布鲁氏菌病实验室诊断技术

布鲁氏菌病诊断的金标准
布鲁氏菌病的金标准诊断方法是通过分离和鉴定布鲁氏菌。

具体诊断布鲁氏菌病的步骤包括：
1. 临床症状分析：布鲁氏菌病的典型症状包括发热、关节痛、乏力、头痛等，临床医生根据患者的症状进行初步判断。

2. 实验室检查：通过采集患者的血液、骨髓、尿液、淋巴组织或其他体液或组织进行培养。

3. 分离布鲁氏菌：将采集到的样本进行无菌条件下的培养处理，将培养基上的菌落进行进一步的鉴定。

4. 鉴定布鲁氏菌：通过对分离的菌落进行生理生化试验，如氧化酶试验、嗜碱性试验、免疫荧光试验、PCR等，判断菌株
是否为布鲁氏菌。

金标准诊断布鲁氏菌病的主要依据是从患者体液或组织样本中成功分离和鉴定出布鲁氏菌。

但由于布鲁氏菌的培养和鉴定过程较为复杂，诊断通常需要时间，并且技术要求高，因此常常需要结合临床症状、实验室检查及其他辅助诊断方法来综合判断。

布鲁氏菌病实验室诊断研究进展高明华樊庆德徐春光杨晓刚（呼伦贝尔学院生命科学与化学学院内蒙古呼伦贝尔021008）布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种重要人兽共患病。

根据致病性和宿主特异性，将布鲁氏菌分为6个种19个生物型，即羊种布鲁氏菌(B.meltensis)、牛种布鲁氏菌(B. abortus)、猪种布鲁氏菌(B. suis)、绵羊附睾种布鲁氏菌(B.ovis)、犬种布鲁氏菌(B. canis)和沙林鼠种布鲁氏菌(B. neotomae)。

另外，从海洋动物中分离到在致病性和分子特征上有别于前6种的布鲁氏菌，定为海洋种布鲁氏菌(B. maris)。

据CDC报告，我国人布鲁氏菌病发生严重，2005~2007年全国布鲁氏菌病新发病人分别为18 416、19 013、21 901例，2008年1~10月新发病数已达27 264例，形势十分严峻。

流行病学调查表明，感染来源主要是患布鲁氏菌病的羊，其次是牛及其他动物。

并且具有疫区范围扩大、爆发点增多、典型病例增多、人群分布以农民和牧民为主等特点。

为有效预防和控制人和动物布鲁氏菌病，加强对动物布鲁氏菌病的检疫监测力度十分重要。

为此本文就布鲁氏菌病实验室诊断方法研究进展作以综述。

1 免疫学诊断技术1.1 血清凝集性试验布鲁氏菌病传统检测方法有血清凝集试验、全乳环状试验(MRT)和抗人免疫球蛋白试验(Coomb’s)等。

经典血清凝集试验包括标准试管凝集试验(SAT)和平板凝集试验(PAT)等在发达国家已基本上停止使用，取代方法是缓冲布鲁氏菌抗原试验，如虎红平板凝集试验(RBT)等。

在国际贸易中，缓冲布鲁氏菌抗原试验是牛、羊、猪种布鲁氏菌病的指定试验。

乳牛MRT依然是乳牛布鲁氏菌病监测的主要方法。

由于凝集性试验是基于检测针对布鲁氏菌多糖O-链的抗体，因此会与有类似多糖O-链的细菌如耶尔森氏菌O:9等出现交叉反应。

1.2 补体结合试验（CFT）CFT至今仍是布鲁氏菌病诊断的重要方法，是牛、羊及绵羊附睾种布鲁氏菌病国际贸易指定试验，并作为确诊用。

动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021 范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。

本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。

本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。

2 虎红平板凝集试验2.1 材料准备2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

2.1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03mL。

2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2 操作方法2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。

