产单核细胞李斯特菌actA基因在大肠杆菌中的表达及其单克隆抗体的研制

单核细胞增多性李斯特菌hlyA基因序列及溶血素活性测定谭炳乾;何启盖;肖军;陈焕春【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2009(29)2【摘要】从3株不同来源的单核细胞增多性李斯特菌中PCR扩增溶血素编码基因hlyA,连接到T克隆载体转化到受体菌DH5α中,经菌落PCR和提取质粒酶切鉴定后测序,对测定的hlyA基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分析,结果表明,从3个菌株克隆的hlyA基因具有完整的开放阅读框,同源性在96.9%以上;其推导的LLO氨基酸序列同源性在97.9%以上,N端存在相同的PEST基序,C端存在相同的保守性11肽结构。

建立和运用分光光度法对3个试验菌株的溶血素活性进行了检测,结果表明,在pH5.6时LLO溶血活性最高,在pH7.0时LLO溶血活性基本丧失。

本试验单核细胞增多性李斯特菌的流行病学分析和基因工程疫苗载体研究提供了依据。

【总页数】5页(P161-165)【关键词】单核细胞增多性李斯特菌;hlyA;李斯特菌溶血素O;溶血活性【作者】谭炳乾;何启盖;肖军;陈焕春【作者单位】襄樊出入境检验检疫局,湖北襄樊441003;华中农业大学农业微生物国家重点实验室,湖北武汉430070【正文语种】中文【中图分类】S852.61【相关文献】1.单核细胞增多性李斯特菌iap基因的克隆、表达与p60蛋白的纯化 [J], 吕添;武海涛;曹正茂;王小红2.单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因克隆与序列分析 [J], 谭炳乾;何启盖;肖军;陈焕春3.基于ActA基因的单核细胞增多性李斯特菌的序列分型研究 [J], 曾海燕4.单核细胞增多性李斯特菌LIPI-1全基因克隆与序列分析 [J], 谭炳乾;何启盖;肖军;陈焕春5.2009-2019年深圳市南山区食源性单核细胞增多性李斯特菌基因组特征分析 [J], 胡鹏威;刘楚云;王银秋;何娇明;袁月明;袁梦;段永翔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

第２８卷第１期２００８年１月南京医科大学学报（自然科学版）ＡＣＴＡＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳＭＥＤＩＣＩＮＡＬＩＳＮＡＮＪＩＮＧ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）・３３・血管内皮生长因子在大肠杆菌中表达、提纯及功能测定程虹，金庆文，姚娟，邓晓萱，万琪，丁新生，季晓辉１２１００２９；１南京医科大学微生物教研室，江苏南京２１００２９）（南京医科大学第一附属医院神经内科，江苏南京［摘要］目的：利用细菌表达系统合成大量重组血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）蛋白。

方法：将ＶＥＧＦ１６５ｃＤＮＡ克隆于表达载体结果：重组ＶＥＧＦ蛋白经ＰＥＴ－３２ａ（＋）后转染ＢＬ－２１株表达重组ＶＥＧＦ蛋白，用分离Ｈｉｓ蛋白的层析柱提纯重组ＶＥＧＦ蛋白。

