欧蒙抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒酶联免疫吸附法说明方案完整版

酶联免疫吸附试验流程介绍酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验室技术，用于检测生物样本中的特定蛋白质或其他分子。

ELISA技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。

本文将详细介绍ELISA的流程及其相关要点。

一、试剂准备在进行ELISA实验之前，需要准备一系列试剂和材料，包括涂板、标准样品、检测抗体、辅助试剂等。

下面是一份常用的试剂列表：1.涂板：通常使用96孔的微孔板，常见的材料有聚苯乙烯或聚碳酸酯。

要确保涂板的表面是光洁的，没有污染或缺损。

2.标准样品：用于构建标准曲线，测定待测样本中目标分子的浓度。

标准样品的浓度应该覆盖到待测样本的浓度范围。

3.抗原或抗体：用于偶联到涂板表面或用作检测物。

抗原可以是待测分子，抗体可以是单克隆或多克隆抗体。

4.阻断剂：用于阻止非特异性结合，并降低背景信号的产生。

常用的阻断剂包括牛血清白蛋白（BSA）或干酪蛋白。

5.洗涤缓冲液：用于洗涤涂板，去除非特异性结合物。

6.辅助试剂：如辅酶、辅酶底物等，用于增强信号或催化染色反应等。

二、典型的ELISA流程下面是一个典型的ELISA流程，包括固相吸附、孔洗涤、抗原或抗体结合、检测抗体结合和信号发生等步骤。

具体流程如下：1. 固相吸附1.将待测样本加入涂板中，使目标分子与涂板表面相互作用；2.孵育一段时间，使待测分子与涂板表面结合；3.倒掉涂板中的待测样本，洗涤孔洞以去除未结合的物质。

2. 孔洗涤1.向涂板中加入洗涤缓冲液，使孔洞充分浸润；2.轻轻倾斜涂板，将洗涤缓冲液倒出，去除未结合的物质；3.重复以上洗涤步骤2-3次，以确保洗涤干净。

3. 抗原或抗体结合1.向涂板中加入检测抗体，与目标分子结合；2.孵育一段时间，使检测抗体与目标分子发生特异性结合；3.倒掉涂板中的检测抗体，洗涤孔洞以去除未结合的物质。

4. 孔洗涤请参考步骤2中的孔洗涤步骤。

人免疫球蛋白D（IgD）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中IgD含量。

实验原理用纯化的IgD抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的IgD抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的IgD 呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。

每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000ug/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成1,000ug/ml，500ug/ml，250ug/ml，125ug/ml，62.5ug/ml，31.2ug/ml，15.6ug/ml，样品稀释液直接作为空白孔0 ug/ml。

如配制500ug/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1,000ug/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、样品稀释液：1×20ml。

4、检测稀释液A：1×10ml。

5、检测稀释液B：1×10ml。

6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液B1:100稀释。

稀释方法同检测溶液A。

8、底物溶液：1×10ml/瓶。

抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）说明书【产品名称】抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）【通用名称】Anti-CardiolipinELISA(lgG)【包装规格】【预期用途】用于体外定量或半定量检测人血清或血浆中抗心磷脂抗体lgG。

适应症：抗磷脂综合症临床意义：与抗心磷脂抗体相关的临床并发症统称为抗心磷脂综合症：静脉和动脉血栓形成、血小板减少症、自发性流产、死胎和早产、中枢神经系统症状（包括头痛到大脑血栓形成等各种症状）、骨坏死的早期体征、肺高压。

抗心磷脂抗体见于50%的系统性红白狼疮患者和约5-40%的其他系统自身免疫异常患者（类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合症、夏普综合症等）。

抗心磷脂抗体阳性的患者有发展为静脉和动脉血栓的危险（高浓度抗心磷脂抗体的患者发病风险约为80%）。

自发性流产、死胎和早期患者经常可检抗心磷脂抗体，与是否存在自身免疫性疾病的征状无关。

但系统性红白狼疮患者更容易出现孕期并发症（达77%），可能的原因包括静脉血栓形成所致子宫内梗死。

心肌或大脑死后检测出高浓度的抗心磷脂抗体预示出现其他血管并发症的危险率增高，也是梗死后病情和预后监测的指标。

抗心磷脂抗体可有lgA、lgG或lgM亚型，诊断价值最高的是高浓度的lgG抗体，但很多患者血清中可检测出lgA和lgM型抗心磷脂抗体。

才外，有证据表明高浓度的抗心磷脂lgG型抗体与血小板减少症高度相关，而高浓度的抗心磷脂lgM型抗体和溶血性贫血高度相关。

【检验原理】试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有心磷脂的微孔。

第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。

在很多情况下，抗心磷脂抗体识别抗原需要血浆蛋白（β2-糖蛋白1）作为辅助因子，为此，反应体系必含有这一辅助因子，如果样本阳性，特异性lgG（包括lgA和lgM）与抗原相结合，为了检测结合的抗体，可加入发生颜色反应的酶标抗人lgG抗体（酶结合物）进行第二次温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。

