栝楼桂枝滴丸质量标准及体外溶出度研究

栝楼桂枝滴丸质量标准及体外溶出度研究 目的 建立栝樓桂枝滴丸的质量标准，并考察其体外溶出度。方法 采用HPLC测定栝楼桂枝滴丸中芍药苷、芍药内酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的含量，通过转篮法测定其体外溶出度。结果 芍药苷、芍药内酯苷的含量分别在0.690～6.900 ?g、0.300～2.996 ?g范围内线性关系良好，平均回收率分别为101.12%、98.52%，RSD分别为2.24%、1.37%；肉桂酸的含量在0.023～0.348 ?g范围内线性关系良好，平均回收率为98.21%，RSD=2.00%；6-姜酚的含量在0.025～0.382 ?g范围内线性关系良好，平均回收率为99.19%，RSD=2.18%；甘草苷、甘草酸、甘草素的含量分别在0.120～2.498 ?g、0.150～2.253 ?g、0.010～0.147 ?g范围内线性关系良好，平均回收率分别为99.80%、100.38%、100.62%，RSD分别为2.10%、1.91%、1.66%。滴丸中7种成分在15 min内累积溶出率均达到98%以上。结论 本方法简便、准确、重复性好，可用于栝楼桂枝滴丸的质量控制，体外溶出度符合要求。

Abstract： Objective To establish the quality standards of Gualou Guizhi Dropping Pills； To investigate the vitro dissolution. Methods HPLC was used to determine the contents of paeoniflorin， albiflorin， cinnamic acid， 6-gingerol， liquiritin， glycyrrhizic acid and liquiritigenin in the dropping pills. The vitro dissolution rate of dropping pills was determined by rotating basket method. Results The calibration curves of paeoniflorin and albiflorin were in a good linearity in the range of 0.690–6.900 ?g， 0.300–2.996 ?g， respectively， and the average recoveries were 101.12% and 98.52%， respectively， with RSD of 2.24%， 1.37%， respectively. Cinnamic acid was linear in the range of 0.023–0.348 ?g and the average recovery was 98.21% with RSD of 2.00%. 6-Gingerol was linear in the range of 0.025–0.382 ?g， and the average recovery was 99.19% with RSD of 2.18%. The calibration curves of liquiritin， glycyrrhizic acid and liquiritigenin were in a good linearity in the ranges of 0.120–2.498 ?g， 0.150–2.253 ?g， and 0.010–0.147 ?g， respectively， and the average recoveries were 99.80%， 100.38%， and 100.62%， respectively with RSD of 2.10%， 1.91%， 1.66%， respectively. The accumulated dissolution rates of seven kinds of elements in the dropping pills all reached more than 98% in 15 min. Conclusion The method is simple and accurate， with repeatability， which can be applied to the quality control of Gualou Guizhi Dropping Pills. The vitro dissolution rates meet relevant standards.Key words： Gualou Guizhi Dropping Pills； quality standards； vitro dissolution

栝楼桂枝汤出自《金匮要略》，由栝楼、桂枝、白芍、生姜、大枣、甘草组成，具有解肌祛邪、舒缓筋脉功效[1]。本课题组前期开展了栝楼桂枝汤的动物、细胞水平相关研究，发现其具有良好的脑保护作用[2-7]，已申报为福建省第二人民医院院内制剂（2013S0001），

并通过大孔树脂对其进行精制纯化，富集有效成分，制成栝楼桂枝滴丸。为有效控制该制剂的质量和疗效，本试验对其进行质量标准和体外溶出度研究。 1 仪器与试药 U-3000型高效液相色谱仪（美国戴安公司），XS105型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），RCZ-6C1型药物溶出度仪（上海黄海药检仪器厂）。

栝楼桂枝滴丸，福建中医药大学药学院中药学重点实验室制备；芍药苷（批号110736-201539）、芍药内酯苷（批号16021410）、肉桂酸（批号110786- 200503）、甘草苷（批号111610-201106），中国食品药品检定研究院；6-姜酚（纯度≥98%，批号PZ9M6R1）、甘草酸（纯度≥98%，批号Z30A6B1）、甘草素（纯度≥98%，批号ZMO314BD14），上海源叶生物科技有限公司；色谱级乙腈，德国默克公司；水为超纯水。

