厌氧培养

厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长 (例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至 0.11V 时才开始生长 )，在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。

为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。

现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学 3 种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。

1．生物学方法培养基中含有植物组织 (如马铃薯、燕麦、发芽谷物等 )或动物组织 (新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等 ) ，由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气(如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理 )，组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。

另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。

其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌(如枯草杆菌 )，另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37恒温箱中培养2~3d 后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。

2．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。

此法系用连二亚硫酸纳 (Sodium hydrosulphite) 和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204 十Na2C03十O2 一→ Na2SO4十Na2SO3 十C02取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内 (如系液体培养基，则直立于罐内 )，最上端保留可容纳 1~2 个平皿的空间 (视玻罐的体积而定 )，按玻罐的体积每1000cm3 空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各 30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。

若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭 (如图１－５ )。

一、厌氧培养的原理
厌氧培养的原理有两方面：一是除去与培养基接触的空气中的氧气；二是增强培养基的还原能力，达到吸收容量中的氧气的目的，是微生物处于无氧的环境中。

二、实验器材
菌种：魏氏梭菌
培养基：卵黄琼脂培养基、疱肉培养基
仪器：恒温水是培养箱、干燥器、真空泵、玻璃平皿、无菌脱脂棉、透明胶三、实验内容及方法
取疱肉培养基试剂管煮沸10——15分钟，感触其溶解的氧气，取出，并迅速冷却，切勿摇动，并按下列步骤操作：
1、接种样品均质液1——2ml或10ml，置于恒温30.C的培养箱内培养五天。

若无异常现象可再培养十天。

若产生混浊并散发奇臭怪味或发酵形成消化肉渣（底部出现黑色沉淀）的即为疱肉培养基试管呈阳性，咋可待用。

2、从阳性疱肉培养基试管中挑出菌种（菌株），划线于卵黄琼脂平板待用。

3、将上述处理后的平板至于干燥器内，在干燥器上涂一层凡士林使其密封，用真空泵抽成真空，立刻关闭干燥器活塞
4、在干燥器底部预先装2.0克焦性没食子酸粉末，并斜置一烧杯，其中装有200ml20%KOH溶液，当抽气完毕关闭干燥器的活塞后，轻轻摇动干燥器，使烧杯倾斜使焦性没食子酸粉末与KOH溶液互相混合，此时容器中的氧便被吸收
5、在干净的玻璃平皿底面上预先称取1g焦性没食子酸，盖上一块无菌脱脂棉，加入10%NAOH1ml，使其缓慢均匀地流入脱脂棉的四周及中心，待脱脂棉呈棕色时，迅速将待用划线卵黄琼脂培养基扣紧，接口处用宽透明胶带贴数圈（不得有气泡，保证平整）
6、将干燥皿、干燥器放入恒温37.C的培养箱培养24小时即可。

四、实验结果
观察菌是否生长。

常见的厌氧培养方法及其原理Anaerobic culture refers to the process of growing microorganisms in the absence of oxygen. 厌氧培养指的是在无氧条件下培养微生物的过程。

This method is crucial for studying and identifying anaerobic bacteria, which play an important role in various diseases and environmental processes. 这种方法对研究和鉴定厌氧细菌至关重要，而这些细菌在多种疾病和环境过程中扮演着重要角色。

There are several common anaerobic culture methods, each with its own principles and applications. 有几种常见的厌氧培养方法，每种方法都有其自身的原理和应用。

One of the most common methods is anaerobic jar cultivation, which uses a sealed container to create an oxygen-free environment. 最常见的方法之一是厌氧罐培养，它使用密封容器来创建无氧环境。

This technique involves placing the culture medium and the sample in the anaerobic jar, along with a chemical mixture that generates anaerobic conditions. 这种技术涉及将培养基和样品放入厌氧罐中，同时加入一种化学混合物，产生厌氧条件。

The jar is then sealed and placed in an incubator to allow the growth of anaerobic bacteria. 然后密封罐子，并放入培养箱中，以促进厌氧细菌的生长。

