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总黄酮含量测定方法
总黄酮是一类化合物的总和，常用的测定方法有色谱法、光谱法和比色法等。
1. 色谱法：色谱法是一种常用的分离和测定化合物的方法。
常用的色谱方法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
其中，HPLC是最常用的测定总黄酮含量的方法。
它可以将样品中的黄酮分离开，并通过检测器测量它们的浓度。
2. 光谱法：光谱法是利用物质对光的吸收、发射、散射等特性进行测定的方法。
常用的光谱法包括紫外-可见光谱法（UV-Vis）和荧光光谱法等。
这些方法通过测量样品在特定波长下的吸光度或荧光强度来确定总黄酮含量。
3. 比色法：比色法是通过比较样品与标准溶液的颜色差异来测定样品中的化合物含量的方法。
通常使用染色剂与样品中的黄酮发生反应，形成有色产物，并通过比色仪或分光光度计测量吸光度，进而计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同的测定方法可能对不同类型的总黄酮有不同的适用性和灵敏度。
因此，在选择测定方法时，需要考虑样品的特性和实验室的仪器条件，确保能够准确测定总黄酮的含量。
总黄酮（Flavonoid）含量(铝盐显色法酶标仪96样)（一）检测原理：总黄酮，即黄酮类化合物，包括黄酮，黄酮醇，黄烷酮，橙酮，异黄酮，黄烷醇，花青素等，是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性（比如抗紫外）和抗病虫害方面有重要作用。
实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定黄酮总含量，即在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。
（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一液体1.6m L×1支4℃保存试剂二液体3m L×1瓶4℃保存试剂三液体12m L×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存做标曲，则用到该试剂（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、粉碎仪、筛子、60%乙醇、离心机、蒸馏水。
（四）总黄酮测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜样本(若水分充足，可增加样本取样质量)；或者称取约0.03g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40-60目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的60%乙醇（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h（若蒸发用60%乙醇定容至1.5mL），25℃×12000rpm，离心10min，取上清待测。
【注】：若样本量较少，可同比例缩减样本量，如取0.02g干样，加入1mL60%乙醇，60℃振荡提取2h。
25℃×12000rpm，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至1mL待测。
②液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长至510nm。
20种牡丹叶中总黄酮、总酚和芍药苷的含量测定及抗氧化活性研究一、本文概述本文旨在全面研究20种牡丹叶中总黄酮、总酚和芍药苷的含量，并评估其抗氧化活性。
牡丹，作为中国传统名花，不仅具有观赏价值，其叶和根也广泛用于中药制剂。
近年来，随着人们对天然产物的深入研究，牡丹叶中的活性成分及其生物活性引起了广泛关注。
特别是总黄酮、总酚和芍药苷，这些成分在抗氧化、抗炎、抗疲劳等方面展现出显著的生物活性。
本文将通过高效液相色谱法（HPLC）、紫外-可见光谱法（UV-Vis）等分析方法，对20种不同品种的牡丹叶进行定量分析，比较各品种中总黄酮、总酚和芍药苷的含量差异。
本文还将采用多种体外抗氧化实验，如DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验等，评估牡丹叶提取物的抗氧化能力，以期为其在食品、保健品和化妆品等领域的应用提供科学依据。
通过本文的研究，我们期望能够深入了解牡丹叶中活性成分的含量及其抗氧化活性，为牡丹叶资源的合理开发利用提供理论支持和实践指导。
本文的研究结果也将为其他天然产物的活性成分研究和应用开发提供参考和借鉴。
二、材料与方法本研究采用了20种不同品种的牡丹叶作为实验材料。
所有牡丹叶样本均采自健康的、无病虫害的植株，并在相同的环境条件下进行养护。
采样后，叶片立即进行处理并保存在适当的条件下，以避免任何可能影响其化学成分的变化。
实验所用的试剂包括乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂，以及用于测定总黄酮、总酚和芍药苷的标准品和试剂。
所有试剂均为分析纯级别。
实验仪器包括高效液相色谱仪（HPLC）、紫外可见分光光度计、电子天平、旋转蒸发仪、离心机等。
将牡丹叶样本进行粉碎后，采用乙醇-水混合溶液进行索氏提取。
提取液经过旋转蒸发仪浓缩后，得到牡丹叶提取物。
采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定牡丹叶提取物中的总黄酮含量。
将提取物与试剂混合后，在特定波长下测定吸光度，并与标准曲线进行比较，从而计算出总黄酮的含量。
采用福林酚试剂法测定牡丹叶提取物中的总酚含量。
植物中总黄酮的提取与测定原理黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。
用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
仪器与试剂新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。
