常见大鼠心肌梗塞模型建立方法对比
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心肌梗死动物模型具体方法及步骤原型物种人来源结扎冠状动脉左前降支(LAD)导致心梗模式动物品系SPF级SD大鼠,健康,3-4W,雌雄各半,体重为180g-200g。
实验分组实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期72h建模方法心肌梗死是指心肌的缺血性坏死,是一种急性及严重的心脏状态。
心脏作为血液循环动力中心这一功能的实现,需要冠状动脉不断提供的血流供应,当冠状动脉发生病变而狭窄或堵塞,使得冠状动脉的血流急剧减少或中断,便会使相应的心肌出现严重而持久地急性缺血,心肌无法得到足够氧气,最终导致心肌不可逆的缺血性坏死,心脏的收缩和舒张功能降低,机体供血不足,严重者最终导致机体死亡。
1. 大鼠用3%戊巴比妥钠(30mg/kg),腹腔注射麻醉,用小动物剃毛器剃除大鼠胸部及腋下毛发(充分暴露手术区),用碘酒和75%乙醇术区消毒。
2.气管插管:麻醉后,夹趾检测无反应即可进行MI手术。
打开外置光源、显微镜开关,打开呼吸机,设置好各参数(呼吸比2:1,潮气量6-8 mL,频率70 次/min),将气管插管沿声门插入气管,取下大鼠接上呼吸机,观察大鼠呼吸状况,胸廓起伏与呼吸机频率一致表示插管成功,即可进行MI手术。
3. 大鼠采用右侧卧位,用眼科剪在左前肢腋下,用显微剪于三、四肋间打开胸腔充分暴露心脏,显微直镊轻轻夹起少量心包并于左心耳下撕开少许心包,充分暴露左冠状动脉前降支(LAD)或所在区域。
4. 结扎冠状动脉:于显微镜下找到LAD走向或可能所在位置,持针器持取5-0带针缝合线,于左心耳根部下方肺动脉圆锥旁以5-0 无创缝合线穿过左冠状动脉前降支( LAD),以完全阻断LAD血流。
5.关胸:结扎完成后,5-0缝线完全缝合胸腔开口(保证无缝隙、无错位)关闭胸腔,由内向外逐层缝合各层肌肉和皮肤。
6.术后管理:术后密切关注大鼠状态,有无呼吸异常等。
待大鼠自然苏醒后将大鼠从呼吸机上取下并取下气管插管,正常饲养。
心肌梗死的动物模型制作心肌梗死是一种严重的心血管疾病,其主要病理特征是冠状动脉的阻塞导致心肌缺血与坏死。
为了研究心肌梗死的发病机制和寻找可能的治疗方法,研究人员常常利用动物模型来模拟心肌梗死的发生。
下面,我将介绍一种常用的大鼠心肌梗死动物模型制作方法。
制作大鼠心肌梗死动物模型可以按照以下步骤进行:1.动物选择。
常用的实验动物有大鼠和猪。
由于大鼠的心血管解剖和生理特征与人类较为接近,同时成本较低,因此大鼠是一种常见的选择。
2.麻醉动物。
使用适量的麻醉剂,如异氟醚或七氟醚等,来使动物处于麻醉状态。
确保动物处于无痛苦的状态。
3.固定动物。
将动物固定在手术台上,以避免动物在手术过程中的移动。
4.体表消毒。
在手术区域进行局部消毒,以防止感染。
5. 做出胸骨切口。
在胸骨两侧做出1-2cm的胸骨切口,用手术器械将胸骨分开,暴露出心脏。
6.找到冠状动脉。
用吸引管或者类似的器械将心包囊抽吸,暴露出心脏表面。
紧邻左心室肌肉的左前降支是心肌梗死的常见发生区域。
7.梗死诱导。
用细导管或者相似的器械将一根可以封堵冠状动脉的丝线或者微球导入至冠状动脉中,使其堵塞。
这一步骤可以模拟冠状动脉的阻塞引发心肌梗死。
8.恢复心脏正常血流。
待梗死产生一段时间后(一般为30分钟-60分钟),再次将导管或器械取出,恢复冠状动脉的血流。
9.缝合胸骨。
将胸骨进行缝合,确保伤口能够愈合。
10.外科处理。
术后外科处理,如用抗生素进行预防性治疗,避免可能的感染。
研究人员可以通过观察心肌梗死后的心电图变化、心肌组织的病理切片等方式来评估心肌梗死的程度与发展。
总的说来,大鼠心肌梗死动物模型是一种常见的研究心肌梗死发病机制的实验模型。
通过制造大鼠心肌梗死动物模型,研究人员可以更好地模拟心肌梗死的发生,寻找新的治疗策略和探索其发病机制。
当然,在制作动物模型时,需要严格遵循相关伦理规范和动物保护法律法规,确保动物的利益和权益不受损害。
此外,动物模型只是研究的一部分,结合体外实验和临床数据,才能更全面地了解心肌梗死的病理机制及治疗方法。
大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估1 对象与方法?1. 1研究对象清洁级雄性Spreague-Dawley (SC)大鼠20 只,体质量250〜300 g (275± 15. 3) g,由广州中医药大学实验动物中心提供。
随机分为假手术组和心肌梗死组。
1 .2 研究方法?1 . 2. 1 MI 模型的建立[2-3] 氯胺酮( 75 mg/kg )腹腔注射麻醉,经口人工呼吸(导管置于大鼠的舌体与上颌之间),连接小动物呼吸机予以正压通气,潮气量3〜5 ml/100 g ,呼吸频率60次/min,吸呼比1? : ?1。
