(1)高拷贝数的质粒载体 - 西北师范大学

质粒载体载体主要有病毒和⾮病毒两⼤类,其中质粒DNA是⼀种新的⾮病毒转基因载体。

⼀、⼀个合格质粒的组成要素a复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。

原核⽣物DNA分⼦中只有⼀个复制起始点。

⽽真核⽣物DNA分⼦有多个复制起始位点。

b 抗⽣素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+c 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因⽚段d P/E 启动⼦/增强⼦e Terms 终⽌信号f 加poly（A）信号可以起到稳定mRNA作⽤⼆、如何阅读质粒图谱第⼀步：⾸先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第⼆步：再看筛选标记，如抗性，决定使⽤什么筛选标记。

（1）Ampr ⽔解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。

（2）tetr 可以阻⽌四环素进⼊细胞。

（3）camr ⽣成氯霉素羟⼄酰基衍⽣物，使之失去毒性。

（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍⽣物）失活（5）hygr 使潮霉素β失活。

第三步：看多克隆位点（MCS）。

它具有多个限制酶的单⼀切点。

便于外源基因的插⼊。

如果在这些位点外有外源基因的插⼊，会导致某种标志基因的失活，⽽便于筛选。

决定能不能放⽬的基因以及如何放置⽬的基因。

第四步：再看外源DNA插⼊⽚段⼤⼩。

质粒⼀般只能容纳⼩于10Kb的外源DNA⽚段。

⼀般来说，外源DNA⽚段越长，越难插⼊，越不稳定，转化效率越低。

第五步：是否含有表达系统元件，即启动⼦－核糖体结合位点－克隆位点－转录终⽌信号。

这是⽤来区别克隆载体与表达载体。

克隆载体中加⼊⼀些与表达调控有关的元件即成为表达载体。

选⽤那种载体，还是要以实验⽬的为准绳。

启动⼦－核糖体结合位点－克隆位点－转录终⽌信号a 启动⼦－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵⼦编码顺序的上游，是DNA分⼦上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动⼦本⾝不被转录。

b增强⼦/沉默⼦－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的⼀种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。

质粒载体的发展质粒载体即，在由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列中插入外源的目的基因，以质粒为载体，将目的基因通过转化或转导的方法导进宿主细胞，进行重组、筛选、扩增的过程。

目录编辑本段质粒载体简介质粒是小型环状DNA分子，在基因工程中作为最常用，最简单的载体，必须包括三部分：遗传标记基因，复制区，目的基因。

质粒在所有的细菌类群中都可发现，它们是独立于细菌染色体外自我复制的DNA分子。

自然界中，质粒是在营养充足时出现的，它在结构、大小、复制方式，每个细菌的拷贝数，在不同的细菌体内的繁殖力，在菌种之间的转移力等方面都会变化，可能最重要的是质粒所携带的特征的改变。

大多数原核生物的质粒是双链环状的DNA分子；但是无论是在革兰式阳性还是阴性菌体内都可以发现线状质粒。

质粒大小变化很大，可从几个到数百个kb。

质粒依靠宿主细胞提供的蛋白质进行复制，但也可以使宿主细胞获得质粒编码的功能。

质粒复制可以与细菌的细胞周期同步，导致菌体内质粒的拷贝数较低，质粒复制也可独立于细胞周期，使每个菌体内扩增了成百上千个质粒拷贝。

一些质粒在菌种间可自由地转移它们的DNA分子，另一些只转移质粒给同种细菌，而有些却根本不转移它们的DNA。

质粒带有具有许多功能的基因，这些功能包括对抗生素和重金属道德抗性、对诱变原的敏感性、对噬菌体的易感或抗性、产生限制酶、产生稀有的氨基酸和毒素、决定毒力、降解复杂有机分子，以及形成共生关系的能力和在生物界内转移DNA的能力。

