酒精性肝损伤造模
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五味子多糖与泽泻提取物联合应用对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用苑荣爽;孙卉;杨雪晗;孙靖辉;李贺;陶雪;陈建光;王春梅【摘要】Objective To observe the protective effects of Schisandra polysaccharides and Alisma orientalis extract on the acute alcohol-induced liver injury in mice.Method 50 Mice were randomly divided into 5 groups,control group,alcoholic liver injury model group,Schisandra and Alisma (2:1) treatment group,Schis-andra and Alisma (1:1) treatment group,and Schisandra and Alisma (1:2) treatment group.The mice in Schisandra and Alisma treated groups were intragastrically administered with Schisandra polysaccharides and Alisma orientalis extract (100mg/kg),and those in the control and model group were given the same volume solvent for 30 days in the same way.1 Hour after the last administration,50% ethanol (12 mL/kg) was administered to the mice in model group and Schisandra and Alisma treated groups.16 Hourslater,blood and liver samples of mice were collected for the calculation of liver indexes of mice in each group and the detection of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) levels in serum as well as the contents of reduced glutathione (GSH) and triglyceride (TG) in liver tissues.Pathological changes of the mice liver were observed by hematoxylin-eosin staining (HE).Results Compared with the alcohol-induced liver injury model,Schisandra and Alisma extract could significantly reduce the liver index in mice (P<0.05) and the levels of ALT and AST inserum (P<0.05),significantly elevate the content of GSH(P<0.01),significantly reduce the content of TG in liver tissues (P<0.05),and significantly improve the pathological changes of the livertissues.Conclusion Application of Schisandra polysaccharides and Alisma orientalis extract should have a protective effect on the acute alcohol-induced liver injury in mice.%目的观察五味子粗多糖与泽泻提取物联合应用对酒精诱导小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 50只小鼠随机分成5组,分别为空白对照组(CON)、酒精性肝损伤模型组(MOD)、五味子泽泻2:1组、五味子泽泻1:1组和五味子泽泻1:2组.各药物处理组小鼠每日灌胃五味子泽泻提取物100mg/kg,空白对照组和酒精性肝损伤模型组给予相同体积溶媒,连续30d.酒精性肝损伤模型组和五味子泽泻各给药组的小鼠末次给药1h后均灌胃给予50%乙醇溶液12mL/kg.16h后取小鼠的血和肝脏,计算各组小鼠的肝指数,检测血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的水平,检测肝组织中微量还原型谷胱甘肽(GSH)和甘油三酯(TG)的含量,应用苏木精-伊红染色(HE)法观察肝脏病理学变化.结果与酒精性肝损伤模型组比较,五味子泽泻1:1组和1:2组均可降低小鼠肝脏指数(P<0.05),降低血清中ALT和AST水平(P<0.05),升高肝组织中GSH含量(P<0.01),且降低TG含量(P<0.05或P<0.01),改善肝脏病理学变化.结论五味子多糖与泽泻提取物联合应用对小鼠急性酒精性肝损伤具有一定的保护作用.【期刊名称】《北华大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2017(018)004【总页数】5页(P454-458)【关键词】五味子;泽泻;急性酒精性肝损伤【作者】苑荣爽;孙卉;杨雪晗;孙靖辉;李贺;陶雪;陈建光;王春梅【作者单位】北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013;北华大学药学院,吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R285.5酒精性肝损伤是由于长期饮酒所致的肝脏疾病,发病率高,加之长期的酒精摄入对神经系统、心血管系统的影响,使酒精性肝损伤已成为一种严重危害人们身体健康的疾病,因此,寻找对酒精性肝损伤有保护作用的药物意义重大[1-2].根据病因、病理等临床特征,酒精性肝损伤可归属于祖国传统医学中的“伤酒”和“酒疸”,酒为体湿性有毒之品,《新修本草》记载:“酒,味苦,大热有毒”[3].本课题组的前期研究表明:五味子多糖对四氯化碳(CCl4)及高脂饮食诱导的肝损伤具有明显的保护作用,并可降低高脂血症小鼠的血清总胆固醇及甘油三酯水平等[4-5];泽泻具有利水渗湿、泄热、化浊降脂的功效,是清热、利湿、解毒的代表性中药,研究表明:泽泻对肝损伤具有明显的治疗作用,能提高机体的免疫力,并促进受损肝细胞功能的恢复[6-8].本研究将五味子与泽泻相配伍,观察其对酒精性肝损伤动物模型的保护作用,为中药的配伍研究和临床应用提供理论依据.1.1 材料1.1.1 实验动物雄性ICR小鼠(长春亿斯实验动物研究中心,生产许可证号:SCXK-(吉)2015-0003),体质量(20±2)g.实验室条件:室温20~25 ℃,小鼠采取分笼饲养,饲料供给充足,自由饮水.1.1.2 药品、试剂与仪器药品:五味子(吉林省集安五味子种植基地)多糖采用水提醇沉的方法进行提取,经正交试验确定最佳提取工艺:料液比为1∶45,提取时间为3 h,提取温度为100 ℃[9],提取率为17.21%,多糖含量为71.92 mg/mL.将中药饮片泽泻(批号:20140725,河北祁新中药颗粒饮片有限公司)粉碎后用一定量乙醇进行提取,经正交试验确定最佳提取工艺,乙醇浓度为70%,乙醇用量是药物的10倍,提取时间为1.5 h,提取温度为70 ℃,可获得深褐色糖浆状提取物.