精选全文完整版酶联免疫吸附试验（ELISA）的程序第一节间接ELISA试验一用可溶性抗原的ELISA：1、纯化抗原：用包被液稀释至1—20ug/ml；2、以50—100ul/孔量加入酶标板孔中；3、置4（度）过夜或37（度）吸附3h；4、PBST洗三次；5、每孔200ulPBS/NCS 4（度）过夜封闭或37（度）封闭3h；6、PBST洗5次，每次1min（包被板可—20（度）或许（度）保存备用）7、每孔加50—100ul第一抗体，同时设阳性、阴性对照。

若杂交瘤筛选，每孔加杂交瘤培养上清；8、37（度）孵育2h9、PBST洗5次，每次5min10、每孔加50—100ul酶标第二抗体；若杂交瘤筛选，每孔加HRP 标记的抗小鼠（IgG+IgM）抗体；11、37（度）孵育2h12、PBST洗5次，每次数5分钟；13、每孔加OPD 或TMBS底物100ul14、37（度）避光作用；（OPD为10—20）分钟，TMBS为40分钟）；15以50ul2MH2SO4终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值（OPD底物选用490nm滤光片，TMBS底物选用450nm滤:光片）；16结果判定：（1）P/N≥2.1 为阳性(2) P≥N+3SD 为阳性成功范例:NDV单抗检测，粘附素单抗检测，H单抗检测亚类鉴定和鸡白痢检疫等。

二、用全菌抗原的ELISA法（一）GA法1、新鲜培养的细菌用蒸馏水悬浮，光密度法或比浊法调整细菌浓度至1X10（6）个/ml。

注意：沙门氏菌等人畜共患病原体，使用前必须灭活或采用市售的灭活诊断菌液；2、酶标板中加200ul/孔，5%戊二醛（GA）溶液（0.1M NaHCO4 95ml+25%DNY戊二醛溶液5ml）;37(度);2小时3、蒸馏水洗5次;4、加细菌悬浮液,50ul/孔;5、37(度)温箱内过液,干燥吸附(20—24h)6、加PBS/NCS 220ul/孔37（度）封闭3小时或4（度）过夜封闭；7、PBST洗5次（—20（度）或4（度））存放备用；8、以下步骤同一。

抗心磷脂体抗体检测1. 检验目的用于体外定性检测人血清或血浆中抗ACA-IgG、IgM、IgA的水平。

2. 方法原理包被纯化的心磷脂抗原与待测样品中的ACA-IgG、IgM结合，加入酶标抗体后，形成复合物，后者与底物作用呈显色反应，在450nm处测定其吸光度（OD）值，反映样品中ACA-IgG、IgA、IgM水平是否正常。

3性能参数阴性参考品血清、阳性参考品血清应符合阴阳性参考品血清要求，最低检测限符合最低检出限的检出要求，精密度CV（%）不高于15%，37℃放置6天产品性能稳定。

