谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒说明书 微量法

还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH）试剂盒说明书货号：QS1200 规格：50管/48样还原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。

还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。

因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

测定原理：DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度与GSH含量成正比。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。

粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

GSH测定操作：1. 分光光度计预热30min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。

3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸馏水，700μL 试剂二，200μL试剂三，混匀静置2min后测定412 nm吸光度A1。

货号: QS1900 规格：50管/24样谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。

此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。

因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

测定原理：GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：提取液：30mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体5 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体5 mL×1瓶，4℃避光保存；试剂三：液体50 mL×1瓶，4℃保存；样品测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定操作表：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒
微量法100T/96S
测定意义：
GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。

GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。

测定原理：
GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。

临床谷胱甘肽还原酶试剂盒反应原理及临床意义谷胱甘肽还原酶 (GR) 是人体氧化还原体系中最为重要的酶之一，广泛存在于人体肝、肾、心红细胞、单核巨噬细胞等组织细胞中。

它可及时地清除人体代谢过程中产生的氧自由基（OFR），是维持细胞中还原型谷胱甘肽（GSH）含量的主要黄素酶。

谷胱甘肽氧化还原系统稳态能维持细胞正常生理过程，维护巯基蛋白和酶的活性，而 GR 是唯一能将氧化型谷胱甘肽（GSSG）转化为GSH 的酶。

在预防血管内皮损伤方面，GR 可以及时清除人体代谢过程水平的中产生的活性氧，有助于预防高浓度活性氧造成的血管内皮损伤。

谷胱甘肽还原酶试剂盒的反应原理紫外酶法：在 NADPH 存在下，谷胱甘肽还原酶高度特异性催化降解氧化型谷胱甘肽 GSSG，NADPH 被氧化成为NADP+，该反应引起340 nm 处的吸光度值减少，谷胱甘肽还原酶的活性可通过测定 340 nm 处吸光度值减少的速率来测定。

临床意义生理性升高：剧烈运动、进餐、饮酒、新生儿 GR 水平生理性增高。

病理性增高或降低：肝胆疾病、物性肝损伤等会引起 GR 水平的增高，维生素 B2 缺乏症、缺铁性贫血、心脑血管疾病和糖尿病等引起 GR 水平的降低、使用还原型谷胱甘肽制剂抑制 GR 而降低。

GR 参与反应生成的还原型谷胱甘肽对保护肝细胞膜完整具有重要意义。

还原型谷胱甘肽是一种常用的保肝药物，在肝细胞受到有害物质和病毒侵袭初期，机体内大量产生 GR，参与肝细胞膜的修复过程。

不同于丙氨酸转氨酶（ALT）和天门冬氨酸转氨酶（AST）在肝细胞膜破裂和线粒体破裂时才能检测出来，GR 可以填补肝细胞受损早期自我修复阶段至破裂进程中诊断的空白，将更有利于早期肝炎的诊断和治疗。

急性肝炎早期阶段，血清谷胱甘肽还原酶敏感性高，相关研究显示，血清 GR 水平每增加 1U/L，肝损伤风险升高 1.086 倍[1]。

GR 比转氨酶更早增加达到峰值，是判断早期肝脏损伤的指标。

gst亲和层析步骤GST（谷胱甘肽S-转移酶）亲和层析是一种常用的蛋白质纯化技术，它基于谷胱甘肽S-转移酶与谷胱甘肽结合的高亲和力，可用于纯化含有GST标签的蛋白质。

第一部分：材料准备在进行GST亲和层析之前，需要准备一些实验材料。

以下是常见的实验材料列表：1. 细菌表达系统：常用的细菌表达系统包括大肠杆菌（E. coli）和酵母菌等。

选择适当的表达系统，并确保表达系统中含有GST融合蛋白的基因。

2. 培养基和抗生素：根据表达系统的需求，准备适当的培养基，并添加相应的抗生素以选择含有GST融合蛋白的菌落。

3. 细胞破碎缓冲液：根据实验需求选择适当的细胞破碎缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）或Tris缓冲液，并添加辅助试剂如EDTA（乙二胺四乙酸）和PMSF （苯甲磺酰氟）等。

