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实验十二 转氨作用【实验目的】1．通过实验掌握水平方向滤纸层析原理和技术 2．了解转氨作用过程。
【实验原理】转氨基作用是由转氨酶（氨基转移酶）催化的，在这个反应中，α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间交换，α-氨基酸转变成相应的α-酮酸，α-酮酸变成新的一种α-氨基酸。
转氨基作用是一种可逆反应。
每个转氨基反应均由专一的转氨酶所催化，在不同的生物有机体中均有转氨酶分布。
本实验是将丙氨酸和α-酮戊二酸与肝匀浆一起水浴反应，肝中的丙氨酸氨基转移酶（ALT ，又称谷丙转氨酶GPT ）含量丰富，该酶可将丙氨酸的氨基转移给α-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。
利用圆盘纸层析鉴定谷氨酸的存在，并且验证组织中的转氨作用。
在肝脏谷丙转氨酶(GPT)催化的转氨基作用，反应方程式如下：CHCOOH CH 2NH 2CH 2COOH ++COCOOH CH 3CHCH 3COOH NH 2CCOOH CH 2OCH 2COOH 谷氨酸丙氨酸丙酮酸α‐酮戊二酸【实验材料】1． 实验器材培养皿；表面皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格尺。
2． 实验试剂⑴ 0.01M pH7.4磷酸缓冲液：0.2MNa 2HPO 4溶液81ml , 0.2MNaH 2P04溶液19ml 混匀，蒸馏水稀释20倍。
⑵ 0.1M 丙氨酸溶液：称取丙氨酸0.891克先溶于少量0.01MpH7.4磷酸缓冲液中，以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑶ 0.01M ａ-酮戊二酸溶液：称取ａ-酮戊二酸1.461克先溶于少量0.01M pH7.4磷酸缓冲液中，用1M Na0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑷ 0.1M 谷氨酸溶液：称取谷氨酸0.735克先溶于少量0．01M pH7.4磷酸缓冲液中， 以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸缓冲液加至100ml 。
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP丙氨酸胺基转移酶（alanine aminotransferase，ALT），又称谷丙转氨酶，是一种存在于细胞内的酶，主要分布于肝脏、心肌、肾脏和肌肉组织中。
ALT的主要功能是参与氨基酸代谢，将丙氨酸转化为丙酮酸，并把谷氨酸转化为谷酸。
ALT是一种常用的临床血液生化指标之一，用于评估肝细胞损伤和肝功能。
ALT水平常常在肝脏疾病、肝细胞损伤和一些非肝脏疾病中发生变化，因此，ALT的测定具有重要的临床意义。
测定ALT的方法是通过检测血液中ALT的活性。
以下是丙氨酸胺基转移酶测定的SOP（标准操作程序）：1. 准备样本：选择新鲜的全血或血清样本。
尽量避免使用有凝块的样本。
将样本转移到离心管中，并在3000 rpm的离心机中离心10分钟。
2.样本处理：将血清分装到干净的离心管中，避免沉淀和异物。
在2-8摄氏度的条件下保存样本，如无法在2小时内进行测定，应冷冻保存。
3.实验准备：将所需试剂室温恢复至室温，配制工作液，准备好标准品和质控品。
4.仪器设定：打开酶标仪，选择ALT测定程序。
根据仪器的要求进行设定。
5.样本测定：将标准品和质控品与样本一起放置在仪器的试剂槽中。
按照仪器的操作指南，进行试剂的加入和反应的进行。
6.记录结果：根据仪器的操作指南，测定样本的吸光度，并记录下结果。
计算样本的ALT浓度。
7.结果分析：根据仪器的参考范围和临床经验，对ALT的测定结果进行分析和解读。
1.评估肝脏健康状况：ALT水平是评估肝细胞损伤和肝功能的重要指标之一、高ALT水平可以提示肝脏病变或损伤，如肝炎、肝硬化等。
2.监测肝炎治疗效果：ALT水平在肝炎治疗中常被用来监测治疗效果。
治疗有效时，ALT水平会下降。
3.鉴别肝脏疾病：ALT水平的变化可以用来鉴别肝脏疾病的类型。
例如，在急性肝炎中，ALT水平常常显著升高。
而在慢性肝病中，ALT水平可能轻度升高或持续在正常范围内。
丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。
检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。
下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。
一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。
具体步骤如下：1.患者空腹4～8小时。
2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。
3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。
4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。
二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确的测试结果。
具体步骤如下：1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。
2.采集患者的静脉血标本。
3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。
4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。
三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。
具体步骤如下：1.准备特定的抗ALT抗体试剂。
2.采集患者的静脉血标本。
3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。
4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。
5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。
综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。
针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。
总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。
您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。