4.始样品系统4．1标本类型：血清或血浆4．2采血严格按照静脉采血的通用规则。

4．3样本在离心前，须凝固充分。

4．4不能使用在室温下放置超过8小时的样本。

4．5如果检测不能在8小时内完成，要将瓶盖紧闭，并存于2—8℃保存。

4．6如果样本在48小时内不检测，将样本血清冻存于-20℃。

4．7样本只能冻融一次。

4．8加样前样本须无纤维、气泡及其它物质。

4．9标本的拒收：严重溶血、脂血、血量不够、三查三对不合格者拒收。

5容器和添加物的类型5.1无抗凝剂的红色或黄色胶头真空试管。

5.2EDTA、肝素抗凝的紫色、绿色胶头真空试管。

6设备和试剂6.1分析仪器：酶标分析仪：TECAN公司移液器：5μl～450μl移液器恒温水浴箱：上海一恒公司的CU420微孔振荡器：分析试剂: ASKI ELISA法检测试剂盒6.2 组成：6.2.1 纯化抗原包被反应条：室温平衡30分钟方可拆开包装6.2.2 酶结合物：用于酶联反应6.2.3 阳性对照：用于阳性对照反应6.2.4 阴性对照：用于阴性对照反应6.2.5 样本稀释液：用于稀释样本6.2.5 浓缩洗涤液：用前以蒸馏水作30倍稀释6.2.6 底物A：用于显色反应6.2.7 底物B：用于显色反应6.2.8 终止液：用于终止显色反应6.3 试剂保存与有效期6.3.1 新购试剂保存于2-8℃，勿冷冻，在有效期内使用。

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）QuicKey-人免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书QuicKey Human IgG (Immunoglobulin G) ELISA Kit产品货号：E-TSEL-H001196T/48T/24T使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话************QQ客服800110755具体保质期请见试剂盒外包装标签。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

QuicKey系列与传统ELISA试剂盒相比，在实验时间节省至少1小时的同时，获得更加灵敏和精确的实验结果。

Elabscience 自主开发的新技术，旨在帮助客户以更为高效的方式进行科学研究。

用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、尿液、唾液中IgG 浓度。

其它相关生物液体请咨询技术支持。

灵敏度、检测范围、特异性和重复性●灵敏度：0.64ng/mL。

●检测范围：1.56-100ng/mL。

●特异性：可检测样本中的人IgG ,且与其它类似物无明显交叉反应。

●重复性：板内，板间变异系数均<10%。

背景介绍免疫球蛋白G（IgG）是一种存在于所有体液中的免疫球蛋白。

它们是体内最小但最常见的抗体(75%到80%)。

IgG抗体是由4个肽链组成的大分子，约150 kDa，包含2个相同的约50 kDa的γ重链，和两个相同的约25kDa的轻链，由此形成一个四聚体的结构。

IgG抗体在对抗细菌和病毒感染方面非常重要,而且是唯一一种能够通过孕妇胎盘帮助胎儿的抗体。

如果机体有特定的症状，IgG的测量可以作为诊断某些疾病的工具，如自身免疫性肝炎。

在临床上，检测到的IgG抗体水平通常被认为是个体对特定病原体的免疫状态的指示物。

这一做法的一个常见例子是，为了证明对麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)、乙型肝炎病毒和水痘等的血清学免疫力而绘制的滴度图。

欧蒙抗核抗体谱I g G检测标准操作规程精编W O R D版IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。

2.适用范围检验科免疫组工作人员。

3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。

5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征），原发性胆汁性肝硬化。

6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。

可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。

在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。

因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。

[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件及有效期： 2-8°C保存，不要冷冻。

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。

2.适用围检验科免疫组工作人员。

3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A〔天然 SS-A 和 Ro-52〕、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。

5.适应症：夏普综合征〔MCTD〕，系统性红斑狼疮〔SLE〕，枯燥综合征，进展性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进展性系统性硬化症〔CREST 综合征〕，原发性胆汁性肝硬化。

6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分〔细胞核的生化成份〕[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白与核糖蛋白。

可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。

在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。

因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病确实认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。

[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征〔混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮〔SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—枯燥综合征〔原发性枯燥综合征〕[5],—系统性硬化症〔系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症〔CREST 综合征〕 [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件与有效期： 2-8°C 保存，不要冷冻。

抗心磷脂、抗卵巢、抗子宫内膜、抗精子IgG抗体联合检测试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：本试剂盒用于体外定性检测人血清或血浆中的抗心磷脂、抗卵巢、抗子宫内膜及抗精子IgG抗体水平。

1.1产品规格：20人份/盒。

1.2 组成：1.2.1检测卡：1人份/袋×20袋,由样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成。

硝酸纤维素膜上检测线包被各检测项目的重组纯化抗原（包括重组心磷脂抗原、重组卵巢抗原、重组子宫内膜抗原及重组精子抗原）、质控线包被羊抗鼠IgG多抗，金标垫上固定胶体金标记的鼠抗人IgG单抗。

