江西省汉坦病毒分离及其S和M基因特征分析

附件6 RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型材料：（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分离的汉坦病毒（2）引物：引物序列（5’～3’）位置片段（bp）逆转录引物TAGTAGTAGACTCC 1~14 LMS通用外引物AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG 1910~1939 M(+) GTACAICCTGTRCCIACCCC 2373~2354 M(-)型特异性引物汉滩病毒GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC 1958~1984 M(+) GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC 2318~2340 M(－) 汉城病毒GTGGACTCTTCTTCTCATTATT 1936~1957 M(+) TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG 2331~2353 M(－) S片段引物ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG 1200~1220 S(+) GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA 1670~1696 S(-)方法：（1）病毒RNA的提取：采用TRIzol按说明提取，制备模板RNA；（2）逆转录、合成cDNA：采用SuperScrip TM II或AMV逆转录酶，按说明书进行；（3）PCR扩增：反应条件为95℃预变性10分钟，94℃60秒、55℃60秒、72℃45秒、扩增30～35个循环，72℃延伸12分钟。

（4）扩增产物用1～2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。

若条带的分子量与预期片段大小相同，则表明为特异性扩增产物。

必要时，可进行：（5）PCR片段的回收和核苷酸序列测定：切下特异分子量条带，用QIAquick 凝胶回收试剂盒回收（按其说明书进行），自动测序仪测序。

意义：扩增到特异性条带可确诊汉坦病毒并明确其型别，序列测定还可以对汉坦病毒的变异情况进行研究。

【疾病名】流行性出血热【英文名】epidemic hemorrhagic fever【缩写】【别名】epidemic；Far East hemorrhagic fever；hemorrhagic disease；hemorrhagic fever with renal syndrome；HFRS；Korean hemorrhagic nephrosonephritis；nephropathia epidemica；Nidoko disease；Songo fever；出血热肾病综合征；出血性肾变病肾炎；肾综合征出血热；朝鲜出血性肾病肾炎；出血性肾炎肾病；流行性肾病【ICD号】A99【概述】流行性出血热(epidemic hemorrhagic fever，EHF)是一种由病毒传染的自然疫源性疾病，流行广泛，危害严重。

至今，流行性出血热还是一种严重危害我国广大人民群众健康的传染性疾病。

流行性出血热在不同的国家和地区，由于其病原、流行病学及临床特征不同，曾有过多种不同的名称。

如我国和日本将其称之为“流行性出血热”；朝鲜称之为“朝鲜出血热”；苏联称之为“出血性肾炎肾病”；北欧称之为“流行性肾病”等。

实际上，不同国家和地区的流行性出血热，无一例外地都有不同程度的肾脏损害，故1982年世界卫生组织(WHO)统一将其命名为“肾综合征出血热”(hemorrhagic fever withrenal syndrome，HFRS)。

【流行病学】本病是世界性流行疾病，目前世界上有31个国家和地区流行本病。

但主要流行于亚洲的我国和韩国，次为欧洲的俄罗斯、芬兰和前南斯拉夫等国。

非洲和美洲的病例较少，在世界各国中我国是重疫区，20世纪50年代报告病例为数以百计，60年代数以千计，70年代则数以万计，80年代高达10万计。

通过灭鼠等防治措施，以及农民住房条件的改善，90年代以来发病人数有所下降。

目前除青海和新疆尚未发现病例外，其余30个省市、自治区均有病例报告，包括台湾。

5株鼠样品中分离汉坦病毒毒株S基因序列比较与分析胡群;邹春颖;马思杰;童淑梅;梅勇【摘要】目的了解近年来从宁波口岸捕获的鼠类样品中分离的5个汉坦病毒株遗传学差异.方法利用RT-PCR方法,对5个汉坦病毒株S基因全长进行扩增、克隆和测序,并将这5个毒株的S基因序列分别与GenBank登录的20个汉坦病毒感毒株进行比较分析.结果 DX1507株和DX1408株S基因核苷酸序列长度为1766 bp与汉城型(SEOV)病毒株Rn-DH27同源性最为接近,LJ1112株S基因核苷酸序列长度为1772 bp与汉城型(SEOV)病毒株Cherwell同源性最为接近,DX0903株和BL1402株S基因核苷酸序列长度为1725 bp与大别山型(DABV)病毒株Yongjia-Nc-95和Yongjia-Nc-38同源性最为接近.结论宁波口岸分离到的汉坦病毒株分别为汉城型和大别山型,对宁波口岸开展汉坦病毒传播防控有重要意义.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2016(032)005【总页数】4页(P502-505)【关键词】汉坦病毒;宁波;序列分析;S基因【作者】胡群;邹春颖;马思杰;童淑梅;梅勇【作者单位】大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812【正文语种】中文【中图分类】R373汉坦病毒(Hantavirus, HV)是重要的人兽共患病病原体，人类感染HV后主要导致2种严重疾病，即肾综合征出血热(hemorrhagic fever withrenal syndrome，HFRS)和汉坦病毒肺综合征(hantaviruspulmonary syndrome，HPS)。

