种羊布病虎红平板凝集与竞争ELISA检测的对比分析
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Cavleson 等是最先应用 ELISA 检测 牛布病抗体并发现其敏感性比试管 凝集试验高 10 ～ 100 倍。目前世界 上比较成熟的检测布病的 ELISA 方 法包括竞争 ELISA(cELISA) 和间接 ELISA（iELISA） 两 种，iELISA 的 敏感性较高， cELISA 的特异性较高， 可以排除其他革兰氏阴性菌引起的 假阳性反应。 2. 本 实 验 采 用 的 RBPT 的 优 点是易操作、简单，缺点是存在假 阳 性 反 应， 特 异 性 差， 且 存 在 人 为判定因素影响 ，本 实 验 结 果 表 明 RBPT 的 假 阳 性 率 在 50%， 这 与 曹 杰， 齐 长 明 等 人 的 试 验 结 果 40% ～ 50% 基本一致。在结果判定 时，凡凝集反应缓慢、颗粒细小的， 应 判 为 可 疑 (+)。 有 实 验 证 明， 虎 红平板凝集试验、和试管凝集试验 这两种诊断方法都会出现较高比例 的假阳性和假阴性。 3. 由于实验动物数量有限，该 实验结果只能初步说明问题，我们 下一步将进行大批量动物试验，以 期获得更加可靠的数据。虽然说布 病检测的血清学方法比较多，但目 前还没有一种检测方法是在敏感性、 特异性、准确性还是快速简便等方 面都兼顾的诊断方法。有结果表明 ELISA 操作方便，具有较好的敏感 性和特异性，建议在检疫中用敏感 性较高的 RBPT 初筛，用特异性较 好的 ELISA 确诊，以得到较好的效 果。由于阳性畜的漏检，为扩散蔓 延病原提供了条件，阴性畜的误杀 又会造成不必要的经济损失，所以 大 规 模 检 疫 时， 可 以 用 价 格 低 廉、 敏感性强、操作简单的方法先初筛， 然后用敏感性、特异性好的诊断方 法复检。 参考文献（略）
二、结果与分析
1. 总体情况。 本 次 实 验 室 共 检 测 血 清 115
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兽医实验室
头 份，RBPT 阳 性 头 数 46 头 份， RBPT 阳 性 率 40% ； c-ELISA 阳 性 头 数 23 头 份，c-ELISA 阳 性 率 20%。 其 中 种 公 羊 46 头 份，RBPT 阳 性 血 清 13 头 份， 布 病 虎 红 阳 性 率 28.26% ；检 测 种 母 羊 69 头 份， RBPT 阳性血清 33 头份，布病虎红 阳性率 47.83%。 c-ELISA 共检测 115 头份，其 中 种 公 羊 46 头 份，c-ELISA 阳 性 血 清 8 头 份， 布 病 c-ELISA 阳 性 率 17.39% ；检 测 种 母 羊 69 头 份，
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2017 年第 9 期
种羊布病虎红平板凝集与竞争 ELISA 检测 的对比分析
刘艳琴 柴贵明 梁莉 刘宗益 / 内蒙古巴彦淖尔乌拉特中旗农牧业局动物疫病预防控制中心 韩文芳 / 内蒙古巴彦淖尔市动物疫病预防控制中心 范艳丽 丁博 / 内蒙古巴彦淖尔五原县动物疫病预防控制中心