编辑本段质粒的基本特征质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。

其特点如下：是染色质外的双链共价闭合环形DNA（covalently closed circuar DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300kb之间，<15kb的小质粒比较容易分离纯化，>15kb 的大质粒则不易提取。

能自主复制，是能独立复制的复制子（autonomous replicon）。

质粒及质粒载体复习题及答案一、填空题1、基因工程中有三种主要类型的载体：质粒DNA、病毒DNA、质粒和病毒DNA杂合体。

2.由于不同构型的DNA插入EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同。

SC DNA的泳动速度最快，OC DNA泳动速度最慢，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分别开来。

3.就克隆一个基因（DNA片段）来说，最简单的质粒载体也必须包括三个部分：复制子（含有复制起点）、选择标记（主要是抗性基因）、克隆位点（便于外源DNA插入）。

另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子质量。

4.如果两个质粒不能稳定地共存于一个寄主细胞中，则属于同一个不亲和群，这是因为它们的复制机制相同所致。

5.质粒拷贝数是指细胞中质粒的份数同染色体的比值，即质粒/染色体。

6.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫质粒消除（或治愈）。

7.PBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pMBl ,它的四环素抗性基因来自于pSClOl ,它的氨节青霉素抗性基因来自于PSE2124 （R质粒）。

8.YAC的最大容载能力是1000~2000kb , BAC载体的最大容载能力是300kb 。

9.把那些没有可检测表型的质粒称为隐蔽性质粒。

10.pUC18质粒是目前使用较为广泛的载体。

pUC系列的载体是通过PBR322和M13两种质粒改造而来。

它的复制子来自pMBl , Amp抗性基因则是来自转座子。

11・Ti质粒是自然界存在的植物基因工程的天然载体。

12.既能在夙coll又能在S・cerevisiae中自我复制的载体DNA称为穿梭载体。

二、选项题（单选或多选）1.下面关于松弛型质粒（relaxed plasmid）性质的描述中，（C ）是不正确的。

的制约, 而有较多的拷贝数A.质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制B.可以在氯霉素作用下进行扩增C.通常具有较少的拷贝数D.同严紧型质粒整合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子2.基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有（B ）被视为用作基因工程载体的天然质粒载体。

基因工程知识点基因工程1、操作水平:DNA分子水平目的:定向改变遗传物质或获得基因产物。

理论基础：1）物质基础一一脱氧核甘酸2）结构基础一一规则的双螺旋结构3）中心法则，共用一套遗传密码2、基因工程（geneticengineering）:指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。

上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）,而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。

（基因操作、遗传工程、重组DNA技术）。

1973年诞生的基本用途:分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源;大规模生产生物活性物质；设计、构建生物的新性状甚至新物种。

3、重组DNA技术：是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术其核心步骤是DNA片段之间的体外连接。

4、基因工程的基本形式：第一代基因工程蛋白多肽基因的高效表达经典基因工程第二代蛋白编码基因的定向诱变蛋白质工程第三代基因工程代谢信息途径的修饰重构途径工程第四代基因组或染色体的转移基因组工程5、基因工程诞生的理论基础:理论上的三大发现1】证实了DNA是遗传物质；2】揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理；3］遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定。

6、DNA双螺旋:带负电的糖一磷酸骨架在外侧,碱基在螺旋中间相互堆叠，以5'-3'方向反向平行关系。

第二章用于核酸操作的工具酶1、寄主的限制和修饰现象：［1］作用:保护自身DNA不受限制；破坏入侵的外源DNA,使之降解。

【2】入侵噬菌体的子代便能高频感染同一宿主菌，但却丧失了在其原来宿主细胞中的存活九因为它们在接受新宿主甲基化酶修饰的同时,也丧失了原宿主菌甲基化修饰的标记。

2、限制性核酸内切酶的命名：如:HindI属名(H)+种名(in)+株名(d)+类型(I)II型限制性核酸内切酶的基本特性:识别双链DNA分子中4-8对碱基的特定序列,大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧,识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构。