试剂:谷丙转氨酶(ALT,批号:20150712)、谷草转氨酶(AST,批号:20150620)、微量还原型谷胱甘肽(GSH,批号:20150725)及甘油三酯(TG,批号:20150720)试剂盒(南京建成生物工程研究所).仪器:JY92-IID超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司);KDM调温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司);旋转蒸发器(上海申生科技有限公司);Eppendorf AG小型台式冷冻离心机、721B 型分光光度计(上海第三分析仪器厂);全自动酶标仪(infiniteM200,瑞士TECAN集团公司).1.2 方法1.2.1 动物实验分组与处理50只小鼠随机分成5 组,分别为空白对照组(CON)、酒精性肝损伤模型组(MOD)、五味子泽泻2∶1组、五味子泽泻1∶1组和五味子泽泻1∶2组.小鼠常规饲料喂养,自由饮水.药物处理组小鼠每日灌胃给予五味子泽泻提取物100 mg/kg,对照组和模型组每天灌胃给予同体积蒸馏水,连续30 d.模型组和各药物处理组的小鼠末次给药1 h后分别灌胃给予50% 乙醇溶液(12 mL/kg),对照组给予同体积溶媒.小鼠经禁食不禁水16 h后,摘取眼球取血,3 500 r/min低温离心,分离血清,冻存待用.取血后小鼠立即断髓处死,迅速取出完整肝脏,于预冷的生理盐水中漂洗,滤纸吸干水分并精确称取肝质量,计算肝脏指数(肝湿重/体质量×100%),观察整体形态及表面光泽,取每只小鼠相同部位的肝小叶组织,分为两份,一份置于10%中性甲醛溶液中固定待用,一份制备匀浆用于肝组织相关指标检测.1.2.2 血清中ALT和AST检测采用酶法测定血清中AST和ALT水平,具体方法参照试剂盒说明书.1.2.3 肝组织中GSH和TG检测剪取一定量肝组织加入9倍量的生理盐水,在冰水浴中用匀浆机制成组织匀浆,2 500 r/min离心,取上清液,-80 ℃ 冻存.采用酶法测定肝组织中的GSH和TG含量,具体方法参照试剂盒说明书.1.2.4 肝组织HE染色取10%甲醛溶液固定的肝组织,石蜡包埋,切成5 μm 的切片,常规 HE 染色,在光学显微镜下观察肝组织病理学变化.1.3 统计学分析应用SPSS 20.0软件进行统计学分析,数据以均数±标准差±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析(One Way ANOVA),两组间比较采用t检验,P<0.05为差异具有统计学意义.2.1 五味子泽泻提取物对各组小鼠体质量和肝指数的影响各组小鼠经药物处理后,体质量无明显差异,与空白对照组比较,酒精性肝损伤模型组肝质量和肝指数均明显增大,差异具有统计学意义(P<0.05),表明一次性灌胃50%乙醇溶液可导致小鼠肝组织水肿,造成肝脏损伤.与酒精性肝损伤模型组比较,五味子泽泻1∶1组、五味子泽泻1∶2组的肝质量及肝指数均有所下降(P<0.05或P<0.01).见表1.2.2 五味子泽泻提取物对小鼠血清中ALT和AST水平的影响与对照组比较,肝损伤模型组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平均显著增加(P<0.05);而与模型组比较,五味子泽泻1∶1和1∶2给药组小鼠血清中ALT和AST水平均显著下降(P<0.05),提示五味子泽泻联合应用对酒精诱导的小鼠肝损伤具有一定的保护作用.见表2.2.3 五味子泽泻提取物对小鼠肝组织中GSH和TG的影响与空白对照组比较,肝损伤模型组小鼠肝组织中GSH水平明显降低(P<0.05),而TG含量显著升高(P<0.05),表明酒精诱导的急性肝损伤小鼠肝组织受到氧化应激损伤,抗氧化能力减弱,且有脂质代谢紊乱症状;与模型组比较,五味子泽泻1∶1和1∶2给药组小鼠肝组织中GSH含量明显升高(P<0.05),TG含量降低(P<0.05或P<0.01),提示小鼠肝脏的抗氧化能力提高,脂代谢紊乱症状得到改善.见表3.2.4 五味子泽泻提取物对小鼠肝组织病理形态学的影响光学显微镜结果表明:空白对照组小鼠的肝细胞大小正常,条索排列规则,细胞核大而圆,并位于中央,核质均匀分布,形态正常(见图1A).酒精性肝损伤模型组小鼠肝组织中肝索排列不规则,整个肝细胞胞质疏松化,表明小鼠急性酒精性肝损伤模型建立成功(见图1B).五味子泽泻各给药组小鼠肝细胞排列整齐,肝细胞胞质疏松化明显减弱,说明五味子泽泻合用对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用(见图1C~E).为探讨五味子多糖和泽泻提取物联合应用对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用,本实验采用50%乙醇一次性给药建立小鼠酒精性肝损伤模型,该造模方法和人们大量饮酒造成的肝损害具有相似性,是研究急性酒精性肝损伤发病机制和筛选护肝药物的理想模型[10-13].实验结果表明:酒精性肝损伤模型组小鼠血清中AST和ALT水平明显升高,肝组织中肝索排列不规则,细胞胞浆明显疏松化,说明小鼠酒精性肝损伤模型建立成功.本研究结果显示:五味子与泽泻联合应用可显著降低小鼠血清中AST和ALT水平,改善肝细胞病理形态学变化.酒精摄入后主要由消化道吸收,经肝脏代谢,在乙醇脱氢酶作用下生成乙醛,进而转化为乙酸,进入体循环[14].乙醇的大量脱氢氧化导致三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢,使TG在肝细胞内沉积,同时乙醇代谢产生的大量自由基导致肝细胞膜的脂质过氧化及GSH的耗竭[15-18].本实验中酒精性肝损伤模型组小鼠肝组织中GSH水平降低,TG水平显著升高,而五味子与泽泻联合给药后可显著增加肝组织的GSH水平,以对抗自由基脂质过氧化反应,维持细胞质膜的正常结构,保护肝细胞免受损伤,且使TG水平显著降低,从而改善了小鼠肝脏的脂肪代谢.综上所述,五味子多糖与泽泻提取物联合应用对酒精诱导的急性肝损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能与抗自由基脂质过氧化反应及改善肝脏脂质代谢有关,这些结果为五味子与泽泻的进一步开发利用提供了理论依据.【相关文献】[1] 王洪岩,李鑫,徐有青.酒精性肝病发病机制研究进展[J].实用肝病杂志,2014,17(1):5-8.[2] 曹丹,刘仲华,黄建安,等.不同时间给予大红袍水提物对小鼠急性酒精性肝损伤的影响[J].茶叶科学,2013,33(4):289-294.[3] 靳华.酒精性肝病的中医病因病机[J].中西医结合肝病杂志,2012,22(4):249-250.[4] 陈宝芝,李生,吴金滢,等.北五味子粗多糖对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制[J].吉林大学学报(医学版),2014,40(1):92-96.[5] 李生,李贺,高晓旭,等.北五味子粗多糖对酒精诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制研究[J].北华大学学报(自然科学版),2014,15(4):472-475.[6] 易醒,黄丹菲,肖小年,等.泽泻的研究现状与展望[J].时珍国医国药,2007,18(2):331-333.[7] 王立新,吴启南,张桥,等.泽泻中利尿活性物质的研究[J].华西药学杂志,2008,23(6):670-672.[8] 陈晓蕾,李红阳.泽泻生品及不同炮制品对小鼠急性肝损伤的保护作用[J].中药材,2006,29(6):592-593.[9] 孙卉,苑荣爽,李贺,等.五味子、黄芪混合多糖的提取及对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用[J].食品科学,2017,38(2):278-282.[10] 徐博,吴畏难,李传甲,等.萱草花总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用及机制探讨[J].中国实验方剂学杂志,2016,23(23):139-143.[11] 齐慧慧,宋佳,陈岳祥.