2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03mL。

2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。

2.3 判定2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(—)。

3 乳牛布病全乳环状试验3.1 材料准备3.1.1 布病全乳环状抗原由制标单位提供，按说明书使用。

3.1.2 乳样3.1.2.1 受检乳样须为新鲜的全乳。

3.1.2.2 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。

3.1.2.3 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。

3.2 操作方法3.2.1 取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。

3.2.2 取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。

3.2.3 置37℃一38℃水浴中60min。

3.2.4 加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。

布鲁氏菌病实验室诊断技术及其适用性评析高明春1,2，王君伟 1,2（1.东北农业大学动物医学学院微生物与免疫学教研室，哈尔滨 150030；2.国家奶牛产业技术体系疾病控制功能室，北京 100193）摘 要：布鲁氏菌病严重阻碍我国养牛业的健康发展，控制乃至根除布病是世界范围内各布病负担国的共识。

本文就各种布鲁氏菌病实验室诊断技术及其在布病净化程序中的适用性加以客观评述，谨供布病防控工作者参考。

关键词：布鲁氏菌病；实验室诊断技术；奶牛；肉牛布鲁氏菌病（布病）是一种公认的人畜共患传染病，人、畜布病均归因于6个陆生动物布鲁氏菌经典种中的5个种所致的感染，即人间布病全部源于动物布病，并且各国的研究表明消灭动物布病能够有效地从根本上减少人间布病。

近年，我国家畜布鲁氏菌病（布病）与人间布病暴发频繁，给畜牧业与人民健康带来了巨大损失，而控制及消除布病影响的一个前提是能够对布病动物进行有效的诊断。

国内外对布病系统性的研究有近150年的历史，期间开发了许多布病体外和体内诊断方法，这些诊断方法服务于不同的应用目的，例如：证实疫情发生、全国性普查、确诊、国际贸易检测以及“无布病”地区的布病监测等等，如何选择诊断策略取决于布病的流行状况及检测的目的[1～5]。

本文对新近探讨各种布病诊断方法的文献进行回顾，并评价其在净化程序中的适用性。

1 布鲁氏菌病概述布鲁氏菌病主要通过消化道、呼吸道、生殖道传播，也可通过损伤的皮肤、黏膜等感染，造成以生殖系统为主的多器官损伤。

牛群中暴发布病会导致大量怀孕母牛流产和奶产量降低，如发生流行，则会严重影响整个产业链。

布病还是公认危害最为严重的人畜共患病之一，人感染后反复发作，难以根治。

因此，世界上绝大多数“布病国家”积极开展了本国的布病根除计划，并且北美、中欧的几个国家及加拿大、日本、澳大利亚和新西兰等已确认根除了布病，取得“无布病国家”称号[6-8]。

布病最重要的临床表现是患畜在第一次怀孕期间流产，虽然通常怀孕母畜只流产一次，但在这些动物的生命周期中依然会保持感染状态。

布鲁氏菌病诊断标准
布鲁氏菌病诊断标准如下：
(一) 流行病学：发病前病人与家畜或畜产品，布氏菌培养物有密切接触史，或生活在疫区的居民，或与菌苗生产、使用和研究密切联系者。

(二) 临床表现：出现数日乃至数周发热，多汗，肌肉和关节酸痛，乏力兼或肝、脾、淋巴结和睾丸肿大等可疑症状及体征。

(三) 实验室检查：布病玻片或虎红平板凝集反应阳性或可疑，或皮肤过敏试验后24、48小时分别观察一次，皮肤红肿浸润范围有一次在2.0cm×2.0cm及以上(或4.0cm²以上)
(四) 分离细菌：从病人血液、骨髓、其他体液及排泄物中分离到布氏菌。

(五) 血清学检查：标准试管凝集试验(SAT)滴度为1：100及以上，对半年内有布氏菌苗接触史者，SAT滴度虽达1：100及以上，过2——4周后应再检查，滴度升高4倍及以上，或用补体结合试验(CFT)检查，CFT滴度1：10及以上;抗人免疫球蛋白试验(Coomb'S)滴度1：400及以上。

