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BCA蛋白质定量试剂盒说明书

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BCA蛋白质定量试剂盒
产品编号：AR0146
产品批号：见外包装标签
主要成份：
A液100ml
B液5ml
蛋白标准品10mg×5支
产品规格：应用试管法可以测量50管，微孔板法可以测量500孔。

产品保存：BCA试剂A和B在4℃保存，蛋白标准品在-20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。

产品说明：
碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，吸光度强度与蛋白浓度成正比。

测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

1.准确灵敏，线性范围广，BCA试剂的蛋白质测定范围是20－2000ug/ml。

2.快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。

3.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。

4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。

5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

使用方法：
试管法
1.配制工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B
（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。

2.稀释标准品：先将冻干标准品加入1ml0.9%NaCl或PBS稀释成10mg/ml的储存液，
然后储存液稀释至25～2000ug/ml。

管号稀释液体积标准品体积终浓度
A2400ul600ul2000ug/ml
B100ul300ul(从A管取)1500ug/ml
C300ul300ul(从A管取)1000ug/ml
D200ul200ul(从B管取)750ug/ml
E300ul300ul(从C管取)500ug/ml
F300ul300ul(从E管取)250ug/ml
G300ul300ul(从F管取)125ug/ml
H400ul100ul(从G管取)25ug/ml
I300ul0ul0ug/ml（空白）
3.将0.1ml的标准品和样本分别加入试管中。

4.各管加入2ml BCA工作液，37℃放置30分钟（增加孵育时间和温度能够增加562nm 的吸光度值和检测最低浓度，降低测量范围）。

5.冷却到室温，（BCA不会达到真正的反应终止点，当冷却到室温时颜色依然会产生。

但是在室温下颜色产生的效率非常低，在冷却后10分钟内测量完所有试管则无影响）用酶标仪测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

微孔板法
1.配制工作液（同上）。

2.稀释标准品：先将冻干标准品加入1ml0.9%NaCl或PBS稀释成10mg/ml的储存
液，然后储存液稀释至25～2000ug/ml。

管号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）终浓度（ug/ml）A240602000
B3090（从A管取）1500
C6060（从A管取）1000
D6060（从B管取）750
E6060（从C管取）500
F6060（从E管取）250
G6060（从F管取）125
H10025（从G管取）25
I6000(空白孔)
3.将25ul的标准品和合适浓度范围的样本分别加入96孔板的微孔中。

4.各孔加入200ul BCA工作液，充分混匀。

5.盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟。

6.
冷却到室温，用酶标仪测定注意事项：
1.在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育或微波几十秒使溶解,如发现细菌污染，则应丢弃。

2.样品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA 沉淀去除干扰物质。

3.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔且标准品与样品处理要尽量一样（如采用同样的溶液溶解样品和标准品）,每次均应做标准曲线。

4.当试剂A 和B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失。

5.需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595nm 之间，562nm 最佳。

酶标仪需与96孔酶标板配套使用。

使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。

使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

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P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书

P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书


使用说明：
1. 取0.8ml蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即 使用，也可以-20℃长期保存。
2. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20l 25mg/ml蛋白标准，加入980l稀释液即可配制成 0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS 稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。
15. Zong-Chun Yi, Hong Wang, Guang-Yao Zhang, Bing Xia. Downregulation of connexin 43 in nasopharyngeal carcinoma cells is related to promoter methylation. Oral Oncol. 2007 Feb 14;
注: 也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反 应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
常见问题：
1. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。 可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，详细的BCA法的兼容性列表请参考碧云天如下网页: /Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang. Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine. Toxicology Letters 159 (2005) 71–82.
BCA蛋白质定量试剂盒说明书

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螯合剂 EDTA
M 100mM
1M 100mM 100mM 100mM 20mM 200mM
4M 50mM
10mM
干扰物质 去垢剂 NP 40 TRITON X-100 SDS TWEEN20 混合物&极性化合物 PMSF Acetone Ethanol Glycerol Urea DMSO Sucrose
1 小时内即可完成蛋白质定量检测。本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA） 溶液作为蛋白质标准溶液，测定范围为 20～2000 ug/ml。
操作步骤：
1. 标准品的稀释：用与样品相同缓冲体系的稀释剂按下表对 BSA 标准品进
行稀释：
BSA 标准浓度配制表
管号 稀释剂体积 BSA 体积（来源） BSA 终浓度（ug/ml）
4. 微管测定方法： 1） 分别取 25ul 表格中新鲜配制的 BSA 标准液和待测样品，加入到 96 孔板中。 2） 每孔中加入 200ul BCA 工作液，并充分混匀。 3） 加盖，37℃孵育 30min 后冷却至室温或室温放置 2h。 4） 用紫外分光光度计于 562nm 处检测其吸光度。 5） 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
*PA115-01 试剂盒所携带的试剂可满足 50 次微管检测和 500 次微板检测。 **PA115-02 试剂盒所携带的试剂可满足 250 次微管检测和 2500 次微板检测。
储存条件：
BCA 试剂 A 和 BCA 试剂 B 室温储存。 BSA 标准品-20℃保存。
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
3. 标准比色杯测定方法： 1） 吸取 0.1ml 的每种标准品和待测样品置于合适的管中。 2） 加入 2.0ml 的 BCA 工作液, 彻底混匀。 3） 加盖，37℃孵育 30min 后冷却至室温或室温放置 2h。 4） 用紫外分光光度计于 562nm 处检测其吸光度。 5） 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
BCA蛋白浓度测定说明书