小鼠急性酒精性肝损伤模型的建立[J].世界华人消化杂志,2012,20(9):759-763.[12] JAE-CHUL JUNG JC,LEE Y H,KIM S H,et al.Hepatoprotective effect of licorice,the root of Glycyrrhizauralensis,Fischer,in alcohol-induced fatty liver disease[J].Bmc Complementary and Alternative Medicine,2015,16(1):1-10.[13] 高姝娟,刘锡锰,高贵,等.谷胱甘肽的抗线粒体脂质过氧化作用[J].生物化学杂志,1997,13(3):287-290.[14] Koneru M,Sahu B D,Gudem S,et al.Polydatin alleviates alcohol-induced acute liver injury in mice:Relevance of matrix metalloproteinases (MMPs) and hepatic antioxidants[J] .Phytomedicine,2017,15(27):23-32.[15] Chen P,Miyamoto Y,Mazagova M,et al.Microbiota protects mice against acute alcohol-Induced liver injury[J].Alcohol Clin Exp Res,2015,39(12):2313-2323.[16] 方芳,王凤忠.醉酒与解酒的研究[J].农产品加工,2013(11):58-61.[17] 赵雪珂,穆茂,程明亮.酒精性肝病与氧化应激[J].临床肝胆病杂志,2014,30(2):118-120.[18] 王吉耀,涂传涛.酒精性肝病的发病机制[J].临床内科杂志,2004,21(2):73-74.。
分析检测富硒酵母姜黄素组合物对小鼠酒精性肝损伤的研究栾金玲1,3,朱娅敏2,陈智仙1,梁秋元2,程 倩1,3*(1.农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室,湖北宜昌 443003;2.宜昌市营养健康食品工程技术研究中心, 湖北宜昌 443003;3.酵母功能湖北省重点实验室,湖北宜昌 443003)摘 要:目的:观察姜黄素、富硒酵母和姜黄素联合富硒酵母组对酒精中毒小鼠的保护作用。
方法:将喂养的小鼠均匀分为空白组、模型组、姜黄素组、富硒酵母组和姜黄素联合富硒酵母组,连续灌胃30 d,观察小鼠肝损伤情况并检测甘油三酯(Triglyceride,TG)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)等指标。
结果:与模型组相比,姜黄素组及姜黄素联合富硒酵母组小鼠肝脏指数下降,且差异具有显著性;各剂量组小鼠肝脏MDA水平明显下降,急性酒精灌胃后,姜黄素组、富硒酵母组及姜黄素联合富硒酵母组小鼠的肝脏TG水平较模型组显著降低,具有显著性差异;各样品组小鼠肝脏病理得分有所下降,脂肪面积占比显著降低,具有显著性差异。
结论:姜黄素和富硒酵母对酒精导致的肝损伤具有协同作用,补充姜黄素和富硒酵母能通过对抗氧化应激和脂质过氧化损伤,有效地改善酒精导致的肝损伤。
关键词:富硒酵母;姜黄素;肝损伤;小鼠Study on the Effect of Selenium Enriched Yeast Curcumin Combination on Alcoholic Liver Injury in MiceLUAN Jinling1,3, ZHU Yamin2, CHEN Zhixian1, LIANG Qiuyuan2, CHENG Qian1,3*(1.National Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Yichang 443003, China;2.Yichang Engineering Technology Research Center of Nutrition and Health Food, Yichang 443003, China;3.Hubei Provincial Key Laboratory of Yeast Function, Yichang 443003, China)Abstract: Objective: To observe the protective effects of curcumin, selenium-rich yeast and curcumin combined with selenium-rich yeast compositions on mice with alcoholism. Method: The mice were evenly divided into blank group, model group, curcumin group, selenium-rich yeast group and curcumin combined with selenium-rich yeast group. After 30-day administration, the content of triglycerides (TG), malondialdehyde (MDA), glutathione (GSH) and other indexes were determined. Result: Compared with the model group, the liver index of mice in the curcumin group and the curcumin combined with selenium enriched yeast group decreased significantly, and the difference was significant; The MDA levels in the liver of mice in each dose group significantly decreased. After acute alcohol administration, the TG levels in the liver of mice in the curcumin group, selenium enriched yeast group, and curcumin combined with selenium enriched yeast group were significantly reduced compared to the model group, with significant differences; The liver pathological scores of each sample group of mice decreased, and the proportion of fat area significantly decreased, showing significant differences. Conclusion: Curcumin and selenium rich yeast have a synergistic effect on alcohol induced liver damage. Supplementing curcumin and selenium rich yeast can effectively improve alcohol induced liver damage by combating oxidative stress and lipid peroxidation damage.Keywords: selenium enriched yeast; curcumin; liver damage; mouth作者简介:栾金玲(1990—),女,湖北襄阳人,硕士,工程师。
葛根对大鼠酒精性肝损伤的干预作用冯琴;方志红;崔剑巍;王晓柠;胡义扬【期刊名称】《上海中医药杂志》【年(卷),期】2007(41)4【摘要】目的观察中药葛根水提液对大鼠慢性酒精性肝损伤的防治作用。