布 鲁 氏菌 病 （Brucellosis） ，简 称布病， 是由布鲁氏菌属 （brucellosis） 细菌引起人与动物共患的变态反应 性传染病，严重地威胁着人类健康 和畜牧业经济。历史上，布鲁氏菌 病在我国曾经是危害极为严重的人 兽共患传染病之一。解放后，布鲁 氏菌病的防治得到高度重视，被列 为二类法定传染病。 从我国不同年代家畜布病感染 状态分析，在上世纪 50-60 年代家 畜 感 染 布 病 明 显 高 于 70-80 年 代， 自 70 年代后开始下降，80 年代末期 已下降到有史以来的最低点，90 年 代初期平均感染率除羊外，牛和猪 都达到我国规定的控制标准。布鲁 氏菌病的防控始于 50 年代中期，我 国始终重视布鲁氏菌病的防治工作， 有组织有计划的进行人畜布鲁氏菌 病流行病学调查。然后是 60、70 年 代对高危家畜进行疫苗防治，发病 率明显下降，取得了显著成果。 在上世纪 50、60 年代时乌拉特 中旗发生过布病，但由于各级政府 及业务部门高度重视布病防治工作， 坚持畜间防治以免疫为主，免、检、 监测、淘汰阳性畜相结合的综合防
c-ELISA 阳 性 血 清 15 头 份， 布 病 c-ELISA 阳性率 21.74%。 2. RBPT 与竞争 ELISA 检测结 果比较。 69 头份 RBPT 阴性血清中，竞 争 ELISA 检 测 阳 性 数 为 2， 阳 性 率 2.9%，分析有可能是患畜初期感 染布病，抗体未达到 RBPT 检测的 含 量，RBPT 检 出 阴 性 ； c-ELISA 的 敏 感 性 高， 检 出 2 份 阳 性 血 样。 RBPT 及竞争 ELISA 检测结果比较 见表 2。 从整体检测结果看，两种试验
控措施，至上世纪ห้องสมุดไป่ตู้90 年代，布病基 本得到了控制。进入本世纪以后，随 着加大农牧业结构调整力度，巴彦 淖尔乌拉特中旗旗又是畜牧业大旗， 畜牧业地位不断提升，农牧民养殖 态度积极，外购牲畜比重逐年增加。 由于牲畜购入渠道繁多，流通监管 难，导致周边及外来牲畜流入巴彦 淖尔乌拉特中旗旗引发布病疫情。 随 着 当 今 世 界 的 国 际 化 贸 易， 布病的检测和监测工作已成为贸易 流通中极其重要的一个环节。虽然 国 际 兽 医 局（OIE） 编 写 了 动 物 传 染病的诊断方法及疫苗标准手册已 统一各成员国检测方法及结果差异， 不同实验室间，即使用同一份血清， 由于条件差异或者用不同的方法检 测所得结果也会有所差异，在实际 检测过程中还有很多问题值得探讨。 因为在布病防控工作中，政府要投 入大量的人力、财力、物力进行实 验室检测、扑杀补贴，因此，选择 合理、可靠的检测方法，科学准确 的做出结果，才能最终达到有效控 制布病的效果，避免在扑杀过程中 误杀、漏杀，进而减少农牧民的经 济损失。
一、材料和方法
1. 种羊。 巴彦淖尔乌拉特中旗 地区的两个种羊场的 115 只种羊全部 进行监测，所有检测羊均未接种过 S19 疫苗或口服猪 2 号疫苗。 布鲁氏菌虎红平板试验 2. 试剂。 抗原，中国兽医药品监察所生产，批 号 20161003，规格 15 ml/ 瓶，阴性血 清，阳性血清。布鲁氏杆菌抗体竞争 ELISA 检测试剂盒，北京维德维康生 物技术有限公司生产， 规格 96T×2/盒。 3. 方法。 布鲁菌病抗体检测按 照中华人民共和国国家标准（GB/ T18646-2002） 操 作， 布 鲁 菌 抗 体 检测按照 ELISA 检测试剂盒的说明 书进行操作。采用 5 ml 一次性采血 器， 每 只 羊 颈 静 脉 采 血 2 ～ 3 ml， 分离血清后进行虎红平板凝集试验 (RBPT)。 同 时 将 所 采 血 清 用 竞 争 ELISA（cELISA）试剂盒进行检测。 所有的血清样品用两种方法进行对比 检测，以确定 RBPT 与 c-ELISA 检 测结果的符合率。
