光皮木瓜多酚类的提取和清除DPPH的抗氧化活性

12种果皮多酚含量及其抗氧化活性研究柳伟;肖雪;葛珊珊;王春丽【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2016(037)014【摘要】选取了12种水果，采用Folin-Ciocalteu测定法分析比较各种水果果皮的多酚含量，筛选出果皮多酚含量较高的水果；运用DPPH自由基法测定果皮提取液的抗氧化活性大小，用于评价水果果皮的抗氧化能力；采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定酪氨酸酶活性的抑制作用，初步评价水果果皮的美白效果。

试验结果表明，12种水果果皮都含有多酚成分，多酚含量大小依次为：山楂皮＞龙眼皮＞葡萄皮＞芒果皮＞苹果皮＞木瓜皮＞柚子皮＞菠萝皮＞猕猴桃皮＞柠檬皮＞梨皮＞香蕉皮；对DPPH自由基清除能力依次为：山楂皮＞龙眼皮＞葡萄皮＞芒果皮＞苹果皮＞木瓜皮＞柚子皮＞菠萝皮＞柠檬皮＞猕猴桃皮＞梨皮＞香蕉皮；对酪氨酸酶的抑制作用依次为：山楂皮＞龙眼皮＞葡萄皮＞芒果皮＞苹果皮＞木瓜皮＞柚子皮＞猕猴桃皮＞柠檬皮＞菠萝皮＞香蕉皮＞梨皮。

【总页数】5页(P25-29)【作者】柳伟;肖雪;葛珊珊;王春丽【作者单位】华东理工大学药学院，上海200237; 上海市新药设计重点实验室，上海200237;华东理工大学药学院，上海200237; 上海市新药设计重点实验室，上海200237;华东理工大学药学院，上海200237; 上海市新药设计重点实验室，上海200237;华东理工大学药学院，上海200237; 上海市新药设计重点实验室，上海200237【正文语种】中文【相关文献】1.4种豆类中多酚、类黄酮含量及抗氧化活性研究 [J], 程安玮;吴剑夫;秦宏伟;杨清梅;刘超;郭溆;孙金月2.木奶果果皮多酚提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究 [J], 张容鹄;夏义杰;窦志浩;何艾;谢辉;邓浩;冯建成3.HPLC同时测定大叶冬青叶中10种多酚成分的含量及抗氧化活性研究 [J], 王存琴;陈颖;汪雷;崔巧玉;段名扬;陈国军4.芒果皮多酚的微波辅助提取及体外抗氧化活性研究 [J], 刘焕云;王艳哲;李敬;李飞5.野生樱桃李果皮多酚含量测定及抗氧化活性研究 [J], 刘晓;刘伟;葛豫炜;刘天琦;安学瑞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

植物酚类物质的提取及其抗氧化性研究随着人们健康意识的提高，抗氧化成分已经成为了现代人最关注的重要话题之一。

而植物酚类物质，无疑是其中的一种重要抗氧化成分。

本文将详细探讨植物酚类物质的提取方法及其抗氧化性研究结果。

一、植物酚类物质的分类植物酚类物质是指一类具有茶褐色或深红色的天然化合物，主要存在于水果、蔬菜、茶叶、咖啡、红葡萄酒等食品中。

植物酚类物质按照结构分为类黄酮、黄酮、异黄酮、花青素、黄酮醇等几个类别。

二、植物酚类物质的提取方法目前，植物酚类物质的提取方法主要有超声波萃取、微波萃取、溶剂萃取和水萃取几种方式。

超声波萃取是一种新型的物理方法，其操作简单、效率高、萃取时间短，可以保留植物酚类物质的活性。

但是，设备成本较高，操作有一定技术要求。

微波萃取是利用微波能量加速植物酚类物质的萃取速度，相比较于传统的溶剂萃取方法，可以快速提取目标物质。

但是，微波萃取制备的植物酚类物质含量较低，需要多次提取。

溶剂萃取是目前萃取植物酚类物质最为常用的方法，其操作简单、成本较低，适合规模化生产。

但是，溶剂萃取所得植物酚类物质存在溶剂残留，且容易受到氧化损失。

水萃取是一种绿色环保的方法，可以用于提取花青素等水溶性植物酚类物质。

但是，水萃取所得植物酚类物质的含量较低。

三、植物酚类物质的抗氧化性研究实验结果表明，植物酚类物质具有较强的抗氧化性能。

这是由于植物酚类物质的结构中含有多个苯骨架，具有较强的自由基清除能力。

其中，茶多酚、异黄酮等植物酚类物质，对抗自由基清除有着非常显著的功效。

而黄酮醇类等植物酚类物质则具有较好的抗氧化和抗炎作用。

综上所述，植物酚类物质的提取方法十分多样，具有各自的特点和优缺点。

而不同种类的植物酚类物质，其对自由基的清除及抗氧化作用也存在差异。

因此，在实际的抗氧化剂选用中，需要结合具体的功能需求和物质特性，选用合适的植物酚类物质，并采用有效的提取方法进行提取。

DPPH法评价抗氧化活性研究进展韦献雅1，殷丽琴1，钟 成2，章明海1，牛应泽1,*（1.四川农业大学油菜研究中心，四川 成都611130；2.四川农业大学玉米研究所，四川 成都611130）摘 要：植物化合物或植物提取物的抗氧化活性的体外评价是研究功能因子的一个重要方面。

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ，DPPH ）法常用于评价化合物或植物提取物的抗氧化活性，但由于没有一个标准化的方法，因而不同实验的结果难于相互比较。

本文从DPPH 法的原理、测定方法、检测波长、DPPH 初浓度、反应时间、清除率计算公式、结果表达、评价指标等几个方面对DPPH 法做归纳总结，分析几种外界因素对DPPH 法的影响，有助于研究者提高认识，从而准确的开展研究工作。

关键词：DPPH 法；自由基；抗氧化剂；抗氧化活性Advances in the DPPH Radical Scavenging Assay for Antioxidant Activity EvaluationWEI Xian-ya 1, YIN Li-qin 1, ZHONG Cheng 2, ZHANG Ming-hai 1, NIU Ying-ze 1,*(1. Rapeseed Research Center, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China;2. Maize Research Institute, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China)Abstract: in vitro evaluation of the antioxidant activity of plant compounds or plant extracts is an important aspect of functional factor research. The DPPH (1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) radical scavenging assay is widely used for antioxidant activity evaluation of plant compounds and extracts. However, this method lacks a standardized program so that results from different experiments may be difficult to compare with each other. The present review presents a comprehensive overview of the principle, measurement procedure and wavelength, initial DPPH f ree radical concentration, reaction time, calculation of the scavenging rate, expression of results and evaluation indices. Several external factors influencing the DPPH assay are also discussed.Key words: DPPH method; free radical; antioxidant; antioxidant activity 中图分类号：TS207.3 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2014）09-0317-06doi:10.7506/spkx1002-6630-201409062收稿日期：2013-06-25基金项目：四川省科技计划项目（12CGZHZX0712）；四川省教育厅重点科技项目（11LD018）作者简介：韦献雅（1980—），女，博士研究生，研究方向为作物遗传育种。

抗氧化活性研究方法引言：氧化反应是指分子或原子失去电子，而还原反应是指分子或原子获得电子。

由于氧化反应产生的自由基具有高度活性，能够对细胞结构和功能造成损害，导致多种疾病的发生。

因此，研究抗氧化活性及其机制对于预防和治疗这些疾病具有重要意义。

本文将介绍几种常用的抗氧化活性研究方法。

一、DPPH自由基清除能力测定法DPPH自由基清除能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。

DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其颜色随着氧化程度的增加而减弱。

在该方法中，将待测样品与DPPH溶液混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够清除DPPH自由基，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。

二、还原能力测定法还原能力测定法是通过测定待测样品对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。

常用的还原剂包括铁离子、铜离子等。

在该方法中，将待测样品与还原剂混合，通过测定混合液的吸光度变化或还原剂浓度的变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够还原还原剂，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降或还原剂浓度的降低。

三、氧化脂质抑制能力测定法氧化脂质抑制能力测定法是通过测定待测样品对氧化脂质的抑制能力来评估其抗氧化活性。

常用的氧化脂质包括脂肪酸、脂肪油等。

在该方法中，将待测样品与氧化脂质混合，通过测定混合液中脂质的氧化程度来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够有效抑制氧化脂质的形成。

四、超氧阴离子清除能力测定法超氧阴离子是一种常见的自由基，具有较高的活性。

超氧阴离子清除能力测定法是通过测定待测样品对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。

常用的超氧阴离子产生体系包括NBT（硝基蓝盐）-NADH（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）体系、XTT（二苯基四唑盐）体系等。

