P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书

BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装价格P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒500次258.00 元O 碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。

O 灵敏度高，检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1-20微升。

O 在50-2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。

O BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。

但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。

不适用BCA法时建议使用碧云天Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

O BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表，参见BCA蛋白浓度测定兼容性表。

O 每个试剂盒可以检测500个样品。

包装清单：BCA试剂A 100 mlBCA试剂B 3 ml蛋白标准（5mg/ml BSA） 1 ml说明书 1 份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。

本试剂盒自订购之日起一年注意事项：O 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。

需96孔板。

如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液,B液和样品的体积。

使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

O 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

O 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

O EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。

不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒 500次产品简介：¾BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。

¾灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。

¾在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

¾BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。

但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。

不适用BCA法时建议试用碧云天生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)。

¾BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质的详细的兼容性，请参见碧云天如下网页:/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf¾每个试剂盒可以检测500个样品。

包装清单：产品编号产品名称包装P0012-1 BCA试剂 A 100mlP0012-2 BCA试剂 B 3mlP0012-3 蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml—说明书1份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。

本试剂盒自订购之日起一年内有效。

注意事项：¾需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。

需96孔板。

如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。

BCA法测定蛋白浓度-酶标仪一、药品1.BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500次酶标仪，碧云天），含以下成分：a)BCA试剂A（P0012-1，100ml，碧云天），室温保存b)BCA试剂B（P0012-2，3ml，碧云天），室温保存c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（P0012-3，1ml，碧云天），-20度保存二、仪器和试剂1.酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm最佳），水浴锅2.96孔单条可拆酶标板（平底）3.15 ml 离心管1个（准备BCA工作液用）4. 1.5 ml 离心管1个（准备蛋白标准品工作液用）5.单道移液器和枪头，8道移液器（排枪）和枪头6.PBS三、操作步骤1.水浴锅调至37℃。

2.蛋白标准品工作液（1 mg/ml）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-20℃冰箱中取出，完全溶解并混匀。

取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240μl PBS，即稀释5倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。

3.计算BCA工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。

BCA工作量按50体积的BCA试剂A加上1体积的BCA试剂B配制（即50:1），需充分混匀。

BCA 工作液室温24小时内稳定。

4.按下表配制8个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。

5.将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。

（1）先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS液各18μl，使总量达到20μl。

（此时蛋白样本的稀释比为10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml时。

如预计蛋白浓度太高或太低，可适当调整稀释比例）（2）再在第1~2条酶标板的蛋白标准品孔（S0~S7）中加入上面配制的8个蛋白标准液各20μl。

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A S0 S0 N1 N1B S1 S1 N2 N2C S2 S2 N3 N3D S3 S3 N4 N4E S4 S4 N5 N5F S5 S5 N6 N6G S6 S6 N7 N7H S7 S7 N8 N86.用排枪在各孔中加入200μl BCA工作液，轻轻摇匀，37℃放置30分钟或室温放置2小时。

BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装价格P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒500次258.00 元O 碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。

O 灵敏度高，检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1-20微升。

O 在50-2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。

O BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。

但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。

不适用BCA法时建议使用碧云天Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

O BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表，参见BCA蛋白浓度测定兼容性表。

O 每个试剂盒可以检测500个样品。

包装清单：BCA试剂A 100 mlBCA试剂B 3 ml蛋白标准（5mg/ml BSA） 1 ml说明书 1 份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。

本试剂盒自订购之日起一年注意事项：O 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。

需96孔板。

如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液,B液和样品的体积。

使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

O 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

O 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

O EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。

不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明BCA法（bicinchoninic acid assay）是一种用于测定蛋白质含量的常用方法。

BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明如下：试剂盒组成：1.BCA试剂A：含有重铜离子和碱性溶液。

2.BCA试剂B：含有双咪唑试剂和碱性溶液。

3.蛋白标准溶液：一系列已知浓度的牛血清蛋白标准溶液。

4.BCA试剂C：含有特殊缓冲溶液。

注意事项：1.所有试剂和样品在使用前均需室温下静置至少30分钟。

2.打开试剂盒后，避免将试剂直接暴露于空气中，以免影响试剂稳定性。

3.在所有步骤中，使用干净且蛋白污染的工具可能会导致错误的结果。

步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的蛋白标准溶液，如0、20、40、60、80和100μg/mL。