氨基酸序列测定证实。

功能测定发现重组ＶＥＧＦ蛋白可阻断细胞表面Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１的表达。

Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测定发现Ｈｉｓ蛋白。

结论：上述表达系统制备大量具有生物活性的重组ＶＥＧＦ蛋白［关键词］血管内皮生长因子；ＰＥＴ－３２ａ（＋）表达载体；Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１［中图分类号］Ｒ３９２．１１［文献标识码］Ａ［文章编号］１００７－４３６８（２００８）０１－０３３－０４Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦｉｎＥ．ＣｏｌｉＣＨＥＮＧＨｏｎｇ，ＪＩＮＱｉｎｇ－ｗｅｎ，ＹＡＯＪｕａｎ，ＤＥＮＧＸｉａｏ－ｘｕａｎ，ＷＡＮＱｉ，ＤＩＮＧＸｉｎ－ｓｈｅｎｇ，ＪＩＸｉａｏ－ｈｕｉ１（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮＪＭＵ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９；１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＮＪＭＵ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｍａｋｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｉｎＥ．Ｃｏｌｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅＶＥＧＦｃＤＮＡｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｐｕｔｉｎｔｏｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍＰＥＴ３２ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ）ｉｎｆｒａｍｅｗｉｔｈｈｉｓｔｉｄｉｎｅｔａｇ．ＡｆｔｅｒｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇｉｎｔｏｔｈｅＢＬ２１（ＤＥ３）Ｅｃｏｌｉｈｏｓｔ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＶＥＧＦ１６５ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｐｒｏｄｕｃｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅＨｉｓ－ｂｉｎｄｒｅｓｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＡＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＴｈｅｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄＶＥＧＦ１６５ｗａｓｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄｂｙｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒＮｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１ａｎｄｃｏｕｌｄｏｂｓｔｒｕｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１ｉｎｃｅｌｌｃｕｒｆａｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｐＥＴ３２ａ／ｈｕｍａｎＶＥＧＦ１６５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ａｎｄｐｒｏｄｕｃｅｄａｌｏｔｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＶＥＧＦ１６５．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＶＥＧＦ；ＰＥＴ３２ａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ；Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１［ＡｃｔａＵｎｉｖＭｅｄＮａｎｊｉｎｇ，２００８，２８（０１）：０３３－０３６］血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）是调节机体血管形成的重要因子，它对各类神经细胞具有直接的调节作用。

单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基和试剂(一)单核细胞增生李斯特氏菌（LM）是一种由李斯特氏菌属（Listeria）引起的感染性疾病，该疾病主要感染免疫功能低下人群，通常会导致败血症和脑膜炎等严重并发症，严重威胁人类健康。

因此，开发出一种快速、敏感、高效的LM检验培养基和试剂至关重要，这可以加速LM 的检测和诊断，有效地减少疾病的传播。

一. 检验培养基1. 构成成分：单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基是由肉汤、肉汤胰蛋白胨、乳糖、黄曲霉素、普鲁兰甲酸和酵母提取物等组成的。

2. 作用：肉汤是一种富含氮源和其他必需营养成分的培养基，在培养微生物中发挥着重要的作用。

肉汤胰蛋白胨是一种蛋白质水解物，可为细菌提供营养和生长因子，促进其繁殖。

乳糖则是一种碳源，能够促进细胞的代谢和繁殖。

黄曲霉素作为一种广谱抗生素，可以有效地抑制杂菌的生长。

普鲁兰甲酸和酵母提取物则可以用来增加LM在培养基上的特异性和灵敏度。

3. 优点：单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基在培养LM时具有快速、敏感、特异性好等优点，可以大大缩短LM的检测时间，确保病菌的检测率。

二. 检验试剂1. 依赖性及非依赖性试剂：检验试剂可分为依赖和非依赖试剂。

依赖试剂需要依赖细菌代谢产物或生长结果的变化来作出结果，如葡萄糖酶试剂。

而非依赖试剂则不需要依赖于细菌代谢的结果，如反应纸片试剂。

2. LM检测常用试剂：LM检测常用试剂包括气体生成剂试剂和反应纸片试剂。

前者是一种单元试剂，含有半胱氨酸脱氨酶和甲酸氢化酶等催化剂，当培养基内细菌产生气体时，该试剂会发生颜色变化，表示LM检测阳性。

而反应纸片试剂则能够迅速地检测LM生长的结果，并呈现出明显的颜色变化。

这种试剂具有使用方便、结果稳定等优点。

3. 优点：LM检验试剂具有便于使用、结果稳定和灵敏度高等特点，可以有效地加速LM的检测和诊断，从而避免其传播和蔓延。

结论：单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基和试剂是一对极为重要的检测手段，在LM的检测过程中发挥着至关重要的作用。