HV流行范围之广泛、危害严重，已经成为一个全球性的公共卫生问题[1-2]，近年来不断有新型或新亚型病毒被发现，已知HV至少可分为40个血清型/基因型，其中已证实至少有22个型的HV可引起人类疾病[3-4]。

一株肉种鸡坦布苏病毒的分离鉴定及致病特点研究
王友;李培勇;段宝敏
【期刊名称】《家禽科学》
【年(卷),期】2024(46)6
【摘要】2010年坦布苏病毒传入我国,对我国养鸭业造成损失。

随后发现,此病毒也能够感染鸡群,对养鸡场生物安全形成威胁。

本研究从发生不明原因产蛋率下降的肉种鸡中分离到一株坦布苏病毒HB20210株,发病鸡群主要剖检病变为卵泡膜出血和卵泡液化等生殖系统病变。

将分离株接种到DF-1细胞和SPF鸡胚中,48 h 后即可出现明显病变。

动物试验结果表明,胸肌注射、颈部皮下注射和灌服的攻毒方式造成的病毒血症持续时间均为5 d。

将分离株进行肉种鸡回归试验,卵泡会出现显著病变。

E蛋白氨基酸同源性和进化树分析表明,分离株HB202010与活疫苗FX2010-180P株、灭活疫苗DF2株、HB株属于同一分支,均为中国分离株II分支,并且与灭活疫苗DF2株和HB株同源性最高,可达99.0%。

HB20210株的分离鉴定为进一步探讨该病毒对种鸡产蛋性能的影响和完善种鸡场防控方法奠定了良好的基础。

【总页数】12页(P17-26)
【作者】王友;李培勇;段宝敏
【作者单位】天津瑞普生物技术股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S858.31
【相关文献】
1.一株鸭坦布苏病毒的分离鉴定及全基因组序列分析
2.白羽半番肉鸭坦布苏病毒的分离鉴定及结构蛋白基因分析
3.一株鸭坦布苏病毒的分离与鉴定
4.一株鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及全基因组序列测定
5.鸭坦布苏病毒的分离、鉴定及致病性研究
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2014—2016年河南省鼠类携带汉坦病毒的病原学分析杜燕华;李懿;马宏;王海峰;许汴利;黄学勇【摘要】目的分析河南省鼠类携带汉坦病毒的基因型别和病原学特点.方法选取2014—2016在驻马店市确山县捕获的600只鼠类标本,分析该地区野外和居住区优势鼠种和鼠密度.采用RT-PCR法扩增鼠肺标本中汉坦病毒的特异性片段(M和S 片段),以M片段(2003~2302 nt)构建系统发生树,分析基因亚型和进化特点.结果确山县野外优势鼠种为褐家鼠和黑线姬鼠,鼠密度在1.33%~1.83%;居住区优势鼠种为褐家鼠、小家鼠和黄胸鼠,鼠密度1.36%~1.97%.RT-PCR结果显示2014年3只鼠携带汉坦病毒,鼠种分别为小家鼠、大仓鼠和褐家鼠.3株病毒M片段和S片段核苷酸同源性均为100%,基于M片段的系统进化分析显示属于S4亚型汉城型汉坦病毒,与韩国和我国湖北省分离的病毒亲缘关系较近.结论河南省确山县鼠类携带的汉坦病毒为S4亚型,宿主范围广泛,有必要采取相关防控措施,预防肾综合征出血热的流行.%Objective To analyze the genotyping of hantavirus and investigate the pathogenic features of local rats in Henan province. Methods A total of 600 rats captured in Queshan county, Zhumadian city from 2014-2016 were chosen to find out the major species and density. Rat lung specimens were detected by RT-PCR using partial M and S segment primers, then sequencing and phylogenetic analysis based on M segment (2003-2302 nt) were performed to analyze gene subtype and evolution. Results In the field of Queshan county, major species were sewer rats and apodemus agrarius, and the average density of rats was 1.33%-1.83%. Sewer rats, mus musculus and apodemus agrarius were major species in the residential area, and the average density of rats was1.36%-1.97%. Hantaviruses were detected by RT-PCR in three captured rats in 2014, and the species were mus musculus, cricetulus triton and sewer rats. Nucleotide homology similarity based M and S segment of three positive products was 100%. Phylogenetic analysis indicated the virus was belonged to S4 subgenotype of Seoul virus, which was similar with the strains in Korea and Hubei province, China. Conclusion The virus from rats in Queshan county, Henan province is seoul virus, S4 subgenotype. It is necessary to take the relevant prevention and control measures to prevent hemorrhagic fever of renal syndrome because of wide host range.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2017(045)006【总页数】4页(P648-651)【关键词】肾综合征出血热;汉坦病毒;基因型;河南;病原学;系统进化分析【作者】杜燕华;李懿;马宏;王海峰;许汴利;黄学勇【作者单位】郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016【正文语种】中文【中图分类】R373.32肾综合征出血热是由汉坦病毒引起的、以啮齿类动物为主要传染源的一种自然疫源性疾病。