基因操作原理_南昌大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.人工导入基因和正常染色体基因间的同源重组，可以发生基因置换参考答案:正确2.1953年Watson和Crick提出（）参考答案:多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋3.DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散可能因为酶失活参考答案:正确4.松弛型质粒（）参考答案:上述A、B两项正确5.粘粒是一种人工建造的载体，下列哪项是错误的（）参考答案:进入受体细胞后，可引起溶原化反应6.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当参考答案:这一系统中的核酸酶都是II类限制性内切核酸酶7.端粒酶的性质是一种DNA外切酶参考答案:错误8.限制性内切核酸酶可以特异性地识别双链DNA的特定碱基序列参考答案:正确9.DNA的变性（）参考答案:包括双螺旋的解链_是可逆的_包括氢键的断裂10.在类似RNA这样的单链核酸所表现出的“二级结构”中，发夹结构的形成（）参考答案:基于各个片段间的互补，形成反向平行双螺旋_仅仅当两配对区段中送油的碱基均互补时才会发生11.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制酶量最好参考答案:正确12.下列关于细菌人工染色体BAC的特征描述，除了（）以外都是正确的。

参考答案:BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝13.用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达参考答案:Western 印迹14.下列哪一个不是Southern印迹的步骤？参考答案:DNA与载体的连接15.在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是参考答案:诱导宿主的α肽的合成16.切口平移是指在（）的作用下，使（）带上放射性标记参考答案:DNA聚合酶I，DNA17.用免疫化学法筛选重组体的原理是（）参考答案:根据外源基因的表达18.如何获取与疾病相关的基因功能信息？（）参考答案:可通过GenBank上的信息，比较正常和异常基因的序列19.如果在人的基因组中新发现一个与先前在酵母中发现的基因具有序列同源性，说明（）参考答案:可推测该基因编码的蛋白质与酵母中表达的同类基因具有类似的功能20.确定人类疾病的分子基础的最重要步骤是（）参考答案:将与疾病相关基因克隆并测序21.下列关于粘粒载体的描述，不正确的是（）参考答案:可像YAC载体那样构建大片段的基因组文库22.以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。

