生殖和发育毒性试验与评定

第二节生殖毒性及其评定一、生殖毒性表现外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。

雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。

雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。

二、生殖毒性作用的评定外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。

生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。

评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。

此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。

（一）试验方法原则生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。

大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。

一般设三个剂量组，另设对照组。

最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。

低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。

另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。

中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。

最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。

要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。

反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。

剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。

最低剂量可相当于最高剂量的1/30。

如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。

第二节生殖毒性及其评定一、生殖毒性表现外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。

雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。

雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。

二、生殖毒性作用的评定外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。

生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。

评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。

此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。

（一）试验方法原则生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。

大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。

一般设三个剂量组，另设对照组。

最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。

低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。

另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。

中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。

最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。

要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。

反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。

剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。

最低剂量可相当于最高剂量的1/30。

如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。

两代生殖发育毒性试验方法Two-Generation Reproductive Toxicity Study1范围本规范规定了两代生殖发育毒性试验基本原则，试验方法和技术要求。

本规范用于检测化妆品原料的生殖发育毒性。

2试验目的提供关于受试物产前、产后暴露对雌性、雄性动物生殖功能、生育力及子代发育影响的确切信息。

3定义3.1生殖毒性Reproduction toxicity对后代产生有害作用，并损伤雄性和雌性的生殖功能和生殖能力。

3.2发育毒性Developmental toxicity生殖毒性的表现，具体表现为后代在产前、围产期、产后发生的结构和功能紊乱。

3.3母体毒性Maternal toxicity受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、毒性反应、甚至死亡。

3.4未观察到有害作用剂量NOAEL通过动物试验，以现有的技术手段和检测指标未观察到任何与受试物相关的毒性作用的最大剂量。

3.5观察到有害作用的最低剂量LOAEL在规定的条件下，受试物引起实验动物组织形态、功能、生长发育等有害效应的最小作用剂量。

4试验的基本原则通过对实验动物以受试物暴露，考察其对雄性和雌性动物生殖功能、生育力及生殖系统形态的影响。

若该暴露（直接或间接）持续至子代，则还可以继续考察受试物对子代发育，甚至子代生殖功能和生育力的影响。

5受试物配制化妆品生殖发育毒性试验一般采用经口途径给予受试物，但基于人的可能暴露途径或受试物的特性而选择经皮或吸入也是合适的。

溶媒对照应采用与之相同的给予途径。

若设置阳性对照，其处理方式可以不同于受试物处理组。

一般情况下首选水作为溶媒，可以是水溶液也可以是混悬液，其次可以选择玉米油作为溶媒配制成乳浊液，也可以将其与水混合配制成油溶液。

使用水以外的其它溶媒，应阐明其毒性并保证所配制溶液的稳定性。

其它应纳入考虑的因素包括：溶媒是否影响受试物化学特征继而改变受试物毒性；溶媒是否影响受试物的吸收、代谢、分布和蓄积；溶媒是否影响动物食物和饮水摄入继而影响营养状况；溶媒本身是否有潜在毒性。

生殖与发育毒性-研究结果综合评价相关性指导原则Guidance for Industry Reproductive and Developmental Toxicities - Integrating Study Resultsto Assess Concerns美国FDA的CDER于2011年9月颁布I. 前言本指导原则描述了当非临床研究结果确定有毒性但无法获得充分的人类资料时，与药物或生物制品暴露相关的可能的人体生殖或发育风险评估的方法。

本指导原则用于NDA和生物制品许可申请（BLA）。

此处的建议也可有助于保证CDER审评人员之间对生殖与发育毒性资料审评的一致性。

本指导原则（1）未对说明书或毒性信息在产品标准中所放位置给予详细建议（关于说明书的信息参见21 CFR 201.57）；或（2）未讨论临床资料或对非临床和临床资料进行综合评价。

FDA指导原则文件（包括本指导原则）不属于法律强制性要求，而只是阐述了本机构对某主题的目前看法，只能认为是一种建议，除非已经在特殊药政法规或法令要求中进行了指明。