肾综合征出血热（HFRS）试题及答案一、单选题（24题）1.肾综合征出血热早期休克的主要原因是﹝D﹞?A.腔道大出血B.弥散性血管内凝血C.心肌损害D.小血管通透性增加，大量血浆外渗2.关于肾综合征出血热低血压期血象变化情况的描述哪项是错误的﹝B﹞?A.出现异型淋巴细胞B.白细胞总数增高C.中性粒细胞增多D.红细胞数减少3.肾综合征出血热的并发症不包括（A）？A.早期低血压休克B.消化道出血C.ARDSD.肾脏自发性破裂4. 关于肾综合征出血热，下列哪项是错误的﹝C﹞?A.鼠类是主要传染源B.是由一种RNA病毒引起的C.都是具典型的五期经过D.具季节性和周期性5. 肾综合征出血热的病原体属于﹝D﹞?A.立克次体B.支原体D.病毒6. 有关肾综合征出血热的描述正确的是﹝B﹞?A.临床上都有五期经过B.血小板常减少C.热退后症状减轻D.外周血白细胞常减少7. 肾综合征出血热病理损害最明显的脏器是﹝D﹞?A.肝脏B.肺C.心脏D.肾脏8. 肾综合征出血热临床上的五期经过顺序正确的是﹝B﹞?A.发热期、出血期、低血压休克期、少尿期和恢复期B.发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期和恢复期C.发热期、多尿期、低血压休克期、少尿期和恢复期D.发热期、低血压休克期、多尿期、少尿期和恢复期9. 肾综合征出血热发热期治疗，下列哪项是不适宜的﹝A﹞？A.高热中毒症状重者可用糖皮质激素B.纠正电解质紊乱C.纠正酸中毒D.解热镇痛剂10. 下列哪项不是肾综合征出血热的临床特点﹝D﹞？A.出血性皮疹B.眼眶痛D.杨梅舌11. 肾综合征出血热的三痛是﹝D﹞？A.头痛、关节痛和腰痛B.头痛、腹痛和腰痛C.头痛、全身痛和腰痛D.头痛、眼眶痛和腰痛12对确诊肾综合征出血热，下列哪项最有意义﹝D﹞？A.三大主症：发热，出血，肾损害B.血象中出现异型淋巴细胞和血小板减少C.尿中出现膜状物D.特异性抗体IgM阳性13. 确诊肾综合征出血热的依据是﹝B﹞？A.鼠类接触史B.特异性IgM抗体滴度升高C.异型淋巴细胞增多D.三痛和三红征14. 以下哪项是肾综合征出血热最主要的传染源﹝A﹞？A.黑线姬鼠B.鼩鼱C.刺猬D.患者15. 有关肾综合征出血热的描述下列哪项是错误的﹝C﹞？A.血液透析是少尿期治疗的有效手段B.鼠类为主要传染源C.发病机制和基本病变是弥散性血管内凝血D.属于自然疫源性疾病16. 中国流行的肾综合征出血热的病毒主要是﹝C﹞？A．Puumala Virus和Prospect Hill VirusB．Prospect Hill Virus和Sin Nombre virusC．Hantaan Virus和Seoul virusD．Thailand Virus和Seoul virus17. 欧洲流行的肾综合征出血热的病毒主要是﹝A﹞？A．Dobrava-Belgrade Virus和Puumala VirusB．Prospect Hill Virus和Sin Nombre virusC．Hantaan Virus和Seoul virusD． Puumala Virus和Prospect Hill Virus18. 美洲流行的肾综合征出血热的病毒主要是﹝B﹞？A．Puumala Virus和Prospect Hill VirusB．Prospect Hill Virus和Sin Nombre virusC．Hantaan Virus和Seoul virusD．Thailand Virus和Seoul virusE．Dobrava-Belgrade Virus和Puumala Virus19. 患者男性，25岁，农民，因发热.头痛.呕吐6天，于12月5日来诊。

我国汉坦病毒基因型和基因亚型的分布研究王世文;杭长寿;王华;解燕乡;马本江【期刊名称】《病毒学报》【年(卷),期】2002(18)3【摘要】为了搞清全国汉坦病毒的基因型和亚型的分布情况 ,广泛收集了全国各地汉坦病毒毒株、阳性病人血清和阳性鼠肺 ,并应用RT -PCR的方法 ,应用汉坦病毒型特异性引物 ,对这些不同来源的阳性标本中汉坦病毒型特异性M和S片段进行扩增和测序 ,并与其它已知病毒序列进行比较 ,以明确其型别和亚型及其在全国的分布情况。