4. 融合蛋白纯化缓冲液：准备一系列用于融合蛋白纯化的缓冲液，包括洗脱缓冲液、结合缓冲液、平衡缓冲液等。

常用的缓冲液成分包括PBS、NaCl（氯化钠）、DTT（二硫苏糖醇）和Tween-20等。

5. GST树脂：选择合适的GST亲和树脂，如GST-Sepharose或Glutathione Agarose等。

6. 色谱柱：选择合适的色谱柱，如预装的柱子或自制的柱子，并进行消毒和平衡。

7. 蛋白质测定试剂盒：用于测定蛋白质的浓度，如BCA（双硫苏糖酸）蛋白定量试剂盒。

第二部分：GST融合蛋白的表达和纯化1. 转化细菌：将含有GST融合蛋白基因的质粒DNA转化到表达宿主细胞中，如E. coli。

通过热激冷冻法、电穿孔法或化学法等方法将质粒DNA导入细菌细胞内。

2. 培养细菌：将转化后的细菌菌落接种到含有适当抗生素的培养基中，并在适当的条件下培养细菌，如温度、pH值和搅拌速度等。

3. 蛋白表达诱导：当细菌培养达到适当的生长阶段时，添加适当浓度的诱导剂，如IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷），以诱导GST融合蛋白的表达。

4. 细胞收获：在蛋白表达诱导后一定时间，收集细菌细胞。

γ-谷氨酰基转移酶（GGT）测定试剂盒(GCANA底物法)适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中的γ-谷氨酰基转移酶（GGT）的活性。

1.1包装规格1.2主要组成成分试剂1主要组分：双甘肽125mmol/L 试剂2主要组分：L-γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺14mmol/L2.1外观2.1.1试剂1应为无色或淡黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物。

2.1.2试剂2应为无色或淡黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物。

2.2装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度：GGT试剂盒在波长395～415nm处测定试剂的空白吸光度值，应不大于0.7。

2.3.2试剂空白吸光度变化率：GGT试剂盒在波长395～415nm处测定试剂的空白吸光度变化率，每分钟的变化值应不大于0.005。

2.4分析灵敏度测试50U/L的γ-谷氨酰基转移酶时，吸光度变化率应不小于0.01。

2.5准确度测定国家标准物质GBW（E）090283，相对偏差应不超过15%。

2.6精密度2.6.1重复性重复测试（50±5）U/L的样本，所得结果的变异系数CV应不大于5%；2.6.2批间差测试（50±5）U/L的样本，所得结果的批间相对极差应不大于10%。

2.7线性范围GGT试剂盒在（10，450）U/L范围内，线性相关系数（r）应不小于0.990；在(10，50］U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±5U/L；在(50，450)U/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性原包装的试剂盒在2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。

在GGT试剂盒有效期满后2个月内，分别检测2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。

谷胱甘肽s-转移酶的功能
谷胱甘肽s-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类重要的酶，在生物体内起着多种重要的功能。

该酶主要作用在细胞内，参与细胞代谢过程中的许多关键反应，具有显著的生物学意义。

在生物体内发挥着重要的作用，包括抗氧化、解毒、细胞保护等多种作用。

首先，在抗氧化方面，谷胱甘肽s-转移酶可以通过转移底物中的谷胱甘肽，帮助清除自由基和有害代谢产物，从而减少氧化应激对细胞的伤害。

自由基是细胞内的危险分子，会导致细胞损伤和生物体老化，而谷胱甘肽
s-转移酶的存在能够有效地减少氧化损伤，维护细胞健康。

其次，在解毒方面，谷胱甘肽s-转移酶可以通过结合有毒底物，将其转化为水溶性代谢产物，从而使其更容易被排泄。

这种解毒作用对维持生物体内环境的稳定性至关重要，有助于预防毒素对生物体的损害。

此外，谷胱甘肽s-转移酶还参与了多种重要的生物化学反应，如脂质代谢、氨基酸代谢等。

在脂质代谢中，谷胱甘肽s-转移酶可以通过调节脂
质代谢途径，维持细胞内脂质平衡，有助于维持细胞健康。

在氨基酸代谢中，谷胱甘肽s-转移酶参与氨基酸的代谢和转运，有助于碱基的合成和蛋白质
的合成，是维持细胞正常功能的关键酶类。

让我们总结一下本文的重点，我们可以发现，谷胱甘肽s-转移酶在生物体内的功能多样且重要，与细胞代谢和生物体内环境的平衡密切相关。

通
过对其功能的深入研究，可以更好地了解细胞内代谢的调控机制，为预防和治疗多种疾病提供理论基础。

未来的研究还需深入探讨谷胱甘肽s-转移酶在细胞信号转导、疾病发生发展等方面的作用机制，以期揭示其更多的生物学功能及临床应用潜力。

谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1450规格：50T/24S产品内容：提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存；使用前37℃预热。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL提取液溶解。

