枪技术对单子叶植物进行转化。
基因枪技术1987 年由Sanford 等人发明,是目前最有前途的植物DNA 转移系统之一。
青蒿素的合成生物学研究进展一、本文概述青蒿素,源自菊科植物青蒿(Artemisia annua L.),是一种具有显著抗疟活性的天然产物,自20世纪70年代被发现以来,已成为全球抗击疟疾的重要武器。
然而,青蒿素的天然来源有限,化学合成成本高昂,且存在环境污染等问题,这使得青蒿素的可持续供应面临挑战。
近年来,随着合成生物学的发展,利用合成生物学方法生产青蒿素成为研究热点。
本文将对青蒿素的合成生物学研究进展进行全面概述,探讨如何利用合成生物学技术提高青蒿素的产量、优化生产过程,以及面临的挑战和未来的发展方向。
本文首先回顾了青蒿素的研究历程和其在全球抗击疟疾中的作用,指出合成生物学在青蒿素生产中的潜在价值和重要性。
随后,综述了目前青蒿素合成生物学研究的主要成果,包括青蒿素生物合成途径的解析、关键酶的发现与改造、以及基于代谢工程的青蒿素高产菌株的构建等。
在此基础上,讨论了合成生物学方法在青蒿素生产中的优势与挑战,如提高青蒿素产量的同时保持其生物活性、优化生产过程的可持续性、以及降低生产成本等。
展望了青蒿素合成生物学研究的未来发展方向,包括利用新兴技术如CRISPR-Cas9基因编辑系统、合成基因组学等进一步提高青蒿素产量和质量,以及推动青蒿素合成生物学技术的产业化应用。
二、青蒿素生物合成途径解析青蒿素是一种具有高效抗疟活性的天然产物,其独特的化学结构和强大的生物活性使其成为全球公共卫生领域关注的焦点。
为了深入理解青蒿素的生物合成机制并进一步提高其产量,科学家们对青蒿素的生物合成途径进行了详尽的解析。
青蒿素的生物合成起始于异戊烯基焦磷酸(IPP)和二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP),这两个分子在甲羟戊酸途径(MVA途径)或2-C-甲基-D-赤藓糖醇4-磷酸途径(MEP途径)中生成。
随后,通过一系列酶促反应,包括预青蒿酸合成酶、青蒿酸合成酶和青蒿素合成酶等,逐步转化为青蒿素的前体物质青蒿酸。
青蒿酸经过青蒿素合成酶的催化,形成青蒿素。
生物反应器技术的应用在现代生物科技领域,生物反应器是一个至关重要的工具,它是一种能够模拟自然界生物过程的人造设备,用来培养、维持生物体、微生物、细胞等生物材料的种植和发育的机器。
在近年来,随着生物工程技术的发展和应用,生物反应器已经成为一种重要的科技手段,被广泛应用于生物基因工程、微生物发酵、制药等领域,对人类健康事业、食品生产等多个方面产生了深刻的影响。
生物反应器概述生物反应器是一种工程设备,其功能是提供一种适宜的环境和场所,使生物体、微生物、细菌等生物材料能够正常生长和发育。
生物反应器的主要部件包括反应器本体、搅拌器、气体增加装置、离心机等。
反应器本体的构成主要包括反应器柱体、反应器罩和反应器轴等,通常是由不锈钢或其他材质制成,具有高强度、不易生锈的特点。
搅拌器则能够提供足够的氧气和营养物质,以促进生物体或微生物的增殖,从而实现她们的长期生长与发育。
气体增加装置则能够根据反应器内气体的需要自动进行释放气体或增加压力,从而保证反应器内的恒定气体环境,提高反应器的工作效率和稳定性。
离心机则是对生物反应器中培养好的细胞、微生物等生物材料进行离心分离,分离其有效成分,并将其提取出来,用于后续的生产加工、分析等操作。
生物反应器分类按照生物反应器中介质物质不同分类,可以将生物反应器分为液体生物反应器和固体生物反应器,其中液体生物反应器应用更为广泛。
液体生物反应器主要应用于细胞、蛋白质等大分子物质的培养,以及微生物发酵等领域。
按照反应器的体积大小,液体生物反应器通常可以分为微型反应器、小型反应器、中型反应器和大型反应器等。
