饲用植酸酶活性的测定

饲用植酸酶活性测定关键控制点于洪莲【期刊名称】《《饲料博览》》【年(卷),期】2019(000)008【总页数】4页(P38-40,44)【关键词】饲用植酸酶; 酶活性; 测定方法【作者】于洪莲【作者单位】广东溢多利生物科技股份有限公司广东珠海 519060【正文语种】中文【中图分类】S816.7随着畜牧业的发展和饲料生产水平的提高，植酸酶作为一种绿色环保型添加剂广泛应用于单胃动物饲料中，其通过催化将饲料原料中丰富的植酸及植酸盐分解为能被动物利用的无机磷和肌醇，可有效提高植物性饲料中磷、矿物质元素和蛋白质的可利用率，提高动物生产性能，因此植酸酶在饲料生产中可定量取代或减少无机磷的添加量，在降低畜禽养殖成本的同时还减少了动物粪便中磷的排放量，减轻磷对环境污染。

植酸酶的研究对解决环境污染和满足营养需求方面有着重要意义。

饲用酶制剂活性分析与检测在饲料工业中具有重要的作用，酶制剂生产企业通过检测产品酶活力来监控产品稳定性，保证酶制剂产品品质，饲料生产企业需要通过检测饲料产品中酶制剂的含量来验证其添加效果（即饲料中酶的活力保存率），以保障饲料品质，因此酶活力的测定是控制酶制剂产品质量的关键环节，也是使用效果的基本保障。

如何准确检测植酸酶含量是许多饲用酶制剂工作者普遍关心的问题。

本文以国标检测方法为依据，综述了植酸酶活力测定方法及检测中关键控制点，以期为植酸酶的检测提供可行性参考。

1 植酸酶活性测定的方法及原理1.1 测定方法《饲用植酸酶活性的测定分光光度法》是现行有效的饲用植酸酶活性测定的国标方法，即GB/T 18634-2009。

本文以国标检测方法为依据。

1.2 测定原理依据国标检测方法，其原理为：植酸酶在一定温度和pH条件下，将底物植酸水解，生成正磷酸和肌醇衍生物。

在酸性溶液中，能与钒钼酸铵生成黄色的复合物，可于波长415 nm下进行比色测定[1]。

1.3 植酸酶活性单位酶活性单位定义为：样品在37 ℃、pH 5.5 的条件下，每分钟从浓度为5.0 mmol·L-1植酸钠溶液中释放出1 μmol 无机磷，即为一个植酸酶活性单位，以U 表示[1]。

中国饲料2010年第20期植酸酶广泛存在于动物、植物和微生物中，能将植酸分解为肌醇和无机磷的一类磷酸单脂水解酶。

文章介绍了植酸酶活性的测定方法，除了以前的传统方法外，近10多年植酸酶活性检测出现了许多新的方法，如近红外光谱法、琼脂平板法、酶联免疫吸附法、生物传感器法、高效液相色谱法等，这些新方法为植酸酶活性测定开辟了新的检测途径。

1植酸酶活性测定方法的发展及意义1.1植酸酶活性测定方法的发展植酸酶发现至今已经有100余年，植酸酶的研究已经取得了丰硕的成果。

回顾植酸酶活性的测定方法：1925年Fiske-SubbaRow法，即钼黄法，因由Fiske和SubbaRow两人发现，所以早期钼黄法也叫Fiske-SubbaRow法；1943年Holman等发现了硫酸亚铁-钼蓝法，曾在国外许多国家发展为植酸酶测定的标准方法，至今还在许多研究中采用（Fu等，2008；Huang等，2008）；1981年Heinonen和Lahti 建立了丙酮-磷钼酸铵法。

植酸酶活性的测定方法除了这些传统的方法外，近10多年来随着科学技术和检测手段的提高，植酸酶活性分析检测及标准化方面出现了许多新的方法，并颁布了新的标准，如近红外光谱法（NIR）、琼脂平板法、酶联免疫吸附法（ELISA）、生物传感器法、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）等。