单核细胞增生性李斯特氏菌tatD基因缺失对小鼠毒力和肠道菌群的影响牛俊辉;李琦;毛福超;钱满;贾艳艳;丁轲;张春杰;程相朝;廖成水【期刊名称】《浙江农林大学学报》【年(卷),期】2024(41)1【摘要】【目的】探究单核细胞增生性李斯特氏菌Listeria monocytogenes tatD基因缺失对小鼠Mus musculus毒力和肠道菌群的影响,为tatD在单核细胞增生性李斯特氏菌与宿主互作中的作用及减毒疫苗研究提供参考。

【方法】采用Bliss法将亲本菌株(LM10403s)、缺失菌株(LM10403sΔtatD)和互补菌株(LM10403sCΔtatD)口服感染小鼠,确定菌株对小鼠的半数致死量(LD_(50))。

LM10403sΔtatD以1.00×105 CFU口服免疫小鼠观察其免疫保护效果。

将40只6周龄雌鼠随机平均分为对照即磷酸缓冲盐溶液组(PBS)、LM10403s组、LM10403sΔtatD组和L M10403sCΔtatD组,PBS组小鼠灌胃200μL无菌PBS,实验组分别灌胃200μL含1.00×106 CFU的菌液。

灌胃24 h后剖杀各组小鼠,收集肠道内容物,采用Illumina Hiseq测序技术测定各处理小鼠盲肠样品微生物16S rRNA V3-V4区序列,并比较分析其微生物群落结构、多样性和信号通路富集。

【结果】LM10403sΔtatD的LD_(50)为8.11×10^(7) CFU,毒力低于LM10403s。

同时LM10403sΔtatD口服免疫小鼠后对单核细胞增生性李斯特氏菌亲本菌株的攻毒能提供80%保护率。

Chao1和Observed species指数显示:PBS与LM10403sΔtatD处理组差异不显著,但LM10403s组和LM10403sCΔtatD处理组相比于PBS处理组显著下降(P<0.05)。

在门水平上,LM10403sΔtatD处理组的厚壁菌门Firmicutes相对丰度高于LM10403s和LM10403sCΔtatD处理组,而在属水平上,乳杆菌属Lactobacillus相对丰度高于LM10403s和LM10403sCΔtatD 处理组。

产单核细胞李斯特菌减毒候选菌株分子生物学特性研究殷月兰;焦新安;许海燕;焦红梅;潘志明;黄金林【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2006(022)006【摘要】目的为了确定用于减毒的产单核细胞李斯特菌菌株,对初筛入选的血清型为1/2a菌株Lm1、Lm2、Lm3和Lm4的分子生物学特性进行了比较研究.方法利用PCR技术均成功地扩增出4株菌株的hly基因及actA和plcB基因片段.以LD50的测定试验作为菌株毒力指征,对4株菌株的毒力进行了测定.结果 4株菌株均为强毒菌株,其中菌株Lm4的毒力最强,用BALB/c小鼠测得的LD50为1.47×104CFU.结论确定以Lm4作为候选菌株.【总页数】4页(P514-517)【作者】殷月兰;焦新安;许海燕;焦红梅;潘志明;黄金林【作者单位】扬州大学生物科学与技术学院,扬州,225009;扬州大学生物科学与技术学院,扬州,225009;扬州大学生物科学与技术学院,扬州,225009;扬州大学生物科学与技术学院,扬州,225009;扬州大学生物科学与技术学院,扬州,225009;扬州大学生物科学与技术学院,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.构建携带幽门螺杆菌oipA核酸的减毒沙门重组菌株及其免疫保护作用的初步研究 [J], 林妙端;陈建森;佘菲菲;陈豪2.以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体构建幽门螺杆菌疫苗候选株的实验研究 [J], 朱森林;陈Min湖;等3.鸡白痢沙门菌减毒候选疫苗株的环境应激评价及主要生物学特性测定 [J], 王艳琳;满成连;冯政;陈素娟;秦涛;彭大新4.1株nsp2蛋白缺失32个氨基酸的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗候选株减毒及免疫原性分析 [J], Lu W H;吴艳5.减毒流感病毒A/California/07/2009ca疫苗候选株在雪貂上的保护性研究 [J], 段跃强;李晓楠;曹东;魏澍;杨鹏辉;邢丽;王希良;李培锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。