黑豆皮花青素提取物的抗氧化活性研究

中图分类号 ：Ｔ Ｓ ２ ０ １ 文献标 志码 ：Ａ ｄ ｏ ｉ ：１ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ １ — ９ ６ ４ ６ （ Ｘ） ． ２ ０ １ ３ ． １ ２ ． ０ ３ ４
Ａｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ Ａｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ０ ｆ Ａｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ Ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｂ ｌ ａ ｃ ｋ Ｓ ｏ ｙ ｂ ｅ ａ ｎ Ｓ ｋ ｉ ｎ
一
羟 自由基 清 除率 ：
Ａｏ
×１ ０ ０ ％．
（ １ ）
＼
式中：Ａ （ 广 空白的平均吸光度 ； Ａ ——样品溶液的平均吸光度 。 １ ． ３ ． ３ 黑豆皮花青素对 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ 自由基清除作用的测定用 将 黑 豆 皮 花 青 素 提 取 物 配 成 质 量 浓 度 分 别 为 ０ ． ０ １ ，０ ． ０ ２ ，０ ． ０ ３ ，０ ． ０ ４ ，０ ． ０ ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 的 溶 液 ， 将 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ溶 解 在 无 水 乙醇 中配 制 成 ２×１ ０ ４ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的溶 液 。将待测样 品与 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ乙醇溶液各取 ２ ｍ Ｌ混匀 ， 室 温 避 光 条 件下 静 置 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ，在 分光 光 度计 下波 长 为５ １ ７ ｎ ｍ处测定其吸光 度 ，平行测定 ３ 次取均值 。 同时做空白对照 ，以 Ｖ Ｃ作为 阳性对照 ，对 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ自 由基 的清 除率 的计 算 式如 下 。
ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｉ ｓ ｅ ｑ ｕ ｉ ｖ ｌｅ ａ ｎ ｔ ｔ ｏ ４ ７ ． ｏ ｏ ％ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ａ ｓ ｃ ｏ ｒ ｂ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ｃ ａ ｐ ａ ｃ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｈｅ ｔ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｉ ｓ ｅ ｑ ｕ ｉ ｖ ｌｅ ａ ｎ ｔ ｔ ０ ｌ ０Ｉ ２ ２ ％ ｎ ｆ ｈｅ ｔ ａ ｓ ｃ ｏ ｒ ｂ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ：ｂ ｌ ａ ｃ ｋ ｓ ｏ ｙ ｂ ｅ ａ ｎ ｓ ；ａ ｎ ｔ ｈ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ｘ ｒ ｔ ａ ｃ ｔ ｓ ；ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ａ ｃ ｉ ｔ ｖ ｉ ｔ ｙ
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｔｈ ｅ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ａ ｃ ｉ ｔ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ａ ｎ ｔ ｈ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ｘ ｒａ ｔ ｃ ｔ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｂ ｌ ａ ｃ ｋ ｓ ｏ ｙ ｂ ｅ ａ ｎ ｓ ｓ ｋ ｉ ｎ ｉ Ｓ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｄ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍｓ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｉ ｔ ｗ ｉ ｔ ｈ ｖ ｉ ｔ ａ ｍｉ ｎ Ｃ．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ Ｏ Ｗ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ｈｏ ｔ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｓ ｐ ｏ ｓ ｓ ｅ ｓ ｓ