在该方法中，将待测样品与超氧阴离子产生体系混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够有效清除超氧阴离子，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。

李娜，陆俊. 五种食用花卉体外模拟消化过程中多酚、黄酮含量及抗氧化活性的变化[J]. 食品工业科技，2023，44（8）：374−382.doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022050297LI Na, LU Jun. Changes of Polyphenol and Flavonoid Contents and Antioxidant Activities of Five Edible Flowers during Simulated Digestion in Vitro [J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(8): 374−382. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022050297· 营养与保健 ·五种食用花卉体外模拟消化过程中多酚、黄酮含量及抗氧化活性的变化李　娜1，陆　俊2,*（1.长沙商贸旅游职业技术学院湘菜学院，湖南长沙 410016；2.中南林业科技大学食品科学与工程学院，湖南长沙 410004）摘　要：目的：为探究五种食用花卉经体外模拟胃肠消化后酚类物质及抗氧化活性的变化规律。

方法：以五种可食用花卉（桂花、万寿菊、栀子花、紫玉兰花、木槿花）为研究对象，通过对比消化前、体外模拟胃消化、体外模拟肠消化五种食用花卉多酚、黄酮含量及其体外抗氧化活性变化规律。

结果：五种可食用花卉的黄酮、多酚含量及抗氧化活性在模拟胃消化阶段增长不大，而在模拟肠消化阶段呈现出较大的增长趋势。

通过整个模拟胃肠消化，多酚增长了127.55%（桂花）~461.70%（万寿菊），黄酮增长幅度为46.50%（玉兰）~218.46%（万寿菊），其中以万寿菊的多酚和黄酮的含量最多，分别达到了（8.95±0.03） mg 没食子酸当量（GAE ）/g 和（83.01±0.01） mg 儿茶素当量（CE ）/g 。

石榴多酚类物质的分离鉴定和抗氧化活性研究一、本文概述本文旨在深入研究和探讨石榴多酚类物质的分离鉴定以及其抗氧化活性。

石榴作为一种营养丰富、历史悠久的水果，近年来因其独特的营养价值和药用功能受到了广泛关注。

石榴多酚类物质作为石榴中的主要活性成分，具有显著的抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性，对于预防和治疗多种慢性疾病具有潜在的应用价值。

因此，本文旨在通过科学的方法和技术手段，对石榴多酚类物质进行深入分离和鉴定，研究其抗氧化活性，并探索其在健康领域的潜在应用。

文章将首先概述石榴多酚类物质的研究背景和重要性，然后详细介绍石榴多酚类物质的提取和分离方法，包括常用的化学方法和现代生物技术手段。

随后，文章将阐述石榴多酚类物质的鉴定方法，如光谱分析、色谱分析等，以揭示其化学结构和组成。

在此基础上，本文将进一步研究石榴多酚类物质的抗氧化活性，通过体外实验和体内实验评估其抗氧化效果，并探讨其抗氧化机制。

文章将总结石榴多酚类物质的研究结果，并展望其在健康领域的潜在应用前景。

本文的研究结果将有助于进一步揭示石榴多酚类物质的生物活性机制，为开发新型天然抗氧化剂提供科学依据，同时也可为石榴深加工产品的开发提供技术支持，促进石榴产业的可持续发展。

二、材料与方法用于研究的石榴果实采自本地优质石榴园，挑选新鲜、成熟且无病斑的石榴果实。

采摘后立即送往实验室进行处理，以保证原材料的新鲜度。

实验所用的化学试剂包括乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂，以及抗氧化活性测定所需的试剂，如DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）、ABTS（2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）等，均为分析纯级别，购自国内知名试剂供应商。

实验所用仪器包括旋转蒸发仪、真空泵、色谱柱、高效液相色谱仪（HPLC）、紫外可见分光光度计等，均为实验室内常用设备。

石榴果实去籽后破碎成汁，加入适当比例的有机溶剂（如乙醇、甲醇等）进行浸泡提取。

提取液经过滤后，通过旋转蒸发仪去除溶剂，得到粗提物。

多酚提取方法
多酚提取是一种重要的化学分离技术，可以从天然植物中提取出多种多酚类化合物，如儿茶素、芦丁、黄酮等。

这些化合物具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性，是开发天然药物和保健品的重要来源。

常用的多酚提取方法有以下几种：
1.溶剂提取法：将干燥的植物材料与适量的有机溶剂（如乙醇、水）混合浸泡，再用过滤纸滤去固体，得到多酚类化合物的提取液。

此方法适用于提取耐水性差的多酚类化合物。

2.超声波辅助提取法：将干燥的植物材料与适量的溶液（如乙醇、水）放入超声波萃取仪中，通过超声波振动加速多酚类化合物的释放和溶解。

此方法提取效率高，时间短，但对设备要求较高。

3.微波辅助提取法：将干燥的植物材料与适量的溶液（如乙醇、水）放入微波辅助提取仪中，通过微波辐射加速多酚类化合物的释放和溶解。

此方法提取速度快，但对设备要求较高。

4.超临界流体萃取法：将干燥的植物材料与超临界流体（如二氧化碳）一起置于高压容器中，在高温高压下进行萃取。

此方法提取效率高，萃取温度低，不会破坏多酚类化合物的结构。

以上几种方法都有其优缺点，应根据不同的实际情况选择合适的提取方法。

- 1 -。

多酚类化合物的提取方法和功效多酚类化合物是一种重要的天然化合物，被广泛应用于医药、食品、化妆品等领域。

这种化合物具有良好的抗氧化性能、抗炎性能和抗肿瘤性能，对人体健康具有重要作用。

由于多酚类化合物来源广泛，不同的植物中都含有这种化合物，因此很多研究人员都希望能够提取出高纯度的多酚类化合物，以用于进一步的研究和开发应用。

本文将介绍几种常见的多酚类化合物提取方法以及这些化合物的功效。

一、乙酸乙酯法乙酸乙酯法是一种较为常见的多酚类化合物提取方法。

该方法的主要原理是利用有机溶剂乙酸乙酯高效地提取出植物中的多酚类化合物。

具体操作步骤为：将待提取的植物样品粉碎，加入适量乙酸乙酯，浸泡数小时或过夜，然后过滤，用旋转蒸发器将溶液浓缩，得到提取出的多酚类化合物粗提物。

这种方法简便易行，得到的产物也具有一定的纯度。

二、超临界流体萃取法超临界流体萃取法是一种较为新颖的多酚类化合物提取方法，该方法利用具有超临界状态的流体作为提取剂来萃取植物中的多酚类化合物。

超临界流体具有高溶解性和高扩散性，能够高效地提取多酚类化合物。

具体操作步骤为：将待提取的植物样品放入萃取罐内，加入超临界流体，经过一定时间后，将萃取罐的溶液和提取出的多酚类化合物分离，最后利用蒸发干燥器将多酚类化合物精制得到。

这种方法具有提取效率高、纯度高等优点。

三、多相固相萃取法多相固相萃取法是一种基于化学吸附原理的多酚类化合物提取方法。

该方法利用特定材料作为吸附剂，能够选择性地吸附多酚类化合物，并将其从溶液中去除。

具体操作步骤为：将待提取的植物样品加入水相溶液中，加入特定吸附剂，然后通过离心等操作将吸附剂和水相分离，最后用甲醇等有机溶剂洗脱吸附剂，并利用旋转蒸发器浓缩甲醇溶液得到多酚类化合物精制提取物。

