果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase,FBP)试剂盒说明书
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第1篇一、产品概述本试剂盒是针对多糖含量测定而设计的高效、便捷的检测工具。
适用于各类生物样本中多糖含量的定量分析,包括但不限于植物提取物、动物组织、微生物发酵液等。
本试剂盒采用酶联免疫吸附法(ELISA)原理,通过特异性抗体与多糖的结合,实现对多糖含量的精确测定。
二、产品组成1. 试剂盒- 多糖抗体- 标准品- 酶标抗体- 底物溶液- 洗涤缓冲液- 封闭液- 终止液2. 仪器- 酶标仪- 微量移液器- 恒温水浴箱- 试管3. 试剂- 酶标仪专用缓冲液- 酶标仪专用洗涤液三、使用方法1. 样本准备- 将待测样本按照说明书要求进行稀释。
- 确保样本无污染,避免酶标仪读取误差。
2. 加样- 在酶标板孔中加入50μl的标准品或样本稀释液。
- 在所有孔中加入50μl的多糖抗体。
3. 孵育- 将酶标板放入恒温水浴箱,37℃孵育1小时。
4. 洗涤- 使用酶标仪专用洗涤液,将酶标板充分洗涤3次。
5. 加酶标抗体- 在所有孔中加入50μl的酶标抗体。
- 37℃孵育1小时。
6. 洗涤- 使用酶标仪专用洗涤液,将酶标板充分洗涤3次。
7. 加底物溶液- 在所有孔中加入50μl的底物溶液。
- 避光孵育15分钟。
8. 终止- 在所有孔中加入50μl的终止液。
9. 检测- 使用酶标仪在450nm波长下检测各孔的吸光度(OD值)。
10. 数据分析- 将测得的OD值与标准曲线进行比较,计算多糖含量。
四、注意事项1. 试剂和仪器- 使用前请仔细阅读说明书,确保试剂和仪器符合使用要求。
- 使用酶标仪时,请按照仪器说明书进行操作。
2. 样本处理- 样本处理过程中,请确保无污染,避免影响检测结果。
- 样本稀释时,请使用适宜的稀释液,确保稀释倍数合理。
3. 操作步骤- 操作过程中,请严格按照说明书进行,避免人为误差。
- 注意操作环境,避免交叉污染。
4. 标准曲线- 标准曲线的绘制应使用新鲜标准品,并确保标准曲线线性良好。
5. 质量控制- 定期进行质量控制,确保试剂盒的准确性和可靠性。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号:G5610有效期:6个月有效。
产品内容:产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明:碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法,其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。
在碱性条件下酚与氨基安替比林结合,并经氧化生成红色醌式结构物,呈深浅不一的红色,产物红色越深,说明碱性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过酶标仪测定510nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料:96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考):1、配制标准品工作液:取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后,取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O,使浓度达到0.05mg/ml,即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。
按照下表稀释系列标准品溶液。
012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品:(1)细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-80℃冻存,用于碱性磷酸酯酶的检测。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介:谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布,可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物,或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH),而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ,并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系,前后两个反应合并起来后,GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时,该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素,此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下:两个反应相合并:本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见,对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件:-20ºC保存,一年有效。
总抗氧化能力(FRAP 法)试剂盒说明书微量法100T/96S 注 意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
研究意义:测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。
在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理:在酸性环境下,抗氧化物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。
自备实验用品:恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:提取液:液体120mL×1 瓶,使用前预冷。
试剂一:液体20 mL×1 瓶,避光保存。
试剂二:液体2 mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体2 mL×1 瓶,避光保存。
混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三按10:1:1 的比例混合,使用前37℃预温。
样品的制备:(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。
血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过30 d)后再测定。
(2) 组织样品按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
(3) 细胞样品按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
