糖原磷酸化酶 a(GPa)活性检测试剂盒说明书 微量法
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碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号:G5610有效期:6个月有效。
产品内容:产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明:碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法,其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。
在碱性条件下酚与氨基安替比林结合,并经氧化生成红色醌式结构物,呈深浅不一的红色,产物红色越深,说明碱性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过酶标仪测定510nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料:96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考):1、配制标准品工作液:取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后,取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O,使浓度达到0.05mg/ml,即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。
按照下表稀释系列标准品溶液。
012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品:(1)细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-80℃冻存,用于碱性磷酸酯酶的检测。
组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2130规格:50T/24S产品内容:提取液:液体30mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体30mL×1瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。
标准品:液体1mL×1支,2μmol/mL酚标准液,4℃保存。
临用前蒸馏水稀释至0.5μmol/mL备用。
产品说明:ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。
ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中,ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚,苯酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。
试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:称取约0.1g组织,加提取液1mL充分研磨,4℃、10000rpm离心10min,取上清液待测。
血液可直接用于测定,如果浓度高的话,用提取液稀释。
二、测定步骤:1.分光光度计预热30min以上,调节波长到510nm,蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。
试剂名称(μL)测定管对照管空白管标准管蒸馏水--100-0.5μmol/mL标准品---100上清液100---试剂一200200200200试剂二200200200200混匀后置于37℃水浴中保温15min试剂三600600600600上清液-100--混匀后于510nm测定吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、ACP活性计算:1.按蛋白浓度计算活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
辅酶II NADP(H)含量检测试剂盒(微量法货号:BC1105规格:100T/48S产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体25 mL×1瓶2-8℃保存碱性提取液液体25 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体10 mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体8mL×1瓶2-8℃保存试剂四A粉剂×1支-20℃保存试剂四B液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体30 mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体50 mL×1瓶2-8℃保存NADP标准品粉剂×1支-20℃保存NADPH标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制:1、试剂二:临用前加入4mL蒸馏水充分混匀,溶解后4℃保存2-8周。
2、试剂四:临用前将试剂四A溶解到试剂四B中,溶解后加入5mL蒸馏水,分装保存,避免反复冻融,-20℃保存4周。
3、NADP标准品:临用前加入1.27 mL 蒸馏水,即5 µmol/mL,-20℃可以保存2周。
4、NADPH标准品:临用前加入1.2 mL 蒸馏水,即5 µmol/mL,-20℃可以保存2周。
产品说明:辅酶Ⅱ NADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH 含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。
NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。
NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH 含量。
乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)含量测定试剂盒说明书货号:MS2106 规格:100管/96样乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)含量测定试剂盒说明书微量法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。
在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。
糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化,经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水,释放能量用于ATP合成。
此外,乙酰辅酶A是合成脂肪酸,酮体,胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
测定原理:苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。
柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A 和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。
利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应,乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。
自备实验用品及仪器:紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1支,-20℃保存。
临用前加入250μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;试剂三:液体10uL×1支,4℃保存。
临用前加入250μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存。
临用前加入22.5mL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;试剂五:液体30mL×1瓶,4℃保存。
工作液的配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×0.23 m L),将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合,或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀(可以测定96样);加样前置37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴锅中预热30 min;现配现用;乙酰辅酶A的提取:1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2195规格:100T/96S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体2mL×1瓶,4℃保存;试剂三:液体2mL×1瓶,4℃保存;试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加入2mL双蒸水充分溶解待用;可分装后-20℃保存,避免反复冻融;试剂五:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加入2mL双蒸水充分溶解待用;可分装后-20℃保存,避免反复冻融;试剂六原液:液体10μL×1支,4℃保存;试剂六稀释液:液体5mL×1瓶,4℃保存;试剂七:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加入5mL双蒸水,用不完的试剂可分装后-20℃保存,避免反复冻融;试剂六工作液的配制:将试剂六原液:试剂六稀释液=1μL:329μL稀释,用多少配多少。
