实验1 大肠杆菌的培养和分离.doc

纯化大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道菌，也是许多生物学实验室中最常用的微生物之一。

在进行分子生物学和遗传学研究时，纯化大肠杆菌是必不可少的步骤之一。

纯化大肠杆菌的目的是将目标菌种从其他微生物（如其他细菌、真菌）和杂质中分离出来，以便后续的实验操作。

以下是一种常用的纯化大肠杆菌的方法：1. 培养大肠杆菌首先，需要选择一株含有目标基因的大肠杆菌株，并进行培养。

将该菌株接种到含有合适营养物质的培养基中，并在适当的温度下培养。

常用的培养基包括Luria-Bertani培养基（LB培养基）等。

2. 收获大肠杆菌在培养过程中，大肠杆菌会进入对数生长期。

当细菌数量达到一定程度时，可以收获细菌。

收获大肠杆菌的方法有两种：离心收获和滤膜收获。

离心收获适用于较大规模的细菌培养，而滤膜收获适用于小规模的细菌培养。

3. 细胞破碎将收获的大肠杆菌细胞进行破碎，以释放细胞内的目标蛋白或核酸。

细胞破碎的方法有多种，包括机械破碎、超声波破碎和化学破碎等。

机械破碎是最常用的方法之一，可以使用搅拌器或高压均质器对细胞进行破碎。

4. 离心分离通过离心将细胞的残渣和细胞碎片与溶解的目标物分离。

首先，通过低速离心将细胞碎片和细胞碎片从溶解的目标物中分离出来。

然后，通过高速离心将残留的细胞碎片和杂质从溶解的目标物中完全清除。

5. 溶解目标物将离心分离的溶解物中的目标物进行溶解，得到纯净的目标蛋白或核酸。

溶解的方法根据目标物的性质不同而不同，可以使用洗脱缓冲液、盐溶液或变性剂等。

溶解后，可以通过低速离心将溶解物中的可溶性目标物与不溶性杂质分离。

6. 纯化目标物将溶解的目标物进行纯化，以获得纯净的目标蛋白或核酸。

常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶过滤层析、离子交换层析和透析等。

选择合适的纯化方法可以根据目标物的性质和目标物与杂质之间的亲和性进行选择。

7. 鉴定目标物对纯化后的目标物进行鉴定，确保纯化的目标物具有预期的功能和性质。

大肠杆菌培养的基本操作介绍如下：
1.紫外线灭菌：将需要使用的培养物和培养器具放置在紫外线灯
下，进行消毒处理。

2.制备培养基：制备适当的培养基。

常用的培养基包括LB培养基
和M9培养基等。

3.接种：选取一定数量的大肠杆菌，将其接种到培养基中。

4.培养：将接种后的培养基放置在恒温摇床上，以适当的温度和
湿度条件下进行培养。

5.观察：观察培养物的生长情况，记录生长速度和菌落形态等信
息。

6.分离：将培养物分离，进行纯化处理。

7.储存：将分离后的纯化菌株储存，并进行标记和记录。

以上是大肠杆菌培养的基本操作，需要注意消毒、无菌操作和记录等方面的细节。

一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。

2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。

3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。

二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。

本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。

2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。

四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。

（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。

（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。

（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。

（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。

（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。

（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。

4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。

（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。

（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。

（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。

五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。

2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。

3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。

分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是微生物学研究中的重要模式生物。

分离大肠杆菌是许多实验室中常见的操作，这里将介绍几种常用的分离方法。

1.无菌技术准备在进行分离大肠杆菌之前，必须保证实验环境的无菌。

操作前要用75%乙醇对操作台面进行消毒，使用无菌培养皿和试管，并佩戴无菌手套。

2.样品采集从目标样品中采集含有大肠杆菌的样品。

常见的样品类型包括食品、水样、粪便等。

采集样品时要注意避免污染，使用无菌容器收集样品。

3.预处理样品将采集到的样品进行预处理，以提高大肠杆菌的分离效率。

常用的预处理方法包括：(1) 粪便样品：将粪便样品稀释于无菌生理盐水中，通过离心操作去除大部分固体颗粒。

(2) 食品样品：将食品样品加入适量的无菌生理盐水中，进行均匀搅拌。

(3) 水样：直接使用无菌容器收集水样，避免污染。

4.选择培养基根据实验需要选择适合分离大肠杆菌的培养基。

常用的培养基包括营养琼脂糖平板（Nutrient Agar Plate）、MacConkey琼脂糖平板（MacConkey Agar Plate）等。

这些培养基含有适合大肠杆菌生长的营养物质，并可以通过某些特殊成分选择性地抑制其他细菌的生长。

5.涂布法涂布法是最常用的分离大肠杆菌的方法之一。

具体操作步骤如下：(1) 取一支无菌的鉴别环，将其蘸取预处理后的样品。

(2) 将鉴别环均匀地涂布在培养基平板的表面上。

(3) 使用无菌铁环或无菌玻璃杆均匀涂布，以保证样品的均匀分布。

(4) 将涂布好的培养基平板放置在恒温培养箱中，以适当的温度（通常为37摄氏度）进行培养。

6.滤膜法滤膜法是一种通过滤膜来分离大肠杆菌的方法。

具体操作步骤如下：(1) 准备无菌滤膜和滤膜培养基。

(2) 将预处理后的样品滤过滤膜，将滤膜放置在滤膜培养基平板上。

(3) 将滤膜培养基平板放置在恒温培养箱中进行培养。

7.生物化学试验分离大肠杆菌后，需要进行进一步的鉴别和确认。

大肠杆菌的培养方法
大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中，也是一种重要的实验室模式生物。