操作步骤:1、酶标仪预热30min,调节波长至593nm。
免疫组化法和qPCR技术检测FBP1在结直肠腺癌中的表达及临床意义刘家有;邓世山;朱剑军;侯令密;谢少利;黄波【摘要】Objective:To explore the expression of FBP1 in colorectal adenocarcinoma and its clinical significance.Methods:46 pairs of fresh human colorectal adenocarcinoma tissues and its adjacent normal tissues were collected from the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College from September 2014 to February 2016,Quantitative RT-PCR was used to detect the expression level of FBP1 mRNA in tissues.30 specimens of human colorectal adenocarcinoma tissues and its adjacent normal tissues were collected from the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College from July 2015 to June 2016,immunohistochemical was used to exam the level of FBP1.Results:Quantitative RT-PCR show that the expression level of FBP1 mRNA in colorectal adenocarcinoma tissues was remarkably lower than that in adjacent normal colorectal tissues(t=2.934,P=0.006).The expression level of FBP1 decreased as the increase of malignancy degree and Duke's stages and distant lymph metastases in colorectal adenocarcinoma (P=0.000).The expression level of FBP1 mRNA in male patients was higher than that in those females,but the difference was not significant (t=1.294,P=0.165).Immunohistochemical results show that the expession level of FBP1 in colorectal adenocarcinoma tissues was lower than that in adjacent normal colorectal tissues(χ2=19.461,P=0.000).Conclusion:The decreased expression level of FBP1mRNA and its protein may act a critical role in colorectal adenocarcinoma and may be used as a potential therapeutic target for colorectal adenocarcinoma.%目的:探讨果糖-1,6-二磷酸酶1 (fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)基因在结直肠腺癌的表达水平及其与临床病理特征的联系.方法:qPCR技术检测川北医学院附属医院2014年9月至2016年2月新鲜结直肠腺癌组织及癌旁正常组织46 例中FBP1基因的表达水平.免疫组化方法检测川北医学院附属医院2015年7月至2016年6月结直肠腺癌及癌旁对照组织的蜡块标本30例中FBP1的表达及分布情况.结果:qPCR技术检测结果表明,FBP1 基因在结直肠腺癌组织中的表达水平低于在癌旁正常组织中的表达水平(t=2.934,P=0.006);FBP1基因在结直肠腺癌组织中的表达水平随着结直肠腺癌肿瘤的恶性程度的增加(F=13.267,P=0.000)、Duke's 分期的增加(F=15.864,P=0.000)、远处淋巴结的转移(t=14.285,P=0.000)而降低;FBP1基因在男性患者的结直肠腺癌组织中的表达水平高于其在女性患者的表达水平,但差异无统计学意义(t=1.294,P=0.165).免疫组化结果显示FBP1在结直肠腺癌组织中低表达甚至缺失,而在癌旁正常组织中高表达,二者差异具有统计学意义(χ2=19.461,P=0.000).结论:FBP1 基因及蛋白质的低表达可能在结直肠腺癌的发生发展中有着重要的作用,是其潜在的治疗靶标.【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2017(032)002【总页数】5页(P167-171)【关键词】结直肠腺癌;果糖-1,6-二磷酸酶1;免疫组化法;qPCR【作者】刘家有;邓世山;朱剑军;侯令密;谢少利;黄波【作者单位】川北医学院人体解剖学教研室,四川南充 637000;川北医学院人体解剖学教研室,四川南充 637000;川北医学院人体解剖学教研室,四川南充 637000;川北医学院附属医院普外科,四川南充 637000;川北医学院附属医院普外科,四川南充 637000;川北医学院临床技能培训中心,四川南充 637000【正文语种】中文【中图分类】R735.3结直肠腺癌是消化道第二位的常见恶性肿瘤,位居癌症死亡率第四位,严重威胁人类的健康[1],探索与结直肠腺癌发病的相关基因,对结直肠腺癌的早期预防和诊治具有重要意义。
基础生物化学Basic Biochemistry9 糖的生物合成9.1 光合作用9.2 糖异生作用9.3 蔗糖的生物合成9.4 淀粉和糖原的生物合成糖异生作用糖异生:非糖前体(如丙酮酸、草酰乙酸等)合成葡萄糖的过程。
主要发生在动物的肝脏中。
糖异生的证据:禁食24小时后,大鼠肝脏中的糖原由7%降低到1%,饲喂乳酸、丙酮酸或三羧酸循环代谢的中间物后大鼠肝脏中的糖原增加。
糖酵解和糖异生比较9.2.1 糖异生途径1.丙酮酸生成磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)①丙酮酸羧化酶-生物素依赖的酶催化丙酮酸羧化成草酰乙酸。
丙酮酸羧化酶生物素、乙酰CoA、Mg2+丙酮酸羧化酶定位在线粒体,丙酮酸需经载体系统进入线粒体后才能羧化成草酰乙酸,后者只有在转变成苹果酸后才能再进入细胞质。
②丙酮酸羧激酶催化草酰乙酸形成磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)。
丙酮酸羧激酶2.1,6-二磷酸果糖酯酶催化果糖1,6-二磷酸转化成果糖-6-磷酸。
3.6-磷酸葡萄糖酯酶催化葡萄糖-6-磷酸转化成葡萄糖。
