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结缔组织染色法Mallory三色染色法：胶原和网状纤维蓝色，软骨、淀粉样变物质淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒红色，髓鞘和红细胞橘红色。
2.Masson三色染色法：胶原纤维绿色，肌纤维红色，红细胞橘红色。
鉴别胶原纤维和肌纤维最宜采用的方法。
3.三联染色法：胶原纤维红色，网状纤维黑色，弹性纤维绿色，肌肉和红细胞淡黄色。
二.胶原纤维染色1.Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法：胶原纤维鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞黄色，胞核蓝褐色。
与胶原纤维染色相比的缺点是：易褪色和对比度差。
2.天狼星红（Sirius Red）苦味酸染色法：胶原纤维红色，细胞核绿色，其他黄色。
在偏光显微镜下可见4种胶原纤维。
三.网状纤维染色：包括：Gomori和James。
Gomori银氨染色法：网状纤维黑色，胶原纤维红色。
鉴别诊断中的应用：1）癌和肉瘤的鉴别。
2)恶性淋巴瘤和组织细胞肉瘤。
3）血管内皮细胞瘤和外皮细胞瘤。
4）黏液纤维瘤和黏液肉瘤。
四.弹性纤维染色：效果最好的固定液是：甲醛生理盐水。
Gomori醛复红染色法：弹力纤维深紫色，黏液紫色（肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、垂体B细胞均能同时着色），背景不同程度的黄色。
1）配制后需在室温静置1-2日。
2）是碱性品红加入三聚乙醛和盐酸配制而成。
3）醛复红所谓的成熟是颜色为深紫色。
3)可使胃主细胞着色。
5）应放置在冰箱内保存。
五.显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法：维多利亚蓝+丽春红S：弹性纤维蓝绿色，胶原纤维红色，背景淡黄色。
六.横纹肌组织染色：Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH)：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、横纹肌等均蓝色；胶原、网状纤维、骨基质及骨黄色或玫瑰红色。
1）要在室温下成熟。
2）可使用高锰酸钾促使PATH成熟。
3）乙醇分化时要保存一定的红色。
4）染色后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。
七.糖类染色：过碘酸的作用是氧化。
过碘酸-Schiff（PAS）染色法：糖原及其他PAS反应阳性物质红色，细胞核蓝色。
三种胶原纤维染色法评价宫腔粘连的比较陈醒;毛乐乐;周应芳;白文佩【摘要】目的比较Masson染色、van Gieson染色、天狼猩红(Sirius red)染色三种胶原纤维染色方法在大鼠宫腔粘连模型中的评价效果.方法取24只成年雌性SD大鼠,暴露两侧子宫,左侧子宫剪开宫腔后使用机械性刮宫的方法损伤大鼠子宫内膜层,然后关腹,制作大鼠宫腔粘连模型.右侧子宫作为对照.术后14 d取材,行HE 染色、Masson染色、van Gieson染色、天狼猩红染色,对子宫组织纤维化进行评估.结果刮宫后子宫组织HE染色显示子宫内膜上皮层消失,子宫内膜腺体数量显著减少(P< 0.01).三种染色法均能清楚地染出胶原纤维.三种染色方法计算出的纤维化面积比,Masson染色(甲苯胺蓝)高于Masson染色(亮绿)、van Gieson染色和天狼猩红染色(P< 0.01).天狼猩红染色法能够在偏振光显微镜下明确区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维,Masson及van Gieson染色法则不能区分.结论天狼猩红染色较Masson染色和van Gieson染色能够更好地显示宫腔粘连组织的纤维化程度,并能区分胶原纤维的类型.%Objective To compare Masson staining,van Gieson staining,and Sirius red staining for evaluation of an intrauterine adhesion(IUA)model in rats. Methods In total,24 female adult Sprague-Dawley rats were selected and bilateral uteri exposed. To establish an IUA rat model, the left uterus was cut and the endometrium scraped using a scalpel. The right uterus was used as a control. Fourteen days after surgery, all uteri were collected for histological evaluation of IUA by hematoxylin and eosin(HE)staining,Masson staining,van Gieson staining,and Sirius red staining. Results HE staining showed that the endometrial epithelial layer of the uterus was absent, with a smaller number of endometrial glandsthan the control uterus(P < 0.01). Collagen fibers were clearly visible using all special staining method. The fibrotic area rate of uteri by Masson staining(using toluidine blue)was higher than Masson staining(using light green),van Gieson staining,and Sirius red staining(P< 0.01). Under polarized light,type I and type III collagen fibers were clearly distinguished by Sirius red staining,but not using Masson and van Gieson staining. Conclusions Sirius red staining is a superior method than Masson and van Gieson staining for evaluation of fibrosis in IUA and can also differentiate collagen fiber types.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2018(028)005【总页数】6页(P34-38,45)【关键词】宫腔粘连;子宫内膜;纤维化【作者】陈醒;毛乐乐;周应芳;白文佩【作者单位】北京大学第一医院妇产科,北京 100034;北京大学第一医院妇产科,北京 100034;北京大学第一医院妇产科,北京 100034;首都医科大学附属北京世纪坛医院妇产科,北京 100038【正文语种】中文【中图分类】R-33宫腔粘连(intrauterine adhesion，IUA)又称Asherman综合征，是由于各种原因导致的子宫内膜基底层破坏，进而产生瘢痕修复，造成的宫颈管或宫腔部分或完全闭锁的一类疾病。