质粒载体的特点及应用质粒载体是一种用于携带和传递特定基因的分子。

它的主要特点有多个拷贝数、相对较小的大小、可自复制和稳定传递等。

下面将详细介绍质粒载体的特点及其应用。

一、质粒载体的特点1.多个拷贝数：质粒载体通常可以在目标细胞中形成多个拷贝，从而提高目标基因的表达水平。

这对于研究基因功能和大规模蛋白产量等应用非常重要。

2.相对较小的大小：质粒载体通常比细菌基因组小得多，方便通过细菌转化技术导入目标细胞。

同时，小的质粒载体也更容易被提取和纯化。

3.可自复制：质粒载体可以通过细胞的复制机制自主复制。

这意味着目标基因可以在转化后传递给后代细胞，并稳定存在。

4.稳定传递：质粒载体的自复制保证了基因的稳定性和可遗传性。

它可以长期存在于细胞中，从而实现长期的基因表达。

5.多样性：质粒载体具有很高的多样性，可以根据不同的研究需求选择合适的载体。

常见的质粒载体包括pUC、pBR322等。

二、质粒载体的应用1.基因克隆：质粒载体是进行基因克隆的重要工具。

通过将目标基因插入到质粒载体的多克隆位点上，可以实现目标基因的扩增和筛选。

2.基因表达：质粒载体可以用于外源基因的表达。

将目标基因插入到适当的表达载体中，可以实现目标基因的高效表达，并获得目标蛋白。

3.分子标记：质粒载体可以用来标记目标分子。

通过在质粒载体上引入荧光蛋白等标记基因，可以实现目标分子的可视化和追踪。

4.基因敲除：质粒载体可以用来进行基因敲除实验。

通过在质粒载体上插入特定的引物或RNA干扰序列，可以干扰目标基因的表达，从而研究其功能和调控机制。

5.基因治疗：质粒载体可以用来进行基因治疗研究。

将具有治疗效果的基因插入到质粒载体中，可在体内或体外进行基因传递实验，通过调控基因的表达来治疗疾病。

6.基因工程：质粒载体可以用来进行基因工程研究。

通过对载体进行改造和优化，可以实现目标基因的高效表达和产量提高。

总结：质粒载体具有多个拷贝数、相对较小的大小、可自复制和稳定传递等特点，是基因工程研究中常用的工具。

基因工程：(又称分子克隆或基因的无性繁殖):通过体外基因操作，引起生物体性状改变的技术。

基因工程的三要素:供体,受体,载体基因工程的发展史1、理论上三大发现●生物的遗传物质――DNA的发现：（现代生物科学的开端）●DNA双螺旋结构和半保留复制机理的建立（大大促进生物科学的发展）●遗传信息传递方式（中心法则）（为基因工程的诞生奠定了理论基础）2、技术上的三大发明●限制性内切酶的发现与DNA的切割（标志着DNA重组时代的开始）●DNA连接酶的发现与DNA片段的连接（基因的体外重组）●基因工程载体的研究与应用（运输工具）基因工程在农林业应用：基因工程的基本操作程序主要包括五个方面的内容：1、带有目的基因的DNA片段的制备2、DNA片段与载体DNA体外重组3、 DNA重组体转入受体细胞4、重组体克隆的筛选与鉴定5、外源基因的表达cDNA法克隆目的基因的局限性并非所有的mRNA分子都具有polyA结构细菌或原核生物的mRNA半衰期很短mRNA在细胞中含量少，对酶和碱极为敏感，分离纯化困难仅限于克隆蛋白质编码基因PCR(Polymerase Chain Reaction）法，又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术，是一种高效快速的体外DNA聚合程序。

PCR克隆目的基因的基本程序由Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物中，其3’末端总是会带有一个非模板依赖型的突出碱基，而且这个碱基几乎总是A，因为Taq DNA聚合酶对dATP具有优先聚合活性。

由于该突出碱基的存在，克隆时即可以采取TdT末端加同聚尾的方法与载体拼接，也可以使用专门的T载体克隆DNA重组体转入受体细胞•1．受体细胞(特点)：(1) 转化率高 (2) 保持质粒稳定 (3)营养缺陷型 (4)其他标记2．DNA重组体进入受体细胞人为地诱导大肠杆菌这样的受体细胞进入感受态，主要采用两种途径：(1) 化学处理 (2) 电击法融合蛋白（fusion protein,包涵体）：表达的蛋白质或多肽的N末端由原核DNA 编码，C末断由克隆的真核DNA编目。

一、填空题1、基因文库的构建通常采用cDNA 法和鸟枪法两种方法。

2 、限制性内切酶识别序列的结构普通为具有 180 度旋转对称的回文结构。

3、DNA 连接酶主要有两种：T4 噬菌体和大肠杆菌 DAN 连接酶。

4、根据质粒在宿主细胞中所含拷贝数的多少，可以把质粒分为两种类型：密切型质粒和松弛型质粒。

5、原核受体细胞通常包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蓝细菌。

6、原核生物或者低等真核生物，将外源重组 DNA 导入受体细胞的方法有借助生物载体的转化、转染、转导。

7、对细菌细胞进行转化的关键是细胞处于感受态。

8、基因工程是_____1970’____年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

9、部份酶切可采取的措施有：(1)减少酶量； (2)缩短反应时间； (3)增大反应体积等。

10、第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是EcoRl。

11、DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割 DNA 聚合酶I 得到的份子量为 76kDa 的大片段，具有两种酶活性：(1)5'-3'合成酶的活性； (2)3'-5'外切核酸酶的活性。

12、为了防止 DNA 的自身环化，可用_碱性磷酸酶__去双链 DNA_ 5’端的磷酸基团_。

13、测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它惟独5'-3'合成酶的活性，而没有 3'-5' 外切酶的活性。