产品说明:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(EC4.1.1.31)广泛存在于植物和微生物中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶,同时也是C4植物和CAM植物固定CO2的关键酶,对三羧酸循环的运转起重要调节作用。
PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算PEPC活性。
试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000g,4℃,离心20min。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px/GPX)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介:谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX 能够催化还原型谷胱甘肽(GSH)生成氧化型谷胱甘肽(GSSG),使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX 催化H 2O 2氧化GSH,产生GSSG,GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物,412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。
试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。
产品内容:提取液:液体80mL×1瓶,4℃保存;试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解;试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用;试剂三:液体10μL×1支,临用前按1μL 试剂三:499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三,4℃保存。
现用现配;试剂四:液体30mL×1瓶,4℃保存;瓶底若有结晶可50℃水浴溶解,此溶液为饱和溶液,若底部最终还有结晶,吸取上清使用即可;试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存;试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用;标准品:粉剂×1支,10mg 还原型谷胱甘肽,4℃保存。
临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。
操作步骤:一、粗酶液的提取:1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取0.05g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。
10000rpm,4℃离心10min,取上清置冰上待测(如上清不清澈,再离心3min)。
货号:MS2205 规格:100管/96样3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3 二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化 1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD,340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH 活性的高低。
需自备的仪器和用品分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:液体×1 支,4℃保存;样本的前处理1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(1)工作液的配制:将试剂二全部倒入试剂一瓶中,充分溶解,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热10分钟;现配现用。
货号:MS3603-100 规格:100管/96样尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphosphprylase ,UGP )试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。
在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG)。
测定原理:UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH,340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自备实验用品及仪器:天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板试剂组成和配制:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后 -20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五:液体2mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置冰上待测。
3.液体:直接检测。
谷氨胺酶GLS)检测试剂说明书微量法货号:UPLC-MS-4447规格:100T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体70mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二A液体0.4mL×1支4℃保存试剂二B液体 1.6mL×1瓶4℃保存试剂三液体2mL×1瓶常温保存标准品液体1mL×1支4℃保存溶液的配制:1、提取液:使用前37℃预热;2、试剂一:临用前加入5mL提取液充分溶解待用;3、试剂二B:临用前将试剂二A倒入试剂二B中混匀(A:B=1:4比例),或者根据样本所需,按照体积比试剂二A:试剂二B=1:4现配现用;4、标准品:10μmol/mL氮标准液,使用前37℃预热。
产品说明:GLS(EC3.5.1.2)主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定GLS催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1.组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5-10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液),冰上匀浆后于4℃,12000g离心15min,取上清置于冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万个细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3s,间隔7s,总时间3min);然后4℃,12000g离心15min,取上清置于冰上待测。
谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4497微量法规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体100mL×1瓶4℃保存试剂二液体22mL×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1瓶4℃保存溶液配制:试剂三:临用前加2mL蒸馏水溶解。
产品说明:GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。
GST是体内解毒酶系统的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此,GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外,因为GST具有GSH-Px活性,亦称为non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
注意,GST催化的反应减少GSH含量,但是不增加GSSG含量。
GST催化GSH与CDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm波长处吸光度上升速率,即可计算出GST活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
自备仪器和用品:低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量石英比色皿/96孔UV 板和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。
8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒说明书微量法谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0355规格:100T/96S产品内容:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体22mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加2mL蒸馏水溶解。