1.2植酸酶活性测定意义植酸酶没有特定光吸收波和鉴定试剂，所以植酸酶的分析和活性测定比较困难（Lasztity等，1990）。

动、植物植酸酶的提取、分离纯化，微生物植酸酶菌株的筛选，基因工程植酸酶表达产物等研究中都需要测定植酸酶活性。

随着植酸酶在饲料中的广泛应用，饲料管理部门、饲料质检机构、科研部门以及生产企业均面临植酸酶定量测定的工作。

目前存在着植酸酶酶活单位混乱、检测手段落后，测定结果误差大等一些问题，所以规范植酸酶酶活性定义和检测方法势在必行。

植酸酶活性的定义方法主要有以下几种：（1）酶活定义为每分钟从一定浓度的植酸钠溶液中释放1μmol的无机磷为一个酶活单位。

8种食用菌菌渣中3种饲用酶活性的测定张国庆;董晓芳;王贺祥;佟建明;张琪【期刊名称】《中国食用菌》【年(卷),期】2009(028)005【摘要】对可商业化人工栽培的8种常见食用菌菌渣中的木聚糖酶、β-葡聚糖酶和植酸酶生物活性进行了测定.结果表明,被测的8个样品均不同程度具有木聚糖酶和β-葡聚糖酶活性.其中,双孢蘑菇和毛木耳菌渣木聚糖酶活性最高,分别为2.856 U·g-1和1.109 U·g-1;杏鲍菇和毛木耳菌渣β-葡聚糖酶活性最高,分别为0.389 U·g-1和0.351 U·g-1;毛木耳在pH 2.5和pH 5.2下均具有植酸酶活性,分别为0.139 U·g-1和0.222 U·g-1;杏鲍菇和糙皮侧耳在pH 5.2下,植酸酶活性分别为0.126 U·g-1和0.122 U·g-1;其它菌渣均不具有明显的植酸酶活性.本研究表明,食用菌菌渣中具有一定的饲用酶活性,利用食用菌菌渣作为畜禽饲料,可在一定程度上减少饲用酶的添加,从而降低生产成本.【总页数】3页(P28-29,56)【作者】张国庆;董晓芳;王贺祥;佟建明;张琪【作者单位】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京,100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,北京,100193【正文语种】中文【中图分类】S646.9【相关文献】1.食用菌菌渣产沼气潜力测定 [J], 秦文弟;甘福丁;徐铁纯;黄凌志;蒋湖波;赵德钦2.潮湿纤维单胞菌和绿色木霉混合接种对不同食用菌菌渣相关酶活性的影响 [J], 谢小林;顾振红;陈美标;姚青;朱红惠3.几种常见食用菌胞外酶活性测定方法的研究1） [J], 吕春鹤;孙婷婷;张健;孟东阳;邹莉4.马铃薯渣作培养代料的两种侧耳属食用菌菌糠中两种饲用酶活性的检测研究 [J], 卢嘉宝;熊皖扬;陈劲春5.香菇木屑菌糖中5种饲用添加酶活性的测定与分析 [J], 张坚;陈铁桥;肖兵南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

发酵液中植酸酶活性测定方法的研究摘要：以钒钼法对发酵液中植酸酶活性进行了测定，并对影响酶活性测定结果的因素进行了研究。

实验结果表明，钒钼法测磷的灵敏度和线性范围分别为0.025mmol/L和0.025mmol/L~0.60mmol/L；为减小植酸酶活性的测定误差，结果测定必须在颜色反应结束后的4h以内完成。

研究中同时发现，发酵液含有的无机磷远远大于酶活测定产生的无机磷含量，直接用发酵液测得的植酸酶酶活是不可靠的。

通过对透析2h的发酵液进行植酸酶酶活的测定，实验结果的最大相对偏差仅为7.1%。

关键词：钒钼法；植酸酶；透析；酶活Study on analysis methods of phytase activity in fermentation brothAbstract: Determination of phytase activity in fermentation broth by vanadiu-molybdenum method and the factors influenced results were studied.The results showed that the sensitivity and linear range for inorganic phosphorus by vanadiu-molybdenum method were 0.025 mmol/L and 0.025-0.60mmol/L, respectively. Detection must be finished within 4 h after colour reaction for decrease of error. It was also found that concentration ofinorganic phosphorus in fermentation broth was much higher than that of produced by enzyme activity and determination of phytase activity directlywith fermentation broth was not reliable. The relative standard deviation of the results was 7.1% when the fermentation broth was dialysed for 2 h.Key words: vanadiu-molybdenum method; phytase; dialysis; phytase activity收稿日期：2009-12-24基金项目：泰山医学院青年科学基金项目（2008-2009）作者简介：洒荣波（1978-），男，讲师，研究方向为微生物发酵。