诊断疑似病例：具备(一)、(二)、(三)者。

诊断确诊病例：疑似病例加(四)或(五)中任何一项者。

布鲁氏菌病实验室诊断研究进展高明华 樊庆德 徐春光 杨晓刚（呼伦贝尔学院生命科学与化学学院 内蒙古 呼伦贝尔 021008）布鲁氏菌病(Brucellosis )是由布鲁氏菌(Brucella )引起的一种重要人兽共患病。

根据致病性和宿主特异性，将布鲁氏菌分为 6个种19个生物型，即羊种布鲁氏菌(B.meltensis )、牛种布鲁氏菌(B.abortus )、猪种布鲁氏菌(B. suis )、绵羊附睾种布鲁氏菌(B.ovis )、犬种布鲁氏菌(B. canis ) 和沙林鼠种布鲁氏菌(B. neotomae )。

另外，从海洋动物中分离到在致病性和分子特征上有别于前6种的布鲁氏菌，定为海洋种布鲁氏菌(B. maris )。

据CDC 报告，我国人布鲁氏菌病发生严重，2005~2007年全国布鲁氏菌病新发病人分别为18 416、19 013、21 901例，2008年1~10月新发病数已达27 264例，形势十分严峻。

流行病学调查表明，感染来源主要是患布鲁氏菌病的羊，其次是牛及其他动物。

并且具有疫区范围扩大、爆发点增多、典型病例增多、人群分布以农民和牧民为主等特点。

为有效预防和控制人和动物布鲁氏菌病，加强对动物布鲁氏菌病的检疫监测力度十分重要。

为此本文就布鲁氏菌病实验室诊断方法研究进展作以综述。

1 免疫学诊断技术 1.1 血清凝集性试验布鲁氏菌病传统检测方法有血清凝集试验、全乳环状试验(MRT)和抗人免疫球蛋白试验(Coomb’s)等。

经典血清凝集试验包括标准试管凝集试验(SAT)和平板凝集试验(PAT)等在发达国家已基本上停止使用，取代方法是缓冲布鲁氏菌抗原试验，如虎红平板凝集试验(RBT)等。

在国际贸易中，缓冲布鲁氏菌抗原试验是牛、羊、猪种布鲁氏菌病的指定试验。

乳牛MRT 依然是乳牛布鲁氏菌病监测的主要方法。

由于凝集性试验是基于检测针对布鲁氏菌多糖O-链的抗体，因此会与有类似多糖O-链的细菌如耶尔森氏菌O:9等出现交叉反应。

布鲁氏菌病检测技术布鲁氏菌病检测技术1.概况布鲁氏菌病(简称布病)，是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的传染病。

临床主要特征是母畜流产、乳腺炎、不育和各种组织(如睾丸、关节)的炎症。

人类感染布病后，病程长，反复发作，长期不愈。

布病几乎遍及世界各地。

凡有牲畜的地区都有布病流行。

据不完全统计，在160个国家和地区中就有123个国家和地区有布病发生。

我国多见于内蒙古、东北，西北等牧区。

在北方农区也有散发，常呈地地方性流行。

在不良环境，如抗生素的影响下，本菌易发生变异，通常变异形成的布鲁氏菌可在机体内长期存在。

该菌对热抵抗力不强，63℃经7～10 min可被杀死，在鲜乳中可存活2天到18个月，在冻肉中可存活14～47天，在干燥土壤和胎儿体内可分别存活37天和6个月。

对常用消毒药敏感，如0.1％升汞数分钟，1％来苏儿或2％福尔马林15 min可将其杀死。

日光下曝晒4 h 可杀死本菌。

人和多种动物对布鲁氏菌易感。

动物中羊、牛、猪的易感性最强。

母畜比公畜，成年畜比幼年畜发病多。

在母畜中，第一次妊娠母畜发病较多。

带菌动物，尤其是病畜、流产胎儿、胎衣是主要传染源。

消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤、粘膜等感染。

常呈地方性流行。

人主要通过皮肤、粘膜和呼吸道感染。

本病一年四季均可发病。

流行区在发病高峰季节(春末夏初)可呈点状暴发流行。

患病与职业有密切关系，如：兽医、畜牧工作者、屠宰工人、皮毛工等感染机会较高。

人类布鲁氏菌病的预防，首先要注意职业性感染，凡在动物养殖区、屠宰区、畜产品加工厂的工作者以及兽医、实验室工作人员等，必须严守防护制度(即穿着防护服装，做好消毒工作)，尤其在仔畜大批生产季节。