60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。
芦丁标准溶液的配制称量13.2mg芦丁，用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。
标准曲线的制作准确吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。
用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
总黄酮提取与测定和计算称取0.6—0.8g样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min。
过滤、定容于100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。
根据标准曲线计算总黄酮的含量。
总黄酮含量=A/M·100×稀释倍数A为标准曲线中的含量。
红河州13种食用花卉的总黄酮、总多酚含量测定严和平;洪亮;徐进诺;罗玉芹;陈雅顺;许春;欧朝凤;张举成【摘要】采用乙醇热提法对红河州13种食用花卉进行总黄酮和总多酚的提取.以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH为显色体系,利用双波长分光光度法,测定总黄酮含量;以Folin-phenol试剂为显色剂,测定总多酚含量.结果表明:13种食用花卉中均含有黄酮和多酚类化合物.总黄酮含量顺序是:桂花(23.93 %)>黄饭花(6.51 %)>棠梨花(3.93 %)>猫屎花(3.43 %)>玉荷花(2.08 %)>鸡屎臭药花(2.04 %)>帘子藤花(1.77 %)>芭蕉花(1.75 %)>石榴花(1.63 %)>马桑花(0.81 %)>菊花(0.64 %)>金雀花(0.52 %)>苦刺花(0.22 %).总多酚含量顺序是:石榴花(13.16 %)>桂花(10.83 %)>棠梨花(5.34 %)>猫屎花(4.94 %)>黄饭花(3.81 %)>鸡屎臭药花(3.23 %)>玉荷花(3.13 %)>帘子藤花(2.61 %)>芭蕉花(2.34 %)>菊花(1.31 %)>金雀花(1.11 %)>马桑花(1.08 %)>苦刺花(0.83 %).桂花的总黄酮含量最高,石榴花的总多酚含量最高,苦刺花的黄酮和多酚含量均最低.%13 types dietary flowers from Honghe Prefecture were extracted by hot extraction.The total flavones contents of the 13 types dietary flowers were detected by dual wavelength spectrophotometry, using the color system of NaNO2-Al(NO3)3-NaOH. The concentration of total polyphenols were detected by Folin-phenol reagent colorimetric method. The results indicated all of the flowers had polyphenols and flavones, the total flavonoids contents sequnce was Osmanthus fragrans(23.93 %)>Buddleja officinalis(6.51 %)>Pyrus pashia (3.93 %)>Gnaphalium affine(3.43 %)>Bauhinia purpurea(2.08 %)>Valeriana officinalis(2.04 %)>Clematis chinensis Osbeck(1.77 %)>Musasapientum(1.75 %)>Punica granatum(1.63 %)>Morus alba(0.81 %)>Chrysanthemum morifolium(0.64 %)>Caraganasinica(0.52 %)>Sophora davidii(0.22 %).The total polyphenols contents sequnce wasP.granatum(13.16 %)>O.fragrans(10.83 %)>P.pashia(5.34 %)>G.affine(4.94 %)>B.officinalis(3.81 %)>V.officinalis(3.23 %)>B.purpurea(3.13 %)>C.chinen sis Os-beck(2.61 %)>M.sapientum(2.34 %)>C.morifolium(1.31 %)>C.sinica(1.11 %) >M.alba(1.08 %)>S. davidii(0.83 %).The content of total flavones inO.fragrans was the highest and the total polyphenols in P. granatum was the highest,but the flavones and polyphenols in S.davidii were the lowest.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)009【总页数】6页(P142-147)【关键词】食用花卉;总黄酮;总多酚;含量测定;红河州【作者】严和平;洪亮;徐进诺;罗玉芹;陈雅顺;许春;欧朝凤;张举成【作者单位】红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199;红河学院生命科学与技术学院,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199;红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199;浙江环茂自控科技有限公司,浙江杭州310051;红河学院理学院,云南蒙自661199;云南省天然药物与化学生物学重点实验室,云南蒙自661199【正文语种】中文云南拥有中国二分之一的植物资源，是植物资源极为丰富的“天然花园”。