实验六、厌氧菌检验一、厌氧培养1、刨肉基法方法：将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在庖肉培养基中，35℃48h，观察结果。

2、厌氧罐法方法：将破伤风梭菌接种在高渗芽孢培养基中并放置于厌氧罐中；将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在血平板中并置于厌氧罐中，放厌氧袋，密闭，置35℃48h观察结果。

二、观察厌氧菌培养结果：1、庖肉基1）破伤风梭菌：肉汤混浊，部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭味。

2）产气荚膜梭菌：产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。

2、血平板1）破伤风梭菌：呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。

2）产气荚膜梭菌：多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外环不完全溶血。

3、梭菌平板破伤风梭菌：形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状。

三、涂片、革兰染色镜检：破伤风梭菌产气荚膜梭菌G-，细长，芽胞圆形，比菌体大，G+，粗短大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列。

位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体四、芽孢染色：制片①5%孔雀绿加热3~5min，水洗甩干；②0.5%沙黄水溶液染色0.5~1.0min，水洗甩干干后镜检，如图所示：菌体呈红色，芽孢呈淡绿色。

破伤风梭菌产气荚膜梭菌五、汹涌发酵试验（试教）产气荚膜梭菌：分解乳糖产酸，使酪蛋白变性，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，为“汹涌发酵”。

六、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。

2、所有接种的菌株暴露于有氧环境中不得超过20min3、厌氧菌检验：可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。

最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。

4、破伤风梭菌微生物检验：根据破伤风的典型临床表现即可作出诊断，故一般不作细菌学检查。

厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长（例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至0.11V 时才开始生长），在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。

为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。

现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学3 种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。

1 ．生物学方法培养基中含有植物组织（如马铃薯、燕麦、发芽谷物等）或动物组织（新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等），由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气（如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理），组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。

另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。

其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌（如枯草杆菌），另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37 恒温箱中培养2~3d 后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。

2 ．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。

（1）李伏夫（B • M Jibbob）法此法系用连二亚硫酸纳（Sodium hydrosulphite）和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204 十Na2C03十02—Na2SO4十Na2SO3十C02 取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内（如系液体培养基，则直立于罐内），最上端保留可容纳1~2 个平皿的空间（视玻罐的体积而定），按玻罐的体积每1000cm3空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。