更要特别注意。

病畜乳肉食品必须灭菌后食用。

必要时可用疫苗接种，接种前应行变态反应试验。

阴性反应者才能接种。

2.实验室监测技术概述(据布鲁氏菌病防治技术规范)2.1检测方法血清学实验或细菌分离。

初筛试验选用虎红平板凝集试验(RBPT)或乳牛布病全乳环状试验(MRT)(见GB/T 18646)。

动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021 范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。

本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。

本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。

2 虎红平板凝集试验2.1 材料准备2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

2.1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03mL。

2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2 操作方法2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。

2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03mL。

2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。

2.3 判定2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(—)。

3 乳牛布病全乳环状试验3.1 材料准备3.1.1 布病全乳环状抗原由制标单位提供，按说明书使用。

3.1.2 乳样3.1.2.1 受检乳样须为新鲜的全乳。

3.1.2.2 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。

3.1.2.3 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。

3.2 操作方法3.2.1 取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。

3.2.2 取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。

3.2.3 置37℃一38℃水浴中60min。

3.2.4 加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。

布鲁氏菌病诊断技术标准一、流行病学调查布鲁氏菌病（简称布病）是一种由布鲁氏菌引起的动物源性传染病。

本病在流行病学上有明显的特点，包括地区性、季节性及职业性。

在流行地区，患者多有与家畜或畜产品密切接触史，或与布鲁氏菌病流行地区有旅行史。

二、临床表现1.发热：多数患者以不规则热为常见，也有弛张型、稽留型和短期发热者。

2.多汗：尤其在夜间或清晨时，大汗淋漓。

3.乏力：几乎所有病例均有不同程度的乏力。

4.疼痛：常表现为全身性疼痛和关节痛。

5.肝、脾、淋巴结肿大等。

三、实验室检测1.血象：白细胞总数正常或偏低，淋巴细胞相对或绝对增多。

2.细菌学检查：血液、骨髓、脑脊液、关节液等标本，通过培养分离出布鲁氏菌，是确诊布鲁氏菌病的重要依据。

3.免疫学检查：血清学试验（如凝集试验、酶联免疫吸附试验等）检测特异性抗体，可作为确诊依据。

4.其他检查：如肝功能、肾功能等。

四、病理学诊断布病的病理学特征包括淋巴结炎、网状内皮细胞增生以及各种脏器的病理改变。

五、鉴别诊断布病应与疟疾、伤寒、结核病等相鉴别，根据临床表现和实验室检查结果进行综合判断。

六、病情评估与预后判断1.病情评估：根据临床表现和实验室检查结果，评估患者的病情轻重及疾病进展情况。

2.预后判断：布病预后良好，经过及时治疗，大多可痊愈。

但若延误治疗，可引起并发症，甚至危及生命。

七、诊断流程图（详见附图）八、诊断标准分级1.疑似病例：符合流行病学史和临床表现。

2.临床诊断病例：符合疑似病例标准，同时符合实验室检查中的一项阳性指标。

3.确诊病例：符合疑似病例或临床诊断病例标准，同时符合病理学检查结果或分离培养出布鲁氏菌。

布鲁氏菌病诊疗指南一、临床表现二、实验室检查诊断布鲁氏菌病主要依赖临床症状和实验室检查结果。

常见的实验室检查包括血液培养、骨髓培养、淋巴结培养、关节液培养等。

同时，还可以检测布鲁氏菌的特异性抗体，包括凝集试验、间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验等。