结缔组织染色法Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B Mssson三色法图表 C 三色染色胃癌组织中血管平滑肌. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞二、胶原纤维染色法. Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)黄色：其他三、网状纤维染色Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法Gomori氏银氨液配制法图表 G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表 H 醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表 J .磷钨酸苏木素法图表 K .磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色染色法（1974年）蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表 L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表 M 染色结肠粘膜图表 N .胃粘膜组织 AB-PAS染色 40×：2.爱先蓝（）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表 O .爱先蓝（）染色液图表 P .爱先蓝法图表 Q .爱先蓝法—3、爱先蓝（）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表 R pigment in cells . malignant melanoma, Fontana-Masson stain.亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表 S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细十一、胆色素染色三氯醋酸染色法绿色：胆色素红色和黄色：其他十四、纤维蛋白染色等MSB染色法*本法的MSB指马休黄猩红蓝法红色：纤维蛋白紫色：陈旧性纤维蛋白蓝色：细胞核黄色：红细胞图表 T 马休黄-酸性品红-苯胺蓝染色液甲紫染色法蓝黑色：纤维蛋白红色：背景十五、淀粉样物质染色1.刚果红染色法红色：淀粉样物质蓝色：细胞核图表 U 15.淀粉染色甲状腺髓样癌淀粉样物质甲紫染色法红色或紫红色：淀粉样物质蓝色：细胞核十六、真菌染色六胺银染色法*真菌均被着色图表 V 16.六胺银染色液2.高碘酸复红染色法（1994年）紫红色：真菌浅黄色：红细胞十七、细菌染色碱性复红结晶紫染色法蓝色：革兰阳性菌红色：革兰阴性菌、细胞核抗酸杆菌染色法红色：抗酸杆菌灰蓝色：背景图表 W . 病理抗酸染色液图表 X . 病理抗酸染色液3.胃幽门螺杆菌Warthin-Starry胃幽门螺杆菌染色法棕黑色或黑色：胃幽门螺杆菌淡黄色：背景十八、螺旋体染色1. 硝酸银染色法染色法蓝—淡紫色：螺旋体、细菌蓝色：细胞质橘黄色：红细胞Ryu碳酸钠碱性复红法红色：螺旋体十九、病毒包涵体染色Macchiavello包涵体染色法图表 Y 19.巨细胞病毒核内出现周围绕有一轮“晕”的大型嗜酸性包涵体。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。
病理学技术特殊染色最总结均配图结缔组织染色法Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B Mssson三色法. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表 D 间苯二酚法二、胶原纤维染色法. Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法Gomori氏银氨液配制法图表 G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表 H 醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表 I 间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表 K .磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）显示缺氧心肌染色法（1964年）绿色：其他组织七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表 L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表 M 染色结肠粘膜图表 N .胃粘膜组织 AB-PAS染色 40×：2.爱先蓝（）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表 O .爱先蓝（）染色液图表 P .爱先蓝法图表 Q .爱先蓝法—3、爱先蓝（）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表 R pigment in cells . malignant melanoma, Fontana-Masson stain.亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表 S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。
天狼星红偏振光法——胶原纤维染色的一种理想方法
贾赤宇;陈璧;王德文
【期刊名称】《西北国防医学杂志》
【年(卷),期】2001(22)3
【总页数】1页(P289-289)
【关键词】实验室诊断;胶原纤维;染色;天狼星红偏振光法
【作者】贾赤宇;陈璧;王德文
【作者单位】第四军医大学西京医院烧伤科;军事医学科学院基础所二所
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.苦味酸-天狼星红偏振光法检测增生性瘢痕组织胶原 [J], 黎小间;雷涛;高建华
2.天狼星红苦味酸染色法和MASSON染色法在显示大鼠肾脏胶原纤维的比较应用[J], 罗灿峤;莫木琼;钟觉民
3.苦味酸天狼星红—偏振光法观察马凡氏综合征主动脉和皮肤的胶原异常（简报）[J], 许增禄
4.苦味酸-天狼星红偏振光法在早期肝纤维化诊断中的应用 [J], 王卫卫;田野;赖日权
5.苦味酸天狼星红对胶原纤维染色的方法 [J], 张艳;陈银成
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
心肌纤维化特殊染色方法比较与优化王亚恒;马嘉昕;雷雨;张连峰;吕丹【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2024(32)3【摘要】目的对目前已有心肌纤维化染色方法进行优化,弥补目前心肌纤维常用染色方法在定量分析中存在的胶原纤维漏读及误读等问题,为心肌纤维化半定量及诊断提供参考。
方法利用实验室前期构建的心肌组织特异性cTnT~(R141W)基因突变致扩张型心肌病转基因小鼠模型,制备心脏组织石蜡切片,分别进行马松三色(Masson’s trichrome, Masson)染色法、天狼星红(picric sirius red, PSR)染色法、天狼星红-品红(van Gieson, VG)染色法、天狼星红-固绿(sirius red/fast green staining, SR/FG)染色法染色,利用Image J 2.1.0软件对胶原纤维面积进行定量比较,并从染液浓度、染色时间、酸性溶液预染3个方面对SR/FG染色法进行优化,对后续的胶原纤维定量分析进行应用验证。