本机构指导原则中所使用的词汇“应该（should）”的意思是建议或推荐，而不是要求。

II. 背景此处所介绍的对非临床生殖与发育毒性资料进行评估的方法包括对各种不同类型的非临床信息的综合评价和仔细考虑：生殖毒性；一般毒性；毒代和药代信息，包括吸收、分布、代谢和排泄资料。

当出现毒性结果且重点评估药物引起不良的人类发育或生殖结果风险的可能性时，采用本方法。

本方法包括当未进行研究时或当未在相关的模型系统或合适的剂量范围下进行研究时的计算法。

此处所描述的基本原则（即对可获得资料的综合分析）将代表性地与药物和生物制品相关，虽然有些方面可能不适用于生物制品，由于可能无法获得本指导原则中所考虑的所有因素的资料（如，种属间一致性、剂量反应关系、代谢、相对暴露倍数（动物：人）>25）。

对于某些肿瘤药物（如细胞毒类），本指导原则的某些方面可能并不适用，因为患者可能给予最大耐受量（MTD）。

毒理学评价实验的主要内容毒理学评价实验是评估物质对生物体可能产生的不良影响的重要手段。

以下是毒理学评价实验的主要内容：1.受试物的形态学观察在毒理学评价实验中，首先需要对受试物进行形态学观察，以了解其外观、颜色、气味、结晶等物理性质。

此外，还需观察受试物的稳定性、溶解度等化学性质，以便更好地了解其可能对生物体产生的影响。

2.急性毒性试验急性毒性试验是评估受试物在短期大量接触后对生物体产生的影响。

通过测定受试物对生物体产生毒性效应的剂量和时间关系，为后续的毒性试验提供参考。

3.遗传毒性试验遗传毒性试验是评估受试物对生物体遗传物质的影响。

通过检测受试物对生物体基因突变、染色体畸变等的影响，评估其潜在的致癌性。

4.发育毒性试验发育毒性试验是评估受试物对胎儿或婴儿生长发育的影响。

通过观察受试物对妊娠期妇女、胎儿及婴儿生长发育的影响，评估其安全性。

5.慢性毒性试验慢性毒性试验是评估受试物在长期接触后对生物体的影响。

通过观察受试物对生物体脏器功能、生理生化指标等的影响，评估其长期使用的安全性。

6.致癌性试验致癌性试验是评估受试物是否具有致癌性的实验。

通过观察受试物对生物体肿瘤发生的影响，评估其致癌风险。

7.免疫毒性试验免疫毒性试验是评估受试物对生物体免疫系统的影响。

通过检测免疫器官、细胞数量、功能等指标，评估受试物对免疫系统的损害程度。

8.生殖毒性试验生殖毒性试验是评估受试物对雄性或雌性生殖系统的影响。

通过观察受试物对性成熟、繁殖能力等的影响，评估其对生殖系统的损害程度。

综上所述，毒理学评价实验的主要内容包括受试物的形态学观察、急性毒性试验、遗传毒性试验、发育毒性试验、慢性毒性试验、致癌性试验、免疫毒性试验以及生殖毒性试验等方面。

通过对这些方面的综合评估，可以全面了解受试物对生物体的影响，为产品的安全性评价提供科学依据。

食品安全国家标准生殖发育毒性试验１范围本标准规定了生殖发育毒性试验的试验方法和技术要求。

本标准适用于评价受试物的生殖发育毒性作用。

2术语和定义2.1生殖毒性生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。

生殖毒性既可发生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期。

表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等。

2.2发育毒性个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡。

2.3母体毒性受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡。

2.4功能发育毒性经母体给予受试物后，其子代从出生后直到性成熟期间出现的机体或器官功能运用能力的改变或延迟，包括器官系统、生化、免疫等功能的变化。

其中功能的改变或延迟往往要在出生后经过相当时间才能判断，如听力或视力异常、行为发育迟缓等。

3 试验目的和原理本实验包括三代（F0、F1和F2代）。

F0和F1代给予受试物，观察生殖毒性，F2代观察功能发育毒性。

提供关于受试物对雌性和雄性动物生殖发育功能影响：如性腺功能、交配行为、受孕、分娩、哺乳、断乳以及子代的生长发育和神经行为情况等。

毒性作用主要包括子代出生后死亡的增加，生长与发育的改变，子代的功能缺陷（包括神经行为、生理发育）和生殖异常等。

4 试验方法4.1受试物受试物应首先使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。

将受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予。

4.2实验动物4.2.1动物选择实验动物的选择应符合国家标准和有关规定。

选择已有资料证明对受试物敏感的动物物种和品系，一般啮齿类动物首选大鼠，避免选用生殖率低或发育缺陷发生率高的品系。

为了正确地评价受试物对动物生殖和发育能力的影响，两种性别的动物都应使用。