1.2.2样本稀释液：5mL/瓶×2瓶，20mM pH7.4 磷酸盐缓冲液。

2.1 物理检查2.1.1 外观外观平整，材料附着牢固，内容齐全，试剂无杂质，外包装完整无破损，标签清晰可辨。

2.1.2 样本稀释液净含量样本稀释液的净含量应不少于5ml。

2.1.3 膜条宽度膜条宽度应为3.8～4.2mm。

2.1.4 液体移行速度液体移行速度应不低于10mm/min。

2.2 临界值本试剂盒检测抗心磷脂IgG抗体、抗卵巢IgG抗体、抗子宫内膜IgG抗体、抗精子IgG抗体的临界值均为各自对应抗体滴度1:12。

检测卡各项目分别检测对应抗体滴度为1:8的阳性企业参考品，各个项目均重复检测20次，检测结果均为阳性反应。

检测卡各项目分别检测对应抗体滴度为1:16的阳性企业参考品，各个项目均重复检测20次，检测结果均为阴性反应。

2.3 特异性于试剂盒检测卡对应项目分别检测下表1所示干扰物质，每份干扰物质重复检测3次，检测结果均为阴性反应。

表1 干扰物质检测列表备注：“—”表示该项目未检测。

2.4 批间差抽取三个批次的检测卡/检测条，每个批次20人份，按2.2临界值的检验方法，分别检测各项目抗体滴度为1:8的阳性企业参考品，反应结果应显色均一，且均为阳性。

抽取三个批次的检测卡/检测条，每个批次20人份，按2.2临界值的检验方法，分别检测各项目抗体滴度为1:16的阴性企业参考品，反应结果均为阴性。

梅毒特异性IgG、IgM抗体分型检测方法的建立与临床应用摘要梅毒是一种常见的传播疾病，由梅毒螺旋体感染人体而发生，可累及全身各个器官且临床表现多样，具有极强的侵袭能力，严重危害到人类身体健康，是最为重要的性传播疾病之一[1]。

梅毒感染的病原体—苍白螺旋体（TP）很难在体外培养，因此，很难通过病原微生物培养进行诊断。

梅毒诊断主要依据患者的临床表现和实验室检查结果[2-4]，包括以抗心磷脂抗体（反应素）为检测对象的非特异性类脂质抗原检测方法和以梅毒螺旋体抗体为检测对象的特异性检测方法两类。

特异性检测结果只能反应梅毒特异性总抗体的存在情况。

检测结果不能区分所检测抗体的类型，即不能判定是IgG还是IgM类型的抗体，也就不能判断患者是既往感染还是现症感染。

梅毒特异性IgM抗体的直接检测方法需要特殊的商品化试剂盒，操作步骤多，检测时间长，多为批量检测方法，无法在临床大规模应用。

本研究的第一部分：构建含梅毒螺旋体特异性抗原TP47基因片段的重组质粒，诱导表达TP47蛋白并纯化。

将纯化后的TP47蛋白进行免疫印迹（weatern blot，WB）检测，对重组蛋白抗原性进行确认。

结果显示：重组蛋白TP47能与梅毒阳性血清有特异性反应，与正常人梅毒阴性血清、自身免疫性疾病患者混合血清无反应。

本研究的第二部分：设计并制造一个能实现半自动化的亲和层析分离梅毒IgG和IgM抗体的装置，并验证装置的稳定性。

制备亲和柱和脱盐柱，按照实验顺序分别装填入亲和装置中，优化亲和层析及脱盐条件。

结果显示：亲和层析装置稳定性良好，无漏液、无管道污染、无非特异性吸附等问题；优化后亲和柱实验条件，即（1）样本上样液为500ul；（2）亲和柱的平衡液为20mM含5g/l的NaCL PH=7.5的Tris-HCL缓冲液4ml；（3）亲和柱的洗脱液为3M KSCN，洗脱体积为2ml。

此时亲和填料可充分结合特异性梅毒抗体，并且平衡液4ml平衡后可去除非特异性IgG、IgM蛋白的残留；优化后脱盐柱实验条件，即（1）上样液为200ul的亲和柱洗脱液第2管；（2）脱盐柱的平衡液为20mM含5g/l 的NaCL PH=7.5的Tris-HCL缓冲液1ml；（3）脱盐柱的洗脱液为0.2M NaOH，洗脱体积为2ml。

人抗心磷脂IgM抗体(ACA-IgM)ELISA检测试剂盒使用方法人(Human)抗心磷脂IgM抗体(ACAIgM)ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗原，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的抗心磷脂抗体IgM（ACAIgM）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗原HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48 MPL U/ml试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）说明书【产品名称】抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）【通用名称】Anti-CardiolipinELISA(lgG)【包装规格】血小、（类风也是梗死后病情和预后监测的指标。