结果 4种特染方法均可实现胶原纤维的分布观察,其中,优化后的SR/FG染色法,即0.1%天狼星红-苦味酸酸性溶液预染5 min,随后于0.1%天狼星红-苦味酸与0.04%固绿的混合液中染色1 h,在软件识别中具有更低的漏读率和遗失率。
结论本文优化后的SR/FG染色法较其他传统胶原纤维特染方法,胶原纤维与心肌组织着色鲜亮、颜色对比明显、稳定性佳、方便快捷,更适用于后续胶原纤维占比定量分析应用。
【总页数】8页(P347-354)【作者】王亚恒;马嘉昕;雷雨;张连峰;吕丹【作者单位】中国医学科学院医学实验动物研究所;中国医学科学院医学实验动物研究所;中国医学科学院医学实验动物研究所;中国医学科学院医学实验动物研究所【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.两种小麦根尖染色体制备方法比较与优化2.胃幽门螺旋杆菌感染检测的4种特殊染色方法比较3.三种特殊染色方法在显示系统性硬化症小鼠肺组织胶原纤维的比较4.斑马鱼肝脏组织油红O染色方法比较优化5.肺组织新型隐球菌的4种特殊染色方法比较因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
心肌纤维化病理染色鉴定方法的综合评价吴限;黎明江;李莎【摘要】目的观察比较苏木精-伊红染色法(hematoxylin and eosin staining,HE staining)、Masson染色法和苦味酸-天狼猩红染色法(picric sirius red staining,PSR staining)在评价心肌纤维化的各自特征及优缺点.方法 20只SD大鼠予以盐酸异丙肾上腺素(isoprenaline,IS0)制备心肌纤维化模型,以5mg/(kg·d)于同一时间段注射,持续3周.取大鼠心脏组织行HE染色、Masson染色以及PSR 染色,置于显微镜下观察纤维化面积及胶原沉积特点,并比较Masson染色和PSR染色纤维化面积所占心肌总面积比重.结果 3种染色方法均可显示心肌纤维化面积,Masson染色和PSR染色所示纤维化面积差异无统计学意义(P＞0.05);PSR染色后进一步行免疫荧光染色能够明确区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的表达,然而Masson染色和HE染色则不能区分.结论PSR染色法结合免疫荧光技术较Masson染色法和HE染色法,能够更好的评价心肌纤维化程度及胶原纤维类型,对于心肌纤维化的治疗及预防具有重要意义.%Objective To compare hematoxylin and eosin(HE) staining,Masson's staining and picric sirius red(PSR) staining in evaluation of cardiac fibrosis.Methods Twenty adult sprague dawley (SD) rats were given subcutaneous injection of isoprenaline for 5mg/(kg · d) for 3 weeks,which induced cardiac fibrosis model successfully.In order to observing the fibrotic areas and collagen deposition,we prepared paraffin sections by using the heart specimen of rat,and carried out HE staining,Masson staining and PSR staining respectivelly for the special staining.Results All staining methods could clearly show the collagen fibers and fibrosis stage.We could clearly distinguish the type Ⅰ and type Ⅲcollagen fibers through PSR staining with immunoflurescent techniques,but not Masson and HE staining.Conclusion The results demonstrated that PSR staining is better than HE and Masson staining to be used for the evaluation of degree and type of proliferation of collagen fibers.It has important signification for treatment and prevention of cardiac fibrosis.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2017(046)009【总页数】4页(P34-37)【关键词】心肌纤维化;胶原蛋白;Masson染色;PSR染色【作者】吴限;黎明江;李莎【作者单位】430060 武汉大学人民医院心内科、武汉大学心血管病研究所、心血管病湖北省重点实验室;430060 武汉大学人民医院心内科、武汉大学心血管病研究所、心血管病湖北省重点实验室;430060 武汉大学人民医院心内科、武汉大学心血管病研究所、心血管病湖北省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R541.9目前，心肌纤维化是一个全球性的治疗难题，是多种急慢性心肌损伤的终末期病理表现，几乎涉及所有心血管疾病的发生、发展过程[1]。
胶原蛋白染色方法
胶原蛋白的染色方法有多种，以下是其中两种常用的方法：
1. Masson's Trichrome染色法：这是一种常用的组织胶原染色
方法。它通过连续染色和脱色步骤来区分组织中的胶原蛋白和
其他组成部分。具体操作步骤如下：
a. 组织样本固定和脱水：将组织样本固定在离子固定剂中，
然后将其脱水，逐渐置于浓度逐渐增高的酒精中。
b. 组织染色：将组织样本置于酸性背景染料（甲酸洋红溶液）
中浸泡，然后转移至酸性胶原染料（磷酸铜硫化铁溶液）中浸
泡。
c. 脱色：用1%酸酒精脱去背景染料，然后用脯氨酸–钼酸铁
试剂脱去胶原染料。
d. 洗涤：用蒸馏水洗涤组织样本。
e. 上蜡：将组织样本置于苯硫酸酯或芳香烃中浸泡，然后放
在玻片上晾干。
f. 封片：用透明胶封闭玻片。
2. Sirius Red染色法：这是一种选择性染色方法，用于检测和
定量组织中胶原蛋白的分布和含量。具体操作步骤如下：
a. 组织样本固定：将组织样本固定在离子固定剂中。
b. 脱水和透明：将组织样本逐渐经过酒精和苯胶旋转干燥。
c. 染色：将组织样本浸渍在Sirius Red染料溶液中，对胶原
纤维进行染色。
d. 洗涤和酸化：用酒精-盐酸洗涤组织样本，去除多余的染
料。
e. 脱水：将组织样本经过酒精脱水。
f. 渗透：将组织样本置于透明剂中浸泡，使其变为透明。
g. 上蜡：将组织样本置于熔化的蜡中浸泡，然后放在玻片上
晾干。
h. 封片：用透明胶封闭玻片。
这些方法可以帮助研究人员在光镜下观察和分析胶原纤维的分
布和形态特征。
SiriusRedstaining天狼星红染色方法1、来自丁香园Sirius red苦陈酸染色法[试剂配制](1)天狼星红饱和苦昧酸液 O(5,天狼星红10ml，苦味酸饱和液90ml。