结果表明 :我国HFRS各疫区仍然为HTNV和SEOV两型病毒 ,但亚型分布差异较大 ,其中HTNV可分为 9个亚型 ,SEOV则有 4～ 6个亚型。

Q32株的部分M和S片段分属于H9和H2亚型 ,是一个基因重排病毒 ,而Nc16 7株在系统发生上与其它HTNV明显不同 ,比较核苷酸序列发现 ,其M片段与其它HTNV 的同源性在 71 3%～ 76 7%之间 ,S片段与其它HTNV的同源性只有 5 2 3%～ 5 7 8% 。

【总页数】6页(P211-216)【关键词】汉坦病毒;基因型;基因亚型;中国;分布【作者】王世文;杭长寿;王华;解燕乡;马本江【作者单位】中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所【正文语种】中文【中图分类】R373.9【相关文献】1.河南省Ⅱ型汉坦病毒基因亚型及其分布的研究 [J], 孙黎;张永振;李林红;张彦平;张爱梅;郝宗宇;孙建伟;陈化新2.乙型肝炎病毒基因型和血清亚型在我国部分地区的分布及其特点 [J], 夏国良;Omana;V;Nainan;等3.广西乙型肝炎病毒基因型及基因亚型流行病学分布研究 [J], 黄月莹;何雨;黄天壬;邓伟;张玉丽;吴玲红;曾洁4.扩增HCV 5'-UTR基因序列分析河南地区HCV基因型和基因亚型分布 [J], 魏君锋;曾艳丽;靳秀;侯环荣;肖二辉;丁岗强;康谊;尚佳5.福州市乙肝病毒基因型和基因亚型的分布及其与前C、C基因启动子变异的关系[J], 郭燕;郑能雄;姚栩;纪惠玲;陈智伟;陈艳;徐珊;张彩云;黄晓霞;杨建娜;卢园因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高三生物学试卷试卷共8页，21小题，满分100分。

考试用时75分钟。

注意事项：1. 考查范围：必修1,必修2第1章～第5章。

2. 答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号等填写在答题卡指定位置上。

3. 回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。

如需改 动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。

回答非选择题时，将答案写在答题卡上。

写在 本试卷上无效。

4. 考生必须保持答题卡的整洁。

考试结束后，请将答题卡交回。

一、选择题：本题共12小题，每小题2分，共24分。

在每小题给出的4个选项中，只有1项 符合题目要求，答对得2分，答错得0分。

1. 支原体是原核生物中比较特殊的一类，其中使人患病的支原体主要有肺炎支原体、人型支原体(DNA 中 的G+C 含量低)等。

下列叙述错误的是()A. 支原体的细胞内没有染色体，但有支持和保护细胞的细胞壁B. 肺炎支原体和人型支原体的DNA 均不含游离磷酸基团C. 人型支原体有合成蛋白质的细胞器，该细胞器不含磷脂分子D. 人型支原体的遗传物质热稳定性相对较弱2. 酸奶是一种优质的发酵奶制品。

质检人员对市场上销售的甲～戊5种原味酸奶中还原糖、脂肪和蛋白质 的含量进行测定，结果如图所示。

下列叙述正确的是( )A. 酸奶中的乳酸来自发酵乳酸菌的线粒体基质B. 等量酸奶中，酸奶乙能为人体提供较多的氨基酸C. 利用斐林试剂可鉴定出酸奶戊中的葡萄糖D. 酸奶中的脂肪被人体直接吸收后，可大量转化成糖类3. 研究发现，耐盐小麦耐盐能力高的原理如图1所示。

随着培养液中氯化钠(NaCl) 浓度的升高，小麦Na+根细胞内 和可溶性糖相对浓度的变化情况，如图2所示。

下列相关叙述错误的是( )含量/(g ·k g ¹)图 1图2A. 图1所示3种转运蛋白中，不与转运物质结合的只有1种B. Na+/H+ 交换蛋白运输Na+ 时，消耗的能量可间接来自ATPC. 该小麦应对高盐胁迫的途径之一是提高细胞内可溶性糖浓度Na+ Na+/H*D. 图2中，胞内 浓度升高速度变缓，与 交换蛋白无关4.某生物小组为了探究酶的作用和特性，设计I 、Ⅱ 、I Ⅲ 三组实验，实验记录及结果和结论(未知), 如下表所示。