这种方法具有操作简单、高选择性等优点。

多酚类化合物具有良好的生物活性，对人体健康具有保健作用。

它具有抗氧化性、抗炎性、抗肿瘤等多种功能。

其中，抗氧化性能可能是多酚类化合物最为重要的作用之一。

a c t i v i t y o fαＧg l u c o s i d a s e w e r e t h e s t r o n g e s t i n t h e p u l p p o l y p h e n o l s o fN a n j i a o N o．４２b a n a n a．T h ee n z y m eac t i v i t y w a s i n h i b i t ed b y m i xe d i n h i b i t i o n,a n d t h e i n t e r a c t i o n w i t h αＧg l u c o s i d a s e w a s e x o t h e r m i c．C o n c l u s i o n:B a n a n a p u l p p o l y p h e n o l sh a v e g o o da n t i o x i d a n t a b i l i t y a n d i n h i b i t i o n a b i l i t y t o αＧg l u c o s i d a s ea c t i v i t y,a n da r ee x p e c t e dt ob ea g o o ds e l e c t i v e i n h i b i t o r o fαＧg l u c o s i d a s e．K e y w o r d s:b a n a n a p u l p;v a r i e t y;p o l y p h e n o l;a n t i o x i d a n t c a p a c i t y;αＧg l u c o s i d a s e i n h i b i t i o na c t i v i t y香蕉是一类热带季节性水果,属于芭蕉科芭蕉属.它是世界上最受欢迎的水果之一,也是世界贸易中第五大农业作物[１].世界上种植生产香蕉的国家和地区数量超过１３０个,以中美洲㊁南美洲和亚洲最为集中[２].其中,亚洲是世界上最大的香蕉生产国,占全球香蕉产量的５４．４％.２０２０年,中国香蕉产量超过１１００万t,香蕉消耗量超过１３００万t,香蕉产业产值超过４００亿美元[３].香蕉中含有多酚㊁蛋白质和多糖等多种成分[４],其中多酚是一类次生代谢产物,普遍存在于植物中,对健康有益处.研究[５－６]表明,植物多酚可能参与人类健康维护和疾病预防,特别是降低患慢性疾病的风险,如心血管疾病和某些类型的癌症.不同品种的香蕉酚类组成及生物活性差异显著,香蕉皮和香蕉果肉之间也存在较大差异,香蕉的抗氧化能力与其多酚含量呈显著正相关[７].彭思琪等[８]研究发现,相同浓度下香蕉皮黄酮羟自由基㊁A B T S自由基清除能力及铁离子还原能力均显著强于抗坏血酸.覃翠钠等[９]研究了５种不同成熟度香蕉果肉及果皮的多酚含量及抗氧化活性,发现熟香蕉果㊁肉㊁皮的抗氧化活性优于生香蕉的.还有研究表明,香蕉皮多酚具有较好的抑菌活性[１０],对食用油脂㊁H２O２㊁超氧阴离子和亚硝酸盐也有一定的清除能力[１１].此外,植物多酚可通过抑制αＧ葡萄糖苷酶的活性,抑制碳水化合物转化为葡萄糖,从而延缓肠道对葡萄糖的吸收,降低餐后血糖水平[１２].且与现有的药物治疗方案相比,植物多酚的副作用更少,有望成为改善血糖的药物替代品[１３].然而,目前关于香蕉果肉多酚的降血糖潜力活性影响尚不清楚.研究拟以５个品种的香蕉果肉为原料,采用超声辅助醇法提取多酚,分析不同品种香蕉多酚的酚类组成和抗氧化活性,探讨香蕉果肉多酚的降血糖潜力,旨在为香蕉果肉多酚在食品工业中的开发及应用提供理论依据.１㊀材料与方法１．１㊀材料与试剂粉蕉(D w a r f b a n a n a,D B):中国热带农业科学院香料饮料研究所;东莞大蕉(D o n g g u a n p l a n t a i n,D P)㊁桂蕉６号(G u i j i a oN o．６,G JＧ６)㊁南角４２号(N a n j i a oN o．４２,N JＧ４２)和威廉斯矮化突变体(８１８８Ｇ１):中国热带农业科学院南亚热带作物研究所;αＧ葡萄糖苷酶:２６．５U/m g,上海源叶生物科技有限公司;没食子酸㊁儿茶素㊁芦丁㊁槲皮素㊁对羟基苯甲酸㊁山奈酚㊁丁香酸㊁咖啡酸:色谱级,上海源叶生物科技有限公司;乙酸㊁乙腈:色谱级,美国T e d i a公司;其他试剂均为分析纯.１．２㊀仪器与设备超高效液相色谱仪:１２９０I n f i n i t yⅡ型,美国A g i l e n t 公司;全波长扫描式多功能读数仪:S y n e r g y H１型,美国B i o T e k公司;荧光分光光度计:FＧ７０００型,日立高新技术公司;食品真空冷冻干燥机:T F D X０．２５型,烟台中孚冷链设备有限公司;低温超声波萃取仪:V O S H I NＧ１５００C型,无锡沃信仪器制造有限公司.１．３㊀方法１．３．１㊀香蕉果肉多酚提取㊀采后的香蕉于３d内完成预处理:香蕉去皮后,切成薄片,于护色液(将２０g柠檬酸㊁２g抗坏血酸和０．５g焦亚硫酸钠溶于１０００m L蒸馏水配制而成)中浸泡２０m i n,沥干水分后置于－２０ħ超低温保存箱中预冻一晚,设置冻干机冷阱温度－４０ħ,维持冻干仓压强１５P a左右,５５ħ真空冷冻干燥１２h,经粉碎研磨通过１００目筛后得到香蕉粉,贮藏于干燥器中备用.多酚的提取参考张顺等[１４]的方法并稍作修改.称取２０g香蕉粉,加入１５０m L预冷的８０％乙醇,４００W常温下超声３０m i n,抽滤后收集滤液,用１００m L８０％乙醇重复提取滤渣.所得滤液在４５ħ下旋转蒸发至１５m L,定容至２５m L后即得香蕉多酚提取液,冷藏于４ħ冰箱,同时取部分提取液于－２０ħ超低温保存箱中预冻一晚,设置冻干机冷阱温度－４０ħ,维持冻干仓压强１５P a左右,５５ħ冷冻干燥２４h后备用.１．３．２㊀香蕉果肉总酚㊁黄酮和单宁含量测定(１)总酚含量:根据福林 酚法[１５].移取０．１m L样品溶液,加入０．４m L福林酚试剂㊁１．０m L２０％N a２C O３,避光静置１h,于７６０n m处测定其吸光度.以没食子酸标准品作标准曲线并计算总酚含量.(２)黄酮含量:根据亚硝酸钠 硝酸铝法[１６].移取０．３m L样品溶液,加入０．２m L５％N a N O２,反应６m i n 后加入５０μL１０％A l(N O３)３溶液,反应６m i n后加入０．５m L１m o l/L N a OH,立即于５１０n m处测定其吸光度.以芦丁标准品制作标准曲线并计算黄酮含量.４５１营养与活性N U T R I T I O N&A C T I V I T Y总第２６６期|２０２３年１２月|(３)单宁含量:根据F e n g等[１７]的方法.移取１００μL 样品溶液,加入０．７５m L４％香草醛甲醇溶液,混匀后加入０．７５m L３０％硫酸甲醇溶液,避光静置２０m i n,于５１０n m处测定吸光度.以儿茶素标准品制作标准曲线并计算单宁含量.１．３．３㊀香蕉果肉酚类物质组成及含量测定㊀采用超高效液相色谱法.将５种香蕉果肉多酚的冻干粉末和多酚标准品分别用甲醇溶解,经过０．２２μm滤膜后上样.根据Z h a n g等[１８]的方法并适当修改,色谱柱为A g i l e n tC１８;检测器为紫外检测器;进样量１０μL;柱温３０ħ;流速１．０m L/m i n;波长２８０n m;流动相A为０．４％乙酸水溶液;流动相B为乙腈;洗脱梯度:０~４０m i nB ５％~２５％,４０~４５m i n B２５％~５０％,４５~５０m i n B ５０％~６０％;５０~５５m i nB６０％~５％.通过与多酚标准品对比出峰时间,确定所属化合物,通过峰面积计算单体酚含量.１．３．４㊀香蕉果肉多酚抗氧化能力测定(１)D P P H自由基清除能力:根据肖星凝等[１９]的方法并稍作修改.移取１００μL适宜浓度的样品溶液,加入１m L０．２mm o l/L的D P P H溶液,室温下避光静置３０m i n后于５１７n m测吸光度.用无水乙醇分别代替D P P H溶液和样品溶液做对照组和空白组,按式(１)计算D P P H自由基清除率.R s＝１－A１－A２A０()ˑ１００％,(１)式中:R s 自由基清除率,％;A１ 样品组的吸光度;A２ 对照组的吸光度;A０ 空白组的吸光度.(２)A B T S自由基清除能力:根据韦芳媚[２０]的方法并稍作修改.配制含７mm o l/L A B T S㊁２．４５mm o l/L K２S２O８的混合溶液,避光静置１６h以上得到A B T S母液,使用前用无水乙醇稀释母液使其在７３４n m的吸光值为０．７００ʃ０．０５０.取０．１m L适宜浓度的样品溶液与１．０m L A B T S溶液混合,避光静置１０m i n后于７３４n m 测吸光度,以无水乙醇分别代替A B T S溶液和样品溶液做对照组和空白组,按式(１)计算A B T S自由基清除率.(３)铁离子还原能力:根据郭俊彤[２１]的方法并稍作修改.将１００m L３０mm o l/L醋酸钠缓冲溶液(p H３．６)㊁１０m L１０mm o l/LT P T Z溶液(用４０mm o l/L H C l溶解)以及１０m L２０mm o l/LF e C l３ ６H２O均匀混合,使用前在３７ħ下水浴１０m i n.移取７５μL适宜浓度的样品溶液,加入１．４３m L混合溶液,避光静置３０m i n,５９３n m处测定吸光度.１．３．５㊀αＧ葡萄糖苷酶抑制率测定㊀根据廖天柱[２２]的方法并稍作修改.将５０μL不同浓度的样品溶液与５０μLαＧ葡萄糖苷酶(１U/m L)混合,室温反应１０m i n后,加入５０μL５mm o l/LαＧp N P G.１０m i n后加入１００μL２０％N a２C O３终止反应,立即在４０５n m处测得吸光值,以P B S溶液分别代替αＧ葡萄糖苷酶溶液和样品溶液做对照组和空白组.以阿卡波糖为阳性对照,按式(２)计算αＧ葡萄糖苷酶抑制率.R I＝１－A１－A２A０()ˑ１００％,(２)式中:R I αＧ葡萄糖苷酶抑制率,％;A１ 样品组的吸光度;A２ 对照组的吸光度;A０ 空白组的吸光度.１．３．６㊀抑制动力学㊀根据谢星等[２３]的方法并稍作修改.保持αＧ葡萄糖苷酶的添加量不变(２U/m L),以不同浓度的αＧp N P G(０．