左侧胸部备皮,消毒手术区域,经胸骨左缘第4 肋间开胸,钝性分离肌肉,以眼科开睑器撑开肋间肌切口,暴露心脏,剪开心包,于肺动脉圆锥与左心耳之间距主动脉根部2~3 mm处,用7-0眼科无创缝合针,穿过前降支深部连同一小束心肌一并结扎。
根据心电图和心肌组织颜色确定冠脉结扎成功。
逐层缝合胸壁,自主呼吸恢复后拔出通气导管。
大鼠清醒后送动物房饲养,规律照明,自由进食和饮水。
术后连续3 d 予以青霉素40 万U 腹腔注射以预防感染。
假手术对照组除不结扎冠状动脉外,其余步骤相同。
1. 2. 2 超声心动图检查[4]3% 戊巴比妥钠( 45 mg/kg )腹腔注射麻醉,用Philips Sonos 5500型多功能超声诊断仪( S12探头,频率5~12 MHz),在胸骨旁以二维超声和M型超声测量左室收缩末径(LVSd、左室舒张末径(LVDd、舒张期左室后壁厚度(PWd、舒张期左室前壁厚度(AWd Ml组为梗死区室壁厚度)、左室射血分数(LVEF和短轴缩短率(FS),分别计算梗死区变薄指数(BBZS即舒张期左室前壁厚度/后壁厚度)和非梗死区增厚指数(ZHZS即舒张期左室后壁厚度/前壁厚度)。
所有参数均在3 个连续的心动周期中进行测量并取平均值。
1.2.3 血流动力学检查[5]3%戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔注射麻醉,气管切开插管,保持呼吸道通畅。
大鼠心肌梗塞模型
大鼠:用3%戊巴比妥钠(30mg/kg)行腹腔注射麻醉,麻醉满意后置于手术台,四肢及头部仰卧固定于手术台上,四肢皮下连接心电图电极,记录标准Ⅱ导联心电图,颈部皮肤备皮消毒,胸骨上窝上正中切开皮肤0.5cm,向上钝性分离推开下颌下腺,剪除气管前肌肉,使气管在没有任何拉钩牵引的情况下能充分显露,彻底止血后于第2~3气管环间行气管横行切开,注意不要切断气管软骨环,切口长度不超过气管周径的1/3,擦干其内分泌物后插入气管插管,深度为0.5~1cm。
连接空气呼吸机进行人工控制呼吸,呼吸频率90次/min,潮气量10~12ml,呼吸比设为1:1。
左前胸去毛,消毒铺巾,顺肋间隙方向于胸骨左旁第3~4肋间切开皮肤,长约1cm,逐层分离皮下组织、肌肉,于2~3肋骨间撑开进胸,向右上方推开胸腺,可暴露心脏及大血管根部,切开心包,轻挤大鼠胸廓,将心脏挤出,有部分动物在左心耳下缘与肺动脉圆锥间可以看见左冠脉前降支起始部,线缝针的进针深度控制在0.1cm,宽度为0.1~0.2cm;回纳心脏入胸廓,待动物的数十次心动周期后,收线打结;观察数分钟后,彻底止血后逐层关胸。
关胸过程中于切口内放置排气管,关胸毕,抽空胸腔积气后拨除。
恢复大鼠自主呼吸,拨出气管内插管,清除气管内分泌物,气管切口及颈部切口开放,不作缝合。
手术过程中分开胸后、缝针后、结扎后和关胸后四个点记录心电图变化;合格动物2周及6周后均复查心电图。
以上手术均在严格无菌条件下进行。
术后肌内注射青霉素钠2×10U/d,连续5d抗感染。
大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估【摘要】目的建立一种稳定可重复的大鼠急性心肌梗死模型。
方法SD大鼠经氯胺酮麻醉后,经口人工呼吸,开胸结扎左冠状动脉前降支。
4周后行超声心动图、血流动力学和组织病理学检查。
结果①心电图和组织病理学检查证实,成功建立了大鼠急性心肌梗死模型,梗死面积40%~45%(平均42%);②与假手术组比较,心肌梗死大鼠左室收缩末径、左室舒张末径和非梗死区增厚指数明显增加(P<0.01),左室后壁、左室前壁、梗死区变薄指数、左室射血分数和左室短轴缩短率显著降低(P<0.05,P<0.01);③心肌梗死大鼠动脉收缩压、舒张压、左室收缩压、左室内压最大上升和下降速率均低于假手术组(P<0.01),心率和左心室舒张末压高于假手术组(P <0.01);④两组大鼠左、右心室实际和相对重量以及胶原容积积分之间的差异有统计学意义(P<0.01)。
结论本文建立心肌梗死动物模型的方法操作简单、重复性好、结果可信。