预混料中木聚糖酶和植酸酶酶活的测定新方法摘要: 本试验选用六和预混料样品, 添加定量的KDN自产全细胞酶或植酸酶, 利用 DNS 法对比不同方法测得的酶活。

结果表明: 在稀释酶缓冲液中添加 6%的DETA·2Na, 可以明显提高预混料中木聚糖酶或植酸酶的酶活测定值; 采用一次性稀释到位酶样品比分级稀释测得的木聚糖酶或植酸酶的酶活值明显提高。

关键词: 预混料; 木聚糖酶; 植酸酶; 酶活饲用酶制剂既能提高饲料的消化率和利用率, 提高畜禽生产性能, 又能减少畜禽排泄物中的氮、磷排泄量, 使自然环境中的水体和土壤免受污染, 因而饲用酶制剂作为一类高效、无毒副作用、环保型的“绿色”饲料添加剂, 在 21 世纪有着十分广泛的应用前景。

但是, 酶制剂在饲料、预混料中的酶活测定方法还不成熟, 有些酶由于添加剂量小及饲料中各种干扰因子如重金属离子等影响, 实验室测定非常困难, 酶活测定结果变异较大。

本试验在预混料中添加以木聚糖酶为主的全细胞复合酶或植酸酶, 通过不同方法分别测定预混料中的木聚糖酶酶活和植酸酶酶活, 目的是探讨预混料中酶活测定的优化条件, 从而为预混料中酶活的检测提供新思路, 为建立一种相对统一的检测方法提供参考。

1 材料与方法1.1 供试酶制剂木聚糖酶: 由康地恩集团以黑曲霉固体发酵生产, 以木聚糖酶为主的全细胞复合酶;植酸酶: 由康地恩集团生产的颗粒植酸酶制剂 5 000u/g。

1.2 预混料由山东六和青岛和美饲料有限公司提供。

分别为青岛和美 LC633P 蛋鸡 5%、LC15 蛋鸡 5%、BC15 肉小鸡 5% 、BC35 肉大鸡 5% 、SB345 猪4%、SB44P 猪 4%、LH660 猪 4%、EV24 鸡 4%、BV15 肉鸡 0.4% 、DV14 鸭 0.4% 、BV24 肉鸡0.4%。

1.3 酶活定义木聚糖酶: 根据山东六和农牧科技园企业标准 Q/SLH002- 2006, 酶样品于40℃, pH 5.0 条件下, 1min 水解木聚糖生成相当于 1μg 木糖还原物质, 即为 1 个酶活力单位。

配合饲料中酶植酸酶的加工及检测由于植酸酶使用量约占商品酶制剂用量的20%，所以有关植酸酶热稳定性的研究报道相当多（Bedford和Schulze，1998）。

之所以如此受到关注，可能是由于许多植物性的饲料原料中均含有植酸，由于植酸的存在使得磷和其他营养素难以吸收利用（Cheryan，1980；Eeckhout和dePaepe，1994；Ravindran等，1995）。

然而，单胃动物体内的内源性植酸酶缺乏活性或活性很低（Pallauf和Rimbach，1997）。

更为复杂的是，同一植酸来源的植物还含有相当数量的植酸酶，并且磷消化的营养性问题与因磷在土壤中的富积而引起的环境污染问题相互交织。

磷污染已成为集约化畜禽产区生产的限制因素。

植酸酶的来源广泛，其特性也各不相同。

Liu等（1998）综述了1998年之前的文献。

结果表明，来自细菌、真菌、酵母和植物的植酸酶的最适活性温度为45～77摄氏度，其差异高达32摄氏度。

Dvorakova等（1997）描述了从黑曲霉（Aspergillus niger）中分离到的植酸酶特性。

该植酸酶在25～65摄氏度的温度范围内具有活性，其最适温度为55摄氏度；其在60摄氏度下培养10分钟可使最初活性丧失5%，而在80摄氏度下培养10分钟可使最初活性丧失80%。