2 方法与结果 2.1 含量测定 2.1.1 色谱条件 DIKMA C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m），流动相为乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脱（见表1），流速0.8 mL/min，柱温30 ℃，进样体积10 ?L，检测波长236 nm[8]。色谱图见图1。

注：A.混合对照品；B.供试品；1.芍药内酯苷；2.芍药苷；3.甘草苷； 4.甘草素；5.肉桂酸；6.甘草酸；7. 6-姜酚 图1 栝楼桂枝滴丸中7种成分HPLC图 2.1.2 线性关系考察 精密称取芍药苷、芍药内酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素對照品适量，甲醇溶解，配制成浓度分别为3.450 mg/mL、1.498 mg/mL、116 ?g/mL、127 ?g/mL、0.999 mg/mL、751 ?g/mL、49 ?g/mL的对照品贮备液。分别精密量取5 mL对照品贮备液至50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，依次吸取2、5、8、10、15、20、25、30 ?L对照品溶液注入高效液相色谱仪。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程，见表2。

2.1.3 供试品溶液的制备 取滴丸适量，研细，取细粉约0.5 g，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加甲醇20 mL，超声提取（功率500 W，频率40 kHz）30 min，冷却后用甲醇定容至刻度，摇匀，静置，用0.45 ?m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.1.4 精密度试验 分别精密吸取同一对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件，重复进样6次进行测定，测得芍药苷、芍药内酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的峰面积RSD分别为0.52%、0.76%、0.44%、0.61%、0.53%、 0.57%和0.76%，表明仪器精密度良好。 2.1.5 稳定性试验 取供试品溶液，分别于配制后0、2、4、6、8、12 h按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，测得芍药苷、芍药内酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的峰面积RSD分别为1.16%、1.62%、1.54%、1.61%、1.96%、1.19%和1.75%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.1.6 重复性试验 取6个不同批次的滴丸，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，测得芍药苷、芍药内酯苷、肉桂酸、6-姜酚、甘草苷、甘草酸和甘草素的峰面积RSD分别为1.29%、2.67%、2.38%、1.99%、1.62%、2.25%和1.81%，表明该方法重复性良好。

2.1.7 加样回收率试验 取滴丸，研成细粉，共6份，每份约0.5 g，精密称定，各精密加入对照品溶液适量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，并计算加样回收率，见表3。

2.1.8 样品含量测定 取3批栝楼桂枝滴丸，分别按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，结果见表4。

2.2 体外溶出度测定 参照2015年版《中华人民共和國药典》四部通则0931，采用转篮法测定。取滴丸适量，平行6份，以水为溶出介质，转速为100 r/min，温度（37±0.5）℃，依法测定，分别于1、2、5、8、10、15、20、25、30 min取样5 mL（同时补充等量等温溶出介质），0.45 ?m微孔滤膜过滤，取续滤液，按“2.1.1”项下色谱条件测定7种成分的浓度，计算累积溶出率，绘制时间-累积溶出率曲线，见图2。结果表明，栝楼桂枝滴丸7种成分在15 min内累积溶出率均达到98%以上。

3 讨论 现代药理研究表明，芍药苷可能通过改善缺血侧大脑血流供应、提高机体消除自由基能力等对缺血大脑产生神经保护作用[8-9]；芍药内酯苷可透过血脑屏障进入脑组织，对脑缺血再灌注损伤的大鼠起到神经保护作用[2]；肉桂酸为栝楼桂枝汤入血成分，提示其可能与复方在体内抗脑卒中后肢体痉挛有一定关系[10]；6-姜酚可能通过抑制脑组织脂质过氧化、抗血小板聚集等起到神经保护作用[11-12]；甘草苷可能通过抑制髓过氧化物酶和细胞间黏附因子-1表达等抗脑缺血再灌注损伤[13]；甘草酸的脑保护作用可能是其抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡等基本药理作用的综合结果[14]；甘草素较易通过血脑屏障，从而发挥神经保护作用[15]。故本研究选取以上7种成分作为优选指标，进行栝楼桂枝滴丸质量标准和体外溶出度研究。在供试品溶液的制备中，主要对提取方法和提取溶劑进行了考察。首先比较了超声、回流2种提取方法对7种成分提取率的影响，结果表明，2种方法对7种成分的提取率相差较小，考虑到超声提取方法简便的特点，最终确定提取方法为超声提取法；提取溶剂考察了甲醇和70%乙醇，结果表明，甲醇对7种成分的提取率高于70%乙醇，故确定提取溶剂为甲醇。