2.取0.1mL蛋白标准溶液加入1.9mL去离子水，即配制出100μg/mL的稀释溶液。

3.以同样的方法依次配制出20、40、60和80μg/mL的稀释溶液。

4.将每个稀释溶液的0.2mL与2mLBCA试剂A混合，放置30分钟。

5.加入0.5mLBCA试剂B，再次混合均匀。

6.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。

7. 使用紫外-可见光谱仪测定吸光度，以280 nm为波长，绘制标准曲线。

步骤2：测定待测样品1.取待测样品，如细胞裂解液，加入BCA试剂C进行稀释，使得样品中的蛋白质浓度在标准曲线范围内。

2.取样品0.1mL加入1.9mL去离子水，配制出与标准曲线相同浓度的稀释液。

3.加入1mLBCA试剂A混合均匀，放置30分钟。

4.加入0.2mLBCA试剂B，再次混合均匀。

5.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。

6. 使用280 nm波长的紫外-可见光谱仪测定吸光度。

步骤3：计算蛋白质含量1.将待测样品的吸光度值与标准曲线进行比较，根据吸光度值确定样品中蛋白质的含量。

2.通过线性拟合标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。

BCA蛋白定量试剂盒使用说明书一、产品简介BCA 蛋白定量试剂盒是一种常用的蛋白质浓度测定方法，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点。

本试剂盒适用于细胞裂解液、组织匀浆、血清、血浆等多种样品中总蛋白浓度的定量测定。

二、试剂盒组成1、 BCA 工作液：A 液与 B 液按 50:1 的比例混合而成，现配现用。

2、蛋白标准品（2mg/ml）：牛血清白蛋白（BSA）溶液。

3、 96 孔板三、所需设备1、酶标仪（波长 562nm）2、移液器（量程分别为20μl、200μl、1000μl）3、涡旋振荡器4、离心机四、操作步骤1、标准曲线的绘制（1）将蛋白标准品（2mg/ml）用 PBS 或生理盐水稀释成一系列浓度梯度，如0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml、2000μg/ml。

（2）在 96 孔板中，每个浓度梯度设置 2 个复孔。

分别向孔中加入25μl 不同浓度的标准品溶液。

（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。

（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定吸光度值（OD 值）。

（5）以蛋白浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品测定（1）将待测样品用 PBS 或生理盐水适当稀释（若样品浓度过高，可能会超出标准曲线范围）。

（2）在 96 孔板中，设置样品孔和空白孔（仅加25μl 稀释液和200μl BCA 工作液）。

向样品孔中加入25μl 稀释后的样品。

（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。

（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定样品孔和空白孔的吸光度值（OD 值）。

（5）样品的蛋白浓度可根据标准曲线计算得出。

五、注意事项1、 BCA 工作液应现配现用，避免长时间放置导致失效。

产品使用说明书BCA 蛋白定量试剂盒试剂盒简介以下货号试剂盒可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB380）。

BCA Protein Assay Kit ：500 / 2500 rxn 货号71285-3BCA 蛋白定量方法是基于双缩脲反应，即在碱性溶液中蛋白将Cu 2+ 还原成Cu 1+，而根据检测到的单价Cu 离子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。

Bicinchoninic acid 是一种显色剂，可以螯合被还原的铜离子，产生一种在562nm 有强吸收的紫色复合物。

Novagen 的BCA 试剂盒可以用于测定浓度在20-2,000µg/ml 范围内的蛋白的浓度，根据样品量分为标准型和微型两种形式进行测定。

试剂盒提供的组分足够用于500次标准型反应（50µl 蛋白样品加上1ml 反应试剂）或2,500次微型测定（25µl 蛋白样品加上200µl 反应试剂，可以在96孔板中进行高通量定量）。

试剂盒中提供的BSA （牛血清白蛋白，2mg/ml ）为用户制作标准浓度曲线提供了便利。

Novagen 的BCA 试剂盒准确度高，兼容性好，能与各种化学试剂和表面活性剂兼容，可以方便地配合默克Novagen 的BugBuster ®，PopCulture ®，CytoBuster™，Reportasol™和Insect PopCulture 抽提蛋白的细胞裂解试剂一起使用。

有些化学成分，例如螯合剂，强酸、强碱、还原剂等，可能会干扰BCA 法采用的还原及螯合定量过程，详细情况请看说明书后附列表。

试剂盒提供的组分500ml BCA 反应液（0.1M NaOH 缓冲的bicinchoninic acid ，碳酸钠，酒石酸钠，碳酸氢钠，pH11.25） 15ml 4% 硫酸铜3×1ml BSA 标准品（2mg/ml ）储存室温存放。

BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在20-2000μg/ml内。

货号：BC1720规格：100T/96S产品内容：试剂A：液体×1瓶，4℃保存。

试剂B：液体×1支，4℃保存。

标准品：液体×1支，4℃保存。

产品说明：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。

此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理：碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm 处吸收峰最强。

自备仪器和用品：台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。

操作步骤：一、样品中可溶性蛋白质提取：1.液体样品：澄清液体样品可以直接测定。

2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水），冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。

（动物样品常常需要稀释）3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定操作：1.可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562nm，蒸馏水调零。

2.工作液置于60℃水浴预热30min。

空白管标准管测定管蒸馏水（μL）4标准品（μL）4待测液（μL）4工作液（μL）200200200混匀后置于60℃保温30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。