㊃专题论著㊃中国新型布尼亚病毒分离株序列基因特征分析刘秀兰ә,姚学君ә,管书慧,姜仁杰盐城市疾病预防控制中心,江苏盐城224100D O I :10.13668/j.i s s n .1006-9070.2018.02.001作者简介:刘秀兰(1968 ),女,江苏盐城人,副主任医师,主要从事免疫规划工作;姚学君(1987 ),男,江苏盐城人,医师,主要从事传染病控制工作;ә为共同第一作者㊂通讯作者:姜仁杰,主任医师,E -m a i l :396066361@q q.c o m 摘要:目的 分析中国新型布尼亚病毒分离株的基因型分布和进化规律,了解分子流行病学特征㊂方法 利用M E G A 6.0软件,对G e n B a n k 数据库收录的中国地区分离株的完整S 片段基因序列进行分析,构建系统进化树,并分析毒株间的核苷酸和氨基酸的同源性㊂结果 在G e n B a n k 数据库收集到248株中国地区新型布尼亚病毒分离株,主要为人源毒株232株,占93.55%,核酸和氨基酸序列同源性分别为94.9%~96.8%和91.4%~95.2%;系统进化树分析显示中国地区流行优势株为C 2基因亚型,占58.06%;5种亚型的核苷酸序列和氨基酸序列同源性为94.9%~96.8%㊁91.4%~95.2%,同亚型毒株核苷酸序列和氨基酸序列同源性为96.3%~99.1%㊁96.8%~98.6%㊂与汉坦病毒属和白蛉病毒属亲缘较远,毒株核苷酸序列同源性分别为39.3%~40.2%和47.3%~48.1%,氨基酸序列同源性13.6%~14.4%和22.5%~23.9%㊂人源毒株与宿主动物分离株高度同源,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为96.3%~97.1%和94.0%~95.7%㊂结论 我国近年来新型布尼亚病毒流行毒株以基因亚型C 2为主,存在多种基因亚型间循环交替流行㊂关键词:新型布尼亚病毒;基因特征;序列分析;流行病学特征中图分类号:R 373.3 文献标识码:A 文章编号:1006-9070(2018)02-0119-03A n a l ys i s o f g e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c s o f S e v e r e f e v e rw i t h t h r o m b o c y t o p e n i a s yn d r o m e v i r u s i s o l a t e d i nC h i n a L I U X i u -l a n ә,Y A O X u e -j u n ә,G U A NS h u -h u i ,J I A N G R e n -ji e Y a n c h e n g M u n i c i p a lC e n t e r f o rD i s e a s eP r e v e n t i o nA n dC o n t r o l ,J i a n g s uY a n c h e n g 224100,C h i n a A b s t r a c t :O b je c t i v e T o a n a l y z e t h e g e n o t y p e d i s t r i b u t i o n a n d g e n e t i c e v o l u t i o n of S e v e r e f e v e rw i t h t h r o m b o c y t o p e n i a s y n -d r o m e v i r u s (S F T S V )i s o l a t e d i nC h i n a ;t ou n d e r s t a n d m o l e c u l a r e p i d e m i o l o gi c a l c h a r a c t e r i s t i co fS F T S V.M e t h o d s M E G A 6.0s o f t w a r ew a su s e d t o a n a l y z e t h e s e g m e n t S g e n e s e q u e n c e s o f i s o l a t e dv i r u s s t r a i n s i nC h i n a a f t e r r e t r i e v i n g c o m p l e t e s e -q u e n c e s f r o mt h eG e n B a n kn u c l e o t i d e d a t a b a s e .T h e p h y l o g e n e t i c t r e ew a s c o n s t r u c t e d a n d t h e h o m o l o g y o f n u c l e o t i d e a n d a m i -n o a c i d sw e r ec a l c u l a t e d .R e s u l t s At o t a lo f248v i r u s i s o l a t e ds t r a i n sw e r ea q u i r e df r o m G e n B a n ko r i gi n a t e df r o m C h i n a ,m a i n l y f r o mh u m a n s a m p l e s ,a c c o u n t e d f o r 93.55%;t h eh o m o l o g y o f n u c l e o t i d e a c i d s a n da m i n oa c i d sw e r e f r o m94.9%t o 96.8%a n d91.4%t o 95.2%;p h y l o g e n e t i c a n a l y s i s s h o w e d t h a tC 2s u b t y p ew a s t h e d o m i n a n t s t r a i n i nC h i n a ,a c c o u n t e d f o r 58.06%.T h e n u c l e o t i d e s e q u e n c e s a n d a m i n o a c i d s e q u e n c e sw e r e 94.9%t o 96.8%a n d 91.4%t o 95.2%h o m o l o g o u s a m o n g 5s u b t y p e s ,r e s p e c t i v e l y .T h eh o m o l o g y o f n u c l e o t i d e s e q u e n c e s a n da m i n o a c i d s e q u e n c e s a m o n g s a m e s u b t y p e s t r a i n s r a n ge df r o m96.3%t o 99.1%a n d 96.8%t o 98.6%,r e s p