收稿 日期 ：２ ０ １ ３ — １ １ － １ ９ 作者简介 ： 杨 民乐 （ １ ９ ５ ７ 一
皮花青素类 物质的抗氧化活性做 出评价 ，以期 为黑 豆的抗氧化保健功能研究提供一定 的理论依据。
１ 材 料 与方 法
１ ． １ 材料与试剂 黑 豆 皮 ，山 西 青 玉 油 脂 有 限公 司产 品 ；Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ， 美国 Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ 公司产品 ；总抗氧化能力 （ Ｔ — Ａ Ｏ Ｃ ）检测 试剂盒 ，南京建 成生物 工程有 限公 司产 品 ；硫 酸亚铁 、 水杨 酸 、无水 乙醇 、抗坏 血酸 （ ｖＣ ） ，均为分析纯 。 １ ． ２ 仪器与设备 Ｓ Ｐ 一 ２ ０ ０ Ｕ Ｖ型紫外分光光度计 ，上海光谱仪器有 限公司产 品 ；Ｊ Ｐ 一 ０ ４ ０ Ｓ Ｔ型深圳市洁盟清洗设备有限 公 司 产 品 ；Ｓ ＨＺ — Ｄ （ Ｉ Ｉ Ｉ ） 型循环 水式 多用真 空泵 ， 巩义市英峪予华有 限公 司产 品 ；Ｒ 一 ２ ０ １ 型旋转蒸发 仪 ，上海 申生生物技术有限公司产品。 １ ． ３ 方法
第１ ２ 期 （ 总第 ３ ３ ８ 期）
２ ０ １ ３年 １ ２月
农 产品加工 （ 学刊）
Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍｉ ｃ Ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆ ａ ｒ ｍ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ Ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ ｇ
Ｎｏ同体系研究黑豆皮花青素提取物的体外抗氧化活性 ，并与 Ｖ Ｃ 作 比较 。结果显示 ， 黑 豆皮 花青 素提取物 具有抗氧化功 能 ，并且存在一定 的效量关 系 ，但在不 同的体外抗氧 化体系 中活性 有所差异 。黑豆皮花青素提取 物清 除Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ 自由基的能力相当于 Ｖ Ｃ的 ２ ８ ． ７ ６ ％ ；黑豆皮花青素提取物 清除羟 自由基 的能力相 当于 Ｖ Ｃ的 ４ ７ ． ０ ０ ％ ；黑豆 皮花青素提取物总抗氧化能力相 当于 Ｖ Ｃ的 １ ０ ． ２ ２ ％。 关键词 ：黑豆 ；花青素提取物 ；抗 氧化性
） ，男 ，山西人 ，副教授 ，研究方 向：食品新工艺与食 品安全 。
农产 品加工 （ 学刊 ）
２ ０ １ ３ 年第 １ ２ 期
１ ． ３ ． １ 黑豆 皮花 青 素提 取 物 的制备 称取 一定量 的黑豆皮样 品 ，经粉碎 机粉碎过 ６ ０目
取样 量 ） ；
ｎ ——样本稀释前稀释倍数 。
黑豆 （ Ｂ ｌ ａ ｃ ｋ Ｓ ｏ ｙ ｂ ｅ ａ ｒ ） 又称 乌 豆 ，原 产 于 中 国 ， 究报道较少 。本试验采用多种体外评 价方法对 黑豆
与大豆 同属豆科植物 。黑豆适应性强 ，耐贫瘠 、耐 干旱 、耐盐碱 ，在全 国各地广泛栽培 ，其 中以山西 、 河北 、陕西栽培较多［ １ ］ 。黑豆 中蛋 白质 、氨基酸 、脂 肪 、维生素 、 － 微量元素和粗纤 维的含量 丰富 ，其 味 甘性平 ，具有祛风除热 、调 中下气 、解毒利尿 、补 。 肾养 血之功能圆 。花青 素作为黑 豆皮色素 的主要成 分 ，是一种很好的抗 氧化 剂。黑豆皮花青素是 羟基 供体 ，同时也是一种 自由基清除剂 ，不仅 能与蛋 白 质结合 防止过 氧化 ，也 与 ｃ ｕ 等螯 合 ，防止 Ｖ Ｃ过 氧化 ，再生 Ｖ Ｃ ，从而再生 Ｖ Ｅ ，也能淬灭单线态氧。 花 青 素 能 与 金 属 离 子 螯 合 或 形 成 花 青 素 一金 属 Ｃ ｕ — Ｖ Ｃ复合物ｐ ． 卅 。由于 同一种具有抗 氧化活性 的物 质在不同的抗 氧化测定体 系中表现 出的抗氧化活性 不 同，因此全面地评价一种物质 的抗氧化能力就要 采用 多种 评 价方 法嘲 。 目前 ，关于黑豆皮 花青素类物质 的生理功能研
ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ｎｔ ａ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ ｄ ｏ ｓ ａ ｇ ｅ － ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｔ ｍａ ｎ ｎ ｅ ｒ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｖ ａ ｒ ｉ ｅ ｓ ｗｉ ｈ ｔ ｔ ｈ ｅ ｔ ｙ ｐ ｅ ｏ ｆ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍｓ ．Ｔ ｈ ｅ ＤＰ Ｐ Ｈ ｒ ａ ｄ ｉ ａ ｌ ｓ ｃ ａ ｖ ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｇ
ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｓ ｍｐ ａ ｌ ｅ ｓ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｉ ｔ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｓ ｅ ｑ ｕ ｉ ｖ ｌ ａ ｅ ｎ ｔ ｔ ｏ ２ ８ ． ７ ６ ％ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ａ ｓ ｃ ｏ ｒ ｂ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙ ｌ ｆ ｒ ｅ ｅ ｒ ａ ｄ ｉ ｃ ｌ ａ ｓ ｃ ａ ｖ ｅ ｎ ｉ ｇ ｎ ｇ
Ｙ Ａ Ｎ Ｇ Ｍｉ Ｉ ｌ — ｌ ｅ ，ＨＯ Ｕ Ｊ ｕ ｎ － ｘ ｉ ａ ｎ ，Ｃ ＨＥ Ｎ Ｓ ｈ ｕ － ｊ ｕ ｎ ，Ｚ Ｈ Ａ Ｏ Ｒ ｕ ｉ — ｈ ｕ ａ ｎ ， Ｋ ＡＮ Ｇ Ｊ ｕ ｎ － ｊ ｉ ｅ ， ⅡＡ Ｎ Ｊ ｉ ｎ － ｒ ｕ ｉ ，Ｐ Ａ Ｎ Ｇ Ｚ ｈ ｅ ｎ － ｐ ｅ ｎ ｇ ，ＵＵ Ｘ ｉ ． ｏ － － ｊ Ｕ ａ ｌ ｑ ｔ ，Ｚ Ｈ Ａ ０： Ｋ ｉ ｎ （ Ｃ ｏ Ｈ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ，Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｔ ａ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ ，Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ ０ ３ ０ ０ ０ ６ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
料
逛
质量浓度 ／ ｍｇ ・ ｍＬ －
图２ Ｖ Ｃ 对 羟 基 自 由基 的 清 除 率
由图 １ 和 图 ２可 知 ，黑 豆皮 花 青 素提 取 物和 Ｖ Ｃ 对 羟 基 自 由基 清 除率 与 质量 浓 度 均 呈 线 性 相 关 ，Ｒ ｚ 分别为 ０ ． ９ ６ ２ ２和 ０ ． ９ ９ ０ ８ ， 回归 方 程 显 著 。 即黑 豆
文章编号 ：１ ６ ７ １ — ９ ６ ４ ６（ ２ ０ １ ３ ）１ ２ ｂ 一 ０ ０ １ １ — ０ ３
黑豆皮花青素提取 物 的抗氧化活性研 究
杨 民 乐 ，侯 俊 仙 ，陈树 俊 ，赵 瑞 欢 ，
康俊 杰 ，田津瑞 ，庞震鹏 ，刘晓娟 ，赵
（ 山西大学 生命科学学 院，山西 太原 ０ ３ ０ ０ ０ ６ ）
筛 。在 ｐ Ｈ值 ｌ ，乙醇体积分数 ７ ０ ％，料液 比 ｌ： ６ Ｏ ， ２ 结 果与分 析 ５ ０ ｃ Ｉ ＝ 条件下 ，超声波辅助提取 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ｉ ６ １ 。相 同操作 提取 ３ 次 ，合并经提取后 的上清液 ，离心 、真空抽 ２ ． １ 黑豆皮花青素清除羟基 自由基能力测定结果 滤去渣 ， ４ Ｏ℃旋转蒸发至黏稠。 黑豆皮花青素提取物对羟基 自由基的清除率见 １ ． ３ ． ２ 黑豆皮花青素清除羟 自由基能力的测定 图１ ，Ｖ Ｃ对羟基 自由基 的清除率见图 ２ 。 将 黑 豆 皮 花 青 素 提 取 物 配 成 质 量 浓 度 分 别 为 ０ ． ２ ，０ ． ４ ，０ ． ６ ，０ ． ８ ，１ ． ０ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ的溶液 ，反 应试 管 中 次加 入 浓度 均 为 １ ． ８ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ Ｆ ｅ Ｓ Ｏ 和水杨 酸 ２ ｍ Ｌ ， 褂 摇 匀加 入 各 不 同浓 度 的样 品 ，最 后 加入 ０ ． ３ ％的 Ｈ： ０ ： 蜒 １ ｍ Ｌ ，３ ７℃水浴条件下反应 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ，在分光光度计 下 波 长为 ５ １ ０ ｎ ｍ处 测 定其 吸 光度 ，平行 测 定 ３次 取 质量浓度 ／ ｍ ｇ ・ ｍＬ － 平 均值 。同时做 空 白对 照 ，相 同操 作 以 Ｖ Ｃ作 阳性 对 图１ 黑豆皮花青素提取物对羟基 自由基 的清 除率 照 ，对 羟 自由基 的清除率 计算 式如 下 。