三、治疗方案1.常规治疗方案盖帕妥：每日口服100mg两次，连续6周。

力奇霉素：每日口服450mg一次，连续6周。

链霉素：每日肌肉注射1g两次，连续3周。

2.替代治疗方案如果患者对盖帕妥过敏或无法耐受，可以使用替代药物如环孢霉素（co-trimoxazole）或利奈唑胺（levofloxacin）。

环孢霉素：每日口服960mg两次，连续6周。

利奈唑胺：每日口服500mg一次，连续6周。

四、治疗监测在开始治疗前，应进行肝、肾功能等相关检查。

治疗期间，应定期复查血常规、肝功能、肾功能及血清学检查。

治疗过程中，如出现过敏反应、肝功能异常等不良反应，应及时调整治疗方案。

五、追踪观察治疗结束后，应对患者进行长期追踪观察，以避免复发和慢性感染。

追踪观察期一般为1年，包括月度随访和半年度随访，随访内容包括临床症状、体征、实验室检查等。

六、预防措施预防布鲁氏菌病的关键是防止人畜接触，包括减少生活在疫区的人与动物的接触，采取严格的个人防护措施，同时对动物实施有效的防疫措施。

总结起来，布鲁氏菌病的诊疗指南主要包括临床表现、实验室检查、治疗方案、治疗监测、追踪观察和预防措施等方面。

这些指南将有助于提高对布鲁氏菌病的早期诊断和有效治疗，减少并发症和死亡率。

布鲁氏菌诊断的金标准一、临床诊断布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的急性或慢性传染病。

临床诊断主要依据患者的病史、症状和体征以及流行病学情况。

患者通常有与患病动物接触或在疫区生活或旅行过的历史，同时出现发热、多汗、关节疼痛、头痛等症状。

然而，这些症状与其他疾病如疟疾、结核病等有重叠，因此需要结合其他诊断方法进行确认。

二、实验室诊断1.细菌培养：将患者的血液、骨髓或其他体液接种到选择性培养基上，培养出布鲁氏菌，是诊断的金标准。

2.分子生物学检测：利用PCR等分子生物学技术检测布鲁氏菌的特异性基因片段，具有快速、敏感和特异性强等优点。

3.血清学检测：通过检测患者血清中布鲁氏菌特异性抗体，如IgM和IgG 抗体，可以辅助诊断布鲁氏菌病。

但需要注意的是，由于抗体产生的时间和持续时间不确定，血清学检测不能用于确诊急性感染。

4.动物接种试验：将患者的血液或组织接种到易感动物（如小鼠）体内，观察是否出现布鲁氏菌病的症状和病理变化，以辅助诊断。

三、流行病学情况患者的职业、生活环境、饮食习惯等也是诊断布鲁氏菌病的参考因素。

例如，从事畜牧业、皮毛加工、畜产品加工等工作的人群患病风险较高。

此外，患者是否在疫区生活或旅行过也是重要的流行病学线索。

四、病理学检查病理学检查可以观察到布鲁氏菌感染引起的组织病理学改变，如淋巴结肿大、间质性炎症等。

但需要注意的是，病理学检查通常需要结合其他诊断方法进行综合判断。

综上所述，布鲁氏菌病的诊断需要结合临床诊断、实验室诊断、流行病学情况、病理学检查等多种方法进行综合判断。

其中，细菌培养和分子生物学检测是较为可靠的诊断方法，血清学检测和动物接种试验也有一定的参考价值。

动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021 范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。

本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。

本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。

2 虎红平板凝集试验2.1 材料准备2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

2.1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03mL。

2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2 操作方法2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。

2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03mL。

2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。

2.3 判定2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(—)。

3 乳牛布病全乳环状试验3.1 材料准备3.1.1 布病全乳环状抗原由制标单位提供，按说明书使用。

3.1.2 乳样3.1.2.1 受检乳样须为新鲜的全乳。

3.1.2.2 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。

3.1.2.3 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。

3.2 操作方法3.2.1 取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。

3.2.2 取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。

3.2.3 置37℃一38℃水浴中60min。

3.2.4 加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。