e c t i v e l y .C o m p a r e dw i t hh a n t a v i r u s a n d p h l e b o v i r u s s t r a i n s ,t h e h o m o l og yo f n u c l e o t i d e s e q u e n c e s a n da m i n o a c i d s e qu e n c e s o f i s o l a t e dS F T S Vs t r a i n sw e r e 39.3%-40.2%,47.3%-48.1%a n d13.6%-14.4%a n d22.5%-23.9%,r e s p e c t i v e l y ;i s o l a t e sf r o m h u m a n w e r eh i g h l y h o m d o g u st oh o s ta n i m a l s ,w h i c hh a d96.3%-97.1%a n d94.0%-95.7%h o m o l o g y f o rn u c l e o t i d e s e q u e n c e sa n da m i n oa c i d ss e q u e n c e s ,r e s p e c t i v e l y .C o n c l u s i o n S u b t y p e C 2w a s t h e d o m i n a n t S F T S Vs t r a i n ,m u l t i -s u b t y pe s c o -c i r c u l a t e d i nC h i n af o r l a s t y e a r s .K e y wo r d s :S e v e r e f e v e rw i t h t h r o m b o c y t o p e n i a s y n d r o m e v i r u s ;G e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c s ;S e q u e n c e a n a l y s i s ;E p i d e m i o l o g i -c a l c h a r a c t e r i s t i c s发热伴血小板减少综合征(S e v e r ef e v e r w i t ht h r o m b o c y t o p e n i a s yn d r o m e ,S F T S )是主要通过蜱虫叮咬传播的新发传染病,首例病例发现于2009年4月淮阳山农村地区㊂该病临床症状以发热㊁血小板减㊃911㊃江苏预防医学2018年3月第29卷第2期 J i a n g s u JP r e vM e d ,M a r c h ,2018,V o l .29,N o .2少㊁胃肠道症状以及多功能脏器损害等为主[1]㊂2010年S F T S病原体首次于患者血样和病例分布地区长角血蜱中分离获得,该病毒被命名为S F T S布尼亚病毒(S F T S V),属于布尼亚病毒科白蛉病毒属的新型病毒㊂S F T S V基因组由L片段(6368n t)㊁M片段(3378n t)㊁S片段(1744n t)等3股负链R N A组成[2]㊂依据该3个片段核苷酸序列构建系统进化树,具有相似的拓扑结构,基因分型结论相似[2-4]㊂为了解中国地区S F T S V毒株的遗传进化规律,现通过G e n B a n k数据库检索中国地区的分离毒株核苷酸㊁蛋白质序列信息,采用分子流行病学方法分析具有完整S片段的核苷酸序列,绘制系统进化树㊂1材料与方法1.1 S F T S V毒株S片段序列获取利用P u b M e d 网页N u c l e o t i d e模块检索 S e v e r e f e v e rw i t ht h r o m-b o c y t o p e n i a s y n d r o m e 毒株核苷酸序列信息,检索日期截至2017年8月10日,共检索出G e n B a n k核苷酸序列数据库中具有完整S片段核苷酸序列分离株248株㊂1.2 系统进化树分析使用D N A S T A R和M E G A6.0软件对S F T S V毒株S片段核苷酸序列进行分析,鉴定病毒基因型别;采用C l u s t a lW法进行多重比对,并用邻接法(N e i g h b o r-J o i n i n g,N J)构建系统进化树,可靠性采用B o o t s t r a p法,循环次数为1000㊂外部参考毒株序列选取G e n B a n k收录的鉴定为汉坦病毒属和白蛉病毒属的毒株㊂1.3核苷酸和氨基酸序列分析使用M E G A6.0软件比较分析核苷酸和氨基酸序列同源性,用配对比较和K i m u r a双参数法计算不同分离毒株的核苷酸和氨基酸差异率以及不同毒株基因序列的同源性,结果以百分数表示㊂2结果2.1毒株来源本研究共检索出具有完整S片段毒株序列248株,主要为人血样分离毒株,232株(占93.55%),其次为蜱虫分离株,10株(占4.03%),刺猬㊁羊分离株各2株(各占0.81%),狗㊁牛分离株各1株(各占0.40%)㊂2.2毒株分离时间、地区分布248株S F T S V分离毒株分离年份为2010 2016年,其中2014年收集分离数目最多,占总分离毒株数目的39.11%,其次为2015年㊁2013年,分别占23.79%㊁12.50%,再次为2012年(占12.10%)㊁2011年(占11.69%)㊁2010年和2016年(各占0.40%)㊂分离毒株来源于10个省市,以河南为主(153株,占61.69%),其次为江苏(30株,占12.10%)㊁浙江(21株,占8.47%),山东(15株,占6.05%),湖北(12株,占4.84%),安徽㊁北京和辽宁(各5株,各占2.02%),湖南和吉林(各1株,各占0.40%)㊂2.3毒株系统进化分析采用M E G A6.0对收录的248株S F T S V毒株核酸序列构建系统进化树,结果:中国地区S F T S V流行毒株与汉坦病毒属㊁白蛉病毒属均不在同一分支,亲缘性较远㊂基因型分析显示S F T S V流行毒株主要归属于C2亚型,占58.06%,其次为C4㊁C3亚型,分别占22.98%和10.89%㊂见图1㊂图1中国地区S F T S V分离毒株系统进化树2.4毒株同源性分析2.4.1不同基因型毒株同源性:采用M E G A6.0对不同基因型别之间核苷酸序列和氨基酸序列同源性分析,结果显示:S F T S V毒株5种亚型核苷酸序列和氨基酸序列同源性为94.9%~96.8%㊁91.4%~95.2%,同亚型间核苷酸和氨基酸序列同源性为96.3%~99.1%㊁96.8%~98.6%㊂S F T S V毒株各亚型与G e n B a n k收录的汉坦病毒属和白蛉热病毒属参考毒株核苷酸序列和㊃021㊃江苏预防医学2018年3月第29卷第2期J i a n g s u JP r e vM e d,M a r c h,2018,V o l.29,N o.2氨基酸序列同源性相差较大,核苷酸序列同源性分别为39.3%~40.2%和47.3%~48.1%,氨基酸序列同源性13.6%~14.4%和22.5%~23.9%㊂见表1㊂2.4.2不同来源毒株同源性:采用M