方法按Lieber-Decarli配方制备酒精液体饲料,以定量喂饲大鼠的方法,复制酒精性肝损伤模型。
32只雄性SD大鼠随机分为正常组、无酒精液体饲料组(对照组)、酒精液体饲料组(模型组)及酒精液体饲料+葛根组(葛根组)。
在造模第4周开始灌胃葛根水提液或蒸馏水。
8周末取材观察:①肝组织病理变化;②肝组织三酰甘油(TG)含量;③血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和肝组织γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性;④肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及血清铁(Fe2+)含量。
结果模型组大鼠肝组织脂肪变性和炎症浸润明显,血清ALT、AST活性和组织γ-GT活性、TG含量较对照组均显著增加;且肝组织MDA 含量、NOS活性及血清Fe2+含量均显著升高,而肝组织SOD显著降低。
葛根组的肝组织脂肪变性和炎症浸润均较模型组显著减轻,肝组织γ-GT活性和TG含量显著低于模型组;同时肝组织MDA含量、NOS活性显著低于模型组,而SOD活性显著高于模型组。
结论葛根水提液有显著的抗慢性酒精性肝损伤的作用。
【总页数】3页(P64-66)【关键词】葛根;肝损伤;酒精【作者】冯琴;方志红;崔剑巍;王晓柠;胡义扬【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院,上海中医药大学肝病研究所【正文语种】中文【中图分类】R575.1;R285.1【相关文献】1.针刺对加皮葛根饮抗大鼠酒精性肝损伤的协同作用 [J], 矫承媛;成泽东;陈明明;陈以国2.葛根对大鼠酒精性肝损伤的治疗作用 [J], 栾玉泉;徐立;赵媛;王成军;陈道邦3.葛根护肝片对慢性酒精性肝损伤大鼠保护作用研究 [J], 赵宏宇;王玉;刘新宇;宋莲莲;史顶聪;史保银;邸琳4.葛根保健饮料的研制及其对大鼠酒精性肝损伤的保护作用 [J], 祝冬青;黄亚东5.葛根素对大鼠亚急性酒精性肝损伤的保护作用及机制初探 [J], 赵岩因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
水飞蓟护肝胶囊增强免疫及对小鼠酒精性肝损伤的保护作用摘要:研究水飞蓟护肝胶囊增强免疫及对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。
结果显示高剂量组碳廓清吞噬指数(a)、中、高剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数及小鼠NK细胞活性明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。
酒精性肝损伤模型建立成功,试验后与模型对照组(0g/kg·BW)比较,各剂量组肝组织中丙二醛含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),中、高剂量组肝组织中GSH 含量显著升高(P<0.05)。
高剂量组肝组织中TG含量、肝组织中脂肪变性平均分显著降低(P<0.05)。
表明水飞蓟护肝胶囊有明显的增强免疫力作用, 同时具有对化学性肝损伤有辅助保护作用。
关键词:水飞蓟,灵芝,化学性肝损伤,免疫肝脏免疫系统包含了众多的固有天然免疫细胞,如巨噬细胞、NK细胞和NKT 细胞。
这些细胞群体大量聚集在肝脏中,表明它们在肝脏生物学中具有重要的地位,能够为机体提供抵抗外来抗原入侵的免疫监视及保护作用[1]。
水飞蓟护肝胶囊为水飞蓟提取物、葛根提取物、灵芝提取物、五味子提取物配伍使用,遵循中医理论,本文研究了其增强免疫及对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。
1仪器与试药紫外可见分光光度计(XTL-2400);冰冻切片机(LEICA CM510)、病理显微镜(DM4000B)、电子分析天平、半自动生化分析仪、酶标仪、二氧化碳培养箱、显微镜等。
全自动生化分析仪(TBA-120FR)等。
ICR 健康雄性小鼠,体重18~22 g。
水飞蓟护肝胶囊(自制,0.4g/粒,2.4g/日,葛根提取物:五味子提取物:灵芝提取物:水飞蓟提取物:辅料按照一定比例2:1:1:0.66:11.34混合后装胶囊制成)2方法2.1 剂量设计免疫试验分别为溶剂对照组、低、中、高剂量组,低、中、高剂量组,每组10只,按照人体推荐剂量的5,10,30倍设计,分别为0.2、0.4、1.2g/(kg·BW),动物灌胃按0.2ml/(10g·BW)体积给予,对照组给予等体积纯水。
葛花对大鼠酒精性肝损伤的预防作用研究苗彦妮;钟赣生【期刊名称】《科技导报》【年(卷),期】2008(26)15【摘要】通过每日予大鼠白酒灌胃方法复制大鼠酒精性肝损伤模型,观察中药葛花对大鼠酒精性肝损伤的预防作用。
110只雄性Wistar大鼠随机分为6组:空白组、模型组、葛花醇提物低剂量组、葛花醇提物中剂量组、葛花醇提物高剂量组和阳性对照药东宝甘泰片组。
在造模的同时灌胃葛花醇提物及东宝甘泰片水溶液。
连续灌胃8周,8周末取材观察:血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性,总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量;肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;肝组织病理变化。
结果显示,模型组大鼠出现肝组织脂肪变性和炎性浸润,血清ALT、AST、ALP活性较空白组显著增加,TP、ALB含量较空白组显著降低;且肝组织中SOD活性显著降低,MDA含量显著升高。
葛花醇提物组大鼠的肝组织脂肪变性和炎性浸润均较模型组有所减轻,血清ALT、AST活性较模型组显著降低,TP、ALB含量较模型组显著升高,肝组织SOD活性较模型组显著升高,MDA含量显著低于模型组,GSH含量较模型组也明显升高。
研究表明,葛花醇提物具有明显预防酒精性肝损伤的作用。
【总页数】6页(P60-65)【关键词】葛花;酒精性肝损伤;脂质过氧化【作者】苗彦妮;钟赣生【作者单位】北京中医药大学基础医学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R575.5【相关文献】1.葛花枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织超微结构影响的实验研究[J], 柳海艳;王茜;钟赣生;孙红梅;葛桂玲;许红;高誉珊;陈绍红;刘佳2.乌药提取物对大鼠急性酒精性肝损伤预防作用的抗氧化机制研究 [J], 陈伟民;王军伟;朱玮华3.复方甘草酸苷对大鼠酒精性肝损伤的预防作用研究 [J], 孟巍;王柏军;任世成4.葛花对酒精性肝损伤保护作用的研究 [J], 雷红伟;杨伟峰5.加减葛花解酲汤对大鼠酒精性肝损伤的防治作用 [J], 罗眈;易自刚;杨力强因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
4人参研究GINSENG RESEARCH 2019年第4期DOI :10.19403/ki.1671-1521.2019.04.001五味子灵芝片对酒精所致大鼠实验性肝损伤的影响白红光1,岳云燕2,董守光1,于晓风2,王鹏1,睢大筼2*(1.吉林省红五味生物技术有限公司,长春134200;2.吉林大学药学院,长春130021)摘要:目的观察五味子灵芝片对酒精所致大鼠实验性肝损伤的保护作用。
方法50只大鼠随机分为正常组,模型组,五味子灵芝片0.25、0.5、1.0g/kg 组。
除正常组给蒸馏水外,其余各组均以56%白酒连续灌胃8周,建立大鼠实验性肝损伤模型,造模同时灌胃给予五味子灵芝片。