(2)天青石蓝液天青石蓝B1(25g(铁明矾1(25g，蒸馏水250ml。
溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml，然后再加入浓盐酸0(5ml。
[染色步骤](1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
(2)人大青石蓝液染5一lOmin。
(3)蒸馏水洗3次。
(4)天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min(5)无水乙醇直接分化与脱水。
二甲苯透明，中性树胶封固。
[注意事项](1)细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染。
(2)染色封固后的切片，须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩注:在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维。
l型胶原纤维:紧密排列，显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维oll型胶原纤维:显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布。
皿型胶原纤维:显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。
lv型胶原纤维:显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。
2、来自网页Sirius Red Staining Protocol for CollagenJohn A. KiernanDepartment of Anatomy & Cell Biology,The University of Western Ontario,LONDON, Canada N6A 5C1NovaUltra Special Stain KitsDescription: It's one of the best understood techniques of collagen histochemistry. Technical details follow, and are followed by some comments and a few references. You should come to grips with the theory, advantages and limitations of this method before using it on alarge scale. Picro-sirius red method (after Puchtler et al., 1973; Junqueira et al., 1979). Step 4 is an addition that prevents the loss of dye that happens if the stained sections are washed in water.Fixation: Fixation is not critical, The method is most frequently used on paraffin sections of objects fixed adequately (at least 24 hours but ideally 1 or 2 weeks) in a neutral buffered formaldehyde solution. This protocol has not been tested on frozen sections.Solutions and Reagents:Picro-sirius Red SolutionSirius red F3B (C.I. 35782) ------------------------- 0.5 gSaturated aqueous solution of picric acid ---------500 ml(Keeps for at least 3 years and can be used many times)Sirius Red is available from Sigma-Aldrich under the name of "Direct Red 80" Cat#365548 or Cat#43665. Saturated aqueous solution of picric acid (1.3% in water) is also available from Sigma, Cat# P6744-1GA.Acidified WaterAdd 5 ml acetic acid (glacial) to 1 liter of water (tap or distilled).Weigert's haematoxylinProcedure:1. De-wax and hydrate paraffin sections.2. Stain nuclei with Weigert's haematoxylin for 8 minutes, and then wash the slides for 10 minutes in running tap water).3. Stain in picro-sirius red for one hour (This gives near-equilibrium staining, which does not increase with longer times. Shorter times should not be used, even if the colors look OK.)4. Wash in two changes of acidified water.5. Physically remove most of the water from the slides by vigorous shaking.5. Dehydrate in three changes of 100% ethanol.6. Clear in xylene and mount in a resinous medium.Results:In bright-field microscopy collagen is red on a pale yellow background. (Nuclei, if stained, are ideally black but may often be greyor brown. The long time in picro-sirius red causes appreciable de-staining of the nuclei. This is not a problem with traditional van Gieson or with picro-aniline blue, with their 1-minute staining times.) When examined through crossed polars the larger collagen fibers are bright yellow or orange, and the thinner ones, including reticular fibers, are green. According to Junqueira et al. (1979) thebirefringence is highly specific for