货号: QS1900 规格：50管/24样谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。
此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。
因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
测定原理：GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体5 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体5 mL×1瓶，4℃避光保存；试剂三：液体50 mL×1瓶，4℃保存；样品测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定操作表：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
血清转氨酶（GPT、GOT）活性的测定【原理】酶的活性即酶的催化效能，在一定条件下酶活性的高低代表酶的含量的多少，故酶活性的测定也即相当于酶含量的测定。
酶的活性通常都是在一定条件下（最适温度、最适的pH、必要的激动剂等），一定的时间内，测定该酶所催化的反应系统中底物的消耗量或产物生成量来确定的。
血清谷丙转氨酶（SGPT）及血清谷草转氨酸（SGOT）分别以丙氨酸和α-酮戊二酸；天冬氨酸和α-酮戊二酸为底物，催化它们进行如下反应：在SGOT催化下所生成的草酰乙酸又可在β脱羧酶和枸橼酸苯胺作用下脱羧，生成丙酮酸，而丙酮酸则可与2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈棕色，在520nm比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙之光吸收远丙酮酸二硝基苯腙为低。
在反应后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，故520nm处光密度增加之程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸之克分子比例成线性关系。
一般临床上用以测定SGPT及SGOT活性的方法有改良的穆氏法、金氏法及赖氏法，这些方法都是基于上述原理而设计的，操作也基本相同，只是这些实验的某些条件、活性单位的规定和计算有所差异。
改良的穆氏法（Mohun）规定血清在37（pH7.4）的条件下，与底物作用30分钟后，每生成2.5μg丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
金氏法（King）则规定在同上条件下，与底物作用60分钟后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
赖氏法（Reitman）本身并未对转氨酶活性单位提出规定，他是用卡门氏法（Karman）来定单位的。
卡门氏法是在紫外分光光度计中用1毫升血清，反应溶液总量为3毫升，在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，25℃ 1分钟内所产生的丙酮酸，在乳酸脱氢酶作用下，使NADH变成NAD+，而引起光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。
而赖氏法则是用卡门氏法所测出的单位数相当于赖氏法所产生的丙酮酸量的相关系数，套用卡门氏单位而来。
第 1 页，共3 页谷丙转氨酶（GPT/ALT ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1555规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2支4℃保存试剂二液体3.5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体30 mL×1瓶4℃保存标准液液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：提供1个8 mL 棕瓶；临用前取1支试剂一倒入空瓶中，用2 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来；2、标准液：20 μmol /mL 丙酮酸钠。
产品说明：谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），GPT （EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。
此外，哺乳动物肝细胞GPT 活性很高，当肝细胞坏死，GPT 释放到血液中，血清GPT 活性显著增高。
因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm 读取吸光值并计算酶活力。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细胞或细菌的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或细菌加入1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率20%，超声3s ，间隔10s ，重复30次）。
谷丙转氨酶的测定方法嘿，谷丙转氨酶的测定方法啊，那咱可得好好说说。
这谷丙转氨酶可是个重要的指标呢。
首先呢，一般是去医院或者体检中心来测这个谷丙转氨酶。
你可别随便找个小地方瞎测哦，那可能不准。
到了地方呢，医生会给你开个单子，让你去抽血。
抽血的时候别紧张哈，就当被小蚊子叮了一下。
护士会用一根针管扎进你的血管，把血抽出来。
抽完血后，护士会给你一个棉球，让你按住针眼，可别让血一直流。
接着呢，抽出来的血就会被送到实验室去检测谷丙转氨酶。
实验室里有专门的仪器和试剂来做这个检测。
检测的方法有好几种呢，常见的有比色法和酶联免疫法。
比色法呢，就是根据血液中的谷丙转氨酶和试剂发生反应后产生的颜色变化来判断谷丙转氨酶的含量。
酶联免疫法呢，就是利用抗体和抗原的特异性结合来检测谷丙转氨酶。
听起来有点复杂哈，其实不用你懂这些原理，只要知道有这些方法就行啦。
然后呢，等一段时间，检测结果就会出来啦。
医生会根据结果告诉你谷丙转氨酶是不是正常。
如果谷丙转氨酶高了，那可能就说明你的肝脏有点问题哦。
不过也别太担心，有时候可能是因为你最近太累了，或者吃了什么药，也会影响谷丙转氨酶的数值。
我给你讲个事儿哈。
我有个朋友，他平时不怎么注意身体，经常熬夜喝酒。
有一次他去体检，结果发现谷丙转氨酶特别高。
他可吓坏了，赶紧去看医生。
医生让他好好休息，别喝酒了，还给他开了一些药。
他按照医生的话做了，过了一段时间再去检查，谷丙转氨酶就降下来了。
你要是也去测谷丙转氨酶，可一定要注意自己的身体哦，要是结果不正常，就得赶紧找医生看看。