试剂二A：液体1mL×1支，4℃保存。

试剂二B：液体4mL×1瓶，4℃保存；临用前将试剂二A倒入试剂二B中混匀（A:B=1：4比例），或者根据样本所需，按照体积比试剂二A：试剂二B=1:4现配现用。

试剂三：液体5mL×1瓶，常温保存。

标准品：液体1mL×1支，10µmol/mL氮标准液，4℃保存；使用前37℃预热。

产品说明：GLS（EC3.5.1.2）主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定GLS催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。

试验需自备仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。

操作步骤：一、粗酶液提取：1.组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万个细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。

2、将标准溶液用提取液稀释32倍得0.3125μmol/mL的标准溶液。

3、样品测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（µL）测定管对照管标准管空白管样品8080--提取液-320-400试剂一320---混匀，37℃水浴1小时--标准液--400-试剂二80808080试剂三60606060蒸馏水460460460460混匀，室温放置30min，630nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。

还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。

因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。

（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。

8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。

8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

（2）血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。

1.3.6.2 血或组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活力测定1.3.6.2.1 原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。

对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH氧化的反应速度，及单位时间内GSH减少的量来表示，GSH和5,5’-二硫对硝基苯甲酸（DTNB）反应在GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH减少的量，由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH减少。

1.3.6.2.2 试剂和仪器仪器：可见光分光光度计、酶标仪、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器试剂：叠氮钠磷酸缓冲液pH7.0N a N316.25mg 终浓度2.5mmol/LEDTA-N a27.44mg 终浓度0.2mmol/LN a2HPO4 1.732g 终浓度0.2mol/LN a H2PO4 1.076g 终浓度0.2mol/L加蒸馏水至100mL，用少量HCL、N a OH调pH7.0，4℃保存。

1mmol/L谷胱甘肽（还原型GSH）溶液GSH 30.7mg加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL，临用前配制，冰冻保存1－2日。

1.25－1.5mmol/LH2O2溶液取30％H2O20.15－0.17mL，用双蒸水稀释至100mL，作为贮备液，4℃避光保存，临用前将贮备液用双蒸水稀释10倍即可。

偏磷酸沉淀液HPO316.7g（先用蒸馏水溶解）EDTA 0.5gN a Cl 280g加蒸馏水至1000mL，用普通滤纸过滤，室温保存。

0.32mol/LN a2HPO4溶液:N a2HPO422.7g加蒸馏水至500mL，室温保存。

DTNB显色液DTNB 40mg柠檬酸三钠 1.0g加蒸馏水至100mL，4℃避光保存1个月。

0.2M磷酸缓冲液pH7.40.9%生理盐水1.3.6.2.3 实验步骤1.3.6.2.3.1 样品制备溶血液：取鼠血10μl加入到1mL双蒸水中，充分振摇，使之全部溶血1:100待测，4h内测定酶活力。

γ- 谷氨酰基转移酶检测试剂盒（速率法）说明书[产品名称] 通用名称：γ- 谷氨酰基转移酶检测试剂盒（速率法）英文名称：γ-Glutamyl Transpeptidase Assay Kit(γ-GGT)[包装规格]2×200Tests；2×400Tests；R1:4×60ml、R2:4×15ml；R1:4×80ml、R2:4×20ml；R1:4×120ml、R2:2×60ml；R1:8×40ml、R2:2×40ml；R1:4×50ml、R2:2×25ml；R1:2×40ml、R2:2×10ml；R1:4×50ml、R2:4×50ml。