collagen. A few materials,including Type 4 collagen in basement membranes, keratohyaline granules and some types of mucus, are stained red but are not birefringent. It is necessary to rotate the slide in order to see all the fibres, because in any single orientation the birefringence of some fibres will be extinguished. This minor inconvenience can be circumvented by equipping the microscope for use with circularly rather than plane polarized light (Whittaker et al., 1994; Whittaker, 1995), but then you don't get a completely black background. Comments and References:Although this method is technically very easy, it is important for the person doing it and (if it's someone else) the person using the stained slides, to know what it does and how it works. Even without a polarizingmicroscope, picro-sirius red shows things like reticular fibres and the basal laminae of cerebral capillaries, which are missed by van Gieson and may be obscured by masses of other stained details in trichrome methods (Mallory, Masson, Heidenhain etc).To the best of my knowledge, most users of picro-sirius red aredoing research that exploits the enhancement by sirius red of the birefringence of collagen fibres, which is largely due to co-aligned molecules of Type I collagen. It is also used to stain amyloid.If you are using only polarized light it does not matter if you lose the "yellow background" of picric acid staining. If you use picro-sirius red as a "better" van Gieson and want to keep the yellow cytoplasm, be hasty with the dehydrating - even more so than with the original van Gieson method.About 4 years ago, someone (sorry, I've forgotten who, so I can't shout your name) posted to HistoNet an excellent bibliography ofstaining methods using sirius red F3B. This should be findable in the Archives()Nobody should do (or order to be done) a picro-sirius red stain without reading at least one of the first two items listed below.1. Junqueira LCU, Bignolas G, Brentani RR. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J 1979; 11, 447-4552. Puchtler H, Waldrop FS, Valentine LS. Polarization microscopic studies of connective tissue stained with picro-sirius red FBA. Beitr Path 1973; 150, 174-1873. Whittaker P. Polarized light microscopy in biomedical research. Microscopy and Analysis 1995; 44, 15-174. Whittaker P, Kloner RA, Boughner DR, Pickering JG. Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light. Basic Research in Cardiology 1994; 89, 397-4105. Kiernan. J.A., (1999) Histological and Histochemical Methods: Theory and Practice, Ed. 3 Butterworth Heinemann, Oxford, UK.Finally, it's important to get the right dye. Sirius red F3B is C.I. 35782 (Direct red 80). There are other "sirius red"s that are quite different. At least one that I've used a lot is OK but does not carryany C.I. designation on the label. With this kind of dye (a tetra-azo direct cotton dye) the manufacturing process necessarily generates more than one coloured product, and other compounds are added to precipitate the dye and adjust its colour intensity. Test your sirius red onsections of muscle, brain andkidney before using it for research or diagnosis. In normal kidneythe glomerular basement membranes should be red but not birefringent. Every muscle fibre should be surrounded by red and birefringent collagen.I could continue, but this is already too long.。