产品说明:GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。
GST是体内解毒酶系统的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此,GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外,因为GST具有GSH-Px活性,亦称为non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
注意,GST催化的反应减少GSH含量,但是不增加GSSG含量。
GST催化GSH与CDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm波长处吸光度上升速率,即可计算出GST 活性。
自备仪器和用品:低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。
8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.血清等液体:直接测定。
222超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:UPLC-MS-4529规格:100T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
微量法试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体100μL×1支2-8℃保存试剂三液体4mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体0.25mL×1支2-8℃保存溶液的配制:1、试剂二:使用前先离心再吹打混匀。
根据样本量将试剂二用蒸馏水稀释10倍后使用,当天用完。
2、试剂四:根据样本量将试剂四用蒸馏水稀释5倍后使用,当天用完。
产品说明:SOD(EC1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生歧化作用,生成H2O2和O2。
SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O-),O-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm 处有吸收;SOD可清除O-,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明SOD活性愈低,反之活性越高。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、细胞超声破碎仪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1.细胞、细菌样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎(功率200w,超声3s,间隔10s,重复30次)。
8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2210规格:25T/24S50T/48S产品内容:提取液:30mL×1瓶,4℃保存;试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;试剂二:液体25mL×1瓶,4℃保存;试剂三:液体15µL×1支,4℃保存;临用前加入0.5mL蒸馏水充分混匀,或根据比例现配现用;用不完的试剂4℃保存一周。
产品说明:GAPDH(EC1.2.1.12)催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3-磷酸甘油醛、无机磷和NAD+,340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。
试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
血清(浆):直接检测。
二、测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号: UPLC-MS-4358规格: 50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
溶液的配制:1、试剂二:临用前配制,加入5 mL 试剂一,混匀;2、试剂三:临用前配制,加入5 mL 试剂一,混匀。
产品说明:磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)依次催化NADPH 合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。
此外,6PGDH 逆境生理中具有重要作用。
6PGDH 催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH 在340nm 有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm 吸光度增加速率,计算6PGDH 活性。
注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)称约0.1g 组织,加入1mL 试剂一,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心10min,取上清粗酶液,待测。
二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min 以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴预热30min 以上。
3.于340nm 处测定3min 内吸光值变化,第0s 吸光值记为A1,第180s 吸光值记为A2。
记ΔA 测定=A2 测定-A1 测定,ΔA 空白=A2 空白-A1 空白。
三、6PGDH 活性计算(1)按蛋白浓度计算活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。
6PGDH 酶活性(U/mg prot) =[(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ε×d)×109×V 反总]÷(Cpr×V 样)÷T=536×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷Cpr(2)按样本质量计算活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。
酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)简介:酸性磷酸酶(acid phosphatase ,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5~5.5。
酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中其分子量从18kD 到100kD 不等,该酶分为两类,一类为酒石酸盐敏感型,一类为氟离子敏感型。
溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型,而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
Leagene 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在酸性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。
在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色,产物黄色越深,说明酸性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过分光光度比色法(分光光度计)测定处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、比色杯2、水浴锅或恒温箱3、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、准备样品:①血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,编号名称TE0034 60T Storage试剂(A): ACP Assay buffer 50ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.2ml-20℃ 避光使用说明书1份尿液通常也可以直接用于测定,冻存,用于酸性磷酸酶的检测。
植酸酶活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC3145规格:100T/48S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
缓冲液:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×2支,4℃保存,临用前加缓冲液4mL配制,现用现配。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。
显色剂:粉剂×6瓶,4℃保存,临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解,再加1.6mL试剂三混匀。