在生物学、医学、食品工业等领域中，大肠杆菌的培养方法是非常重要的。

下面我们来了解一下大肠杆菌的培养方法。

1. 培养基的选择
大肠杆菌可以在多种培养基上生长，但最常用的是LB培养基。

LB 培养基是一种富含营养物质的培养基，可以提供大肠杆菌所需的所有营养物质。

此外，还有一些特殊的培养基，如M9培养基、TB培养基等，可以根据实验需要选择。

2. 培养条件的控制
大肠杆菌的生长需要一定的温度、pH值和氧气含量等条件。

一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37℃，pH值为7.0左右，需要充足的氧气供应。

因此，在培养大肠杆菌时，需要控制好这些条件，以保证细菌的正常生长。

3. 培养方法的选择
大肠杆菌的培养方法有液体培养和固体培养两种。

液体培养适用于大规模培养，可以在较短时间内获得大量的细菌。

固体培养适用于单个菌落的分离和纯化，可以使不同菌株之间不互相干扰，方便后
续的实验操作。

4. 培养时间的控制
大肠杆菌的生长速度较快，一般在液体培养中可以在12-16小时内达到对数生长期，而在固体培养中需要24-48小时。

因此，在培养大肠杆菌时，需要控制好培养时间，以避免过度生长或过早停止生长。

大肠杆菌的培养方法是实验室中非常重要的一部分。

通过选择合适的培养基、控制好培养条件和时间，可以获得高质量的大肠杆菌菌株，为后续的实验操作提供保障。

分离大肠杆菌的方法大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，具有广泛的应用价值。

在科学研究和实际应用中，需要将大肠杆菌与其他细菌分离开来，以便进行进一步的研究和利用。

下面将介绍几种常用的分离大肠杆菌的方法。

1. 革兰氏染色法革兰氏染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，也适用于分离大肠杆菌。

该方法基于细菌细胞壁的染色反应，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。

大肠杆菌属于革兰氏阴性菌，通过革兰氏染色可以将其与革兰氏阳性菌区分开来。

2. 培养基选择法大肠杆菌对不同培养基有特定的生长要求，可以利用这一特性进行分离。

常用的培养基有MacConkey培养基和Eosin Methylene Blue (EMB) 培养基。

这两种培养基中都含有特定的抑菌剂，可以抑制大肠杆菌以外的其他细菌的生长，从而使大肠杆菌能够生长并形成特征性的菌落。

3. 双层琼脂糖平板法双层琼脂糖平板法是一种常用的分离大肠杆菌的方法。

该方法利用了大肠杆菌产生气体的特性。

首先，在琼脂糖平板上均匀涂抹待分离样品，然后在上层平板上加上一层液体琼脂糖。

如果样品中存在大肠杆菌，它们会在培养过程中产生气体，使液体琼脂糖上升形成气泡，从而可以观察到特征性的气泡形成。

4. PCR 筛选法PCR 筛选法是一种高效的分离大肠杆菌的方法。

它利用了大肠杆菌特有的基因序列，通过特异性引物扩增目标基因片段，并通过凝胶电泳分离和鉴定。

这种方法具有高灵敏度和高特异性，可以快速、准确地分离大肠杆菌。

总结起来，分离大肠杆菌的方法有革兰氏染色法、培养基选择法、双层琼脂糖平板法和PCR 筛选法等。

在实际应用中，可以根据具体需要选择适合的方法进行分离和鉴定。

这些方法的应用不仅可以帮助科研人员深入了解大肠杆菌的特性和生理功能，还可以为医学诊断、食品安全等领域提供有力的支持。

大肠杆菌如何培养
一、大肠杆菌如何培养1. 大肠杆菌如何培养2. 大肠杆菌的保存方法 3. 大肠杆菌菌种的复苏二、大肠杆菌对人体益处和危害三、什么是大肠杆菌
大肠杆菌如何培养
1、大肠杆菌如何培养1.1、称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。

牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片。

蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。

1.2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。

若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。

1.3、调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。

若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节。

pH的调节通常放在加琼脂之前。

应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

1.4、过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察。

但是供一般使用的培养基,这步可省略。

1.5、分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。