E G A6.0比对人与不同媒介动物宿主间S F T S V毒株序列同源性,结果显示:人与5种媒介宿主间毒株序列高度同源,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为96.3%~ 97.1%和94.0%~95.7%,提示不同宿主动物可能为S F T S V重要传播媒介㊂见表2㊂表1中国地区分离的S F T S V毒株间核苷酸和氨基酸序号同源性分析(%)C1C2C3C4J C2核苷酸96.899.1C3氨基酸95.298.6核苷酸96.795.298.9C4氨基酸95.293.496.8核苷酸95.695.295.598.4氨基酸93.693.992.998.2 J核苷酸95.495.095.294.996.3氨基酸92.592.891.491.897.2 H a n t a v i r u s核苷酸39.740.139.940.239.3氨基酸14.114.313.614.414.1 P h l e b o v i r u s核苷酸47.348.147.947.447.6氨基酸23.423.223.923.222.5表2人与媒介S F T S V毒株核苷酸和氨基酸同源性(%)蜱虫刺猬羊狗牛人核苷酸96.696.897.196.396.5氨基酸95.595.795.594.694.0 3讨论S F T S是我国近年发现的一种自然疫源性新发传染病,多个省份地区均有发现报道[5]㊂血清学和生化分析显示,引起该病的S F T S V属于布尼亚病毒科白蛉病毒属[2],基因组序列可分为C和J2个型别[6]㊂本研究检索出的S F T S V分离株主要从人血样中分离得到㊂宿主来源主要是蜱虫,且中国㊁韩国㊁日本等流行地区的蜱虫均分离得到S F T S V毒株,进一步印证蜱虫可能为S T F S主要传播媒介[6]㊂S T F S于2010年参照乙类传染病报告,通过网络直报加强了对S T F S病例监测发现力度,2011 2014年病例报告数呈现上升趋势,与G e n B a n k中各年度分离毒株逐年增加相一致[5]㊂本研究显示分离毒株主要来源于河南,原因可能是河南省山地和丘陵土地面积较大㊁植被丰富,适宜宿主动物蜱虫和鼠类等繁殖,使该地区发病具有明显的空间聚集性㊂系统进化树分析表明,我国S F T S V分离株可分为C1~C4基因亚型和J基因型㊂我国2010 2016年分离株主要为C基因型,C2基因亚型为流行优势株,占分离株50%以上,该基因亚型与C3㊁C4基因亚型和J基因型在我国多个地区交替流行,在河南㊁湖北和山东等7个主要地区局部流行[5]㊂Z h a n g等[3]研究发现部分C2基因亚型毒株分离于死亡病例,提示基因亚型可能与病例严重程度相关,但还需进一步研究和验证㊂C1基因亚型仅有1株于2011年山东境内的羊血清标本分离出,与T o m i k i等[6]研究相似㊂本研究对中国分离的S F T S V毒株核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析,结果显示:S F T S V分离株各基因亚型同源性极高,与单军[7]㊁宫连凤[8]等报道一致;但与汉坦病毒属㊁白蛉病毒属毒株序列同源性较低,系统进化树不在同一分支;人源血分离株与宿主分离株的核苷酸同源性为96.3%~97.1%,与宫连凤等[8]报道相似;刘洋等[9]发现病例血样分离株与病例当地采集的蜱体分离毒株核苷酸㊁氨基酸序列同源性可高达99%㊂以上报告提示,蜱虫和家养动物可能作为中间宿主,在S F T S传播过程中起重要作用㊂参考文献[1] Y uX J,L i a n g M F,Z h a n g S Y,e t a l.F e v e rw i t hT h r o m b o c y t o p e n i aA s s o c i a t e dw i t haN o v e lB u n y a v i r u s i nC h i n a[J].N E n g l JM e d,2011,364(16):1523-1532.[2]张永振,周敦金,熊衍文,等.中国淮阳山地区由新蜱传布尼亚病毒引起的出血热[J].中华流行病学杂志,2011,32(8):838-840.[3] Z h a n g Y F,S h e nS,S h i J M,e t a l.I s o l a t i o n,c h a r a c t e r i z a t i o n,a n dp h y l o g e n i c a n a l y s i s o f t h r e en e ws e v e r e f e v e rw i t ht h r o m b o c y t o-p e n i a s y n d r o m e b u n y a v i r u s s t r a i n s d e r i v e d f r o m H u b e i P r o v i n c e,C h i n a[J].V i r o l S i n,2017,32(1):89-96.[4]冯岑,张磊,孙逸,等.浙江省一株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒分离株全基因组测序及分子进化分析[J].中华预防医学杂志,2014,48(7):612-616.[5]李昱,周航,牟笛,等.中国2011 2014年发热伴血小板减少综合征流行特征分析[J].中华流行病学杂志,2015,36(6): 598-602.[6] Y o s h i k a w aT,S h i m o j i m a M,F u k u s h iS,e ta l.P h y l o g e n e t i ca n dg e o g r a p h i cr e l a t i o n s h i p so fs e v e r ef e v e r w i t ht h r o m b o c y t o p e n i as y n d r o m ev i r u s i nC h i n a,S o u t h K o r e a,a n dJ a p a n[J].JI n f e c tD i s,2015,212(6):889-898.[7]单军,唐震,崔仑标,等.江苏省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的核酸检测及全基因组序列分析[J].现代预防医学,2013, 40(14):2686-2689,2696.[8]宫连凤,姜梅,刘娟,等.山东省烟台市人与动物新型布尼亚病毒感染调查及同源性分析[J].中华流行病学杂志,2014,35(5): 524-527.[9]刘洋,黄学勇,杜燕华,等.河南发热伴血小板减少综合征流行区蜱类分布及媒介携带新布尼亚病毒状况调查[J].中华预防医学杂志,2012,46(6):500-504.收稿日期:2017-11-14编辑:彭海燕㊃121㊃江苏预防医学2018年3月第29卷第2期J i a n g s u JP r e vM e d,M a r c h,2018,V o l.29,N o.2。

