纳豆红曲葡萄籽组合辅助降血脂功能试验
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研究与探讨Y952018年5月·下纳豆红曲葡萄籽组合辅助降血脂功能试验王荣昌1 朱 勤1 郁 桦1 李 玲1 王玉莹1 甘 露1 汪普林1 匡 荣2 朱社敏2(1.江苏天美健大自然生物工程有限公司,江苏 南京 210000;2.浙江省食品药品检验研究院,浙江 杭州 310052)摘 要 目的:研究纳豆红曲葡萄籽组合辅助降血脂功能。
方法:辅助降血脂功能实验设0.33、0.67、 2.0g/kg·bw 低、中、高三个剂量组,分别相当于人推荐量的5、10、30倍,同时设空白对照组、模型对照组。
实验采用混合型高脂血症动物模型,连续30天经口给予大鼠不同浓度的受试样品液,空白对照组、模型对照组同时给予等量灭菌纯化水。
实验结果:模型对照组与空白对照组比较,大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平升高,高密度脂蛋白(HDL-C)水平降低,差异均具有显著性意义(P<0.01),模型成立;给予受试样品30天后,与模型对照组比较,低、中、高剂量组大鼠TC 水平及TG 水平均下降,差异均具有显著性意义(P<0.01),各剂量组LDL-C、HDL-C 水平均未见明显差异。
结论:纳豆红曲葡萄籽组合在本试验条件下具有辅助降血脂功能。
关键词 纳豆;红曲;葡萄籽;辅助降血脂1 综述纳豆是大豆经过纳豆芽孢杆菌发酵而成,其含有的纳豆激酶能够有效清除人体血液内的血栓[1],且研究表明纳豆可降胆固醇和甘油三酯。
因此,纳豆具有溶解血栓、降血压、降血脂等功能[2-3]。
红曲是首先发现具有降脂作用的中药,其降脂成分为洛伐他汀,洛伐他汀是胆固醇合成途径中HMG-CoA 还原酶的竞争性抑制剂,可以有效减少或阻断内源性胆固醇的合成[4], 葡萄作为药食兼用植物, 其医疗保健作用受到国内外预防医学领域的广泛关注。
葡萄籽提取物的主要功能成分是原花青素 ,原花青素等具有降血脂、抗氧化、致突变等作用[5-6]。
纳豆红曲葡萄籽组合物是由纳豆、红曲、葡萄籽提取物制成的保健食品,本文研究了该组合制剂对高脂血症模型大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C 的影响,为其更好的开发利用提供理论依据。
2 材料与方法2.1 样品与剂量:纳豆红曲葡萄籽胶囊样品由某生物科技有限公司提供,人用推荐剂量为66.67mg/kg.bw/日(人以60kg 计)。
按国食药监保化[2012]107号文附件6辅助降血脂功能评价方法,本实验设三个剂量组、空白对照组和模型对照组。
空白对照组给予维持饲料,模型对照组及三个剂量组给予模型饲料,低、中、高三个剂量分别为0.33、0.67和2.0g/kg.bw/日(相当于人推荐量的5、10和30倍),最低剂量组折合成原药材:相当于纳豆0.25 g/kg.bw/日、红曲0.033 g/kg.bw/日、葡萄籽1.410.033 g/kg.bw/日(该提取物得率3.5%)。
2.2 实验动物及设施:本实验由浙江省食品药品检验研究院操作,该机构为国家食品药品监督管理局遴选确定保健食品注册检验机构。
实验用SD 大鼠由昭衍(苏州)新药研究中心有限公司提供,生产许可证号为SCXK(苏)20130003,清洁级,雄性,购入时体重为150-170g,动物质量合格证号为No.201710087。
维持饲料和模型饲料由江苏协同医药生物工程有限公司生产,生产许可证号为苏饲证(2014)01008,检测环境条件:实验动物使用许可证号为SYX(浙)2016-0009,饲养环境:温度范围20-25℃,相对湿度范围40-70%。
2.3 实验试剂与仪器:实验试剂:总胆固醇测定试剂盒(酶试剂法)、甘油三脂测定试剂盒(形试剂法)采购于德赛诊断系统(上海)有限公司;高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒R1及剂盒R2、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒R1及试剂盒R2均采购于日本和光纯药工业株式会社。
试验仪器:株式会社日立制作所生产的日立全自动生化分析仪(7180型);余姚市金诺天平仪器有限公司生产的电子天平(TD12001型)。
2.4 统计方法:实验数据以平均值±标准差(x ±s)表示,方差分析和统计学检验采用孙瑞元等编辑的DAS 统计软件中多组均数分析。
先对数据进行方差齐性检验,若方差齐,采用单因素方差分析进行总体比较,发现差异再用T 检验法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。
若方差不齐则改用秩和检验进行统计。
3 实验方法按国食药监保化[2012]107号文附件6辅助降血脂功能评价方法进行实验,具体如下:3.1 造模:取适应期结束SD 大鼠112只,体重180-220g,按体重随机取12只大鼠为空白对照,大鼠给予维持饲料;其众大鼠均给子定制的模型饲料。
1周后,所有大鼠均不禁食眼内毗采血,采血后分离血清,用全自动生化分析仪测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平。
选取造模成功大鼠48只,根据TC 水平将大鼠随机分成低、中、高三个样品组和一个模型对照组,每组12只,分组后各样品组和模型对照组比较TC、TG、LDL-C 和HDL-C 水平及初始体重差异应均无显著性,空白对照12只大鼠为空白对照组。
3.2 受试样品的给予:低、中、高三个样品组分别灌胃给予相应的样品液,模型对照组和空白对照组大鼠均灌胃给予灭菌的纯化水,每天一次,连续30天,试验期间,空白对照组给予维持饲料,模型对照组和各样品组给予模型饲料。