糖酵解和糖异生作用中的酶的差异糖酵解作用糖异生作用己糖激酶(hexokinase)6-磷酸葡糖磷酸酶(glucose-6-phosphatase)磷酸果糖激酶(phosphofructokinase)1,6-二磷酸果糖磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase)丙酮酸激酶(pyruvate kinase)丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvatecarboxykinase)糖异生途径总览糖异生作用的生物学意义①糖异生作用是一个十分重要的生物合成葡萄糖的途径。
②在饥饿或剧烈运动造成糖原下降后,糖异生能使酵解产生的乳酸、脂肪分解产生的甘油等对于满足组织对糖的需要很重要。
③糖异生可以促进脂肪氧化分解供应能量,当体内糖供应不足时,糖异生对维持三羧酸循环的正常进行起主要作用。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线:400-168-3301或800-8283301订货e-mail:******************技术咨询:*****************碧云天网站微信公众号网址:酸性磷酸酶检测试剂盒产品编号产品名称包装P0326 酸性磷酸酶检测试剂盒120次产品简介:碧云天生产的酸性磷酸酶检测试剂盒(Acid Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性的试剂盒。
酸性磷酸酶(Acid Phosphatase),也称酸性磷酸酯酶,是一种在溶酶体中含量较高的酸性水解酶,被认为是鉴定溶酶体亚细胞组分的标志物。
酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。
酸性磷酸酶分为两类,一类为酒石酸盐敏感型,一类为氟离子敏感型。
溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型,而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
血浆中的酸性磷酸酶活性范围在2-7.9U/L,血清中酸性磷酸酶的活性范围在2.5-11.7U/L。
精液(semen)中含有高浓度的酸性磷酸酯酶,活力可以达到87-436KU/L。
本试剂盒可以检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液或纯化的酶样品等中的酸性磷酸酶活性。
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。
para-nitrophenol (p-nitrophenol)在碱性条件下,呈黄色产物,可以在400-415nm检测吸光度。
产物黄色越深,说明酸性磷酸酶检活性越高,反之则酶活性越低。
据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
包括标准品和空白对照,本试剂盒共可进行120个样品的检测。
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP/ALP)活性测定试剂盒说明书分光光度法50管/24样注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
测定原理:在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
自备仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品:液体×1支(EP管中),2 μ mol/mL酚标准液,4℃保存。
粗酶液提取:1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g离心10min,取上清液待测。
2. 细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定,或者适当稀释后测定。
测定步骤:1. 分光光度计预热30min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸馏水,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A空白管。
α-淀粉酶(AMY )测定试剂盒(EPS底物法)说明书【产品名称】α-淀粉酶(AMY)测定试剂盒(EPS 底物法)【包装规格】a)试剂1:2×45mL 试剂2:2×15mL b)试剂1:4×45mL 试剂2:4×15mL c)试剂1:2×60mL 试剂2:2×20mL 【预期用途】用于体外定量测定人体血清中淀粉酶的活性。
临床上常用于急性胰腺炎的诊断,血淀粉酶的增高常见于急性胰腺炎、唾液腺疾病、胆管疾病、糖尿病酮酸中毒及破裂异位妊娠等[1]。
【检验原理】PNPG7−−→−淀粉酶PNPG3+麦芽三糖PNPG3−−−→−葡糖苷酶PNPG1+葡萄糖PNPG1−−−→−葡糖淀粉酶对-硝基酚+葡萄糖生成的对-硝基酚为黄色物质,通过在405nm 测定对-硝基酚吸光度值的的上升速率,即可计算出样本中淀粉酶的活性。
【主要组成成分】试剂1主要组分Tris 缓冲液50mmol/L 葡糖苷酶25KU/L 氯化钠50mmol/L 牛血清白蛋白适量试剂2主要组分Tris 缓冲液50mmol/L P-硝基苯D-麦芽庚烷(PNPG7)0.9mmol/L 氯化钙5mmol/L 牛血清白蛋白适量注:不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】贮存于2~8℃,有效期为18个月,生产日期、有效期见标签。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200;日立HITACHI 7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT 008AS 型;贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821;佳能TBA-FX8/TBA-120FR /TBA-2000FR ;罗氏cobas 8000c 702/cobas 8000c 701/cobas 8000c 502;西门子SIEMENS ADVIA 1800/ADVIA 2400;雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200;西森美康SYSMEX BM6010/C ;科华KHB 卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ZY-1280;迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-1400;迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M ;颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480;赛诺迈德SUNMATIK-9050型;雷杜Chemray 420;英诺华D280;特康TC6010L ;锦瑞GS400;普康6066。
