严格厌氧菌菌种保藏方法

微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

素而设计的。

一、保藏方法大致可分为以下几种：1、传代培养保藏法2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。

病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。

保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

二、器材:细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。

三、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。

菌种保种方法一、引言菌种保种是指为了保持菌种的纯度和活力，采取一系列措施来保存和繁殖菌种的方法。

菌种是微生物学研究和应用的基础，保种工作的重要性不言而喻。

本文将介绍几种常用的菌种保种方法。

二、冷冻保存法冷冻保存法是一种常见且有效的菌种保种方法。

其原理是将菌种培养液或菌落用冷冻保藏液冷冻储存。

冷冻保藏液通常是由含有保护剂的培养基和甘油或其他冷冻保护剂组成的。

操作时，首先制备含有保护剂的培养基，然后将菌种培养液或菌落和冷冻保护剂混合，分装入冷冻管中，迅速冷冻至-80摄氏度或更低温度保存。

三、干燥保存法干燥保存法是一种常用的菌种保种方法，适用于许多细菌和真菌。

其原理是将菌种培养液或菌落迅速干燥至低水分状态下保存。

操作时，可以将菌种培养液或菌落均匀涂布在无菌的滤纸或玻璃片上，然后放置于无菌条件下自然干燥或使用干燥器进行加速干燥。

干燥后的菌种可以直接保存在常温下，也可以放置在密封容器中保存。

四、液氮保存法液氮保存法是一种常用的长期保存菌种的方法。

其原理是将菌种培养液或菌落迅速冷冻至液氮温度(-196摄氏度)保存。

液氮保存法能够有效地保持菌种的生物特性和遗传稳定性。

操作时，可以使用液氮罐将菌种冷冻保存，也可以采用液氮冷冻干燥的方法进行保存。

五、连续传代法连续传代法是一种常用的菌种保种方法，适用于某些需要经常传代的菌种。

其原理是将菌种定期传代至新的培养基中，以保持菌种的活力和纯度。

操作时，首先准备新的培养基，然后将菌种从原有培养基中取出，接种到新的培养基上，并进行连续传代。

六、冷冻干燥法冷冻干燥法是一种较为复杂但有效的菌种保种方法。

其原理是先将菌种冷冻至低温，然后进行干燥处理，最后封存于干燥剂中保存。

冷冻干燥法能够有效地保持菌种的生物特性和遗传稳定性，并能够较长时间地保存。

操作时，首先将菌种培养液或菌落冷冻至低温，然后迅速进行干燥处理，最后将干燥的菌种封存于密封容器中。

七、细胞冻存法细胞冻存法是一种高效且可靠的菌种保种方法，适用于细胞类型的菌种。

根据不同菌种的营养要求分类
•纸片、半固体琼脂培养基、琼脂平板 注意：常温、低温、超低温均可
• 假单胞菌：冷冻干燥、肉汤、血浆、 10%甘油、滤 纸片、半固体琼脂培养基、琼脂平板 注意：常温、超低温均可
• 苛养菌株：平板传代保存、推荐冷冻干燥 • 厌氧菌：平板传代保存、室温厌氧湿盒法、-30℃~-
长期保存的菌种
• 采用脱脂牛奶冷冻干燥方法进行保存，其 复溶效果及细菌存活率较用肉汤、血浆等 附形物要好，
• 10%甘油或甘油肉汤 • 注意：均为低温冷冻
3.厌氧菌的保存
• 冷冻真空干燥是最好的保存方法，但不 易做到。
• 平皿传代是较简单且实用的方法。将需 要保存的菌株接种于布氏血琼脂平板上， 放入厌氧罐（或袋）中于孵箱中培养48小 时后，放室温阴凉处可保存两个月。
临床菌库组成
参考菌株：
ATCC：美国典型菌株保存中心。 NCTC：英国国家典型菌株保存中心。 CMCC(B)：中国医学细菌保藏管理中心。 质控菌株：WHO及各级临检中心发放的室间质控菌株。
临床分离菌：
实验中用标准方法鉴定，鉴定值>95％典型菌株，并 经多次传代，特征衡定的菌株。不同耐药机制的菌株。
80℃冷冻保存 注意：常温、超低温均可
根据保存菌种所期望的时限分类
• 长期保存的菌种，采用脱脂牛奶冷冻干燥方法进 行保存，其复溶效果及细菌存活率较用肉汤、血 浆等附形物要好，10%甘油；
• 中短期保存的菌种，根据菌种的不同采用脱脂牛 奶、血浆、全血、滤纸片、半固体琼脂培养基及 琼脂平板传代等方法进行保存；
菌种保存方法介绍
卫生部北京医院--艾效曼
菌种保存的目的：
1. 临床诊断和治疗需要，以备复查及补充药敏试验 2. 实验室质量控制所必需。 3. 卫生学监测用菌种，特别是院内感染（包括消毒

菌种保藏方法菌种保藏是微生物学中非常重要的一项工作，它涉及到菌种的保存、保存条件、保存方法等方面。

而实验室中的菌种保藏主要是为了能够长期保存菌种，并保持其完整性和活力，以便之后的研究和应用。

一、保藏条件菌种的保藏条件直接关系到其保存的效果。

一般来说，菌种的保藏条件包括温度、湿度、光照、气体环境等方面。

1. 温度：温度是影响菌种保藏效果最为重要的因素之一。

一般来说，低温可以有效地延缓菌种的新陈代谢和老化速度，使其保存时间更长。

常用的温度包括4℃、-20℃、-70℃等，根据具体的菌种特性和实验需求选择合适的温度进行保存。

2. 湿度：湿度也是影响菌种保藏效果的重要因素之一。

过高或过低的湿度都会影响菌种的活力和完整性。

一般来说，菌种的保藏湿度应控制在相对湿度60%~80%之间，以保持菌种的适宜生长环境。

3. 光照：大部分菌种对光照较为敏感，因此在保存菌种时应避免暴露在强光下。

通常使用阴暗保存的方法，或用遮光布、铝箔等材料进行遮挡，以防止光照导致菌种的损害。

4. 气体环境：有些菌种对氧气、二氧化碳等气体的需求较高，因此在保存时需要考虑这些气体的供应。

常见的方法是使用密闭容器进行保存，或者通过调节氧气和二氧化碳的浓度来维持菌种的生长环境。

二、保藏方法菌种的保藏方法有多种，常见的包括冻干法、冷冻法、液氮法等。

1. 冻干法：冻干法是一种将菌种经过预处理后进行冻干保存的方法。

首先，将菌种培养在适宜的培养基上，然后添加一定浓度的保护剂，如甘露醇、赖氨酸等，以增强菌种的抗冻性。

接着，将培养基中的菌液进行冷冻处理，使之形成冻干物，最后将冻干物存放在干燥、密封的容器中，通常保存在低温环境下。

2. 冷冻法：冷冻法是将菌种直接保存在低温环境下的一种方法。

通常将菌液经过培养和增殖后，使用特殊的冷冻液冷冻保存，如甘油、乳糖等。

冷冻保存时，要确保液氮罐的密封性和温度稳定性，以防止菌种失活。

3. 液氮法：液氮法是一种将菌种保存在液态氮中的方法。