[预期用途] 用于体外定量检测人血清中的γ- 谷氨酰基转移酶的活力。

[检验原理]γ-GGTγ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺+ 甘氨酰甘氨酸γ-L-谷氨酰甘氨酰甘氨酸+ 2-硝基-5-氨基苯甲酸[主要组成成份]由试剂R1和试剂R2组成。

试剂R1：三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、甘氨酰甘氨酸；试剂R2：γ-L-谷氨酰-3羧基-4-硝基苯胺。

[储存条件及有效期] 试剂在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。

有效期12个月。

开瓶后2℃～8℃可稳定30天。

备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。

[适用仪器]日立7170、奥林巴斯AU640、贝克曼LX-20全自动生化分析仪。

[样本要求]使用新鲜的血清。

不可使用已被污染的样本。

[检验方法]（1）双试剂无需配制，直接使用。

（2）试验条件：样本（S）：10 µl试剂1(R1) ：160 µl 试剂2（R2）：40 µl温度：37 ℃测定类型：速率法主波长：405 nm 副波长：505 nm 反应方向：上升方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后1分钟至3分钟之△A/min 。

主要目的：——测定物质谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）活力。

主要原理：——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）可以促使过氧化氢（H 2O 2）与还原性谷胱甘肽（GSH ）反应生成H 2O 及氧化性谷胱甘肽（GSSG ）,谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。

H 2O 22O+GSSGGSH-Px 的活力以催化GSH 的反应速度来表示，由于这两个底物在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应（称为非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除非酶促反应引起的GSH 减少的部分。

而GSH 含量的测定可以跟据GSH 和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，在412nm 处测其吸光度即可计算出实验室签章一、试剂——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定试剂盒（南京建成生物研究所）二、仪器设备——96孔酶标板——UV-Vis可见多功能酶标仪——旋涡混匀器——离心机——水浴锅——移液枪及其相应量程枪头三、实验方法根据试剂盒说明书具体操作步骤如下:1. 非酶管和酶管各加入1 mmol/LGSH 0.2 mL ，酶管加入稀释后的待测血清和组织匀浆液0.2 mL ，37 ºC 水浴预温5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂一应用液0.1 mL ，37 ºC 水浴准确反应5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂二应用液2 mL ，同时非酶管加入待测细胞上清液0.2 mL 。

混匀，3500-4000转/分，离心10分钟，取上清1 mL 作显色反应。

2. 空白管加入1 mL GSH 标准品溶剂应用液，标准管加入1 mL 20 μmol/LGSH 标准液，非酶管和酶管各加入上一步骤1 mL 上清液，然后空白管、标准管、非酶管和酶管各加入1 mL 试剂三应用液，0.25 mL 试剂四应用液和0.05 mL 试剂五应用液。

谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究摘要：本实验利用亲和层析法纯化谷胱甘肽转硫酶，以 CDNB 为底物，研究酶促反应动力学的特性。

本实验测定了 GST 的酶活性，为0.187IU，比活力为12.26IU/mg;实验中还利用终米氏倒数作图法得出GST 的米氏常数为0.2632mol/L，最大速率122.4umol/mL。

关键词：谷胱甘肽转硫酶、酶活性、比活力、米氏方程谷胱甘肽转硫酶（Glutathion S-transferases，简称GST，EC2.5.1.18）广泛存在于动物和人体的各种组织，哺乳动物肝脏中含量最高，约占肝可溶性蛋白的10%。

GST是机体内一组具有重要解毒作用的同工酶家族，均为由两个亚基组成的二聚体，相对分子质量为45 000—49 000，各同工酶的等电点不同，多为碱性同工酶。

GST参与芳香环氧化物、过氧化物和卤化物的解毒作用，能够催化这些带有亲电中心的疏水化合物与还原型谷胱甘肽（GSH）的亲核基团GS－反应，中和它们的亲电部位，使产物水溶性增加，经过一系列代谢过程，最后产物为巯基尿酸，被排出体外，从而达到解毒目的。

另外，GST还能共价或非共价地与非底物配基以及多种疏水化合物结合，具有结合蛋白的解毒功能。

一、实验原理（1）亲和层析原理：很多生物大分子与相应的分子间具有专一的可逆结合的特性，如酶与其底物、抑制剂、辅助因子，抗体与抗原，核酸与互补的碱基序列、核酸聚合酶、结合蛋白，激素与其受体、载体蛋白，细胞与其表面特异蛋白等等，它们依靠分子间的氢键、范德华力进行结合，这种专一的可逆结合力的称为亲和力。