8周后各组大鼠水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,检测血清总胆固醇(TC )、甘油三脂(TG )、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c )、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c )、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量及天门冬氨酸氨基转移酶(AST )和丙氨酸氨基转移酶(ALT )活性。
取血后摘取肝脏,电子天平称肝湿重,计算肝脏指数。
结果与正常组比较,模型组大鼠体质量明显降低,肝脏指数增加,血清TC 、TG 、LDL-c 、TNF-α和IL-6含量及AST 、ALT 活性均明显升高,HDL-c 含量明显降低(P <0.05或P <0.01)。
与模型组比较,五味子灵芝片0.5、1.0g/kg 组均能明显增加大鼠体质量,降低肝脏指数,降低血清TC 、TG 、LDL-c 、TNF-α和IL-6含量及AST 、ALT 活性,升高HDL-c 含量(P <0.05或P <0.01)。
结论五味子灵芝片对酒精所致大鼠实验性肝损伤具有保护作用,可能通过调节脂质代谢紊乱及对抗炎症损伤实现的。
关键词:五味子灵芝片;酒精性肝损伤;脂质代谢;大鼠基金项目:吉林省省级医药健康产业发展专项资金项目,项目编号:20180311032YY 。
葛根素对急性酒精性肝损伤的预防作用季红;郭鑫;尹鹏【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2016(22)15【摘要】目的:观察葛根素对急性酒精肝损伤的预防作用。
方法将32只SD大鼠按随机数字表法分为4组(空白组、模型组、葛根素高剂量组、葛根素低剂量组),每组8只。
葛根素高剂量组给予葛根素0.8 g/kg,葛根素低剂量组给予葛根素0.4 g/kg,连续给药30 d,空白组及模型组给用同等计量的蒸馏水。
解剖前,模型组及葛根素高、低剂量组按14 mL/kg体积(56°白酒)经口灌胃,建立急性酒精肝损伤模型;造模后禁食16 h,处死,检测血清中三酰甘油(TG)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶( AST)水平变化,观察肝脏病理学组织变化。
结果模型组大鼠血清中 TG、ALT、AST均高于空白组( P <0.05),葛根素低剂量组、葛根素高剂量组大鼠血清中 TG、ALT、AST 均低于模型组(P<0.05),且与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
空白组、模型对照组、葛根素高剂量组、葛根素低剂量组的肝质量/体质量分别为0.0332±0.0011、0.0390±0.0051、0.0348±0.0024、0.0338±0.0019,其中模型对照组高于空白组、葛根素高剂量组、葛根素低剂量组(P<0.05),葛根素高剂量组、葛根素低剂量组与空白组比较差异无统计学意义( P>0.05)。
结论葛根素可以预防大鼠急性酒精性肝损伤,对肝脏具有保护作用。
%Objective To observe the preventive effect of puerarin on acute alcoholic liver injury . Methods Total of 32 SD rats were divided into4 groups according to the random number table method (blank controlgroup,model group,puerarin high dose group,puerarin low dose group),8 rats/group.The puerarin high dose group was given 0.8 g/kg puerarin,the puerarin low dose group was given 0.4 g/kg puer-arin,the blank group and model group were given the same measurement of distilledwater,continuously for 30 d.Before dissection,the model group and puerarin high and low dose group were given 14 mL/kg volume (56 degrees liquor) by oral gavage,to establish acute alcoholic liver injury model;after making the model, 16 h fasting was done,and all groups were killed,and the serum triglyceride(TG),alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase(AST) content changes,liver tissue pathology changes were observed. Results The serum TG,ALT,AST of the model group were higher than the control group(P<0.05),and TG,ALT,AST of the puerarin low-dose group, puerarin high dose group were lower than the model group (P<0.05),and had no statistically significant differences from the control group(P >0.05).The liver weight/body weight of the control group,model group,puerarin high dose group,puerarin low dose group were 0.033 2 ±0.001 1,0.039 0 ±0.005 1,0.034 8 ±0.002 4,0.033 8±0.001 9 re spectively,the model group higher than the blank control group,puerarin high dose group,and puerarin low dosegroup(P<0.05),while the differences between the puerarin high dose group,puerarin low dose group and the control group were not statistically significant(P>0.05).Conclusion Puerarin can prevent acute alcoholic liver injury in rats, presenting a protective effect on the liver.【总页数】3页(P3048-3049,3055)【作者】季红;郭鑫;尹鹏【作者单位】吉林大学中日联谊医院药品管理部,长春130033;吉林大学中日联谊医院药品管理部,长春130033;吉林大学中日联谊医院药品管理部,长春130033【正文语种】中文【中图分类】R961.1【相关文献】1.黄芪预防小鼠急性酒精性肝损伤的作用机制研究 [J], 舒慧;魏蕾;2.黄芪预防小鼠急性酒精性肝损伤的作用机制研究 [J], 舒慧;魏蕾3.乌药提取物对大鼠急性酒精性肝损伤预防作用的抗氧化机制研究 [J], 陈伟民;王军伟;朱玮华4.葛根素联合美他多辛对急性酒精性肝损伤的保护作用研究 [J], 王书庆;刘烨;徐思;张溢峰;蒋琪燕;向光盛5.葛根素对大鼠亚急性酒精性肝损伤的保护作用及机制初探 [J], 赵岩因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