14、切口移位(nick translation)法标记 DNA 的基本原理在于利用 DNA 聚合酶 I 的5'一 3'合成酶和 5'一 3'合成酶的作用。

15、欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 份子转变成平末端的双链形式，通常可采用S1 核酸酶切割或者DNA 聚合酶补平。

16、反转录酶除了催化 DNA 的合成外，还具有核酸水解酶 H 的作用，可以将DNA-RNA 杂种双链中的 RNA 水解掉。

pet30a核苷酸序列
核苷酸序列是生物信息学领域的一个重要研究方向，它在基因工程、生物制药等领域具有广泛的应用。

在众多核苷酸序列中，PET30a核苷酸序列以其独特的优势受到了科研工作者的关注。

PET30a核苷酸序列是一种大片段、高拷贝数的质粒载体，来源于大肠杆菌。

它具有较高的克隆效率和稳定性，适用于多种生物合成途径的表达。

与其他核苷酸序列相比，PET30a核苷酸序列在表达外源基因时，具有更高的表达水平和更容易的操作性。

因此，它在基因工程研究中具有广泛的应用。

PET30a核苷酸序列的应用主要体现在以下几个方面：
1.基因表达：PET30a核苷酸序列可以用于外源基因的表达，从而获得目标蛋白质。

这对于研究基因功能、蛋白质结构与功能的关系等方面具有重要意义。

2.药物筛选：PET30a核苷酸序列可用于筛选具有特定功能的药物靶点，为药物研发提供依据。

3.生物传感器：PET30a核苷酸序列可以用于构建生物传感器，实现对环境中特定物质的高灵敏度检测。

4.基因治疗：PET30a核苷酸序列可作为基因治疗的载体，将正常或功能性基因导入病变细胞，从而达到治疗疾病的目的。

核苷酸序列在生物科技领域的意义不容忽视。

我国在核苷酸序列研究方面取得了世界领先的成果。

例如，我国科学家成功解析了新冠病毒（SARS-CoV-2）的基因组序列，为疫苗研发和药物筛选提供了重要依据。

此外，我国还在基
因编辑技术、基因治疗等领域取得了一系列突破性进展。

总之，PET30a核苷酸序列作为一种重要的生物资源，其在基因工程、生物制药等领域的应用具有广泛的前景。

第三章分子克隆载体（Molecular cloning vectors）一、名词解析二、填空题1.基因工程中有三种主要类型的载体、和。

2.就克隆一个基因来说，最简单的质粒载体也必须包括三个部分和、。

另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子质量。

3.如果两个质粒不能稳定的存在已同一个宿主细胞中，则属于群，这是因为他们的所致。

4.pBR 322是一种改造型质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来源于，它的氨苄青霉素抗性基因来源于。