太行菊的抗氧化活性试验计划1. 实验内容对太行菊的甲醇提取物的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水共六种萃取物进行总酚、总黄酮含量的测定，分析实验结果，选择总分和总黄酮含量比较高的两个层分进行抗氧化能力测定，分析其抗氧化能力强弱，判断其有无研究价值。
用Folin-Denis法测定太行菊甲醇提取物各萃取层组分的总酚含量，以没食子酸作为标准品进行对照。
用三氯化铝法测定太行菊各萃取层组分的总黄酮含量，以槲皮素作为标准品进行对照。
根据实验结果，选择总酚和总黄酮含量较高的萃取层组分进行抗氧化能力测定，包括DPPH自由基清除能力测定，羟基自由基清除能力测定，还原能力测定。
2.实验步骤将太行菊用甲醇溶液回流提取其有效成分，旋转浓缩后用水溶解，然后分别用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取、水层，得相应层的馏分。
2.1总酚含量测定：在试管中分别加入不同层样品（1mg/ml）0,25ml +Folin-Denis 试剂0.5ml ，5min后，再加入Na2CO3饱和溶液0.5ml,并做三组重复。
对照组中样品和Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。
空白组中Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。
在760nm紫外光下测定吸光度。
对实验结果处理后做标准曲线，以没食子酸为标准品。
以没食子酸的微克数表示总酚含量:吸光度=0.0069 μg没食子酸－0.042。
Folin-Denis试剂的配制：在2L烧瓶中加入750ml蒸馏水，再加入100g钨酸钠和20g磷钼酸，再加入50ml正磷酸回流2h, 冷却后装入1L容器内置于暗处实验组*3:体积Folin-Denis的体积Na2CO3MEOH层0.25ml 0.5ml 0.5mlH层0.25ml 0.5ml 0.5mlCH层0.25ml 0.5ml 0.5mlEA层0.25ml 0.5ml 0.5mlBUOH层0.25ml 0.5ml 0.5mlW层 1 2 2对照组*3：DW DW Na2CO3体积0.25ml 0.5ml 0.5ml空白组*3：体积DW的体积Na2CO3MEOH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlCH层0.25ml 0.5ml 0.5mlEA层0.25ml 0.5ml 0.5mlBUOH层0.25ml 0.5ml 0.5 mlW层0.25ml 0.5ml 0.5ml2.2总黄酮含量测定：在试管中分别加入不同层样品(1mg/ml) 0.5ml + 1M CH3COOK溶液0.1ml + DW 2.8ml + 95%乙醇 1.5ml + 10% AlCl3·6H2O溶液0.1ml，并做三组重复。
亚贡叶化学成分分离与鉴定
亚贡叶化学成分分离与鉴定
亚贡叶（Bauhinia variegata L.）是一种观赏用植物，也是一种
在药材中常见的植物原料。
它可以抗氧化，抗肿瘤，抗炎，调节血糖水平，甚至可以改善脑神经活动。
为了开发出有效利用亚贡叶的药物，研究者开展了化学成分的分离和鉴定。
亚贡叶化学成分分离与鉴定，主要是利用水溶性、有机溶性及抗氧化活性，分离和鉴定亚贡叶中的有效成分。
水溶性物质主要包括碳水化合物和氨基酸。
有机溶性物质主要包括酚类、苯并环类化合物、黄酮和蛋白质。
抗氧化活性物质主要包括维生素C、维生素E、类胡萝卜素和木犀草素。
亚贡叶中的有效成分提取之后，需要进一步鉴定，以确定它们的类别和含量。
主要的鉴定技术有高效液相色谱法（HPLC）、波谱分析（NMR）、电感耦合等离子体质谱（ESI-MS）和紫
外光谱法（UV）。
这些技术可以测量有效成分的种类和含量，并表明他们的结构。
亚贡叶化学成分的分离和鉴定，能够使我们对亚贡叶中的有效成分有更多的了解，用以研发出具有药理作用的药物，有助于提高我们的健康水平。
亚贡叶中总黄酮及总酚酸的含量测定
作者：田芳窦德强迟玉新吴阳朱红丘鹰昆康廷国董锋【摘要】目的建立亚贡叶总黄酮、总酚酸的含量测定方法。
方法利用分光光度计通过测定吸光度计算总黄酮、总酚酸的含量。
结果实验建立了总黄酮、总酚酸的标准曲线，测得亚贡叶中总黄酮平均含量为3.2%, RSD=1.4%（
作者：田芳窦德强迟玉新吴阳朱红丘鹰昆康廷国董锋
【摘要】目的建立亚贡叶总黄酮、总酚酸的含量测定方法。
方法利用分光光度计通过测定吸光度计算总黄酮、总酚酸的含量。
结果实验建立了总黄酮、总酚酸的标准曲线，测得亚贡叶中总黄酮平均含量为3.2%, RSD=1.4%
（n=6）；总酚酸平均含量为4.5%, RSD=1.6%（n=6）。
结论建立了亚贡叶的
总黄酮、总酚酸含量测定方法，该法简单、快捷，重现性好，可用于亚贡叶的质量控制和定量分析。
【关键词】亚贡总黄酮总酚酸
Abstract：ObjectiveTo establish the determination methods of
total flavonoids and total phenolic acid from leaf of Yacon. MethodsThe content of total flavonoids and total phenolic acid were determined by spectrophotometry. ResultsCalibration graphs were constructed for total flavonoids and total phenolic acid. The content of total flavonoids was 3.6% and the total phenolic acid was 4.4%. ConclusionThe methods are rapid, reliable, accurate and suitable for analysis of total flavonoids and total phenolic acid and quality control in Smallanthus sonchifolius.