５,１．０,２．０,２．５mm o l/L)为底物,加入N JＧ４２果肉多酚溶液,测定其在４０５n m处的吸光度.通过L i n e w e a v e rＧB u r k双倒数曲线图计算米氏常数(K m)㊁最大反应速度(V m a x)㊁竞争性(K i c)和非竞争性抑制常数(K i u),判断N JＧ４２果肉多酚对αＧ葡萄糖苷酶的抑制类型,计算公式:１V＝K m[S] V m a x＋１V m a x,(３)S＝K mV m a x＋K mαK i c[I],(４)I＝１V m a x＋１αK i u V m a x[I],(５)式中:V 初始反应速度,μg/(m L m i n);K m 米氏常数,μg/m L;V m a x 最大反应速度,μg/(m L m i n);[S] 底物浓度,mm o l/L;S L i n e w e a v e rＧB u r k双倒数曲线图中的斜率;K i c 竞争性抑制常数,μg/m L;[I] 多酚质量浓度,μg/m L;I L i n e w e a v e rＧB u r k双倒数曲线图中的纵截距;K i u 非竞争性抑制常数,μg/m L;α 表观系数.１．３．７㊀荧光淬灭㊀采用荧光分光光度计测定N JＧ４２果肉多酚与αＧ葡萄糖苷酶的荧光淬灭光谱.将０．５m L不同浓度的样品溶液与２m LαＧ葡萄糖苷酶溶液混合,分别在２９７．１５,３０３．１５,３０７．１５K下反应１０m i n.用P B S溶液代替样品溶液作为对照组,激发波长２９５n m㊁发射波长３００~４００n m,狭缝宽度２．５n m.采用S t e r nＧV o l m e r方程判断淬灭类型,计算公式:５５１|V o l．３９,N o．１２冉静凤等:５种香蕉果肉多酚的抗氧化活性和抑制αＧ葡萄糖苷酶活性F ０F ＝１＋K s v [Q ],(６)l gF ０－FF ()＝lg K a＋n l g [Q ],(７)式中:F ０㊁F 加入淬灭剂前后的荧光强度;K s vS t e r n ＧV o l m e r 淬灭常数,m L /m g ;K a 多酚与αＧ葡萄糖苷酶的结合常数,m L /m g ;n 结合位点数;[Q ] 多酚质量浓度,m g/m L .１．４㊀数据处理每组数据平行测定３次,用O r i gi n２０２２绘图,用S P S S (１７．０)软件进行数据分析及显著性检验(P ＜０．０５).２㊀结果与分析２．１㊀总酚、黄酮和单宁含量５种香蕉果肉的总酚㊁黄酮和单宁含量见图１.不同品种香蕉果肉的总酚含量为４．５３~１１．５１m g G A E /gDW ,黄酮含量为６．２３~１１．７２m g R E /g DW ,单宁含量为３．７０~１２．７７m g C E /g DW .不同品种香蕉果肉的活性成分含量差异显著(P ＜０．０５),其中,N J Ｇ４２的总酚㊁黄酮和单宁含量均最高且显著高于其他品种的(P ＜０．０５).覃翠钠等[９]对比了５种香蕉的多酚含量,发现D P 的总酚含量高于D B ,A b o u l ＧE n e i n 等[２４]报道埃及不同品种香蕉的黄酮含量为８．５６~１６．１５m g 槲皮素/g DW ,与试验结果相似.而B a s h m i l 等[２５]研究表明,澳大利亚未成熟香蕉果肉的单宁含量为１．５２m g C E /g DW ,低于试验的测定结果,可能是不同的品种或提取溶剂造成的.此外,香蕉中活性物质的含量还与成熟度㊁提取方法等因素有关[２６],比如冷冻干燥技术可以使植物细胞的组织结构发生变化,促进活性成分的释放[２７].不同于以往研究中直接对鲜香蕉进行打浆处理,试验采用真空冷冻干燥法处理采后的香蕉,可能是其活性成分含量较高的原因.同组小写字母不同表示差异显著(P ＜０．０５图１㊀５种香蕉果肉的总酚㊁黄酮和单宁含量F i g u r e１㊀T h et o t a l p o l y ph e n o l ,f l a v o n e a n d t a n n i n s c o n t e n t i n f i v e v a r i e t i e s o f b a n a n a p u l ps ２．２㊀５种香蕉果肉多酚组成及含量超高效液相色谱表明香蕉果肉多酚中主要含有没食子酸㊁对羟基苯甲酸㊁儿茶素㊁咖啡酸㊁丁香酸㊁芦丁㊁槲皮素和山奈酚８种单体酚,标准品的H P L C 图谱见图２,各组分含量见表１.５种香蕉果肉中,N J Ｇ４２果肉的总多酚含量最高,其中单体酚含量最高的是儿茶素和芦丁,含量最低的是丁香酸;D B 果肉的总多酚含量最低,其中单体酚含量最高的是儿茶素,含量最低的是对羟基苯甲酸.A x e l l e 等[２８]检测了法国６种热带水果中的酚类组成,发现香蕉中含量最高的酚类化合物是表没食子儿茶素没食子酸酯,属于儿茶素类化合物.王娟等[２９]比较了不同提取工艺对香蕉皮中多酚含量的影响,发现香蕉皮中含有儿茶素㊁咖啡酸㊁芦丁等６种主要单体酚,其中儿茶素的含量最高,上述结果与试验结果相似.１．没食子酸㊀２．对羟基苯甲酸㊀３．儿茶素㊀４．咖啡酸㊀５．丁香酸㊀６．芦丁㊀７．槲皮素㊀８．山奈酚图２㊀多酚标准品H P L C 图F i g u r e ２㊀C h r o m a t o g r a mo f p o l y ph e n o l s t a n d a r d m i x t u r e２．３㊀５种香蕉果肉多酚提取物的抗氧化活性如图３所示,５种香蕉果肉对D P P H 自由基的清除能力差异较大,其中N J Ｇ４２(４８．６３m g T E /g DW )的清除能力最强,显著高于D P (４２．３８m g T E /g DW )(P ＜０．０５),而８１８８Ｇ１(１４．８１m g T E /g DW )的清除能力最弱.在不同国家生长的２３个变异香蕉品种的D P P H 抗氧化值为０．６８~６６．９m g T E /g [７],试验结果与部分品种较为接近.５种香蕉果肉均对A B T S 自由基有较强的清除能力,其清除能力变化范围为２０．０２~６３．９５m g T E /g DW ,N J Ｇ４２的清除能力最强,而D B 和８１８８Ｇ１的清除能力最弱.根据H a ge r m a n 等[３０]的研究,单宁作为高分子量酚类物质,具有较强的清除A B T S 自由基的能力,这也许是试验中香蕉果肉多酚有效清除A B T S 自由基的原因之一.香蕉果肉铁还原力的强弱与A B T S 自由基清除能力一致,其中,除D B 和８１８８Ｇ１外,品种之间有显著性差异(P ＜０．０５).６５１营养与活性N U T R I T I O N &A C T I V I T Y 总第２６６期|２０２３年１２月|表１㊀不同品种香蕉果肉中单体酚的含量†T a b l e １㊀C o n t e n t s o f f r e e p h e n o l s i nd i f f e r e n t v a r i e t i e s o f b a n a n a p u l ps m g /g品种没食子酸对羟基苯甲酸儿茶素咖啡酸丁香酸芦丁槲皮素山奈酚D P ０．８９ʃ０．０４d０．５６ʃ０．０５c５．４２ʃ０．４３b １．７１ʃ０．０３a １．２０ʃ０．０３a ３．３０ʃ０．０４b０．８３ʃ０．０８b０．３７ʃ０．０４cD B１．６５ʃ０．０５b ０．４１ʃ０．０１d ５．１６ʃ０．０２b ０．５６ʃ０．０４e ０．５０ʃ０．０２b ２．１９ʃ０．０４d －０．５４ʃ０．０６b G J Ｇ６１．２２ʃ０．２４c ０．５７ʃ０．０１c ５．６８ʃ０．０８b １．２７ʃ０．０２c １．０３ʃ０．１３a ２．７８ʃ０．０７c ０．９９ʃ０．０７b －N J Ｇ４２２．３７ʃ０．０４a ２．８３ʃ０．０６a ７．０８ʃ０．２４a １．４６ʃ０．０１b １．１６ʃ０．０１a ４．６９ʃ０．２８a ２．９１ʃ０．０４a １．３６ʃ０．０８a ８１８８Ｇ１０．８９ʃ０．０４d０．７４ʃ０．０３b４．４８ʃ０．１０c １．００ʃ０．０３d １．０１ʃ０．０４a ２．２３ʃ０．０６d０．４２ʃ０．０９c ０．４２ʃ０．０５b c㊀†㊀同列上标小写字母不同表示差异显著(P ＜０．０５); －表示未被检出.同组小写字母不同表示差异显著(P ＜０．０５图３㊀５种香蕉果肉多酚的抗氧化活性F i g u r e ３㊀A n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f p o l y ph e n o l s i n f i v e v a r i e t i e s o f b a n a n a p u l pH a n g 等[７]研究表明,不同品种香蕉多酚F R A P 抗氧化能力为０．３２~１７．６４m g T E /g,试验中,D B ㊁G J Ｇ６和８１８８Ｇ１３种香蕉果肉的结果均处于该范围内,而N J Ｇ４２(３０．０８m g T E /g DW )和D P (２８．２０m g T E /g DW )高于该研究结果,这是因为果实的抗氧化活性会因地理位置㊁品种㊁收获或贮藏时间的不同而有所差异.综上,５个香蕉品种的体外抗氧化能力可排序为N J Ｇ４２＞D P ＞G J Ｇ６＞D B ＞８１８８Ｇ１,这一结果也与总酚含量的大小排序一致.研究[３１]表明,许多植物来源物质的抗氧化活性与酚类含量成正比,因此总酚含量与抗氧化活性之间可能存在因果关系.２．４㊀５种香蕉果肉多酚对αＧ葡萄糖苷酶的抑制能力如图４所示,阿卡波糖和５种香蕉果肉多酚均能有效抑制αＧ葡萄糖苷酶的活性,且抑制效果呈明显的浓度依赖性.由表２可知,５种香蕉果肉多酚抑制αＧ葡萄糖苷酶的I C ５０值的顺序为D B＞８１８８Ｇ１＞G J Ｇ６＞D P＞N J Ｇ４２.其中,N J Ｇ４２果肉多酚抑制αＧ葡萄糖苷酶的效果最强,D B 果肉多酚提取物对αＧ葡萄糖苷酶的抑制作用最弱.虽然５种香蕉果肉多酚对αＧ葡萄糖苷酶的抑制作用均低于阿卡波糖[I C ５０为(２２．１３ʃ０．６８)μg /m L ],但其酶抑制作用结果仍表明香蕉果肉多酚可以作为αＧ葡萄糖苷酶的有效抑制剂,即香蕉果肉多酚可替代现有的部分治疗药物,进图种香蕉多酚对αＧ葡萄糖苷酶的抑制F i g u r e ４㊀I n h i b i t i o ne f f e c t s o f αＧg l u c o s i d a s eb y fi v e b a n a n a s p h e n o l i c s a n da c a r b o s e表２㊀５种香蕉果肉多酚抑制αＧ葡萄糖苷酶的I C ５０值†T a b l e ２㊀I C ５０va l u e s o f f i v eb a n a n a p u l p s i n h i b i t i n g αＧgl u c o s i d a s e 品种I C ５０/(μg m L －１)D P３９．