抗心磷脂抗体可有lgA、lgG或lgM亚型，诊断价值最高的是高浓度的lgG抗体，但很多患者血清中可检测出lgA和lgM型抗心磷脂抗体。

才外，有证据表明高浓度的抗心磷脂lgG型抗体与血小板减少症高度相关，而高浓度的抗心磷脂lgM型抗体和溶血性贫血高度相关。

【检验原理】试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有心磷脂的微孔。

第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。

在很多情况下，抗心磷脂抗体识别抗原需要血浆蛋白（β2-糖蛋白1）作为辅助因子，为此，反应体系必含有这一辅助因子，如果样本阳性，特异性lgG（包括lgA和lgM）与抗原相结合，为了检测结合的抗体，可加入发生颜色反应的酶标抗人lgG抗体（酶结合物）进行第二次温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。

【主要组成成分】1、不同批号试剂盒内的酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液可互换。

【储存条件及有效期】2-8℃保存，不要冰冻。

未开封前，除非特别说明，试剂盒中各成分自生产之日起可稳定1年。

1、包被有抗原的微孔板：自第一次开封后，抗原包被的微孔板在干燥的2-8℃的环境中保存至少4个月。

2、酶结合物：稀释后的酶结合物必须在稀释后的4小时内试用。

3、清洗缓冲液：稀释后的缓冲液于2-8℃最多可稳定一个月。

℃保存、从第一-标准品和对照血清:-酶结合物：10倍浓缩，使用前应充分混匀，用干净的吸管吸取需要量的酶结合物用样本缓冲液1:10稀释，如：需温育一条微孔板条。

则可取0.1ml浓缩酶结合物用0.9ml样本缓冲液稀释。

已稀释的酶结合物必须在4个月内使用。

-样本缓冲液：直接使用-清洗缓冲液：10倍浓缩。

如果浓缩清洗缓冲液中出现结晶，稀释前应加热到37度并充分混匀溶解。

酶联免疫吸附(ELISA)实验具体步骤及详细说明酶联免疫吸附(ELISA )可以:(1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位o(2)研究抗酶抗体的合成。

(3 )显现微量的免疫沉淀反应。

(4 )定量检测体液中抗原或抗体成份。

本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体Z经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合Z经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定Z底物降解的量即为欲测抗原的量。

这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位,因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用Z而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。

因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。

我们用在霍乱肠毒素的测定。

HbSAg及HbS 的测定。

具体步骤—、包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度(1 ~ 10 ug /ml),每凹孔加0.3 ml , 4°C过夜Z或37。

C水浴3小时,贮存冰箱。

二、洗涤：移去包被液Z凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20 )洗3次，每次5分钟。

三、每凹孑I J加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37°C作用1~ 2小时。

四、洗涤：移去包被液Z凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20 ）洗3次，每次5分钟。

五、加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液,37。

C作用1 ~ 2 小时或由预试实验确定作用时间。

六、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20 ）洗3次，每次5分钟。

七、加入0.2ml底物溶液于每个凹孔（OPD或OT）,室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4 ml底物加0.1 ml终止剂）O八、加终止剂：每凹孔加2M H2SO4或2 M柠檬酸0.05 ml o九观察记录结果：目测或用酶标比色计测定（OPD用492nm ）OD值。

医疗器械产品技术要求编号：抗心磷脂抗体检测试剂盒（酶联免疫法）1.产品型号/规格及划分说明1.1产品型号/规格48人份/盒、96人份/盒。

1.2结构组成试剂盒应包括下列主要部分：包被有心磷脂抗原的微孔板、ACL阴性对照、ACL阳性对照、标本稀释液（加有山羊血清的PBS缓冲液）、酶结合物（HRP标记的单抗人IgG）、显色剂A （主要成份为过氧化脲）、显色剂B（主要成份是TMB.2HCL）、浓缩洗涤液（25×，主要成份为PBS）、终止液（2MH2SO4）组成。