五味子灵芝片对酒精所致大鼠实验性肝损伤的影响白红光;岳云燕;董守光;于晓风;王鹏;睢大筼【摘要】目的观察五味子灵芝片对酒精所致大鼠实验性肝损伤的保护作用.方法50只大鼠随机分为正常组,模型组,五味子灵芝片0.25、0.5、1.0 g/kg组.除正常组给蒸馏水外,其余各组均以56%白酒连续灌胃8周,建立大鼠实验性肝损伤模型,造模同时灌胃给予五味子灵芝片.8周后各组大鼠水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性.取血后摘取肝脏,电子天平称肝湿重,计算肝脏指数.结果与正常组比较,模型组大鼠体质量明显降低,肝脏指数增加,血清TC、TG、LDL-c、TNF-α和IL-6含量及AST、ALT活性均明显升高,HDL-c含量明显降低(P<0.05或P<0.01).与模型组比较,五味子灵芝片0.5、1.0 g/kg组均能明显增加大鼠体质量,降低肝脏指数,降低血清TC、TG、LDL-c、TNF-α和IL-6含量及AST、ALT活性,升高HDL-c含量(P<0.05或P<0.01).结论五味子灵芝片对酒精所致大鼠实验性肝损伤具有保护作用,可能通过调节脂质代谢紊乱及对抗炎症损伤实现的.【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2019(031)004【总页数】3页(P2-4)【关键词】五味子灵芝片;酒精性肝损伤;脂质代谢;大鼠【作者】白红光;岳云燕;董守光;于晓风;王鹏;睢大筼【作者单位】吉林省红五味生物技术有限公司,长春134200;吉林大学药学院,长春130021;吉林省红五味生物技术有限公司,长春134200;吉林大学药学院,长春130021;吉林省红五味生物技术有限公司,长春134200;吉林大学药学院,长春130021【正文语种】中文五味子首载于《神农本草经》,列为上品,为木兰科北五味子属植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill.的果实,习称北五味子,是我省长白山道地中药材,具有收敛固涩,益气生津,补肾宁心之功效。
纳豆激酶对大鼠酒精性肝损伤的干预作用及机制的研究黄思敏 1 顾越 1 王振军 2 隋宏书 3*发布时间:2023-06-09T07:26:12.487Z 来源:《医师在线》2023年5期作者:黄思敏 1 顾越 1 王振军 2 隋宏书 3*[导读] 目的研究纳豆激酶对大鼠酒精性肝损伤的干预保护作用及其机制。
1.山东第一医科大学口腔医学院,济南,2500002.山东第一医科大学临床与基础医学院病理学与法医学系济南 2500003.山东第一医科大学临床与基础医学院组织学与胚胎学系济南 250000摘要:目的研究纳豆激酶对大鼠酒精性肝损伤的干预保护作用及其机制。
方法适应性饲养一周体重大致相同的雄性SD大鼠一周后,将其随机分成三组:对照组(A组)、模型组(酒精肝)(B组)、纳豆激酶组(C组),每组20只。
A组每日给予生理盐水灌胃,同时B组、C组每日给予56度红星二锅头灌胃,由于一次性灌入过大剂量酒精易导致大鼠死亡,故酒精灌入量应逐渐增加,剂量依次为5ml/(kg•bw•d)1周,8ml/(kg•bw•d)1周,随后每周10ml/(kg•bw•d)持续五周,期间C组给予纳豆激酶每天500FU/(kg•bw•d),A组、B组给予生理盐水,剂量与纳豆激酶相同,每天观察大鼠活动状态,测量大鼠体重。
最后一次灌胃给药后,禁食12h,测量大鼠体重和肝脏湿重,处死3组小鼠,采集腹主动脉血液检测ALT、AST水平,计算肝脏指数,HE染色法观察大鼠肝脏变化,进行数据统计与分析。
结论纳豆激酶可以防治大鼠酒精性肝损伤,保护肝脏。
关键词:酒精性肝损伤;纳豆激酶;大鼠1. 前言长期大量的进行饮酒会导致的肝脏损伤疾病,其中酒精性肝损伤(alcoholic liver disease,ALD)就是主要疾病之一,随着社会发展、酒桌文化的出现、人们饮食不规律等影响,酒精性肝病发病率逐年升高[1],饮酒导致的肝脏相关疾病正逐渐成为导致肝脏疾病的第二大病因,是威胁人民生活的常见病[2]。
白凤菜醇提物对斑马鱼酒精性脂肪肝损伤的修复陈灿滨;陈志亮;薛钰;张文娟;李秀敏;潘裕添【摘要】以斑马鱼为实验材料 ,研究白凤菜醇提物对斑马鱼酒精性脂肪肝损伤的修复作用 .实验结果表明 ,白凤菜醇提物对斑马鱼慢性酒精性脂肪肝具有防治作用 .白凤菜醇提物能抑制成鱼酒精肝损伤血清中ALT和AST 的升高 ,抑制肝组织中MDA 的升高 ,提高肝组织中SOD活性水平 ;能够有效减轻肝脏的炎性病理 ;能够升高斑马鱼幼鱼组织匀浆液中的 AST 和 ALT 含量 ,抑制肝组织中MDA的升高 ,提高肝组织中SOD活性水平 ,幼鱼整体肝脏脂肪明显减少 .【期刊名称】《牡丹江师范学院学报(自然科学版)》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】4页(P53-56)【关键词】斑马鱼;白凤菜;酒精肝;脂代谢;胆固醇【作者】陈灿滨;陈志亮;薛钰;张文娟;李秀敏;潘裕添【作者单位】闽南师范大学菌物产业工程技术中心 ,福建漳州 363000;漳州片仔癀药业股份有限公司 ,福建漳州 363000;闽南师范大学菌物产业工程技术中心 ,福建漳州 363000;闽南师范大学菌物产业工程技术中心 ,福建漳州 363000;闽南师范大学菌物产业工程技术中心 ,福建漳州 363000;闽南师范大学菌物产业工程技术中心 ,福建漳州 363000【正文语种】中文【中图分类】Q593酒精性肝病是世界范围内关注的健康问题,其确切的发病机制尚不清楚,为了进一步研究酒精性脂肪肝预防和发病机制,理想的实验动物模型是非常重要的.[1]酒精饲养是传统酒精性脂肪肝造模的常规方法,原理是通过长时间饮酒引起肝脏损伤导致机体产生过量代谢产物或者乙醛,从而释放肾上腺素导致体内血压升高,肝细胞缺氧,造成肝细胞空泡变性,严重者甚至坏死.[2-3]本研究实验动物采用斑马鱼,其基因与人类70%蛋白质编码基因相关,87%的基因与已知人类疾病有关的基因组相对应[4],遗传发育和生理与哺乳动物相似,酒精可以简单地添加到饲养的鱼水,在一定程度上模拟人饮用酒精的状态,实验花费时间少,费用低.白凤菜DC.),又名白子菜、白背三七,为菊科菊三七属多年生草本植物,分布于台湾省至华南、西南一带,喜生于潮湿的阴地上.白凤菜的根、茎、叶均可入药,主入肝、肺、肾、大小肠诸经,有消炎、解热、解毒、利尿、降血压等功效,主治肝炎、肝硬化、肺炎、肺癌、高血压、感冒、发烧、肾脏炎等疾病.[5-6]本研究通过酒精处理建立斑马鱼成鱼、幼鱼酒精性脂肪肝模型,研究白凤菜醇提物对酒精引起的斑马鱼肝损伤的保护作用.1.1 实验药物将白凤菜晒干,置于电热鼓风干燥箱内60℃烘干,粉碎,过50目筛,密封备用.取一定量的白凤菜粉末,用70%乙醇提取3次,每次2h.合并提取液,抽滤掉白凤菜渣滓,滤液旋转蒸发浓缩至适宜体积,浓缩后乙醇溶剂粗提物用离心浓缩仪离心浓缩至粉末,恒温箱挥发多余的乙醇,备用.[7]1.2 实验动物4-5月龄的野生型成年斑马鱼.28±1℃恒温环境中,光照14h明-10h暗,每日三餐定时喂食新鲜丰年虫,饲养一个星期,待用.斑马鱼幼鱼来自野生型TU品系斑马鱼,前一晚取卵.将野生型TU品系斑马鱼喂饱后放入交配缸中,雌雄鱼分开,中间插入隔板,次日清晨拨开挡板收集胚胎.胚胎培养于28℃恒温培养箱中培养至96hpf.恒温培养箱要及时换水,剔除死卵.1.3 实验试剂与实验仪器水乙醇、丙二醇、苏木精、伊红染液;ALT,AST,TC,TG,SOD,MDA生化试剂盒;Nikon SMZ18体视显微镜,TECANinfiniteM200PRO酶标仪,LeicaTP1020脱水机,LeicaEG1150H包埋机,SLEE包埋机.1.4 实验斑马鱼成鱼、幼鱼均分为5组:正常组、模型组、白凤菜醇提物低剂量组、白凤菜醇提物中剂量组和白凤菜醇提物高剂量组.成鱼鱼缸中酒精浓度1.0%,鱼水每日一换,连续四周.对照组以常规鱼水饲养.实验组自造模之日起,分别加入白凤菜醇提物低、中、高浓度的药物于鱼水中.幼鱼鱼缸中酒精浓度2.0%,饲养32h.自造模之日起,分别加入白凤菜醇提物低、中、高浓度的药物于鱼水中.检验项目成鱼体重、肝重、肝脏指数;斑马鱼血清肝功能检测ALT活性、AST活性、TC活性、TG活性、SOD活性、MDA活性.