精心整理抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）说明书
【产品名称】抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）
【通用名称】Anti-Cardiolipin ELISA(lgG)
【包装规格】
血小
、
（类风
子宫内梗死。
心肌或大脑死后检测出高浓度的抗心磷脂抗体预示出现其他血管并发症的危险率增高，也是梗死后病情和预后监测的指标。
抗心磷脂抗体可有lgA、lgG或lgM亚型，诊断价值最高的是高浓度的lgG抗体，但很多患者血清中可检测出lgA和lgM型抗心磷脂抗体。才外，有证据表明高浓度的抗心磷脂lgG型抗体与血小板减少症高度相关，而高浓度的抗心磷脂lgM型抗体和溶血性贫血高度相关。
【检验原理】试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有心磷脂的微孔。第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。在很多情况下，抗心磷脂抗体识别抗原需要血浆蛋白（β2-糖蛋白1）作为辅助因子，为此，反应体系必含有这一辅助因子，如果样本阳性，特异性lgG（包括lgA和lgM）与抗原相结合，为了检测结合的抗体，可加入发生颜色反应的酶标抗人lgG抗体（酶结合物）进行第二次温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。
【主要组成成分】
1、不同批号试剂盒内的酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液可互换。【储存条件及有效期】2-8℃保存，不要冰冻。未开封前，除非特别说明，试剂盒中各成分自生产之日起可稳定1年。
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2
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样本
稳定性
注意：
注意：所有试剂在使用前均在室温（18-25度）平衡30分钟。从第一次使用起，实际在2-8℃保存并无污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。
-抗原包被微孔：直接使用，在外包装密封线咬合部的上段剪开保护袋，为防止板条受潮，只有当微孔板平衡到室温后才可以打开包装。剩余的孔应立即放回保护袋并封好（保存干燥剂）、从第一次打开保护带起，抗原包被的微孔可在干燥的2-8℃的环境中至少保存4个月。
-标准品和对照血清:直接使用，使用前应充分的混匀。
-酶结合物：10倍浓缩，使用前应充分混匀，用干净的吸管吸取需要量的酶结合物用样本缓冲液1:10稀释，如：需温育一条微孔板条。则可取0.1ml浓缩酶结合物用0.9ml样本缓冲液稀释。已稀释的酶结合物必须在4个月内使用。
-样本缓冲液：直接使用
-清洗缓冲液：10倍浓缩。如果浓缩清洗缓冲液中出现结晶，稀释前应加热到37度并充分混匀溶解。用干净吸管从瓶中吸取需要量的浓缩清洗缓冲液用蒸馏水1:10稀释（1份浓缩清洗缓冲液加9份蒸馏水）。如：需清洗一条微孔板，则可取5ml浓缩液清洗缓冲液用45m蒸馏水稀释。稀释后的
1、
照或
应将微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残留的清洗液。
注意：清洗后遗留在微孔中的残夜（＞10ul）可干扰底物反应而导致吸光度值偏低。
清洗不充分（如少清洗少于3次，清洗液太少或清洗液清洗时间太短）可能导致吸光
度值偏高。
微孔反应板条上的空位应添上与测定的微孔反应同规格的空反应微孔。
酶结合物温育：滴加100ul酶结合物至每一个微孔，室温（18-25℃）温育30分钟。
清洗：倒掉微孔板内的液体，如上述步骤清洗。
底物温育：滴加100ul色原/底物液至每一微孔，室温（18-25℃）避光温育15分钟。
终止反应：以与加色原/底物液相同速度和顺序滴加100UL终止液至每一微孔。
比色：450nm比色，参考波长620-650nm，加完终止液后30分钟之内比色，比色前，轻轻振动微孔板以使液体扩散均匀。
加样方案
1-4微孔板条加样方案是对24份患者样本（P1-P24）进行半定量检测的示例。
7-10微孔板条加样方案是对24份患者样本（P1-P24）进行定量检测的示例。
标准品（C1-C3）、阳性对照（POS）、阴性对照（NEG）和患者样本（P1-P24）各在孔中温育。没分样本复孔检测可提高实验性的可靠性。
每一微孔可从板条上取下，这样可根据样本的数量选择试剂的用量，减少试剂的浪费。
阳性和阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次试验都必须做。
【参考范围】用本检测系统检测了406份健康献血员工血清中国抗心磷脂lgG抗体水平，以12PL-lgG-U/ml作为临界值，所有献血员工血清抗心磷脂lgG抗体阴性。
曲线图
如果患者样本的吸光度超出了标准品1的值（120PL-lgG-U/ml），结果为大于120PL-lgG-U/ml，建议将样本1:800稀释后重新测定，从标准曲线计算出的数据再乘以4即为赝本中的抗体的浓度。
欧蒙推荐的正常范围的上限（CUT-OFF）为12PL-lgG-U/ml。
欧蒙推荐对实验结果做如下解释：
＜12PL-lgG-U/ml：阴性
≥12PL-lgG-U/ml：阳性
复孔检测应取两孔检测结果的平均值进行计算。如果两孔间的值相差过大，应重做试验。
应结合病人的临床症状和血清学检查结果进行诊断。
【产品性能指标】
定标：标准品采用国际人标准血清（Louisville APL Diagnostics, USA）订标，标准品单位为
PL-lgG-U/ml。1 PL-lgG-U/ml定义为经亲和层析从标准血清（Harris et.al 1987）纯化得到的1 ug/ml
（如磷脂酰乙醇胺）反应。
2120lgG-PL-U/ml
曲线图
度。本检测系统的最低检出限为0.8lgG-PL-U/ml。
脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱）反应，没有其他交叉反应。
的黄疸对检测结果没有干扰。
复性。批内检测的CV基于20次检测的结果，而批间的CV则基于不同6天、每天4次检测的结果。
阳性发生率和特异性：21份APS患者血清中抗心磷脂抗体lgG的阳性发生率为67%。对照血清盘（HIV/HBV或者HCV患者血清n=247:健康献血者血清n=406）检测结果显示：本检测系统的特异性为100%。
【注意事项】
警示：（1）本检测试剂仅用于体外诊断。