【Abstract】Objective To develop a steady and reproducible myocardial infarction(MI) model in rats.Methods SD rats were anaesthetized with ketamine.After linking with respiration machine,left anterior decending coronary artery was ligated.Echocardiogram,haemodynamics and histopathology were done four weeks after ligation.Results ①The model of MI was established successfully and proved by electrocardiogram and histopathology.Infarct sizes were 40%~45%(average 42%).②Compared with sham operation group,MI rats had higher left ventricular systolic diameter,left ventricular diastolic diameter and non-infarcted region thickening index (P<0.01),and lower posterior wall diameter,anterior wall diameter,infarcted region thinningz index,left ventricular ejection fraction and fractional shortening (P<0.05,P<0.01).③Systolic blood pressure,diastolic blood pressure,left ventricular systolic pressure and the maximum rising and dropping rates of left ventricular pressure decreased,while heart rate and left ventricular end-diastolic pressure increased after MI.④There were significant differences in left ventricular actual weight,right ventricular actual weight,left ventricular relative weight,right ventricular relative weight and collagen volume fraction between sham operation group and MI rats (P<0.01).Conclusion This experiment provided an easy way to establich the MI model,which was reproducible and credible.【Key words】Coronary artery;Myocardial infarction;Modelanimal;Rats心肌梗死(myocardial infarction,MI)是21世纪医学亟待解决的难题之一[1]。
心肌梗死动物模型比较分析[摘要]:心肌梗死(myocardial infarction,MI)是心血管病中最危重的急性事件,近年来的发病有明显的增高趋势,是21世纪医学亟待解决的难题之一[1]。
在心血管疾病研究中,动物模型被广泛用,研究目的不同则所需的动物模型平台亦不同。
MI动物模型的建立对于研究人类MI的病理生理变化、心电生理改变以及评价各种治疗方法具有重大价值。
近年来,通过干细胞移植修复受损心肌成为研究热点,大量临床试验及动物实验研究表明干细胞移植可改善心肌梗死后的心脏功能,而建立心肌梗死动物模型则成为深入研究干细胞移植修复心肌损伤的重要基础。
结扎左前降支制作MI模型,是一个被广泛接受近于成熟的制模方法。
但随着实验技术的发展,它的一些操作步骤、评价指标等方面仍需进一步改进。
因此,本文将回顾MI动物模型的进展情况,及主要探讨研究细胞移植研究用心肌梗死动物模型的选择。
[关键词] 心肌梗死;动物模型;细胞移植;WWHLMI家兔;不稳定斑块1 目前已有报道的常用心肌梗死动物模型目前国内外常用的建立心肌梗死动物模型的方法主要分两大类:(1)采用各种方法直接造成冠状动脉狭窄或堵塞,其试验周期短,可以观察梗死后再灌注对心肌的损害。
(2)诱发冠状动脉粥样硬化形成狭窄与梗死,其试验周期长,死亡率较高。
通过开胸结扎不同部位冠状动脉建立急性心肌梗死模型已沿用多年[2-5] 结扎大鼠冠状动脉在医学实验中已得到公认,最常用的心肌梗死动物模型。
国外多采用Jons法[6-7],即在自主呼吸下,开胸迅速挤出心脏,结扎冠状动脉。
这种方法需要在极短的时间内完成操作,技术要求高,难度大,难以掌握;而且由于心脏移位,容易导致血流动力学紊乱和心律失常等并发症;开胸后小动物呼吸无法得到保证,因而手术死亡率极高。
此后Fisbein[8]和Pfeffer[9]在Johns法的基础上略加改进,应用小动物呼吸机维持呼吸,明显提高了手术的成活率,但是又增加气管切开的的创伤,延长手术时间势必会增加感染机会。