Key words：Yacon; Total flavonoids; Total phenolic acid
亚贡Smallanthus sonchifolius (Poepp．et End1．)H．Robinson为菊科向日葵属多年生草本植物，俗称“雪莲果”“雅龙果”，英文名为“YACON”。
原产于南美洲安第斯山脉，是当地印第安人的传统根茎食品［1］。
在我国云南地区有大面积种植，贵州、福建、湖南、台湾等地也均有种植。
民间用亚贡叶加工成茶，冲泡饮用，有降血糖、预防动脉粥样硬化的功效。
日本学者研究发现，亚贡能有效地控制胆固醇增加,有减肥、防感冒、防骨质疏松、降低高血压的功效,对消化道和循环系统的疾病,以及结肠癌等,均具有一定的疗效［2］。
目前国内对于亚贡的文献报道较少，本文对亚贡叶中总黄酮及总酚酸含量进行了测定，为其资源合理的开发利用及质量控制提供理论依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
UV-2100紫外分光光度计(上海UNICO)、FA-1004分析天平（上海精科天平厂）。
1.2 试药芦丁对照品为自制，经HPLC纯度检验为98.472%、咖啡酸标准品购于中国药品生物制品检定所（批号110885-200102）。
亚贡叶200509
采自辽宁省鞍山市岫岩新甸镇大山村，经辽宁中医药大学药学院康廷国教授鉴定为菊科亚贡Smallanthus sonchifolius的叶。
所用试剂(硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、三氯化铁六水合物、铁氰化钾、十二烷基磺酸钠、盐酸、甲醇)购于各试剂公司。
2 方法
2.1 供试品的准备精密称取亚贡叶粉末约2 g，加入石油醚100 ml，用索氏提取器脱脂6 h。
脱脂后粉末加入100 ml60%甲醇加热回流两次，各1.5 h。
过滤，合并滤液，减压浓缩并定容至25 ml容量瓶。
精密吸取1 ml再定容至25 ml容量瓶中备用。
2.2 总黄酮含量测定［3］。
2.2.1 芦丁对照品的准备精密称取芦丁对照品，用60% 的甲醇溶解后定容，配成浓度为95μg/ml 的芦丁对照品贮备液。
精密吸取1 ml芦丁对照品溶液，定容至10 ml，制成浓度为9.5 μg/ml的芦丁对照品溶液。
2.2.2 标准曲线的绘制精密吸取浓度为9.5μg/ml芦丁对照品溶液0，1.0，4.0 ml及95μg/ml的芦丁对照品溶液1.0，2.0，
3.0，
4.5 ml于7只10 ml具塞比色管中，分别加入5% NaNO2溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min后各加入10% Al(NO3)3溶液0.3 ml，摇匀放置6 min。
分别加入4%NaOH溶液4.0 ml，用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置10 min。
在波长505 nm处测定吸光度。
回归方程：Y = 1.193 7X - 0.001 1 ，r= 0.999 7。
其中Y为吸光度，X 为芦丁对照品溶液浓度（mg/ml）。
结果表明：芦丁在0.001～0.043 mg/ml的范围内呈良好的线性关系。
2.2.3 方法学考察
精密度实验：精密吸取95 μg/ml芦丁对照品溶液1.0 ml置于10 ml具塞比色管中，同“2.2.2”项下实验方法进行显色和测定，记录吸光度A，吸光度A的RSD为0.51%(n=5)。
重现性实验：精密称取2 g同一批药材5份，按“2.1供试品的制备”及含量分析项下进行操作，制得5份供试液，各取适量，同“2.2.2”项下实验方法进行显色和测定，记录吸光度，吸光度A的RSD为1.5%(n=5)。
稳定性实验：精密吸取95 μg/ml芦丁对照品溶液1.0 ml，同“2.2.2”项下实验方法进行显色，分别在15，20，30，45，60，100 min测定，结果表明样品在15～60 min内稳定。
2.2.4 供试品总黄酮含量测定精密吸取供试品溶液3 ml置于10 ml具塞比色管中，同上述显色法测定其吸光度A。
计算亚贡叶中总黄酮平均含量为
3.2%，RSD=1.4% (n=6)。