８２ʃ４．９５d D B２１９．９０ʃ１０．４３aG J Ｇ６９９．３５ʃ０．９６c N J Ｇ４２２８．１１ʃ２．０９e ８１８８Ｇ１１５６．９２ʃ２．４７b ㊀㊀㊀㊀†㊀同列上标小写字母不同表示差异显著(P ＜０．０５).而减少药物的摄入.２．５㊀多酚各组分与抗氧化活性和αＧ葡萄糖苷酶抑制能力的相关性㊀㊀由表３可知,咖啡酸㊁丁香酸㊁芦丁㊁槲皮素与αＧ葡萄糖苷酶的I C ５０值相关性最好,具有极显著相关性(P ＜０．００１),儿茶素与αＧ葡萄糖苷酶的I C ５０值相关性次之,具有较显著的相关性(P ＜０．０１),而没食子酸和山奈酚与之的相关性较弱.研究[３２]表明,黄酮类物质对αＧ葡萄糖苷酶活性具有很强的抑制作用,结合H P L C 鉴定的结果,芦丁可能是香蕉果肉多酚中对αＧ葡萄糖苷酶活性的抑制贡献较大的化合物,高芦丁含量使其能较好地发挥对αＧ葡萄糖苷酶的抑制作用.７５１|V o l ．３９,N o ．１２冉静凤等:５种香蕉果肉多酚的抗氧化活性和抑制αＧ葡萄糖苷酶活性表３㊀香蕉果肉中主要成分与抗氧化活性和αＧ葡萄糖苷酶抑制的I C５０的相关数值†T a b l e３㊀C o r r e l a t i o nv a l u e s o fm a j o r p h e n o l i c c o m p o n e n t s i nb a n a n a p u l p a n da n t i o x i d a n t a c t i v i t y a n dI C５０v a l u e o fαＧg l u c o s i d a s e i n h i b i t i o n指标G A E P H B A C E C A E S A E R E Q E K E D P P H A B T S F R A P I C５０G A E１．０００P H B A０．７７６∗∗１．０００C E０．７４０∗∗０．７９０∗∗１．０００C A E－０．０６８０．３５４０．４４７１．０００S A E－０．０６５０．３９６０．３２８０．８７８∗∗１．０００R E０．６１６∗０．８６７∗∗０．８２７∗∗０．６７１∗∗０．５７６∗１．０００Q E０．６７１∗∗０．９４３∗∗０．８４６∗∗０．５７８∗０．５６８∗０．９４４∗∗１．０００K E０．７９１∗∗０．８９２∗∗０．６３９∗０．１１７０．１３２０．７０６∗∗０．７３０∗∗１．０００D P P H０．５８０∗０．６１３∗０．６８３∗∗０．４８２０．２４２０．７７５∗∗０．６１８∗０．７１２∗∗１．０００A B T S０．４５１０．７０９∗∗０．７３６∗∗０．７８９∗∗０．６１９∗０．９０６∗∗０．７９９∗∗０．６３１∗０．８９３∗∗１．０００F R A P０．３９１０．６５５∗∗０．６８３∗∗０．７９６∗∗０．６１３∗０．８８２∗∗０．７４７∗∗０．６０４∗０．９０３∗∗０．９９４∗∗１．０００I C５０－０．２１９－０．５９９∗－０．６５５∗∗－０．９５０∗∗－０．８２４∗∗－０．８５１∗∗－０．７８２∗∗－０．３７４－０．６５６∗∗－０．９１９∗∗－０．９０７∗∗１．０００㊀†㊀G A E㊁P H B A㊁C E㊁C A E㊁S A E㊁R E㊁Q E㊁K E分别代表没食子酸㊁对羟基苯甲酸㊁儿茶素㊁咖啡酸㊁丁香酸㊁芦丁㊁槲皮素和山奈酚的含量;∗相关性在０．０５水平显著,∗∗相关性在０．０１水平显著.㊀㊀由表３还可知,香蕉果肉多酚各组分均与其抗氧化值有不同程度的相关性,说明香蕉的抗氧化能力可能与其酚类组成相关.其中,儿茶素㊁芦丁和D P P H抗氧化值㊁A B T S抗氧化值㊁F R A P抗氧化值均具有极显著的相关性,这是因为黄酮类化合物对多酚抗氧化活性有贡献[３３].此外,酚类物质的抗氧化能力还取决于它们的分子量㊁芳香环的数量以及附着在芳香环上的羟基的数量和位置[３４].２．６㊀N JＧ４２果肉多酚抑制αＧ葡萄糖苷酶活性的机制２．６．１㊀动力学分析㊀由图５可知,N JＧ４２果肉多酚的L i n e w e a v eＧB u r k曲线呈良好的线性关系,且相交于第二象限.由表４可知,随着多酚质量浓度的增加,V m a x值下降(P＜０．０５),K m值上升(P＜０．０５),表明香蕉果肉多酚对αＧ葡萄糖苷酶是混合型抑制,该结果与谢星等[２３]报道的海蒿子多酚的混合型抑制作用类似,即N JＧ４２果肉多酚既可以与αＧ葡萄糖苷酶结合,也可与酶 底物复合物结合.㊀㊀由表４可知,香蕉果肉多酚的K i c值(４．８４μg/m L)低于K i u值(１８．３８μg/m L),其商为３．７９(介于２．０~５．０),表图多酚抑制αＧ葡萄糖苷酶的L i n e w e a v e rＧB u r k曲线F i g u r e５㊀L i n e w e a v e rＧB u r k p l o t so f t h e i n t e r a c t i o no fαＧg l u c o s i d a s ew i t hN JＧ４２p u l pp h e n o l i c s明在混合型抑制中竞争型抑制占主导地位,即N JＧ４２果肉多酚与αＧ葡萄糖苷酶的结合能力强于酶 底物复合物[３５].２．６．２㊀荧光淬灭分析㊀如图６所示,当激发波长位于２９５n m时,在３３０~３４０n m出现αＧ葡萄糖苷酶的最大发表４㊀N JＧ４２多酚与αＧ葡萄糖苷酶作用后的抑制动力学参数†T a b l e４㊀K i n e t i c p a r a m e t e r s f o r t h e i n h i b i t i o no fαＧg l u c o s i d a s eb y b a n a n a p h e n o l i c s多酚质量浓度/ (μg m L－１)V m a x/(mm o l L－１ m i n－１)K m/(mm o l L－１)K i c/(μg m L－１)K i u/(μg m L－１)００．５２a１．４２d－－２００．３７b２．７８c４．８４１８．３８３００．３０c３．３７b４００．２４d４．１１a㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀†㊀同列上标小写字母不同表示差异显著(P＜０．０５).８５１营养与活性N U T R I T I O N&A C T I V I T Y总第２６６期|２０２３年１２月|图种温度下果肉多酚与αＧ葡萄糖苷酶相互作用的荧光光谱及图F i g u r e ６㊀F l u o r e s c e n c e s p e c t r a o f t h e i n t e r a c t i o no fN J Ｇ４２p u l pp o l y p h o n i cw i t hαＧgl u c o s i d a s e a t ２９７．１５K ,３０３．１５Ka n d３０７．１５K ,a n dS t e r n ＧV o l m e r p l o t s射峰.同时,最大发射峰的荧光强度随N J Ｇ４２果肉多酚质量浓度的增加而降低,且最大发射波长出现轻微蓝移,W u 等[３６]研究的橡子仁多酚与αＧ葡萄糖苷酶相互作用的荧光淬灭也呈现了类似的特征.荧光强度的降低表明N J Ｇ４２果肉多酚可以通过与αＧ葡萄糖苷酶结合来淬灭酶的固有荧光,改变了酶的构象;微弱的蓝移表明αＧ葡萄糖苷酶周围微环境的极性降低[３６].此外,从表５可知,K a值随反应温度的升高而升高,表明N J Ｇ４２果肉多酚与αＧ葡萄糖苷酶的亲和力随温度的升高而变强,推测其淬灭过程可能为放热反应[１６].表５㊀N J Ｇ４２果肉多酚抑制αＧ葡萄糖苷酶的荧光淬灭参数和结合常数T a b l e ５㊀F l u o r e s c e n c e q u e n c h i n gp a r a m e t e r s a n db i n d i n gc o n s t a n t so f N J Ｇ４２p u l p p o l y p h e n o li n h i b i t i n gαＧg l u c o s i d a s e a t d i f f e r e n t t e m pe r a t u r e s T /KK s v/(m L m g－１)K a/(m L m g－１)n２９７．１５０．４９３１．０２０１．７７８３０３．１５０．５４４１．２７４１．９５４３０７．１５０．５６６１．３９１１．９５０３㊀结论㊀㊀研究利用超声辅助醇提法萃取５种香蕉果肉多酚并测定其抗氧化活性和对αＧ葡萄糖苷酶活性的抑制能力,发现５种香蕉果肉多酚提取液均有抗氧化活性,但存在一定差异,其中N J Ｇ４２的抗氧化能力最强,８１８８Ｇ１的抗氧化能力最弱.通过单体酚的检测发现儿茶素和芦丁是香蕉多酚中含量最高的单体酚.此外,５种香蕉果肉多酚均对αＧ葡萄糖苷酶有抑制作用,其中N J Ｇ４２果肉多酚通过混合型抑制的方式抑制酶活,竞争型抑制占主导地位,与αＧ葡萄糖苷酶的相互作用为放热反应,在５种香蕉果肉多酚中抑制效果最优.以上研究结果表明,香蕉果肉可以作为良好的植物多酚来源用于制备αＧ葡萄糖苷酶选择性抑制剂.后续可深入研究香蕉果肉多酚对其他降血糖相关酶的抑制能力,为香蕉果肉在食品工业中的开发及应用以及香蕉果肉多酚的高值化利用提供理论依据.参考文献[1]LI B,XIE B G,LIU J,et al.A study of starch resources with high Ｇamylose content from five Chinese mutant banana species [J ].Frontiers in Nutrition,2022,9:1073368.[2]SINGH B,SINGH J P,KAUR A,et al.Bioactive compounds in banana and their associated health benefits:A review [J ].Food９５１|V o l ．３９,N o ．１２冉静凤等:５种香蕉果肉多酚的抗氧化活性和抑制αＧ葡萄糖苷酶活性Chemistry,2016,206:1Ｇ11.[3]王梦阳.香蕉皮膳食纤维的理化性质及其降血糖效果的研究[D].