分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。

2、大肠杆菌的保存方法
2.1、常用的长期保存法有:液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜(DMSD)等保护剂。

大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。

下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。

2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。

3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。

4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。

5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。

6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。

7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。

8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。

9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。

10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。

11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。

12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。

13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。

14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。

15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。

16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。

17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。

18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。

19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。

20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。

大肠杆菌一般培养方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是生物学研究中最常用的模式菌株之一、大肠杆菌具有广泛的分布范围，可以在许多环境中生存和繁殖。

本文将介绍大肠杆菌的一般培养方法。

一、培养基的制备大肠杆菌的培养基通常包括两个主要组分：固体培养基和液体培养基。

固体培养基用于菌落计数和细菌分离，并可用于培养单个菌落。

液体培养基则可用于扩大菌种和进行大规模的培养。

1.固体培养基的制备最常用的固体培养基为琼脂培养基。

制备过程如下：（1）称取所需琼脂，加入适量的蒸馏水中，进行均匀搅拌。

（2）加热至100摄氏度，溶解琼脂。

（3）煮沸1-2分钟，消毒琼脂。

（4）冷却至约50摄氏度。

（5）加入所需的培养基成分，如营养物质和抗生素等。

（6）倒入培养皿中，待凝固后即可使用。

2.液体培养基的制备最常用的液体培养基包括LB培养基（Lysogeny Broth）和TB培养基（Terrific Broth）。

制备过程如下：（1）称取所需培养基成分，加入适量蒸馏水中。

（2）加入琼脂和洗涤剂等成分，以调整液体的黏度和表面张力。

（3）调整pH值。

（4）加热并搅拌溶解，待溶解后冷却。

（5）过滤培养基，以去除不溶性杂质。

（6）分装到培养瓶中。

二、大肠杆菌的预培养将保存的大肠杆菌菌种(如冻存菌)挑取一高洁净的培养皿上贴菌，通常可采用菌板上交叉涂布法，用三角稀菌棒反复涂抹菌落。

之后用无菌瓷珠轻压菌落，使其均匀分散于培养皿上。

贴菌后将培养皿倒置，避免水分凝结在盖子上。

培养皿翻转的目的是避免水珠滴入培养基内，影响气体交换。

然后将培养皿放入培养箱中，37℃保温，24小时后进行预培养。

三、大肠杆菌的正式培养预培养后，取适量的大肠杆菌菌落液，加入培养基中，并进行摇床培养。

有时候，还需要在培养基中添加相应的抗生素，以筛选具有特定基因或表现的菌株。

培养条件一般为37摄氏度、摇床转速为200-250转/分钟。

培养时间根据需要和实验目的而定。