成鱼肝脏HE染色将固定的组织样脱水,用石蜡进行包埋,切片,厚度为4μm,漂片后70℃烘片30min,苏木素-伊红(HE)染色,中性树胶封片,OlympusBX40显微镜进行观察.幼鱼肝脏大小及卵黄吸收显微镜拍照及统计随机挑选斑马鱼幼鱼,使用低浓度tricane麻醉,在NikonSM18体视显微镜拍照统计,按照斑马鱼的表形分为正常、一般严重、严重三个组别进行归类.白凤菜醇提物对斑马鱼幼鱼整体油红染色脂肪含量的影响将随机选取的斑马鱼幼鱼放在培养皿中,多聚甲醛固定2~4h,PBS洗3~4次,丙二醇低浓度到高浓度梯度脱水,0.5%油红避光孵育,摇晃过夜.丙二醇高浓度到低浓度复水,洗净背景,80%甘油4℃永久保存.NikonSM18体视显微镜拍照统计.[8]斑马鱼幼鱼谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量测定斑马鱼幼鱼发育至96 hpf,挑选发育正常的斑马鱼幼鱼,移入6孔板的样孔中,每个培养孔中放入50条斑马鱼幼鱼,设置对照组和模型组以及白凤菜醇提物低、中、高共五组.样孔中加入新配好的酒精溶液,对照组为胚胎培养用水.每个组别设3个重复.待实验结束后,测定ALT,AST,SOD活力和MDA含量.[9]生物化学与分子生物学指标96hpf斑马鱼幼鱼实验处理32h,用试剂盒(Qiagen)提取总RNA.取等量浓度的RNA反转录合成cDNA,半定量RT-PCR反应.引物及PCR循环数见表1.取等量的反应产物电泳跑胶,以actin作内参,拍照,使用NIH的ImageJ软件对凝胶图像进行电泳条带信号强度分析,计算出各个基因的相对表达率.[10]统计学处理所有数据均以平均数±标准差)表示,用SPSS10.0软件处理,采用单因素方差分析法,<0.05表示差异具有显著性水平,<0.01表示差异为极显著性水平.2.1 白凤菜醇提物对斑马鱼成鱼体重、肝重和肝指数的影响酒精肝模型斑马鱼体重下降,肝脏重量升高,肝指数显著升高(P<0.05);与模型组比较,不同浓度白凤菜醇提物组肝重下降,体重和肝指数都升高,结果见表2.2.2 白凤菜醇提物对酒精性脂肪肝斑马鱼血清功能的影响模型斑马鱼血清ALT、AST活性、TG水平均显著升高,TC水平无明显变化;与模型组对比,白凤菜醇提物各组别血清ALT、AST活性,TC、TG水平均有下降趋势,见表3.由表4可以看出,与正常组相比,斑马鱼SOD含量降低,MDA含量升高;与模型组对比,白凤菜醇提物各组别SOD含量呈升高趋势,MDA水平呈下降趋势.2.3 白凤菜醇提物对斑马鱼酒精肝炎性病理变化的影响正常组肝细胞排列整齐,细胞分界清,核圆,位于细胞中央,胞质丰富;模型组肝小叶结构破坏,肝板排列紊乱,肝细胞肿胀明显,呈气球样变性,大泡性脂肪变性,小叶炎性浸润.白凤菜醇提物组肝组织炎性及变性坏死明显改善,见图1.2.4 白凤菜醇提物对斑马鱼幼鱼肝脏大小及卵黄囊吸收的影响模型组斑马鱼幼鱼经过2.0%的酒精处理32h后,体形出现畸形,主要表现在脊柱弯曲,心包水肿,卵黄囊水肿以及鱼鳔畸形等.体视显微镜放大倍数拍照观察到斑马鱼幼鱼肝脏出现肿大,正常对照组的斑马鱼幼鱼肝脏呈月牙形,酒精处理组的斑马鱼幼鱼肝脏呈现圆形,同时伴随卵黄囊吸收变慢的情况,这与肝脏功能变差密切相关,按照表形严重程度分成正常、一般严重、严重三种情况,对各组进行分类统计.可以观察到白凤菜醇提物能够明显改善上述情况,见图2.2.5 白凤菜醇提物对斑马鱼幼鱼脂肪含量的影响模型组斑马鱼幼鱼肝脏组织发生脂肪变性后,肝脏变大,肝脏染色明显加深,按照染色深浅程度分成正常、一般严重、严重三种情况对各组进行分类统计.可以观察到白凤菜能够明显缓解斑马鱼幼鱼对酒精吸收形成的脂肪沉积,见图3.2.6 斑马鱼幼鱼谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量测定模型组斑马鱼幼鱼较对照组ALT,AST,SOD活性出现显著性下降(<0.01),MDA出现了显著性上升(<0.01),白凤菜醇提物能够使酒精肝斑马鱼ALT,AST,SOD活性呈上升趋势,MDA水平呈下降趋势(<0.05).2.7 白凤菜醇提物对酒精肝斑马鱼脂肪、胆固醇代谢相关基因表达的影响模型组斑马鱼幼鱼能够使脂肪代谢ACC1,Fads,Fasn以及胆固醇代谢基因Hmgcra, Hmgcrb,Hmgcrs相关基因表达上调,使酒精肝斑马鱼脂肪代谢以及胆固醇代谢相关基因呈下调趋势.见图4.实验采用酒精诱导斑马鱼成鱼和斑马鱼幼鱼酒精性脂肪肝模型,以白凤菜醇提物作为治疗用药,观察白凤菜对酒精肝的治疗作用.斑马鱼成鱼实验结果表明,白凤菜能降低脂肪肝斑马鱼血清ALT,AST和MDA的活性,升高SOD水平,改善肝脏脂肪变性从而减轻肝脏炎症程度;斑马鱼幼鱼实验表明,白凤菜能够有效改善酒精肝斑马鱼的脂肪堆积,提高酒精肝幼鱼整体匀浆的ALT,AST和SOD的活性,降低MDA含量;分子生物学相关基因表达表明,白凤菜醇提物能够有效的抑制脂肪、胆固醇基因的表达,证实白凤菜具有良好的治疗酒精肝疾病的作用,为该药的临床应用和进一步研发提供药理学基础,也为进一步对酒精性脂肪肝防治和发病机制的研究奠定实验基础.【相关文献】[1]O′Shea R S,Dasarathy S,Mccullough A J.Alcoholic liver disease[J].Hepatology,2010,51(1):307-328.[2]Lieber C S.Alcoholic fatty liver:its pathogenesis and mechanism of progression to inflammation and fibrosis[J].Alcohol,2004,34 (1):9-19.[3]Miller Andrew M,Horiguchi Norio,Jeong Won-IL,etal.Molecular Mechanisms of Alcoholic Liver Disease:Innate Immunityand Cytokines[J].AlcoholismClinical&Experimental Research,2011,35(5):787-793.[4]EisenJS.Zebrafishmakeabigsplash.[J].Cell,1996,87(6):969-977.[5]王跃兵,李春刚.叶菜新秀——白凤菜[J].农村百事通,2010(14):31-31.[6]冯冬林,刘美琴.白凤菜总黄酮提取工艺研究[J].福建农业科技,2013(11):70-72.[7]刘美多,王晓翠.从竹叶中提取茶多酚的实验研究[J].牡丹江师范学院学报:自然科学版,2008(3):27-28.[8]戴文聪,刘莉,王坤元,等.急性酒精性脂肪肝斑马鱼模型的建立[J].临床肝胆病杂志,2013,29:286-289.[9]Lieber C S.Alcoholic fattyliver:its pathogenesis and mechanism of progression to inflammation and fibrosis[J].Alcohol,2004,34 (1):9-19.[10]王詝.脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建[J].牡丹江师范学院学报:自然科学版,2009(4):23-25.。
探索性医学综合实验—教学改革与实践(第五期) 44 酒后饮绿茶对小鼠肾功能影响的实验性研究
李佳 陈路军 陈洁 徐立思 齐慧娟 陆妙君 指导老师:黄品贤 (上海中医药大学03中西(七)上海201203)
[摘要]目的 观察给最佳酒醉状态的小白鼠灌茶对肾功能的影响。方法 检测给小白鼠0.15ml/10g白酒后20min灌入低、中、高浓度茶、解酒阳性对照药枳椇子各0.20ml/10g,连续7天后血肌酐、血尿素蛋及尿蛋白含量。结果 ⒈高中浓度茶组、模型组的尿蛋白与正常组相比有显著差异,P<0.05。⒉各组生存曲线比较的Log-rank检验结果:χ2=20.39, P<0.01。⒊肾脏病理改变:低浓度茶组小鼠肾小球、肾小管未见明显病变,但间质血管扩张充血明显,有较多量红细胞漏出,可见炎症反应,间质未见纤维化;中浓度茶组肾组织结构完整,肾小球、肾小管未见明显病理变化,间质未见明显充血,少量红细胞漏出,间质未见纤维化;高浓度茶组肾脏组织结构与中浓度茶组接近。阳性对照组肾组织结构基本完整,肾小球、肾小管未见明显病理变化,间质少量充血。结论 根据尿蛋白、实验小鼠的生存曲线分析、肾脏的病理结果的一致性得出:⒈酒后饮茶均可导致小鼠的死亡,但是酒后高浓茶对肾脏的损害作用最小。⒉酒后饮淡茶及阳性解酒药枳椇子能起到一定解酒作用,但对肾脏有明显的损害。但本次实验由于死亡率高致样本含量不够,确切的结论有待继续研究。