BCA蛋白浓度测定说明书

BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装CHEM001 BCA蛋白浓度测定试剂盒102ml包装清单：产品编号产品名称包装CHEM001A BCA试剂A 100mlCHEM001B BCA试剂B 3mlCHEM001C 蛋白标准（2mg/ml） 1.2ml—说明书1份产品简介：增强型BCA蛋白浓度测定试剂(Enhanced BCA Protein Assay)是常用蛋白浓度测定方法之一。

Viagene的BCA测定试剂测定方法简单，稳定性好，灵敏度高和抗干扰性强。

增强型BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。

能够耐受低浓度的EDTA、EGTA、二硫苏糖醇，但高浓度螯合剂和还原剂可能会对测定有影响。

增强型BCA蛋白浓度测定试剂适合用于测定Western Blotting样品，EMSA核提取液的蛋白浓度。

检测灵敏度达到10μg/ml。

按照本说明书操作，每套试剂可进行145次比色杯法测定或500次微板法测定。

比色杯法测定的BCA工作液用量较微板法多，但抗干扰性强，结果更准确。

使用说明：A.比色杯法测定1、根据待测定样品数算出所需BCA工作液总体积（每个测定需0.7ml工作液），按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。

BCA工作液在室温可稳定24小时。

2、试管编号，按以下操作。

管号S0 S1 S2 S5 S10 S20 S40 样品xH2O （µl）20 19.5 19 17.5 15 10 0 20样品制备液（µl） 4 4 4 4 4 4 4 －蛋白标准液（µl）0 0.5 1 2.5 5 10 20 －样品体积－－－－－－－ 4反应体积24 24 24 24 24 24 24 24 BCA工作液（ml）0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7蛋白浓度（µg/µl）0 1 2 5 10 20 40 待定注：1）标准曲线一般做4个点加一个空白。

BCA蛋白定量

BCA蛋白定量

BCA蛋白定量试剂盒配制及内部操作SOP一、BCA试剂盒配制流程1、标准品配制：配制2mg/ml的BSA标准品，以50ml为例，各成分加入量如下表：原料浓度加入量（mg）厂家货号牛血清白蛋白（BSA）0.2%100北京（二楼生产部提供）YSCW2500氯化钠（NaCl）0.9%450国药集团化学试剂有限公司10019308叠氮化钠0.05%25成都金山化学试剂有限公司/注意：为了确保检测的准确性，应用微量天平精准称量100mg，然后定容至50ml，1ml/管分装，4℃保存。

2、工作液配制由于A液和B液加入比例为50:1，因此配制工作液时A液各成分加入量按照1000ml配制量加入，B液成分按照25ml配制量加入。

原料浓度加入量（g）厂家货号A液（1000ml）二喹啉甲酸（BCA）1％10aladdin B107658无水碳酸钠2％20天津博迪化工股份有限公司/碳酸氢钠0.95%9.5国药集团化学试剂有限公司10018960酒石酸钠0.16% 1.6国药集团化学试剂有限公司30169818氢氧化钠0.4％4国药集团化学试剂有限公司10019762B液（25ml）硫酸铜4％1国药集团化学试剂有限公司81005261备注：A液各成分混合之后，调节PH至11.25。

二、BCA法蛋白定量操作SOP1、标准品稀释按照下表制备一组蛋白质标准品。

将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的小瓶中，最好使用与待测样品相同的缓冲液。

每一个1mL安瓿的2mg/mL牛血清白蛋白标准品足够用于制备下表中所列出的任意一组稀释范围的标准品；每个稀释浓度的标准品的体积足够用于3次重复检测。

用于标准方案的稀释方法（检测范围=20-2,000ug/mL）如下：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A03002000B125375ul的A1500C325325ul的A1000D175175ul的B750E325325ul的C500F325325ul的E250G325325ul的F125H400100ul的G25I40000用于试管增强方案的稀释方法如下（检测范围=5–250ug/mL）：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A700100250B400400ul的A125C450300ul的B50D400400ul的C25E400100ul的D5F400002.样品稀释：根据需要，将样品用用PBS或者与待测样品缓冲液相同的溶液稀释至线性范围内（所用稀释液与标准品稀释液应保持一致）。