作为寻找耐热性酶类的部分工作，Wyss等（1998）对从烟曲霉（A. fumigatus）和黑曲霉（A. nige）中分离到的纯化植酸酶的热变性进行了研究。

这两种来源的植酸酶在低至55摄氏度时就会发生变性。

然而，在温度提高到90摄氏度时，来自烟曲霉（A. fumigatus）的植酸酶再次折叠成一种活性构型，但来自黑曲霉（A. nige）的植酸酶不会发生这种变化。

无疑，某些耐热性的植酸酶类在不久的将来将投入商业使用。

溶液中的酶遇热失活，并不表明饲料中的酶遇热也失活，这是因为饲料中的酶与饲料基质存在互作。

实际上，饲料原料在短时间内能够保护酶免受蒸汽或高温的破坏（Chesson，1993）。

两种测定植酸酶酶活的方法比较及发酵条件研究XU Dan-dan;ZHAO Han-dan;WANG Xiu-ran;GUAN Shu-yan【摘要】从富含有机质的环境中采集土样,通过植酸钙平板透明圈法初筛得到产植酸酶菌株,进而用钒-钼酸铵法和丙酮-磷钼酸铵法2种方法测定植酸酶酶活力,并进行比较.结果表明,钒-钼酸铵法为准确、可用的方法,通过正交试验确定了最适产酶发酵条件为pH 5,可溶性淀粉用量1.25 g/100 mL,酵母粉用量1.80 g/100 mL,植酸钙用量1.0 g/100 mL.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2019(058)012【总页数】4页(P134-137)【关键词】植酸酶;酶活;测定;钒-钼酸铵法;丙酮-磷钼酸铵法【作者】XU Dan-dan;ZHAO Han-dan;WANG Xiu-ran;GUAN Shu-yan【作者单位】;;;【正文语种】中文【中图分类】Q93-332植酸（肌醇六磷酸）及植酸盐广泛存在于植物体中，是植物磷的主要贮存形式，占植物中总磷的60%～80%［1］。

但植酸磷难以被单胃动物吸收利用，随粪便排出体外会造成水体和土壤的严重磷污染［2］。

同时，植酸及其盐还是一种抗营养因子，能与多种金属离子螯合并能与蛋白质等形成难溶的复合物，影响动物对矿质元素和蛋白质的吸收利用［3，4］。

植酸酶能将植酸及其盐类降解为肌醇和磷酸（或磷酸盐），作为饲料添加剂可以提高植酸磷的利用率，提高植物性饲料的营养价值，减少畜禽粪便中磷的排放，减轻环境污染［5－7］。

传统的产植酸酶菌株的筛选方法为透明圈法，该方法利用微生物在植酸酶筛选培养基上降解植酸钙，在菌落周围生成透明圈来初步判断微生物是否产植酸酶，但有些产酸菌株也能降解植酸钙产生透明圈，故平板透明圈法缺乏特异性和绝对性，必须再对产透明圈的菌株进行液体发酵培养，测定发酵液的植酸酶活性，才能判断出该菌株是否能够产植酸酶。

目录摘要 (2)Abstract (2)1前言 (4)2酶活定义 (6)3样品 (6)4试剂及溶液 (6)4.1试剂 (6)4.2溶液 (7)5实验仪器及设备 (8)6实验方法 (8)6.1植酸酶标准曲线的绘制 (8)6.2发酵前面粉中植酸酶活性的测定 (9)6.3发酵后面粉中植酸酶活性的测定 (10)7结果分析 (10)7.1植酸酶标准曲线的获得 (10)7.2 测定发酵前面粉中植酸酶活性 (11)7.3 测定发酵后面粉中植酸酶活性 (12)7.4发酵前后面粉中植酸酶活性的比较 (13)8重现性实验 (19)9讨论 (20)10结论 (21)总结与体会 (22)致谢词 (23)参考文献 (24)摘要植酸酶是一类特殊的催化剂，能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用[1]。