[关键词] 酒,茶,小白鼠,肾功能,病理学
在中国,茶能解酒是自古以来就流传的说法。日常生活中,人们通常用绿茶来帮助消食解酒,且认为茶越浓解酒效果越好。人们认为,饮茶能够使人大脑兴奋、清醒,酒后饮茶能够让被酒精冲昏了的头脑清醒一些,从而达到“醒酒”的效果。 但近年来,有越来越多的报道指出:过量饮酒后饮茶对肾脏有害无益。其理论依据为:绿茶的主要成分茶碱有利尿作用,浓茶中的大量茶碱更能迅速发挥利尿作用,促使尚未分解的酒精代谢产物——乙醛过早地进入肾脏,而乙醛对泌尿系统有很大的损害作用。 本实验采用56度白酒以最佳致醉量对小鼠灌胃后,用等量不同浓度的绿茶及阳性对照药物枳椇子对醉酒小鼠进行灌胃的方法,通过检测鼠尿中的尿蛋白、血样中血肌酐、尿素氮指标及对肾脏组织病理切片的观察,对以上两种观点的正确性作出验证。 现将实验研究结果报告如下。
1 材料与方法 1.1实验动物:昆明种小鼠120只,体重:20-35g,雌雄各半,由上海中医药大学动物实验中心提供。动物房饲养温度:20-23℃,相对湿度:50-70%,标准饮食,饮自来水。
1.2实验仪器和试剂及其制备: 1.2.1实验仪器:针筒灌胃针、天平、试剂瓶、代谢笼、离心机、气象色谱仪、生化分析探索性医学综合实验—教学改革与实践(第五期) 45 仪等。 1.2.2 实验试剂及其制备: 1.2.2.1 56度红星二锅头:北京红星酿酒总厂生产。 1.2.2.2 绿茶:黄山毛峰(一级,散装)。绿茶制备:低浓度茶:10g 绿茶加入100度蒸馏水1000ml,浸泡30分钟,用两层纱布过滤;中浓度茶:25g绿茶加入100度蒸馏水1000ml,浸泡30分钟,用两层纱布过滤;高浓度茶:40g绿茶加入100度蒸馏水1000ml,浸泡30分钟,用两层纱布过滤。 1.2.2.3 枳椇子:由张江孙桥饮片厂提供。枳椇子水煎剂制备:枳椇子25g,加200ml水煎煮1.5小时,纱布过滤,滤渣加200ml水煎煮1小时,过滤,两次滤液合并。提取液含生药62.5mg/ml。[1-4] 1.2.2.4 尿蛋白测定试剂盒(考马斯亮蓝法);尿素氮试剂盒-BUN(OPA法);肌酐试剂盒-CRE(苦味酸不除蛋白法)。
1.3实验方法: 1.3.1 预实验:以0.25ml/20g,0.30ml/20g,0.35ml/20g 56度红星二锅头分别对三组小鼠进行灌胃,每组5只。观察令小鼠出现翻正反射消失而无小鼠死亡的所需酒量。找出最佳致醉量为0.30ml/20g。[5-6] 1.3.2 动物分组:称重后,按体重将105只小鼠随机分为6组,空白对照组、模型组、枳椇子组,每组17只;低浓度茶、中浓度茶、高浓度茶组,每组各18只。每日11点开始灌胃,连续7天。 1.3.3 给药量见下表1。
表1 酒后饮绿茶给药量方法 组 别 第一次灌(0.15ml/10g) 20min后再灌 空白组 0.9%生理盐水 0.9%生理盐水0.2ml/10g 造模组 白酒 0.9%生理盐水0.2ml/10g 枳 椇 子组 白酒 枳椇子水煎剂0.2ml/10g 高浓度茶组 白酒 高浓度茶0.2ml/10g 中浓度茶组 白酒 中浓度茶0.2ml/10g 低浓度茶组 白酒 低浓度茶0.2ml/10g 注:每日灌白酒的量相当于成人每天饮用三两酒的量。
1.4生化检测及病理检查 第8天以小鼠代谢笼法搜集尿样,并断头取血,取肾脏。样品由上海中医药大学附属曙光医院检验科检测生化指标:尿蛋白、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);由曙光医院病理实验室制作病理切片。
1.5统计方法: 计量资料以均数±标准差表示;计数资料用百分率表示。资料经正态性检验和方差齐性检验后,再进行方差分析和LSD检验;以及采用Log-rank检验,用SPSS12.0统计软件探索性医学综合实验—教学改革与实践(第五期) 46 处理。 2 结果 2.1.各组小鼠实验中的死亡情況和各组生存曲线比较的Log-rank检验。见表2。 表2 各组小鼠实验中的死亡情況 组 别 实验前 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天 死亡率(%) 正 常 组 17 0 0 1 1 0 0 0 11.7
模 型 组 17 3 1 0 1 0 0 1 35.3 阳性对照组 17 4 2 3 1 0 1 1 70.5 高浓度茶组 18 6 1 1 0 0 2 3 72.2 中浓度茶组 18 7 2 2 0 2 0 0 72.2 低浓度茶组 18 3 4 2 1 1 1 1 72.2 合 计 105 23 10 9 4 3 4 6 56.2 注:各组间有显著差异: P<0.05.
表3 各组生存曲线比较的Log-rank检验结果 组 别 n 平均生存时间(天) 95%可信区间 生存率(%) 正 常 组 17 6.59 6.05~7.13 88.24
图1 各组动物的死亡率比较11.735.370.572.272.272.201020304050607080
正常组模型组枳椇子组高浓度茶组中浓度茶组低浓度茶组死亡率(%)探索性医学综合实验—教学改革与实践(第五期)
47 模 型 组 17 5.47 4.19~6.75 64.71 阳性对照组 17 4.22 3.01~5.43 33.33 高浓度茶组 18 4.39 3.07~5.71 27.78 中浓度茶组 18 3.44 2.22~4.61 27.78 低浓度茶组 18 4.11 2.96~5.27 27.78 合 计 105 44.34 Log-rank检验结果:χ2=20.39,df=5,P=0.0011。
图2 各组动物生存曲线的比较 2.2 各组小鼠尿液中尿蛋白含量比较 见表4。 表4 各组小鼠尿液中尿蛋白含量比较(μmol/l) 组 别 n 尿蛋白 正 常 组 5 1.32±0.51# 模 型 组 5 0.73±0.17* 枳 椇 子组 5 1.01±0.39 高浓度茶组 5 0.72±0.27* 中浓度茶组 5 0.640±.13* 低浓度茶组 5 1.320±.65# 合 计 30 0.950±.39 注:*表示与正常组比较p<0.05;#表示与模型组比较p<0.05
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正 常 組 模 型 组 枳椇子组 高浓度茶组 中浓度茶组 低浓度茶组 探索性医学综合实验—教学改革与实践(第五期)
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2.3各组小鼠血肌酐(Cr)含量比较 见表5 表5 各组血肌酐的比较(umol/L) 组 别 n Cr 正 常 组 4 34.2527.96 模 型 组 2 17.50±0.71 枳 椇 子组 0 0.00±0.00 高浓度茶组 4 27.751±2.84 中浓度茶组 0 0.00±0.00 低浓度茶组 2 20.50±0.71 合 计 12 27.001±7.37 注:n为0,说明该组小鼠血肌酐值不在测定范围,没有测出来。 根据专业知识得到血肌酐应该是服从正态分布的资料,但是,本次试验有的组别因未能测到血肌酐,同时,各组样本量比较少,而且个体差异也比较大,经方差分析得出各组间无显著差异。仅作参考。 2.4 肾脏病理切片结果:
正常小鼠肾组织(10×10) 低倍镜下肾组织结构完整,肾小球、肾小管未见异常,间质血管可见 正常小鼠肾组织(10×40)
高倍镜下肾小球、肾小管结构基本正常,间质未见炎性充血
低浓度茶组小鼠肾组织图(10×10) 低倍镜下肾小球、肾小管未见明显病变、但
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