合肥:合肥工业大学,2022:1Ｇ5.WANG M Y.Study on physicochemical properties and hypoglycemic effect of banana peel dietary fiber[D].Hefei:Hefei University of Technology,2022:1Ｇ5.[4]AURORE G,PARFAIT B,FAHRASMANE L.Bananas,rawmaterials for making processed food products[J].Trends in Food Science&Technology,2009,20(2):78Ｇ91.[5]KAN L J,CAPUANO E,FOGLIANO V,et al.Inhibition of αＧglucosidases by tea polyphenols in rat intestinal extract and CacoＧ2cells grown on Transwell[J].Food Chemistry,2021,361:130047.[6]UMENO A,HORIE M,MUROTOMI K,et al.Antioxidative andantidiabetic effects of natural polyphenols and isoflavones[J].Molecules(Basel,Switzerland),2016,21(6):708.[7]HANG T V,SCARLETT C J,QUAN V V.Phenolic compoundswithin banana peel and their potential uses:A review[J].Journal of Functional Foods,2018,40:238Ｇ248.[8]彭思琪,王娟.香蕉皮总黄酮的提取及其抗氧化和抑制酪氨酸酶的活性[J].食品研究与开发,2022,43(20):132Ｇ140.PENG S Q,WANG J.Antioxidant activity and inhibition on tyrosinase of total flavonoids extracted from banana peels[J].Food Research&Development,2022,43(20):132Ｇ140.[9]覃翠钠,李志春,何雪梅,等.基于成熟度研究不同品种香蕉多酚含量及抗氧化活性的差异[J].食品工业科技,2022,43(22): 52Ｇ60.QIN C N,LI Z C,HE X M,et al.Polyphenol content and antioxidant capacity from banana with different varieties and maturity[J].Science&Technology of Food Industry,2022,43(22): 52Ｇ60.[10]柯薇.香蕉皮中多酚类物质的抑菌活性研究[J].现代食品, 2016(15):93Ｇ95.KE W.Study on antimicrobial activity of polyphenols from banana peel[J].Modern Food,2016(15):93Ｇ95.[11]郭丽萍.香蕉皮中多酚物质抗氧化性能的研究[D].南宁:广西大学,2006:56Ｇ67.GUO L P.Study on antioxidant activity of polyphenol from banana peel[D].Nanning:Guangxi University,2006:56Ｇ67.[12]陈超.刺梨多酚黄酮类物质分离纯化㊁降血糖活性及机理研究[D].贵阳:贵州大学,2022:4Ｇ8.CHEN C.Study on the purification,hypoglycemic activity and mechanism of polyphenol flavonoids of Roxanthia Roxanthi[D]. Guiyang:Guizhou University,2022:4Ｇ8.[13]PAPOUTSIS K,ZHANG J Y,BOWYER M C,et al.Fruit,vegetables,and mushrooms for the preparation of extracts with αＧamylase andαＧglucosidase inhibition properties:A review[J].Food Chemistry,2021,338:128119.[14]张顺,惠哲哲,王宏亮,等.玉兰叶多酚物质提取及特性研究[J/ OL].中国粮油学报.(2023Ｇ04Ｇ19)[2023Ｇ05Ｇ16].https:///10.20048/ki.issn.1003Ｇ0174.000177.ZHANG S,HUI Z Z,WANG H L,et al.Extraction and characteristics of magnolia polyphenols[J/OL].Journal of the Chinese Cereals and Oils Association.(2023Ｇ04Ｇ19)[2023Ｇ05Ｇ16]. https:///10.20048/ki.issn.1003Ｇ0174.000177.[15]LIU Y,CHEN L,XU H,et al.Understanding the digestibility of rice starchＧgallic acid complexes formed by high pressure homogenization[J].International Journal of Biological Macromolecules,2019,134:856Ｇ863.[16]杨成峻,陈明舜,刘成梅,等.花椒果皮多酚类成分鉴定及降血糖活性[J].食品科学,2023,44(2):271Ｇ278.YANG C J,CHEN M S,LIU C M,et al.Chemical composition and hpyerglycemic activity of phenolic extract from Zanthoxylum bungeanum pericarps[J].Food Science,2023,44(2):271Ｇ278.[17]FENG Y,DUNSHEA F R,SULERIA H A R.LCＧESIＧQTOF/MScharacterization of bioactive compounds from black spices and their potential antioxidant activities[J].Journal of Food Science& Technology,2020,57(1):4671Ｇ4687.[18]ZHANG R Q,ZENG Y,DENG M,et al.Phenolic profiles andantioxidant activity of litchi pulp of different cultivars cultivated in Southern China[J].Food Chemistry,2013,136(3):1169Ｇ1176.[19]肖星凝,李苇舟,石芳,等.不同品种李子多酚组成及抗氧化活性[J].食品科学,2017,38(15):31Ｇ37.XIAO X N,LI W Z,SHI F,et al.Antioxidant activity and phenolic contents of peel and pulp of different plum varieties[J].Food Science,2017,38(15):31Ｇ37.[20]韦芳媚.桑叶提取物㊁茶多酚及其复配物的抗氧化和降血糖活性[D].广州:华南理工大学,2019:28Ｇ44.WEI F M.Antioxidant and hypoglycemic activities of mulberry leaf extract,tea polyphenols and their compounds[D].Guangzhou: South China University of Technology,2019:28Ｇ44.[21]郭俊彤.覆盆子多酚的提取㊁抗氧化活性及胃肠道可及性研究[D].西安:陕西师范大学,2021:20Ｇ37.GUO J T.Study on extraction,antioxidant activity and gastrointestinal accessibility of raspberry polyphenols[D].Xi an: Shaanxi Normal University,2021:20Ｇ37.[22]廖天柱.六种含笑属植物提取物的多酚成分及生物活性研究[D].长沙:中南林业科技大学,2022:22Ｇ39.LIAO T Z.Study on polyphenol constituents and biological activities of extracts of six Michelia L.species[D].Changsha: Central South University of Forestry and Technology,2022:22Ｇ39.[23]谢星,王思宇,王佩欣,等.海蒿子多酚组分的化学成分㊁抗氧化和降血糖活性分析[J].食品科学,2023,44(10):281Ｇ290.XIE X,WANG S Y,WANG P X,et al.Chemical composition, antioxidant and hypoglycemic activities of phenolics fractions from Sargassum pallidum[J].Food Science,2023,44(10):281Ｇ290.