样本处理产品说明:植酸酶(phytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称,属磷酸单酯水解酶,它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理植酸酶在一定温度和pH值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物,在700nm处有特征吸收峰,根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅,超声溶解器,回旋式振荡器。
操作步骤:1.酶制剂:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:500~1000的比例(建议称取约0.001g,加入1mL提取液)第1页,共4页加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,待测。
2.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。
3.饲料样品:饲料烘干粉碎,过40目筛,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,在超声波溶解器上溶解15min,再用回旋式振荡器振荡15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。
酸性转化酶(AI)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0565规格:100T/48S产品内容:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入20mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存;标准液:粉剂×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。
产品说明:蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。
根据最适pH,Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。
AI(EC3.2.1.26)主要存在于细胞液泡或自由空间中,最适pH为4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。
AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在540nm 有特征光吸收,在一定范围内540nm光吸收增加速率与AI活性成正比。
试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;12000g,4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。
第1页共3页二、标准曲线绘制将标准液稀释成2、1.5、1.0、0.5、0.25mg/mL葡萄糖标准液,按照下述测定步骤,分别测定2、1.5、1.0、0.5、0.25、0mg/mL葡萄糖标准液在540nm下的吸光度(A),以各浓度下吸光值减空白管(浓度为0mg/mL)的吸光度为y轴,葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线三、测定步骤和加样表:1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
1.性能指标1.1外观外观应符合以下要求:a)试剂盒应组分齐全,完整,液体无渗漏;包装标签文字符号应清晰。
b)GA试剂1(R1):无色至淡黄色液体。
c)GA试剂2(R2):淡黄色至棕黄色液体。
d)ALB试剂1(R1):无色至淡黄色液体。
e)ALB试剂2(R2):棕绿色至淡绿色液体。
f)校准品/质控品:白色至淡黄色冻干粉。
1.2装量液体试剂装量要求不低于标示量。
1.3试剂空白吸光度糖化白蛋白试剂在主波长处的空白吸光度(A)≤0.1。
白蛋白试剂在主波长处的空白吸光度(A)≤0.35。
1.4分析灵敏度糖化白蛋白样本浓度在650μmol/L 时,吸光度变化在0.08~0.19。
白蛋白样本浓度在4.0g/dL 时,吸光度变化在0.2~0.6。
1.5线性范围1.5.1糖化白蛋白1.5.1.1糖化白蛋白浓度在[38,1300] μmol/L范围内,线性相关系数r≥0.990。
1.5.1.2在[38,620] μmol/L范围内,线性绝对偏差应不大于±30μmol/L;在(620,1300] μmol/L范围内,线性相对偏差应不大于±10%。
1.5.2白蛋白1.5.2.1试剂盒在[1.0,6.0] g/dL 范围内,线性相关系数r≥0.990。
1.5.2.2 在[1.0,2.0] g/dL 范围内,线性绝对偏差应不大于±0.4g/dL;在(2.0,6.0] g/dL 范围内,线性相对偏差应不大于±10%。
1.6精密度1.6.1重复性糖化白蛋白批内精密度(CV)≤5%;白蛋白批内精密度(CV)≤2%。
1.6.2批间差糖化白蛋白批间相对极差(R) ≤8%;白蛋白批间相对极差(R)≤5%。
1.7准确度糖化白蛋白:相对偏差应不大于±10%。
白蛋白准确度:相对偏差应不大于±6.0%。
1.8分析特异性当胆红素≤7.5mg/dL、结合胆红素≤5mg/dL、葡萄糖≤2400mg/dL、抗坏血酸≤5mg/dL、血红蛋白≤200mg/dL、尿酸≤35mg/dL、脂肪乳≤0.2%时,对GA 试剂检测结果的偏差影响在±10%以内。
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糖原磷酸化酶a(GPa)活性检测试剂盒说明书微量法
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号:BC3345
规格:100T/96S
产品内容:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体16mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂四:粉剂×1支,-20℃保存;
产品说明:
糖原磷酸化酶(Glycogenphosphorylase,GP,EC2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子
从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷
键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两
种形式。糖原的分解主要在GPa的催化下进行。
未添加激活剂时,GPa催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶
和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GPa
活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本的前处理:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进
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行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零;
2、工作液的配制:临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂4℃可保存一周;
3、试剂三的配制:临用前在试剂三管中加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃可保存一周;
4、试剂四的配制:临用前在试剂四管中加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃可保存一周;
5、将工作液、试剂三和试剂四置于37℃预热5分钟;
6、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三、10μL试剂四、10μL蒸馏水和160μL工作
液,立即混匀,记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
三、GPa活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/mgprot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T
=643×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T
=643×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,
1cm;V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5min;Cpr:样本
蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下:
(1)按样本蛋白浓度计算
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单位定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/mgprot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T
=1286×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T
=1286×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,
0.05cm;V样:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5min;Cpr:样
本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。