微型反应器的体积通常不到1毫升,主要用于在实验室中进行生物材料的初步筛选,小型反应器一般在1~100升之间,主要用于生产中较小批量的生物材料生产。
中型反应器的体积在100~5000升之间,主要用于中等批量的生物材料生产,以及研究性项目中的规模制备。
大型反应器的体积在5000~30000升之间,主要用于工业规模生产,能够应对大规模生产所需的产出量。
植物生物反应器的研究进展及发展方向姓名(内蒙古科技大学生物技术系)摘要利用转基因植物作为生物反应器生产外源蛋白,包括抗体、疫苗、药用蛋白等较之其他生产系统具有很多优越性。
本文简介了植物生物反应器的研究发展历史和现状, 并对植物生物反应器领域的发展作了一定的展望和讨论。
关键词植物抗体; 口服疫苗; 药用蛋白;转基因; 生物反应器植物生物反应器是生物反应器研究领域中的一大类, 是指通过基因工程途径, 以常见的农作物作为化学工厂,通过大规模种植生产具有高经济附加值的医用蛋白、工农业用酶、特殊碳水化合物、生物可降解塑料、脂类及其他一些次生代谢产物等生物制剂的方法[1]。
1 植物生物反应器研究内容1.1植物抗体(plantibody)抗体(antibody) 是动物体液中的一系列球蛋白,称为免疫球蛋白(Ig) 。
它们可介导动物的体液免疫反应。
在植物体内表达编码抗体或抗体片段(如Fab 片段和Fv 片段) ,获得的产物就称为植物抗体。
植物抗体最大的优点是使生产抗体更加方便和廉价。
尤其在生产单克隆抗体方面,利用植物生产要比杂交瘤细胞低廉的多。
据估计,在250 m2 的温室中利用苜蓿生产IgG的成本约为500~600美元/ g ,而利用杂交瘤细胞生产抗体的成本约为5 000 美元/g 。
因此,利用植物生产抗体具有广阔的市场前景。
目前,利用转基因植物表达的抗体包括完整的抗体分子、分泌型抗体IgA、IgG、单链可变区片段(scFv) 、Fab 片段、双特异性scFv 片段以及嵌合型抗体等不同类型的抗体。
植物不仅作为生物反应器器生产抗体用于医药产业,而且植物抗体介导的免疫调节在植物抗病育种上也很值得研究。
Fecker 等将抗甜菜坏色黄脉病毒(BNYVV) 的外壳蛋白基因的scFv 转化烟草,产生的scFv 定位于细胞质中或通过末端的连接信号肽而分泌到质外体,结果发现转scFv 的植株出现症状的时间明显迟于对照。
Tavladoraki 等将抗菊芋斑驳病毒(AMCV) 的外壳蛋白基因的scFv 转入烟草后,发现感病率下降50~60 % ,出现症状的时间也明显迟于对照。
LeGall 等将针对僵顶病植原体主要膜蛋白的scFv 转入烟草中,并通过细菌信号肽把scFv 定位到质外体,将转基因烟草接穗嫁接到被植原体侵染的砧木上,没有表现病症,而对照的非转基因接穗却出现严重的僵顶病症状甚至死亡。
另外,在植物细胞中表达具有催化或钝化酶和激素作用的抗体,从而对细胞代谢进行调节,这对于植物代谢机理的研究非常有用。
Owen 等将植物光敏色素单链Fab 抗体转入烟草中,转基因烟草光敏色素下降40 % ,而且该转基因烟草种子表现出异常的依赖光敏色素萌发的能力。
Shimada等在烟草内质网中高效表达了抗赤霉素前体分子A19/ 24 的scFv ,A19 和A24 分别是A1 和A4 的前体,转基因烟草中A1含量降低并表现矮化[2]。
1.2口服疫苗(edible vaccine)传染病严重威胁人类的生命和健康,一直以来人类获得免疫预防主要通过疫苗接种。
但在发展中国家,昂贵的疫苗造成数百万人尤其是儿童依然死于传染病。
目前利用植物作为生物反应器生产口服疫苗,极大降低了疫苗的生产成本,并且研究表明植物疫苗确实可以使人和动物产生相应的免疫应答,因此这一新技术将有助于疫苗的普及从而改善发展中国家人民的健康状况。