糖醛酸途径简介糖醛酸途径是生物体内一种重要的代谢途径,它参与多种生物学过程,包括能量产生、糖类代谢、信号传导等。
在这个途径中,葡萄糖通过一系列的反应转化为糖醛酸,最终产生能量或进一步代谢。
糖醛酸途径的主要步骤1.磷酸化:葡萄糖首先被磷酸化为葡萄糖-6-磷酸(G6P),这是催化剂葡萄糖激酶(glucokinase)或hexokinase催化的反应。
这个步骤需要消耗一个ATP分子。
2.转异构:G6P转变为果糖-6-磷酸(F6P),这是通过催化剂果糖-6-磷酸异构化酶(phosphoglucose isomerase)催化的反应。
3.磷酸化:F6P再次被磷酸化为果糖-1,6-二磷酸(F1,6BP),这是由磷酸果糖激酶(phosphofructokinase)催化的反应。
这个步骤也需要消耗一个ATP分子。
4.分解:F1,6BP被水解为二磷酸甘油(DHAP)和甘油-3-磷酸(G3P),这是通过催化剂果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase)催化的反应。
5.重排:DHAP转变为磷酸甘油(G3P),这是通过催化剂三磷酸甘油异构化酶(triose phosphate isomerase)催化的反应。
6.氧化:G3P被氧化为1,3-二磷酸甘油(1,3BPG),这是通过催化剂甘油-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)催化的反应。
在此过程中,NAD+被还原为NADH。
7.磷酸化:1,3BPG转变为3-磷酸甘油(3PG),这是由催化剂1,3-二磷酸甘油激酶(phosphoglycerate kinase)催化的反应。
这个步骤产生一个ATP分子。
8.水解:3PG被水解为2-磷酸甘油(2PG),这是由催化剂3-磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate mutase)催化的反应。
9.脱水:2PG失去水分转变为磷酸烯丙醛(PEP),这是通过催化剂磷酸肌酸二磷酸激酶(enolase)催化的反应。
中 文 说 明 书适用产品目录号:G9951、G9952和G99532020 版 CTM456原英文技术手册TM456Caspase-Glo ®1Inflammasome AssayG9711, G9712 and G9713普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址:北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话:************网址:技术支持电话:800 810 8133(座机拨打),400 810 8133(手机拨打)技术支持邮箱:*************************TM4562020制作1Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay所有技术文献的英文原版均可在/ protocols 获得。
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如果您在使用该试剂盒时有任何问题,请与Promega 北京技术服务部联系。
电子邮箱:*************************1.产品描述 (2)2.产品组分和储存条件 (6)3.试剂制备和储存 (7)4.Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay操作步骤 (8)4.A 在培养细胞中测量Caspase-1活性的操作步骤 (8)4.B 在细胞培养基中测量释放的Caspase-1活性的操作步骤 (11)4.C 使用纯化的Caspase测量Caspase-1活性的操作步骤 (13)5.代表性数据 (15)6.一般注意事项 (20)6.A 炎症小体活化的动力学和Caspase Glo® 1 Inflammasome Assay (20)6.B Caspase-1的特异性 (22)6.C 检测灵敏度 (24)6.D 温度 (25)6.E 化学品 (25)6.F 混匀 (25)6.G 发光检测仪 (25)7.参考文献 (26)8.缓冲液和溶液的成分 (27)9.相关产品 (28)10.内容变更总结 (30)Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd电话:************网址: 技术支持邮箱:*************************TM4562020制作21. 产品描述Caspase Glo ® 1 Inflammasome Assay (a,b )是一种均质的基于生物发光反应的检测方法,可用于选择性地测量半胱天冬-1(caspase-1)活性。
货号:MS3502 规格:100管/96样果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase,FBP)
试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
果糖-1,6二磷酸酶又称果糖1,6二磷酸酯酶,催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷,在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。
测定原理:
FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷,在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算FBP活性。
自备实验用品及仪器:
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入20mL试剂四充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂二:液体7.2μL×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂四:液体25mL×1瓶,4℃保存;
样本的前处理:
①总FBP酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。
②胞浆和叶绿体FBP酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中FBP酶活性。
建议测定总FBP酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP,则按照步骤②提取粗酶液。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
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始计时,在340 nm波长下记录反应1min后吸光度A1和反应6min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。
FBP活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
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