亲和层析的方法就是根据具有亲和力的生物分子间可逆地结合和解离的原理建立和发展起来的。

将能可逆结合和解离待分离生物分子的物质称为配基，与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联，制成专一的亲和吸附剂，当被分离物质随着流动相经过亲和吸附剂时，亲和吸附剂上的配基可以选择性地吸附待分离物质，通过解吸附使待分离物质得以纯化。

谷胱甘肽s-转移酶的功能谷胱甘肽s-转移酶（Glutathione S-transferase，GST）是一类重要的酶，广泛存在于动物、植物和微生物中。

它在生物体内起着重要的保护作用，参与多种生理和病理过程。

本文将从多个方面探讨谷胱甘肽s-转移酶的功能。

一、谷胱甘肽s-转移酶的结构与分类1. 谷胱甘肽s-转移酶的结构谷胱甘肽s-转移酶是由两个亚基组成的二聚体，每个亚基由两个结构域组成：N端为N端域（N-terminal domain）和C端为C端域（C-terminal domain）。

这两个结构域通过一个柔性连接区连接在一起。

2. 谷胱甘肽s-转移酶的分类根据基因序列、氨基酸序列和功能特点，谷胱甘肽s-转移酶可分为多个家族。

目前已经发现了八个家族：α、μ、π、σ、θ、κ、ρ和ω。

二、谷胱甘肽s-转移酶在细胞中的功能1. 活性氧清除作为细胞内主要的抗氧化酶之一，谷胱甘肽s-转移酶通过转移谷胱甘肽（GSH）的巯基与氧化物质发生反应，将其还原为相对稳定的形式，从而清除细胞内的活性氧。

2. 解毒作用谷胱甘肽s-转移酶通过与毒性物质结合，将其转化为相对无毒的形式。

这种解毒作用在细胞内起着重要的保护作用，防止有害物质对细胞结构和功能的损害。

3. 代谢调节谷胱甘肽s-转移酶参与多种代谢过程中底物和产物之间的转化。

例如，在药物代谢中，它能够将药物与GSH结合形成可溶性底物，并促进其排泄。

此外，在一些生理过程中，如雌激素代谢和类固醇激素合成调节等方面也发挥着重要作用。

4. 细胞信号传导调节最近研究发现，一些GST家族成员在细胞信号传导途径中起到了重要调节作用。

例如，在细胞凋亡过程中，一些GST家族成员能够调节凋亡信号通路，影响细胞的生存和死亡。

三、谷胱甘肽s-转移酶与疾病的关系1. 肿瘤谷胱甘肽s-转移酶与肿瘤的关系备受关注。

一些研究发现，GST家族成员在肿瘤发生和发展过程中起到了双重作用。

一方面，它们能够通过解毒作用减少致癌物质对细胞的损害；另一方面，它们也可能通过调节细胞信号通路影响肿瘤细胞的增殖和凋亡。

Uscn Life Science Inc.Wuhan网址:电话:+862784259552传真:+862784259551E-mail:***************大鼠谷胱甘肽(GSH)酶联免疫吸附测定试剂盒使用酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书说明书产品编号：E0294Ra规格：96T本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!预期应用本酶联免疫吸附测定试剂盒运用竞争抑制酶标免疫分析法定量测定大鼠血清、血浆、组织匀浆或其它相关生物液体中GSH 含量。

本试剂盒试剂盒未提供但需自备的设备及试剂未提供但需自备的设备及试剂1、450±10nm 滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、单道和多道微量加液器及吸头3、稀释样品的EP 管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器试剂盒的储存及有效期所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。

请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A 以及96孔板保存于-20。

开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于-20，避免潮湿。

有效期为6个月。

实验原理本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中待测物质水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中同时加入酶标的抗原和待测抗原，被测抗原与酶标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。

经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。

显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。

标本的采集标本的采集与与保存1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置30分钟或4过夜，然后1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80保存，但应避免反复冻融。

2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-81000g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80保存，但应避免反复冻融。