目前在植物中表达的疫苗有几十种,包括乙肝病毒表面抗原、诺沃克病毒外壳蛋白、大肠杆菌热不稳定肠毒素B 亚基(L T - B) 、霍乱毒素的A ,B 亚基(CT - A ,B)、冠状病毒(Coronavirus) 的免疫原糖蛋白S 多肽、狂犬病毒糖蛋白、口蹄疫病毒(foot - and mouth disease virus) 抗原、水貂肠炎病毒抗原、犬细小病毒抗原。
植物疫苗在动物实验中已证明能够成功激发动物黏膜免疫应答和血清免疫应答,使动物对致病原产生了抵抗力,但在人体中的免疫检测还不多,只有少数几种植物疫苗进行了人体试验。
Mason 实验小组让志愿者服用了包含Lt - B 的去皮马铃薯片,受试者表现出黏膜和全身性免疫反应。
Tacket 等将转诺沃克病毒外壳蛋白基因的马铃薯让20 个志愿者服用,结果19 个人产生特异性IgG,6 个人产生特异性IgA ,说明95 %的人对诺沃克病毒产生了抵抗力。
目前,科学家正在进行植物源性的抗癌疫苗、抗艾滋病疫苗、抗糖尿病疫苗以及利用植物生产加强免疫效应的辅助佐剂方面的研究。
研究人员用于表达疫苗的植物多为烟草、马铃薯、西红柿,但这些植物都存在作为口服疫苗的缺点,如烟草不能食用、马铃薯不易生食、而西红柿不易长期贮存,因此更宜于生产口服疫苗的是那些含有大量可溶性蛋白,耐贮运种子植物,特别是水稻、小麦、玉米,其胚乳中含有丰富可溶性蛋白能够与种子其余部分分开,从而降低植物疫苗服用剂量。
此外,植物必须高水平表达疫苗才能达到口服免疫的效果[3]。
1.3利用植物生产药用蛋白植物作为生物反应器除了可以生产抗体疫苗外,还可表达细胞因子、酶及其它药用蛋白和生物活性肽等。
但是利用植物生产上述细胞因子、酶,药用蛋白和生物活性肽等需要下游纯化, 只有它占总可溶性蛋白(TSP) 的1 %以上才具有商业开发的价值。
Verwoerd 等将黑曲霉的肌醇六磷酸酶(即植酸酶) 基因转入烟草,在成熟种子中植酸酶占总可溶性蛋白的1 % 。
Witcher 等利用转基因玉米生产重组的β - 葡萄苷酸酶( GUS) ,表达水平高达种子总可溶性蛋白的0. 7 % ,且生物活性与天然的的GUS 相同。
Hood 等在转基因玉米中成功表达了重组抗生物素蛋白,其表达量占总可溶性蛋白的2 %。
与从鸡蛋清中提取的相比具有相同的功效而成本却大大降低了。
现已成为Sigma - Aldrich 的商品。
Moloney 等将人的亮氨酸脑啡肽基因导入油菜中,先以种子贮藏蛋白2S清蛋白的形式表达,再用胰蛋白酶水解,获得的脑啡肽产量达到220 nmol/ g 种子,脑啡肽是临床可作为止痛剂或镇定剂。
此外,在转基因油菜种子油体中高效表达的水蛭素目前已经在加拿大投入商业生产,这是第一个用来商业开发的范例。
Sijmous 等人将人血清白蛋白(human serum albumin,HSA) 编码区与烟草的一个蛋白分泌信号肽序列的融合基因转入马铃薯,表达的融合蛋白占总可溶性蛋白的0. 02 % ,此外在植物中表达的其它人源蛋白的含量也很低。
例如β-干扰素的含量低于0. 03 %(鲜重) 、促红细胞生长因子( EPO)占总可溶性蛋白的0. 003 %、利用植物生产药用蛋白。
人工合成的人表皮因子在烟草中的表达量仅达到总可溶性蛋白的0. 001 % ,因此尚不具备开发价值,需通过进一步的研究来提高表达量[4]。
2 植物生物反应器存在的主要问题2. 1 转基因沉默是指转基因在受体植物中往往不能稳定表达,有时甚至完全不表达,或者说利用遗传转化方法导入并稳定整合进受体细胞中的完整的外源基因在当代转化体或在其后代中表达受到抑制的现象。
其可以通过以下途径解决: ①探明影响植物基因表达的基因调控元件,加以修饰和开启控制; ②了解转录过程,以便在转录水平进行基因操作,提高转录效率; ③研究翻译过程,提高翻译效率; ④构建一些新的植物高效表达系统,即各种载体及高效元件。