1.3 适用范围该试剂盒为体外诊断试剂盒，适用于酶标仪，用于临床上体外检测人血清中的抗心磷脂抗体IgG。

2性能指标2.1外观外观应符合如下要求：a)试剂盒各组份应齐全、完整，液体无渗漏；b)标签应清晰，易识别。

2.2液体装量液体试剂最低装量应不小于标示量。

2.3阴性参考品符合率对本公司提供的 15 份阴性参考品进行检测，阴性参考品符合率为 100%。

2.4阳性参考品符合率对本公司提供的 10 份阳性参考品进行检测，阳性参考品符合率为 100%。

2.5检测限对本公司提供的检测限参考品进行检测，应符合 4 份检测限参考品的检出要求：L1 检测 S/CO.比值应大于 4.0；L2 检测 S/CO.比值应大于 2.0；L3 检测 S/CO.比值应介于0.5～1.5；L4 检测 S/CO.比值应小于 1.0。

2.6重复性对本公司提供的重复性参考品重复检测 10 次，其变异系数 C V（％）应不大于 10%。

2.7批间差用 3 个批号试剂盒检测本公司提供的重复性参考品，3 个批号试剂盒之间的批间变异系数 CV 应不大于 15%。

2.8生物安全性检测ACL 阴阳对照应做 HBsAg，抗-HCV，抗-HIV，抗-TP 检测，结果为阴性。

1。

人免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T2.5μg/ml -80μg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白G(IgG)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人免疫球蛋白G(IgG)水平。

用纯化的抗-IgG抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白G(IgG)，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白G(IgG)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人免疫球蛋白G(IgG)浓度。

试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl （样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

抗心磷脂IgG/IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）适用范围：用于体外定性检测人血清中的抗心磷脂IgG/IgM抗体水平。

1. 产品型号/规格及其划分说明1.1 产品规格48人份/盒1.2 组成及成分表1. 抗心磷脂IgG/IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）组成成分2．性能指标2.1 外观2.1.1 试剂盒各组份齐全、完整。

标识应清晰、易识别。

液体试剂透明、无渗漏、无沉淀或絮状悬浮物。

2.1.2 抗原包被板包装袋应密封性好，无破损、无漏气现象。

2.2 净含量各液体组份的净含量不少于标示值。

2.3 临界值2.3.1 对心磷脂 IgG临界值阳性参考品（A值为0.35）检测，检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。

2.3.2 对心磷脂 IgG临界值阴性参考品（A值为0.15）检测，检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。

2.3.3 对心磷脂 IgM临界值阳性参考品（A值为0.35）检测，检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。

2.3.4 对心磷脂 IgM临界值阴性参考品（A值为0.15）检测，检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。

2.4 S/CO值重复性2.4.1 对心磷脂 IgG重复性参考品（A值为0.60）检测20次，变异系数CV≤15%。

2.4.2 对心磷脂 IgM重复性参考品（A值为0.60）检测20次，变异系数CV≤15%。

2.5 批间差抽取三个批次的试剂盒，每个批次80人份，按2.3项临界值的要求检测，各浓度反应结果应一致。

2.6 效期稳定性试剂盒在规定的贮存条件下保存至有效期末或超过有效期二周内进行检测，检测结果应符合2.3、2.4项的要求。

总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书[产品名称][通用名称] 总IgE检测试剂盒(酶联免疫法)[英文名称] Total IgE ELISA[包装规格]适应症：过敏性疾病、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。

临床意义：1）过敏反应和特应性疾病的诊断：除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE外，变态反应性疾病的诊断还包括检测总IgE水平。

但是，过敏反应并不总伴有总IgE水平的升高（成人>100 IU/ml）。

相反，低水平的IgE（成人<25 IU/ml）也不能排除患有特应性过敏反应。

通过长期脱敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。

通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻炎以及婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。

在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE（数千IU/ml）。

其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke 水肿（血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。

检测总IgE也可用于鉴别诊断肺部嗜酸性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和Churg-Strauβ 综合征。

2）其他疾病中的IgE：高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形式的蠕虫病，如弓蛔虫病、蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。

然而，在绦虫病和蛲虫病中未见有IgE水平升高。

对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围内。

在下列疾病中可检测出高浓度的IgE：湿疹性或非湿疹性皮炎；IgE骨髓瘤；急性系统性红斑狼疮（SLE）；移植物抗宿主反应；T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich 综合征）；2度或3度烧伤；耳鼻喉肿瘤；肝病（尤其与酒精滥用有关）；AIDS晚期阶段（CD4+ T细胞明显下降）。

在下列疾病中可有IgE缺陷：X-染色体相关低丙种球蛋白血症；严重的联合免疫缺陷（SCID）；毛细管扩张性运动失调；肺纤维化疾病；极少数的健康人。