实验二（2）转氨酶（GPT）活性的测定一．研究背景及目的转氨酶是生物体内重要的一类酶。
转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。
转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。
其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。
GPT与GOT活性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。
GPT催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。
由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。
本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。
二．原理由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP的活性进行测定。
转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆氏法及赖氏法等较成熟的基本方法，本实验采用的是金氏法。
该方法对转氨酶活力的定义是：血清在37℃，pH7.4条件下，与底物作用60min后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
丙酮酸含量的测定运用的是比色法。
丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，所以通过测定溶液在520nm下的光吸收值并与标准溶液比色便可计算出丙酮酸的含量，丙酮酸的含量对应于一定的转氨酶活力单位。
三．材料、试剂与仪器材料：新鲜家兔肝脏和血清试剂[1]：①磷酸盐缓冲液（pH7.4）甲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液乙液：1/15 mol/L磷酸氢二钾溶液取甲液825ml，乙液175ml，混合，测得pH为7.4即可。
ALT检测操作规程ALT（丙氨酸氨基转移酶）是一种存在于细胞质中的酶，广泛分布于人体包括肝脏、心脏、肾脏等组织中。
ALT是肝脏功能的重要指标之一，通过测量血液中ALT的活性，可以评估肝脏功能的健康程度。
本文将介绍ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测操作规程（速率法）。
一、实验器材和试剂准备1.乙醚：用于准备昏迷鼠模型；2.丙酮：用于制备丙酮胺溶液；3.氯化二乙酸：用于制备氯化二乙酰胺试剂；4.丙酮胺：用于制备丙酮胺溶液；5.磷酸氢二钾溶液：用于制备缓冲液；6.氧化丙酮胺：用于制备氧化丙酮胺试剂；7.pH7.0缓冲液：用于制备反应体系；8.4-氨基硫代洪美酸：用于停止反应；9.甲醛：用于制备甲醛溶液；10.维生素C溶液：用于制备维生素C溶液；11.肝组织磷酸化酰胺：用于制备肝组织提取液；12.酶提取液：用于提取ALT酶。
二、实验步骤1.制备ALT酶提取物：（1）取新鲜动物（小鼠）肝脏组织15g，加入磷酸缓冲液5倍的体积；（2）放入冷冻机中，-20℃下保存12h；（3）取出，加入万能匀浆器中，对肝脏组织进行研磨；（4）将研磨后的肝脏组织加入毛细管离心管中，进行离心，1800r/min 离心10 min；（5）将提取液转入新的毛细管离心管中，再次离心，3000r/min 离心10 min；（6）将上清液收集至离心管中，取出备用。
2.制备标准曲线：（1）取6个试管，分别标记为A、B、C、D、E、F，一个空白试管用作对照；（2）分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml的ALT 酶提取液；（3）加入pH 7.0缓冲液，使总体积为2.0ml；（4）每个试管中加入0.2ml的氧化丙酮胺试剂；（5）按顺序加入2ml、0.2ml、2ml的维生素C溶液、氧化丙酮胺试剂和ALT提取液；（6）加入4-氨基硫代洪美酸停止反应，并立即搅拌均匀；（7）用甲醛溶液处理样品；（8）分别在0.1、0.2、0.3、0.4及0.5的浓度范围内，测定样品的吸光度。
2014级12班1组201450557 陆丽霞血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定实验原理：以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，在血清丙氨酸氨基转移酶的作用下，生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性的大小,丙氨酸能与2，4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸二硝基苯腙。
丙酮酸二硝基苯腙在碱性溶液中呈现棕色，可用比色测定。
实验步骤：1.标准曲线绘制：⑴取6支试管并编号，按表4-16操作；表4-16 标准曲线的绘制试剂对照 1 2 3 4 52mmol/L丙酮酸标准液0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25底物溶液0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 PBS缓冲液0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37摄氏度水浴5分钟，然后各管加入2,4—二硝基苯肼2,4——二硝基苯肼0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0相当于ALT活力单位0 28 57 97 150 200A5200 0.059 0.107 0.167 0.208 0.249⑵将所得6支试管混匀，10min后以对照组调零，用520nm波长比色并读取吸光度；⑶以吸光度为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标，绘制标准曲线2．酶活性测定：⑴取2支试管，编号，按表4-17操作：表2 ALT活力测定试剂对照测定血清——0.1PBS缓冲液0.1 ——底物溶液0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴30分钟，然后各管加入2,4——二硝基苯肼2,4—二硝基苯肼0.5 0.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH 5.0 5.0A5200 0.122⑵用520nm波长比色，以对照管调零，读取测定管吸光度；实验结果:由标准曲线方程y=0.0014x，当A520=0.122，即y=0.122，故x=87那么测得ALT酶活力单位为87讨论：1．查资料得参考正常值为40单位以下，实验测得ALT酶活力单位为87，机体可能发生了肝病变。