吉林省汉城型汉坦病毒基因分型研究熊海萍;李明慧;段正秀;陈化新;张永振【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2010(000)001【摘要】为了研究吉林省褐家鼠中汉城型汉坦病毒的基因亚型及其分布情况,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法扩增阳性样品中HV的部分S片段及部分M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型.结果显示,在吉林省肾综合征出血热(HFRS)疫区共捕获啮齿动物120只,在9份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中7只为褐家鼠,2只为小家鼠,病毒携带率为7.5%.用汉城型病毒(SEOV)特异性引物从7份HV抗原阳性样品中扩增出部分S片段(620～999 nt)及部分M片段(2001～2301 nt)并测定序列.对扩增出的部分S片段和M片段核苷酸序列分析表明,7株病毒与GenBank已提交的SEOV有很高的同源性,均为SEOV.但在用部分S片段及部分M片段核苷酸序列所构建的系统发生树上,7株病毒的聚集模式不同.结论为吉林省褐家鼠携带S3亚型汉坦病毒.【总页数】3页(P40-42)【作者】熊海萍;李明慧;段正秀;陈化新;张永振【作者单位】新疆石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832000;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206;新疆石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832000;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.广东省蝙蝠体内汉城型汉坦病毒的检测初报 [J], 李敏;李林妙;张礼标;原丽红;陈金平2.自然感染的宿主动物和病人体内汉城型汉坦病毒S片段末端序列多样性研究 [J], 彭毅;左曙青;江佳富;杨红;曹务春3.呼伦贝尔市啮齿动物携带汉坦病毒的基因分型研究 [J], 马超;李明慧;张凤贤;张永振4.新流行期汉城型汉坦病毒全S及部分L与M基因核苷酸序列测定及研究 [J], 陈宇萍;郭彦敏;安洪明;王华;孟祥芝;杭长寿;耿志洲;马士恒5.4株在山东分离的汉城型汉坦病毒株分子生物学特性研究 [J], 王志强;王宇路;赵玲;孙成阳;张学启因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。