5.Puc18质粒是目前使用较为广泛的载体。

pUC系列的载体是通过和两种质粒改造而来。

它的复制子来源于，Amp抗性基因则是来源于。

6.当λ噬菌体DNA进入宿主细胞以后是靠宿主细胞的和形成封闭的环状的DNA分子的。

7.λ噬菌体是感染大肠杆菌的噬菌体。

8.α-互补是指 lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的阴性的突变体之间实现互补。

9.溶源化的频率和与有关。

10.噬菌体DNA通过其上唯一的整合位点与宿主染色体DNA上的唯一整合位点发生重组，从而整合到染色体中。

11.通过分析大量缺陷型λ噬菌体的 DNA ，发现 J 基因与 Cro 基因之间的 DNA 被或替换后，不影响λ噬菌体裂解生长。

12.对野生型大肠杆菌来说，向溶源和裂解方向的转变是由和决定的。

13.代表性λ噬菌体载体有和14.粘粒的组成包括________，________，________。

15.柯斯质粒(Cosmid)载体：一种由________和_______cos尾巴构建的复合载体。

16.pcos1 EMBL 是设计用于筛选体内重组的重组粘粒文库，通过同源重组过程达到筛选目标克隆的目的。

该载体的复制起点来源于__________质粒，含_________和_________抗性基因。

17.酵母人工染色体由酵母染色体的__________、__________和__________等功能性DNA序列组成。

异源蛋白表达高拷贝策略
异源蛋白表达高拷贝策略是指通过采用合适的方法和策略，使异源蛋白在宿主细胞中能够高效地表达出来，以获得大量的目标蛋白。

以下是一些常用的异源蛋白表达高拷贝策略：
1. 使用高拷贝数质粒：选择具有高拷贝数的质粒载体，如pUC系列质粒，可以提高目标蛋白的表达水平。

2. 选择适当的宿主细胞：某些宿主细胞具有高表达异源蛋白的能力，例如大肠杆菌（E. coli）BL21(DE3)等。

3. 优化启动子和转录因子：使用强启动子和适当的转录因子可以增强目标蛋白的转录水平，提高表达效率。

4. 调整培养条件：优化培养基组成、温度、pH值、培养时间等条件，可以提高细胞的生长速度和目标蛋白的表达水平。

5. 优化诱导条件：对于适应感受子的异源蛋白表达系统，通过优化诱导剂的浓度、诱导时间等条件，可以提高目标蛋白的表达水平。

6. 利用融合蛋白增加稳定性：将目标蛋白与稳定性较高的蛋白进行融合，可以增加目标蛋白的稳定性和表达水平。

7. 应用外源信号肽：外源信号肽可以将蛋白定位到适当的细胞
区域，如细胞质、内质网、细胞外等，提高蛋白的表达和分泌效率。

总之，通过合理选择质粒载体、宿主细胞和适当的表达调控策略，结合优化培养条件和转化方法，可以实现异源蛋白高拷贝表达。

分子生物学_中南大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.以下哪项属于真核生物基因的顺式作用元件参考答案:增强子2.以下哪项是原核生物基因组的结构特点参考答案:操纵子结构3.串联重复拷贝数的增加是不稳定的，它可随世代的传递而扩大，所以被称为动态突变（dynamic mutation）。

参考答案:正确4.强直性肌营养不良由3ˊ非翻译区CTG拷贝数过度增加引起。

参考答案:正确5.基因诊断不仅局限于遗传病的诊断。

参考答案:正确6.可用于分析基因转录水平变化的是（）参考答案:RT-PCR7.作为克隆载体的质粒具有一个以上的遗传标记，便于对宿主细胞进行选择。

参考答案:正确8.3种等电点不同的蛋白质：甲蛋白等电点为6.1，乙蛋白为4.3，丙蛋白为5.7。

在负极点样后再电泳30分钟，请问哪种蛋白泳动的距离最远（）参考答案:乙蛋白9.转染是指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。

参考答案:正确10.一次检测可以诊断出DNA多位点突变的是参考答案:反向斑点杂交11.基因诊断检测的是基因本身的结构或表达产物变化。

参考答案:正确12.增强子的作用是参考答案:增强基因转录13.真核生物基因表达调控的关键环节是参考答案:转录起始14.Taq DNA聚合酶无5′→3′外切酶活性。

（）参考答案:错误15.反式作用因子的化学本质是参考答案:RNA或蛋白质16.PCR反应中产物一直呈指数积累。

（）参考答案:错误17.在大肠杆菌中表达真核基因,必须用参考答案:cDNA18.以下哪项技术常用于基因诊断中参考答案:PCR19.在大肠杆菌表达系统中，表达分泌蛋白是避免表达的蛋白被宿主菌对产物的降解、减轻宿主细胞代谢负荷及恢复表达产物天然构象的有力措施。

参考答案:正确20.腺病毒载体具有定点整合的特点。

参考答案:错误21.自杀基因治疗使用的前体药物是有毒的。

参考答案:错误22.基因治疗使用最多的载体是病毒载体。