但它会因为其天然结构遭到修饰而丧失活性，植酸酶结构上的微小改变可以大大改变其与目标底物(即植酸)的结合能力[2]。

这些蛋白质发挥功能时所处的环境对其特性也非常关键, 因为它们对诸如温度和pH 值等因素高度敏感[2]。

本实验采用钒一钼酸铵法，既利用植酸酶可以水解植酸钠释放出无机磷的原理。

通过加入酸性钒-钼酸铵试剂使水解反应停止，同时与水解释放出来的无机磷产生颜色反应，形成黄色的[(NH4)3PO4NH4VO3.16MoO3]复合物在415 nm波长下测定磷的含量。

以标准植酸酶为参照物，间接计算被测样品中植酸酶的含量[3]。

摘要应包括主要的实验目的方法结果结论【关键词】面粉发酵钼蓝比色法植酸酶AbstractPhytase is a special kind of catalyst.It will chang phytic acid and its salts in food and feed into available phosphorus to meet the need of organisms，reduce the phosphorus content in the manure and the pollution of the environment, improve the absorption and use of nutrients . But because its natural structure was modified, it will loss its activity. The small chang in the structure can greatly chang the ability to combine with phytic acid. When these proteins function works, the environment is also very critical of their properties, because they are highly sensitive to temperature and pH .This study used a V-ammonium molybdate, which is the principle that phytase can hydrolyze sodium-sik to release inorganic phosphorus. Acidic vanadium - ammonium molybdate reagents joined can hydrolysis stop, and then generate a color reaction with hydrolysis of inorganic phosphorus released, and produce a yellow [(NH4)3PO4NH4VO3 .16MoO3] complex in the 415 nm wavelength of the phosphorus content . Content of phytase in the samples tested can be indirect calculated by a standard reference for the phytase.Keywords：wheat flour Fermentation Molybdenum bluecolor method phytase1 前言磷在植物中的主要存在形式为植酸磷，植酸磷不能被单胃动物直接利用，从而造成磷源浪费和形成高磷粪便污染环境。

高效植酸酶的选择标准植酸酶是一种能够水解植酸的酶类，广泛应用于畜禽饲料、食品加工、酿造等行业。

随着植酸酶应用领域的不断扩大，高效植酸酶的选择变得至关重要。

本文将从酶的活性、稳定性、适应性等方面，为您详细介绍高效植酸酶的选择标准。

一、活性高效植酸酶的活性是衡量其水解植酸效果的关键指标。

活性高的植酸酶在单位时间内可水解更多的植酸，从而提高生产效率，降低成本。

选择高活性的植酸酶至关重要。

活性的衡量主要通过酶的酶活力来评价，酶活力可通过测定酶的催化反应速率来确定。

在选择高效植酸酶时，需注意查看产品说明书，选择酶活力高的产品。

也可以通过相关实验室进行测试，以确保所选植酸酶的实际活性达到要求。

二、稳定性植酸酶在使用过程中需要具备一定的稳定性，即能够保持其活性的长久效果，减少因酶的降解而导致的成本增加。

高效植酸酶的选择标准之一就是稳定性。

稳定性主要包括热稳定性、耐酸碱性、耐盐性等方面。

热稳定性是指酶在高温条件下能够保持其活性，耐酸碱性是指酶在酸碱条件下能够保持其活性，而耐盐性是指酶在高盐条件下能够保持其活性。

选择高效植酸酶时，需要注意查看产品说明书，选择具有良好稳定性的产品。

三、适应性适应性主要包括温度适应性、PH适应性等方面。

温度适应性是指酶能够在不同温度条件下发挥出稳定的活性，PH适应性是指酶能够在不同PH条件下发挥出稳定的活性。

在选择高效植酸酶时，需要考察其在不同条件下的适应性，选择适应性较好的产品。

四、纯度在选择高效植酸酶时，需要查看产品的纯度指标，选择纯度较高的产品。

也可以通过实验室测试，以确保所选植酸酶的纯度符合要求。

五、安全性高效植酸酶的安全性也是选择标准之一。

安全的植酸酶应该是无毒、无污染的，不会对生产环境和产品质量产生负面影响。

在选择高效植酸酶时，需要注意查看产品的安全性指标，选择安全性较好的产品。

高效植酸酶的选择标准主要包括活性、稳定性、适应性、纯度和安全性。

选择适合自身生产需求的植酸酶，不仅能够提高生产效率，降低生产成本，还能够保证产品质量，推动企业的可持续发展。