第十一章动物细胞培养

继续培养，此即传代培养。
[思维激活2] 有没有不进行贴壁生长和不存在接触抑制现象 的细胞？若有，试各举一例。 提示 淋巴细胞可以持续在悬浮状态下生长；癌细胞无接 触抑制现象，在适宜条件下可以无限增殖。
3．冻存与复苏 (1)冻存 降低温度 。 保存细胞的措施主要是_________ 一般的低温 ，如哺乳动 a．短期和临时性的保存可以采用___________ 4℃左右 可存活几十天甚至几个月。 物的细胞在_________ 超低温冻存法 ，即将细胞和 b．长期保存细胞一般采用_____________ －196℃的液氮 中进行保存，在超低温环境 保护剂 放入_______________ _______ 最低点 ，近似于“_____” 休眠 状态。 中，细胞的代谢活动降到了_______ (2)复苏 当需要冻存的细胞时，随时将它们取出，迅速放入______ _____中解冻，细胞便会逐渐“_____”过来。
养瓶中会贴壁生长，形成一层细胞，相互接触后停止生长。 克隆培养法培养过程中，仅有极少数细胞的基因型会发生 改变。二倍体细胞的传代培养一般传至10代后就不易传下 去了。恶性细胞系的细胞具有不死性，可以进行传代培养。
答案
D
归纳提升
动物细胞培养的选材、结果及工具酶
(1)动物细胞培养时，一般选取幼龄动物的组织、器官， 其细胞的分化程度较低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容 易培养。 (2)在动物细胞培养过程中，一般情况下10代以前的细胞
不同组织来源的细胞需要不同的而且也不4适宜的气体环境一般把细胞置于氧气和二氧化碳的气体环境中氧气参与细胞的二氧化碳可以维持培养葡萄糖无机盐维生素核苷酸生长因子需求量955呼吸作用ph课堂互动探究课堂互动探究热点考向示例热点考向示例随堂达标检测随堂达标检测为什么进行动物细胞培养的环境要求无菌无提示离体培养的细胞已失去了对微生物和有毒物质的防御能力一旦受到污染或自身代谢物质积累等有毒物质的侵害细胞就会死亡

体外培养优点：
理化环境可精确调控，生理条件相对恒定；
对于同一来源的组织样品，随着传代进行，细胞系逐渐趋于均一；
培养过程经济有效且可规模化；
可模拟细胞体内环境。
体外培养局限性：
对操作者的专业技术技能要求高；
能获得的细胞量较少（实验室：1-10g细胞/批，企业：100g细胞/批）；
培养过程中易出现细胞去分化和选择性培养的现象；
细胞质功能：
蛋白质和脂肪合成的重要场所，细胞内所有蛋白质合成的起始步骤都发生在细胞质基质的游离核糖体上；
细胞与环境、细胞质与细胞核以及细胞器之间的物质运输、能量交换、信息传递等都要通过细胞质基质来完成；
很多重要的中间代谢反应也发生在细胞质基中，糖酵解、磷酸戊糖途径、糖醛酸途径、糖原的合成与部分分解过程等；
线粒体
细胞中数量醉倒的细胞器（大约1700/cell），占细胞总体积的20%，人体内的细胞每天合成的数千克ATP大约95%由线粒体产生
超微结构：
线粒体是由两层单位膜套叠热诚的封闭的囊状结构。一般呈粒状或杆状
包括四个功能间隔：外膜、内膜、膜间隙、基质
线粒体的主要功能：
氧化磷酸化；合成ATP；为细胞的生命活动提供能量。
磷脂双层膜是一种非共价结合的聚合物，由磷脂组装而成，因此，可以自由活动：迅速地扩大、缩小、断裂、融合
细胞膜动态平衡：膜循环以维持平衡
小结——细胞膜
磷脂双分子层特性：磷脂双分子层是流动的，其流动性受温度、脂肪酸和胆固醇等因素影响；
磷脂双分子层由磷脂、糖脂、胆固醇和蛋白构成；
磷脂具四种类型结构，以甘油丝或丝氨酸为骨架；
细胞质面积：VSELs：6μm2，HSCs：35μm2
水：占尽80%；蛋白占10~20%。

在理论上证明了，同植物细胞一样，分化了的动物细 胞核也具有全能性．
思考题
5、对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出 操作过程的不同点？
多莉克隆过程的受体细胞是去核卵细胞，而高产奶 牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母细胞；多莉克 隆过程是将供体细胞核注入受体细胞，而高产奶牛 的克隆过程是将供体细胞注入受体细胞。
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物
核 移
胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全
能性容易
植
体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能 （难度高） 性不容易
受体细胞：MⅡ期的卵母细胞
卵母细胞采集、培养
MⅡ期卵母细胞 去核
去核卵母细胞
（二）体细胞核移植过程 （体细胞克隆动物）
供体细胞注入 去核卵母细胞
体细胞培养
植物组织培养, 植物体细胞杂交
2、动物细胞工程常用的技术手段呢？ • 动物细胞培养、动物细胞核移植、 • 动物细胞融合、生产单克隆抗体等
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
一、动物细胞培养 （一）概念
从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞， 然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
（三）培养条件
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、
微量元素、血清、血浆等。）
合成培养基
保证细胞顺利
3、温度和pH
的生长增殖
36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4
4、气体环境：
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
思考
动物细胞培养液的主要成分是什么？ 较植物组培培养基有何独特之处？ 主要成分： 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量 元素、血清、血浆等。

过程
脱分化、再分化
原代培养、传代培养
项目
植物组织培养
动物细胞培养
结果 获得新个体或细胞产物
大量产生细胞或细胞 产物
用途
①快速繁殖名贵花卉和果 树；②培养无病毒植株、 转基因植物；③大规模生 产细胞产物，如药物、食 品添加剂、香料、色素等
①生产蛋白质制品， 如病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等；②检 测有毒物质；
(3)温度和
温度：哺乳动物多以 pHpH： 7.2～7.4
36.5±0.5℃
为宜
(4)气体环境COO2 ：2：细维胞持代培谢养所液必的需p的H
4．应用[连线]
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1．动物核移植的概念和类型 (1)概念： ①供体：动物一个细胞的细胞核； ②受体：去掉细胞核的 卵母细胞 ； ③结果：形成重组胚胎，发育成 动物个体 。 (2)类型：哺乳动物核移植可分为胚胎细胞核移植和体细 胞核移植。
2.如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： (1)容器 A 中放置的是动物器官或组织，它一般 取自________________。 (2)容器 A 中的动物器官或组织首先要进行的处 理是________，然后用__________酶处理，这 是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 _________________________________________________。
胞质内的遗传物质来自受体卵母细胞，其次生物的性状还
受环境的影响，因此，克隆动物并不是对提供体细胞的动
物进行完全复制。
4.右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述
不．正确的是
(D )
A．个体 2 为克隆动物，c 为高度分化的
体细胞
B．个体 2 的遗传性状与提供 c 细胞的羊