两种大鼠心肌梗死模型的比较研究童敏;贺亮;刘文亮;周胜华【摘要】目的通过对大鼠冠状动脉前降支结扎法和超声波凝固法制作心肌梗死模型进行对比研究,探讨两种心梗模型的优缺点.方法 45只SD大鼠,随机分成假手术组(n=15)、冠状动脉结扎组(n=15)、超声刀组(n=15).假手术组:冠脉左前降支只套线,不结扎;冠状动脉结扎组:用620缝合线结扎大鼠左冠状动脉前降支;超声刀组:用超声刀凝固冠状动脉左前降支.术后4周分别测定大鼠血清肌酸磷酸激酶(CK)及其同功酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH),天门冬氨酸氨基转换酶(AST)水平,并行心肌HE染色进行病理组织学分析,探讨两种模型的优劣.结果与冠脉结扎组比较,超声刀组血清CK、CK-MB、LDH、AST活性均无明显差异(P>0.05);HE染色显示:两组心肌组织均出现凝固性梗死,炎细胞浸润,继而有肉芽组织长入,最后形成瘢痕.冠状动脉结扎组大鼠术后死亡率50%,超声刀组大鼠术后死亡率20%,差异有统计学意义(P<0.05).结论二者均可有效复制心肌梗死模型.超声刀凝固法操作简单,死亡率低,能建立稳定的大鼠心肌梗死模型,可用于心肌梗死的相关研究.%Objective To compare two rat models of myocardial infarction established by coronary artery ligation and harmonic scalpel method for their advantages, disadvantages and applications. Methods Sixty Sprague Dawley rats were randomly divided into sham-operated group, coronary artery ligation group and harmonic scalpel group. In the latter two groups, myocardial infarction was induced by ligation of the left anterior descending coronary artery and coagulation of the artery, respectively. Four weeks after the operations, the rats were sacrificed to measure the serum levels of CK, CK-MB, LDH and AST, and the hearts were collected for histopathologicalobservation with HE staining. Results The rats in the sham-operated group and coronary artery ligation group showed no significant differences in serum levels of CK , CK-MB , LDH or AST. Histologically, the myocardial tissues of the two models all showed coagulation necrosis and inflammatory cell infiltration, with granulation tissue ingrowth in the infracted tissues and scar formation. The mortality rate of the rats in coronary artery ligation group was 50% at 4 weeks, ' significantly higher than that of the harmonic scalpel group (20%, P<0.05). Conclusion Coronary artery ligation and harmonic scalpel method are both effective means to produce rat models of myocardial infarction. The latter method can establish a more stable model for studying the mechanism and treatment of myocardial infarction.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2011(031)011【总页数】3页(P1941-1943)【关键词】冠状动脉结扎法;超声刀;心肌梗死【作者】童敏;贺亮;刘文亮;周胜华【作者单位】中南大学湘雅二医院动物实验室,湖南长沙410012;中南大学湘雅二医院麻醉科,湖南长沙410012;中南大学湘雅二医院胸外科,湖南长沙410012;中南大学湘雅二医院心内科,湖南长沙410012【正文语种】中文【中图分类】R758.22在心肌梗死(myocardialinfarction,MI)[1-2]发病率和死亡率不断上升,严重威胁人类健康的今天,成功制备心肌梗死动物模型是我们进行相关研究的基础。