[24]ABOULＧENEIN A M,SALAMA Z A,GAAFAR A A,et al.Identification of phenolic compounds from banana peel(Musa paradaisica L.)as antioxidant and antimicrobial agents[J].Journal０６１营养与活性N U T R I T I O N&A C T I V I T Y总第２６６期|２０２３年１２月|of Chemical and Pharmaceutical Research,2016,8:46Ｇ55. [25]BASHMIL Y M,ALI A,BK A,et al.Screening andcharacterization of phenolic compounds from Australian grown bananas and their antioxidant capacity[J].Antioxidants,2021,10: 1521.[26]LI D N,MENG X J,LI B.Profiling of anthocyanins from blueberries produced in China using HPLCＧDADＧMS and exploratory analysis by principal component analysis[J].Journal of Food Composition and Analysis,2016,47:1Ｇ7.[27]CASTAGNINI J M,BETORET N,BETORET E,et al.Vacuumimpregnation and air drying temperature effect on individual anthocyanins and antiradical capacity of blueberry juice included into an apple matrix[J].LWTＧFood Science and Technology,2015, 64(2):1289Ｇ1296.[28]AXELLE S M,GIOVEDIE S,ELISABETH D,et al.Evaluation ofnutritional and antioxidant properties of the tropical fruits banana, litchi,mango,papaya,passion fruit and pineapple cultivated in Réunion French Island[J].Food Chemistry,2016,212:225Ｇ233.[29]王娟,谢静,张伟,等.香蕉皮中6种多酚的HPLC检测及制备工艺研究[J].食品工业,2016,37(3):187Ｇ190.WANG J,XIE J,ZHANG W,et al.Determination and preparation of six polyphenols in banana peel by HPLC method and the influence of extraction condition on components contents[J].Food Industry,2016,37(3):187Ｇ190.[30]HAGERMAN A E,RIEDL K M,JONES G A,et al.Highmolecular weight plant polyphenolics(tannins)as biological antioxidants[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1998, 46:1887Ｇ1892.[31]RICEＧEVANS C,MILLER N,PAGANGA G.Antioxidantproperties of phenolic compounds[J].Trends in Plant Science, 1997,2(4):152Ｇ159.[32]CARDULLO N,MUCCILI V,PULVIRENTI L,et al.CＧglucosidicellagitannins and galloylated glucoses as potential functional food ingredients with antiＧdiabetic properties:A study ofαＧglucosidase andαＧamylase inhibition[J].Food Chemistry,2020,313:126099.[33]ABDENNACER B,KARIM M,YASSINE M,et al.Determinationof phytochemicals and antioxidant activity of methanol extracts obtained from the fruit and leaves of Tunisian Lycium intricatum Boiss[J].Food Chemistry,2014,174:577Ｇ584.[34]LI H B,WONG C C,CHENG K W,et al.Antioxidant properties invitro and total phenolic contents in methanol extracts from medicinal plants[J].LWTＧFood Science and Technology,2008,41 (3):385Ｇ390.[35]NI M T,HU X,GONG D M,et al.Inhibitory mechanism of vitexinonαＧglucosidase and its synergy with acarbose[J].Food Hydrocolloids,2020,105:105824.[36]WU M X,YANG Q X,WU Y W,et al.Inhibitory effects of acorn (Quercus variabilis Blume)kernelＧderived polyphenols on the activities ofαＧamylase,αＧglucosidase,and dipeptidyl peptidase IV [J].Food Bioscience,2021,43(4):101224.(上接第１３８页)[12]韩馨仪,赵松松,刘斌,等.分体式空调室内气流组织CFD仿真优化[J].制冷与空调,2021,21(11):41Ｇ45.HAN X Y,ZHAO S S,LIU B,et al.CFD simulation and optimization of indoor air flow organization in split air conditioning[J]. Refrigeration and AirＧConditioning,2021,21(11):41Ｇ45.[13]王少鹏,张益诚,罗君,等.基于空气制冷系统的高密度冷库降温 维持工况仿真计算特性分析[J].船海工程,2022,15(5): 37Ｇ41.WANG S P,ZHANG Y C,LUO J,et al.Simulation calculation of cooling and maintenance condition of high density cold storage based on air refrigeration system[J].Ship&Ocean Engineering, 2022,15(5):37Ｇ41.[14]段宇飞,寿旭日,童欢,等.船用高温冷库气流组织对温度分布的影响[J].船舶工程,2021,43(12):126Ｇ131,171.DUAN Y F,SHOU X R,TONG H,et al.Effect of air distribution on temperature distribution in marine high temperature cold storage[J].Ship Engineering,2021,43(12):126Ｇ131,171.[15]沈希,王晓燕,黄跃进,等.制冷压缩机变工况运行的热力性能研究[J].制冷学报,2009,30(6):15Ｇ19.SHEN X,WANG X Y,HUANG Y J,et al.Thermodynamic performance of refrigeration compressor running at variable condition[J].Journal of Refrigeration,2009,30(6):15Ｇ19. [16]张晟,张晓虎,赵亮,等.基于Ergun方程的菱镁球团填充床层阻力特性实验[J].东北大学学报(自科学版),2021,42(3): 347Ｇ352.ZHANG S,ZHANG X H,ZHAO L,et al.Experiment of resistance characteristics for magnesite pellets packed bed based on ergun equation[J].Journal of Northeastern University(Natural Science), 2021,42(3):347Ｇ352.(上接第１５２页)[31]YI R K,WEI Y X,TAN F G,et al.Antioxidant capacityＧrelatedpreventive effects of Shoumei(slightly fermented Camellia sinensis)polyphenols against hepatic injury[J].Oxidative Medicine and Cellular Longevity,2020,2020(19):1Ｇ17.[32]蒋丽,殷劲.当归红花汤对糖酵解供能条件下力竭性游泳训练小鼠耐缺氧能力㊁抗疲劳能力的影响[J].中国老年学杂志, 2013,33(18):4492Ｇ4494.JIANG L,YIN Q.Effects of Danggui Honghua decoction on hypoxia tolerance and fatigue resistance of exhaustive swimming training mice under glycolysis energy supply condition[J].Chinese Journal of Gerontology,2013,33(18):4492Ｇ4494.１６１|V o l．３９,N o．