3.3 指标检测:在给受试样品第1、2、3、4周,称取大鼠体重。
给受试样品第30天,在给予受试样品1h 后,大鼠不禁食限内毗采血,采血后分离血清,用全自动生化分析仪测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平。
4 实验结果4.1 造模后大鼠分组试验结果结果见表1.原始数据均符合方差齐性要求,与空白对照组比较,模型对照组大鼠TC、TG、LDL-C 水平升高,HDL-C 水平降低,差异均具有显著性意义(P<0.01),说明模型成立,与模型对照组比较,各剂量组大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C 差异均无品书性意义(P>0.05),即分组符合要求。
4.2 辅助降血脂功能评价试验结果结果见表2.原始数据均符合方差齐性要求,与空白对照组比较,模型对照组大鼠TC、TG、LDL-C 水平升高,HDL-C 水平降低,差异均有显著性意义(P<0.01), 说明模型成立。
与模型对照组比较,低、中、高剂量组大鼠TC 水平及TG 水平均下降,差异均具有显著性意义(P<0.01),同时,各剂量组大鼠的HDL-C、LDL-C 水平和模型对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05),显示本试验组合具有辅助降血脂功能。
研究与探讨Y 962018年5月·下表1 造模后大鼠分组试验结果(x±s)组别动物数(只)TC(nmol/L)TG(nmol/L)HDL-C(nmol/L)LDL-C(nmol/L)空白对照组12 2.29±0.230.65±0.16 1.45±0.150.79±0.16模型对照组12 3.99±0.57△△7.32±2.24△△ 1.03±0.10△△ 1.28±0.51△△低剂量组12 4.06±0.687.05±2.050.99±0.12 1.45±0.46中剂量组12 3.96±0.47 6.44±1.50 1.02±0.17 1.71±0.51高剂量组12 3.95±0.49 6.57±2.15 1.09±0.13 1.46±0.52 F26.91729.00224.267 6.806 P0.0000.0000.0000.000注:与空白对照组比较,△△P<0.01表2 辅助降血脂功能评价试验结果(x±s)组别动物数(只)TC(nmol/L)TG(nmol/L)HDL-C(nmol/L)LDL-C(nmol/L)空白对照组12 2.37±0.350.94±0.34 1.45±0.230.79±0.24模型对照组12 4.87±0.79△△ 5.60±2.50△△ 1.06±0.13△△ 2.40±1.23△△低剂量组12 3.62±0.57** 3.18±1.13** 1.08±0.14 2.17±0.34中剂量组12 3.92±0.43** 3.00±0.93** 1.01±0.25 2.56±0.40高剂量组12 4.08±0.49** 2.97±0.75** 1.08±0.07 2.67±0.48 F33.23018.08412.30817.194 P0.0000.0000.0000.000注:与空白对照组比较,△△P<0.01; 与模型对照组组比较,**P<0.01。
4.3对大鼠体重影响试验结果结果见表3。
原始数据均符合方差齐性要求。
与空白对照组比较,模型对照组大鼠第2、3、4周体重升高,差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,高剂量组大鼠第1、2、3、4周体重下降,差异均有显著性意义(P<0.05),高剂量组大鼠第1、2、3、4周体重与空白对照组比较,体重差异无显著性意义(P>0.05)。
其余各剂量组大鼠体重差异均无显著性意义(P>0.05).表3 本组合物对大鼠体重的影响(x±s)组别动物数(只)初始体重(g)第一周(g)第二周(g)第三周(g)第四周(g)空白对照组12272.8±14.5342.8±19.7391.2±24.6428.5±23.7468.4±27.7模型对照组12283.6±14.2354.0±18.7412.1±22.4△462.3±27.7△△495.3±30.5△低剂量组12280.8±8.5342.9±10.5402.4±15.4449.9±23.2485.2±29.6中剂量组12285.7±13.1353.0±19.3419.4±23.5457.0±31.5503.4±32.1高剂量组12286.1±11.7334.6±17.5*392.2±21.0*432.1±28.0*465.5±33.3*F 2.246 2.559 3.899 3.712 3.481P0.0760.0490.0070.0100.013注:与空白对照组比较,△P<0.01,△△P<0.01;与模型对照组比较,*P<0.055 小结与结论实验结果表明:与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高,HDL-C水平降低,差异均具有显著性意义(P<0.01),混合型高脂血症动物模型成立,且第2、3、4周体重升高(P<0.05或P<0.01);给予受试样品30天后,与模型对照组比较,低、中、高剂量组大鼠TC水平及TG水平下降,差异均具有显著性意义(P<0.01),同时,各剂量组大鼠的LDL-C、HDL-C水平和模型对照,组比较差异均无显著性意义(P>0.05),高剂量组大鼠第1、2、3、4周体重下降,差异均有显著性意义(P<0.05)结论:纳豆红曲葡萄籽组合具有辅助降血脂功能。