2.2 表达水平低大多数转基因植物通过自交后可以选择出目的基因纯合的后代,可以稳定遗传,使表型得以延续。
但是大部分外源基因的表达水平在植物体内不高,目前没有得到很好的解决。
可以尝试用如下方法加以解决:采用适当的强启动子、增强子序列和前导序列,使用偏爱密码子,将转基因产物定向到合适的细胞分隔(如细胞质、质外体、内质网腔、叶绿体液泡等) ,组织器官特异性表达(如种子、块茎、果实、橡胶树乳管等) ,去除mRNA不稳定序列,同时表达有助于产物正确折叠的酶或蛋白质(如分子伴侣) 。
此外,还可用植物病毒作为载体提高表达量。
虽然这一问题可以解决,但要形成一套完整的外源基因在植物体内的高效表达体系还有待深入研究。
2.3 重组蛋白质中糖链结构的改变植物表达蛋白质的氨基酸序列和它的原始序列通常是相同的,并且在植物中能形成类似于人类等哺乳类动物的复杂型糖链结构,但是二者在高尔基体中的糖基化过程存在较大差异。
植物中糖蛋白缺少唾液酸和半乳糖残基,特异存在α2(1, 3) 2岩藻糖和β2(1, 2) 2木糖。
而唾液酸和半乳糖残基缺失会影响糖蛋白在人体内的稳定性及半衰期,使其活性降低;α2(1, 3) 2岩藻糖和β2( 1, 2) 2木糖的存在则易引起人体内的免疫原性。
为了避免植物高尔基体中特异的糖基化过程,人们发现在表达蛋白质的后面添加KDEL序列,可将蛋白质定位在内质网中,从而形成对人无免疫应答的高甘露糖型糖蛋白质,同时还可以提高蛋白质的表达量。
2. 4 下游生产成本高尽管植物生产体系具有许多优点,但如果产物需提纯,其费用还是比较昂贵的,因此有待降低下游生产成本,尽可能地避免或部分避免表达产物的纯化,如用转基因植物生产直接口服疫苗。
有时通过被修饰植物的直接消化运输生物药物产物可能不需要纯化,这种生物药物及可食用疫苗能以种子、块茎或果实的形式储存和分配,可以直接利用,这样就大大简化了下游的加工成本。
另外,也可将植物种子油脂体作为蛋白或肽类的载体,外源基因以融合蛋白的形式表达,油脂蛋白具有亲脂性使其成为高效的多肽纯化系统。
2.5转基因药品的安全性问题目前,虽然通过植物生物反应器生产外源蛋白相对于动物和微生物来讲安全性更高一些,但是转基因产品的安全性仍存在争议,如在口服药物和口服疫苗方面,植物是否含有对直接口服蛋白有影响的因子。
公众对转基因产品的接受和认可程度还不够,从而使转基因产品的市场化进程受到影响。
因此,一方面要加大宣传普及力度,另一方面还要对转基因产品的潜在危险性进行充分评价,开发清洁载体,防止目标产物受到污染,同时还要制定相应的安全和管理法规。
展望尽管转植物生物反应器仍存在一些问题尚待解决,但利用植物表达系统已成功地表达了多种具有生理活性的外源多肽,而且有些已经进行了人体和动物的试验,其前景是可观的,随着人类基因组计划研究的不断深入,会发现有更多医疗价值的蛋白质,因此利用转基因植物将会成为最具潜力的生产系统来生产这些药物,为人类健康做出巨大的贡献[5]。
参考文献[1] 庞俊峰; 黄东光; 吴燕民;植物生物反应器研究进展生物技术通报, Biotechnology Bulletin, 编辑部邮箱 2011年 01期[2]严萍,赵树进. 转基因技术在植物抗体上的应用[J]. 生命的化学, 2006,(01) .[3] 刘德虎. 利用转基因植物生产药用蛋白[J]. 生物技术通报, 1999,(04) .[4] 杜小春; 何正权; 陈磊; 杨晔; 姚伟; 植物生物反应器表达药用蛋白研究新进展中国生物工程杂志, China Biotechnology, 编辑部邮箱 2008年 09期[5] 杨晶; 李天航; 熊丽东; 庞实峰; 李校堃; 植物生物反应器的研究进展生物工程学报, Chinese Journal of Biotechnology, 编辑部邮箱 2009年 05期。