常见大鼠心肌梗塞模型建立方法对比
心肌梗塞是危害人类健康的主要疾病之一,主要是由于某支冠状动脉持续缺血,其所支配的心肌发生不可逆转坏死而形成的病理过程。
90%以上的心肌梗塞是由于冠状动脉粥样硬化病变基础上血栓形成而引起的,较少见于冠状动脉痉挛,少数由栓塞、炎症、畸形等造成管腔狭窄闭塞,使心肌严重而持久缺血达1小时以上即可发生心肌坏死。
心肌梗塞的发生常有一些诱因,包括过劳、情绪激动、大出血、休克、脱水、外科手术或严重心律失常等。
美国每年约有150万人发生心肌梗塞。
而在中国,近年来心肌梗塞发生率呈明显上升趋势,每年新发至少50万名患者,现存至少200万名患者。
为了更好地筛选有效治疗心肌梗塞的药物并研究心肌梗塞的发病机理,实验人员常以大鼠、兔和实验用小型猪来建立标准化的心肌梗塞模型。
相对于其他动物,大鼠有许多优势:
1.大鼠的品系纯正,组内差异较少;
2.大鼠饲养成本低,造模前后管理较容易;
3.大鼠的冠脉系统侧支循环比较少,结扎后易出现一个比较固定的缺血区,能很大程度上提高造模的成功率;
4.大鼠心肌梗塞模型手术较小,单人就能操作。
下面我们将就较常见的几种大鼠心梗造模方法来进行一一详细介绍。
a.传统冠状动脉结扎法
冠状动脉结扎是最常选用的大鼠心肌梗塞造模方法,其具体操作步骤为:将大鼠用氯氨酮麻醉后接上小动物呼吸机,经左侧第4肋间剪开皮肤,钝性分离肌肉组织,打开胸腔并剪开心包膜,挤压出心脏,在左心耳与肺动脉圆锥之间穿线,结扎左冠状动脉前降支(于分支的起点处约1~2mm),用Ⅱ导生理记录仪记录心电
图,心电图ST段弓背抬高示心肌梗塞造模成功。
然后迅速将心脏放回胸腔,随即缝合胸腔及皮肤。
假手术组(阴性对照组)除不结扎冠状动脉外,其余操作与手术动物相同,术后给予庆大霉素局部处理。
b.异丙肾上腺素注射法
除冠状动脉结扎法之外,药物注射法也常用于大鼠的心肌梗塞模型的建立。
将大鼠用1%的戊巴比妥钠20~25mg/kg体重给予大鼠腹腔注射麻醉,直接按5mg/kg 体重,皮下注射4%异丙基肾上腺素(ISO),或直接将药物注入腹腔均可造模,每天注射1次,连续注射2-8天,可造成心梗、心衰、冠状动脉痉挛。
一般在注射后4-8周发病。
c.反复冷冻法
沿大鼠胸骨左缘前外侧第4肋间进入胸腔打开,充分暴露心脏,用浸过液氮的直径6mm铜棒充分接触左室游离壁,持续时间5s/次,随即闭合胸腔,待自主呼吸恢复正常后,按分组情况再次原位反复共3、5次或8次进行心肌冷冻损伤。
这三种大鼠的心肌梗塞模型的建立方法各有优缺点,通过对这三种方法所建立疾病类型、手术实验技术要求、实验室仪器要求、术后死亡率及造模稳定性等方面的对比,我们对比总结了这三种造模方法(如表1所示)。
表1.三种心肌梗塞造模方法对比
模型类型造模类型实验技能要求仪器要求死亡率造模稳定性
冠状动脉前降支结扎法急性心梗高需要小动物
呼吸机
较高高
冷冻法急性心梗较高需要小动物
呼吸机
较高低
药物注射法慢性心梗低无要求低较高从上表可见,冠状动脉前降支结扎法与冷冻法类似,均会造成大鼠的急性心肌
梗塞,且对实验技术的要求较高,均涉及到大鼠的麻醉、开胸、肋间分离等多个实验步骤。
特别是结扎法,因为结扎部位的确定和伤口缝合均需要一定的手术经验,不熟练者会有术后大鼠气胸的风险,造成术后大鼠死亡率偏高,但经过相关培训和练习后,结扎法相对于其它造模方法造模稳定性更高,心肌梗死较彻底且梗死面积的大小与结扎部位的高低呈正相关,是全球公认的大鼠心肌梗塞造模方法。
相比之下,冷冻法亦能造成大鼠的急性心肌梗塞,且操作方法较较结扎法简便,但由于术后发病与否与冷冻部位及冷冻时间有直接关系,较难保证每次造膜的稳定性,且容易造成组内发病程度差异过大。
与以上两种方法不同,以异丙肾上腺素诱导为代表的药物注射法,主要是诱发慢性心肌梗塞,一般在注射后4-8周发病,该方法的优点在于只要选择合适的药物剂量,注射后一般可保证较高的大鼠生存率,且不需要小动物呼吸机等特殊的仪器支持,简便易行,容易操作掌握。
但这种方法造成的梗死区域内偶尔可见有未坏死心肌,梗死灶主要分布在左心室壁和室间隔上,尤以靠近心尖部为重。
实验人员可根据自身实验需要及实验室自身硬件设施来综合选择最适宜的心肌梗塞模型大鼠的建立方法。