１２冉静凤等:５种香蕉果肉多酚的抗氧化活性和抑制αＧ葡萄糖苷酶活性基金项目:国家十三五重点研发计划项目(编号:２０１９Y F D ０９０１９０２);国家自然科学基金项目(编号:３１９７２０１７)作者简介:滕薇,女,硕士.通信作者:吴金鸿(１９７８ ),女,上海交通大学研究员,博士.E Ｇm a i l :w u j i n h o n g ＠s jt u ．e d u ．c n 收稿日期:２０２３Ｇ０７Ｇ２３㊀㊀改回日期:２０２３Ｇ１１Ｇ１５D O I :１０．１３６５２/j ．s p j x ．１００３．５７８８．２０２３．８０６９３[文章编号]１００３Ｇ５７８８(２０２３)１２Ｇ０１６２Ｇ０９酶解 膜分离耦合连续制备抗氧化性小分子透明质酸C o n t i n u o u s p r e p a r a t i o no f a n t i o x i d a n t l o w m o l e c u l a rw e i g h t h ya l u r o n i c a c i db yc o u p l i n g o f e n z y m o l y s i s a n dm e m b r a n e s e pa r a t i o n 滕㊀薇１T E N G W e i １㊀刘俊辉２L I UJ u n h u i ２㊀吴金鸿１WUJ i n h o n g １㊀刘树滔２LI US h u t a o ２(１．上海交通大学农业与生物学院,上海㊀２００２４０;２．福州大学生物工程研究所,福建福州㊀３５０００２)(１．C o l l e g e o f A g r i c u l t u r e a n dB i o l o g y ,S h a n g h a i J i a oT o n g U n i v e r s i t y ,S h a n gh a i ２００２４０,C h i n a ;２．I n s t i t u t e o f B i o t e c h n o l o g y ,F u z h o uU n i v e r s i t y ,F u z h o u ,F u ji a n ３５０００２,C h i n a )摘要:目的:构建一种酶解 膜分离耦合的方法用来提高小分子透明质酸的生产效率.方法:利用酶生物反应罐与平板式聚醚砜超滤膜分离组件组成的连续式酶解 膜分离耦合反应体系.以膜通量㊁膜污染㊁透过液透明质酸质量浓度㊁产率为评价指标,系统地考察各因素对酶膜耦合体系内两种不同相对分子质量透明质酸分离效果的影响,并以产率为指标进一步通过正交试验优化酶膜耦合反应的工艺参数.结果:酶膜耦合反应体系制备小分子透明质酸的最优工艺参数为搅拌速度２００r /m i n ㊁跨膜压力０．１５m P a ㊁酶解时间４．０h ㊁加酶量５g /１００g .该条件下可以快速制备并分离出两种不同相对分子质量(M r )的小分子透明质酸,实现一步法同时制备M r 在１万~５万的低相对分子质量透明质酸(L MW ＧHA )和M r ＜３０００的透明质酸寡糖(O ＧHA ),且这两种不同相对分子质量透明质酸均具有清除D P P H 自由基和羟自由基的能力.结论:酶解 膜分离耦合法可以连续同步生产具有不同相对分子质量和一定抗氧化性的L MW ＧHA 和O ＧHA .关键词:酶膜耦合反应;透明质酸;工艺优化;抗氧化;连续制备A b s t r a c t :O b je c t i v e :T h i s s t u d y a i m e d t o c o n s t r u c t a n e n z y m o l y s i sa n d m e m b r a n es e p a r a t i o n m e t h o dt oi m p r o v et h e p r o d u c t i o nef f i c i e n c y o fl o w m o l e c u l a rh ya l u r o n i ca c i d (H A )．M e t h o d s :A c o n t i n u o u se n z y m o l y s i sa n d m e mb r a n es e p a r a t i o nc o u p l i n g r e a c t i o ns y s t e m w a sde s i gn e d ,w h i c hc o n s i s t e do fa n e n z y m e b i o l o g i c a l r e a c t i o n t a n k a n d a f l a t p o l y e t h e r s u l f o n e u l t r a f i l t r a t i o n m e m b r a n e s e p a r a t i o n m o d u l e ．B y e v a l u a t i n g m e m b r a n e f l u x ,m e m b r a n e c o n t a m i n a t i o n ,h ya l u r o n i c a c i d c o n c e n t r a t i o n ,a n d y i e l d ,t h ee f f e c t so fv a r i o u sf a c t o r so nt h e s e p a r a t i o n o f l o w m o l e c u l a r H A i n t h e e n z y m e Ｇm e mb r a n ec o u p l i n g s y s t e m w e r es y s t e m a t i c a l l y i n v e s t i g a t ed ．T he p r o c e s s p a r a m e t e r s of t h e e n z y m e Ｇm e m b r a n e c o u p l i ng r e a c t i o n w e r e f u r th e r o p ti m i z e dt h r o u g ho r t h o g o n a l e x p e r i m e n t s ．R e s u l t s :T h e o p t i m a l p r o c e s s p a r a m e t e r s f o r t h e p r e p a r a t i o no f l o w m o l e c u l a r h y a l u r o n i ca c i db y e n z y m e Ｇm e m b r a n ec o u p l i n g r e a c t i o ns ys t e m w e r e a s t i r r i n g s pe e dof ２００r /m i n ,t r a n s m e m b r a n e p r e s s u r eo f ０．１５m P a ,e n z y m o l y s i st i m eo f４．０h ,a n de n z y m ed o s ag eo f ５g /１００g ．I nthi s m e t h o d ,t w ol o w m o l e c u l a rh y a l u r o n i ca c i d s w i t hd i f f e r e n tm o l e c u l a rw e i g h t s (M r )c a nb e q u i c k l yp r e p a r e d a n d s e p a r a t e d ,t h e l o w m o l e c u l a rw e i g h t h y a l u r o n i c a c i d (L MW ＧHA )w i t h Mw b e t w e e n １００００~５００００a n d t h e H Ao l i g o s a c c h a r i d e s (O ＧH A )w i t h M r ＜３０００c a n b e p r e pa r e d r a p i d l yb y o n e Ｇs t e p a p p r o ac h ．B o t ho f t h e s ed i f fe r e n t m o l e c u l a r w e i g h t s h y a l u r o n i c a c i dc o u l ds c a v e n g eD P P H a n dh y d r o x yl f r e e r a d i c a l s ．C o n c l u s i o n :T h ee n z y m o l y s i sa n d m e m b r a n es e p a r a t i o n c o u p l i n g m e t h o d p r o v i d e sa ne f f i c i e n t m e t h o df o rs i m u l t a n e o u s a n d c o n t i n u o u s p r o d u c t i o n o f L MW ＧH Aa n dO ＧH Aw i t h d i f f e r e n t m o l e c u l a rw e i g h t s a n d c e r t a i na n t i o x i d a n t p r o pe r t i e s ．K e yw o r d s :e n z y m em e m b r a n e r e a c t o r s ;h y a l u r o n i ca c i d ;p r o c e s s o p t i m i z a t i o n ;a n t i o x i d a t i o n ;c o n t i n u o u s p r e pa r a t i o n 透明质酸(h ya l u r o n i c a c i d ,HA )是细胞外基质的主要成分,广泛分布于人体组织和体液,具有免疫调节㊁抗炎和抗氧化等多种生物活性[１－２].当前,透明质酸钠已被批准为 新食品原料 ,可以添加到多种食品中[３],并且口２６１F O O D &MA C H I N E R Y 第３９卷第１２期总第２６６期|２０２３年１２月|。