若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭（如图1-5 ）。

厌氧培养的方法嘿，咱今儿就来说说这厌氧培养的方法！你可别小瞧它，这可是个大学问呢！咱先说说为啥要搞厌氧培养呀。

就好像有些小生物，它们就喜欢在没氧气的地方待着，要是给它们弄个有氧的环境，它们可就不乐意啦，就没法好好生长繁殖咯。

那怎么搞厌氧培养呢？首先得有个专门的容器吧，就像给这些小宝贝们准备个舒适的家。

这个容器得能把氧气隔绝得死死的，不能让一丝氧气溜进去。

你想想，要是有个缝儿，氧气钻进去了，那不就前功尽弃啦？然后呢，还得有一些特别的手段来创造无氧环境。

比如说，可以用一些化学试剂，让它们把氧气给“吃”掉，或者用一些物理方法，把氧气给挤出去。

这就好比是给这些小生物打造一个专属的无氧乐园。

再说说培养的条件吧。

温度呀，湿度呀，这些都得控制好。

温度高了低了都不行，就跟咱人一样，太冷太热都不舒服。

湿度也得恰到好处，太干了太湿了都不利于它们生长。

这就像是给它们准备的饭菜，得合口味才行。

还有啊，得注意无菌操作。

可不能让其他杂七杂八的细菌混进去，不然这厌氧培养不就乱套啦？这就好比是一场精心准备的宴会，可不能让不速之客来捣乱。

你说这厌氧培养是不是挺有意思的？就像是在给这些小生物当保姆，得方方面面都照顾到。

要是有一点疏忽，它们可能就不乐意啦，就长不好啦。

想象一下，要是没有厌氧培养，我们怎么能研究那些只能在无氧环境里生活的小生物呢？怎么能发现它们的奥秘呢？这厌氧培养就像是一把钥匙，能打开那神秘的无氧世界的大门。

所以啊，可别小看这厌氧培养的方法，这里面的学问大着呢！咱得认真对待，仔细研究，才能让这些小生物在无氧的世界里茁壮成长，为我们带来更多的惊喜和发现。

怎么样，是不是对厌氧培养有了更深的认识啦？。

厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气存在下生长和繁殖的微生物。

这些微生物在许多领域都具有重要的应用价值，包括环境保护、生物能源生产等。

因此，为了研究和应用这些厌氧菌，科学家们发展了多种厌氧菌的培养方法。

本文将详细介绍常用的三种厌氧菌的培养方法。

一、利用情境气氛培养厌氧菌情境气氛培养是培养厌氧菌的一种常用方法，其原理是通过调节培养基的气氛来控制氧气浓度。

在培养厌氧菌时，一般会采用以下方法之一来制备情境气氛。

1.预氧化法：将培养容器密封，置于28-37°C的恒温灭菌箱中。

然后通过注入一定比例的高纯度二氧化碳-氧气混合气体，使容器内的气氛变为厌氧情境。

这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较低的情况。

2.双液低压法：将培养基分成两个相隔的容器，分别加入不同的培养液。

然后将两个容器封口并贴膜，用胶带封好。

经过一段时间后，在密封的容器内会形成低压情境。

这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较高的情况。

通过以上两种情境气氛培养方法，可以模拟出适合厌氧菌生长的条件。

二、利用厌氧培养器培养厌氧菌厌氧培养器是一种专门用于培养厌氧菌的装置，其原理是通过封闭式容器和气氛控制系统，实现在厌氧情境下的培养。

常用的厌氧培养器有以下两种类型：1.商用厌氧培养器：通常有专门的培养室和压力控制系统，可以产生适合厌氧菌生长的气氛。

在这种培养器中，可以根据菌株的特性进行相应的操作和调节。

2.自制厌氧培养器：由于商用的厌氧培养器设备较为昂贵，对于一些实验室来说并不实际。

因此，一些实验室会开发自己的厌氧培养器。

自制培养器的原理和商用培养器类似，只是在设计和制作上有所差异。

利用厌氧培养器进行培养时，需要注意以下几点：1.气氛控制：厌氧培养器应能够调节培养基的气氛，包括氮气、二氧化碳等气体的供应和排除。

2.温度调节：厌氧培养器应能够保持恒定的培养温度，一般为28-37°C。

3.培养基搅拌：适当的培养基搅拌可以增加氧气的溶解度，并促进菌体的生长和分散。

实验十二厌氧性细菌（厌氧培养方法）厌氧性细菌（Anaerobicbacteria）是一大群必须在无氧或低氧环境中才能生长繁殖的细菌；一般情况下，这类细菌在无氧条件下比在有氧环境中生长好，不能在空气（氧气浓度大于18%）和（或）二氧化碳浓度小于10%以下的固体培养基表面生长。

这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢多以无氧发酵的方式进行。

它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。

（一）无芽胞厌氧菌主要种类及生物学性状无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。

1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。

形态呈多形性，有荚膜。

除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。

2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。

为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。

其他革兰阴性球菌极少分离到。

3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。

本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。

4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：（1）丙酸杆菌属：小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。

（2）双歧杆菌：呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。

29个种中有10个种与人类有关，其中只有齿双歧杆菌与龋齿和牙周炎有关。

其他种极少从临床标本中分离到。

（3）优杆菌属：单一形态或多形态，动力不定，严格厌氧，生化反应活泼，生长缓慢，常需培养7天，最常见的是迟钝优杆菌。

（二）微生物学检查要从感染灶深部采取标本。

最好是切取感染灶组织或活检标本，立即送检医.学教育网搜集整理。

1.直接涂片镜检：将采集的标本直接涂片染色镜检，观察细菌形态、染色及菌量，为进一步培养以及初步诊断提供依据。