下载文档原格式
人脐血间充质干细胞治疗肝纤维化的研究进展【中图分类号】r329 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）13-0068-02研究发现，具多向分化潜能的间充质干细胞（mesenchymal stem cells，mscs），脐带间充质干细胞具有无限增殖和多项分化潜能，可以向肝细胞分化，能在体外自我增殖，并可以定向分化为内、中、外3 个胚层来源的多种细胞，如骨、软骨、脂肪、神经及类肝细胞等，有望用于肝脏疾病的治疗。
脐带来源广泛，无伦理道德方面的争议。
如果能够利用易于获得的mscs在体内外定向分化为肝前体细胞，则可做为肝细胞移植的一个主要来源。
不过脐血中的间充质干细胞含量很少，如何分离纯化？如何使其较长时间保持干细胞特性？如何诱导其向肝细胞分化？据研究表明，人脐血间充质干细胞能够贴壁生长，而体外培养的贴壁细胞是一个异质细胞群，可能含有多种细胞成分。
一般呈现类纤维细胞形态，并可分裂增生，且同时具有间皮细胞标志的贴壁细胞，如cd44+ 细胞，可以初步判断为是mscs。
之前，报道hucmscs可采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离获得，并可冷冻保存；复苏后在肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4 的联合诱导下，能定向分化为表达ck8&18，并合成白蛋白和糖原的类肝细胞，类肝细胞可能具有诱导人脐血间充质干细胞向肝系细胞定向分化的作用。
脐血中存在mscs， ucbmsc 形态与mscs相似，倍增时间为48 h ，传代后形态基本无变化； ucbms c 不表达cd34及cd45，强表达cd44及cd166 ，与mscs的表面抗原特性一致，是脐血中区别于造血干细胞的一群处于未分化状态的非定向干祖细胞。
本研究先通过对hucmscs 的体外培养，对hucmscs进行纯化、扩增和鉴定；初步掌握hucmscs分离、培养及冻存的技术和方法，探索有效诱导hucmscs 分化为肝前体细胞的途径；然后，将诱导和未诱导的hucmscs在体外与人肝星状细胞（hsc）共培养，为下一步研究其在体内通过不同途径移植到肝纤维化鼠体内，以观察其对肝功能的修复情况及对肝纤维化进程的影响奠定基础。
人间充质干细胞团体标准
一、术语和定义
1.人间充质干细胞（MSC）：一种成体干细胞，具有多向分化潜能，可分化
为脂肪、骨、软骨等细胞，并具有免疫调节功能。
2.细胞来源：MSC可从多种组织中获取，包括骨髓、脂肪、脐带血等。
3.细胞制备：通过适当的分离、培养和扩增技术，将原始组织中的MSC制备
成可用于治疗的细胞。
4.细胞表型鉴定：通过免疫表型分析技术，对MSC的表面标记进行检测，以
确定其身份和纯度。
5.细胞功能检测：对MSC的功能进行检测，包括增殖能力、分化能力、免疫
调节能力等。
6.细胞存储与运输：通过适当的存储和运输条件，保证MSC在存储和运输过
程中的活性和稳定性。
7.细胞应用指导：根据患者的具体情况和治疗需求，为医生提供MSC应用的
指导建议。
8.安全管理：制定安全管理措施，确保MSC制备和使用过程中的安全性。
9.质量管理：建立质量控制体系，确保MSC的质量和有效性。
10.标识、记录与档案管理：对MSC的制备、存储和使用过程进行记录和档案
管理，确保可追溯性。
11.培训与资质要求：对从事MSC相关工作的人员进行培训和资质认证，确保
其具备必要的专业知识和技能。
12.伦理与合规性考虑：在MSC的制备、使用和研究中遵循伦理原则和相关法
律法规的规定。
脐带血间充质干细胞体外分离、纯化及培养陈 镭1,惠国桢2,栾文忠1,苗宗宁3,王 玲3,陆 华3,吴智远2,芦 奕2(1.天津医科大学,天津,300070; 2.江苏省无锡市第三人民医院细胞实验室,江苏无锡,214019;3.苏大学附属第一医院神经外科,江苏苏州,215006)摘 要:目的 研究脐带血(HUCB)中含有的间充质干细胞(M S Cs)体外分离、纯化及培养条件,探究其作为种子细胞应用于实验和临床的可行性。
方法 无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的M esen cult T M 作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层,用流式细胞仪检测M SCs 表面抗原。
结果 来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞,间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达M SCs 相关的抗原(CD 29、CD 44、CD 166),但不表达造血细胞抗原(CD 34、CD 45),这与源于骨髓的M SCs 一致。
结论 脐带血来源的M SCs 能在体外培养、扩增,而用于满足实验和临床的需要。
关键词:脐带血;间充质干细胞;体外培养中图分类号:R 329 2 文献标识码:A 文章编号:1672 2353(2004)01 0012 03THE ISOLATION PURIFICATION ANDCULTURE OF HUCA MSCsCHEN Lei,HUI Guo zen,RUAN Wen zong,MIAO Zong ning,WANG Ling,LU HUA,W U Zhi yuan,LU Li(1.T ianj in M edical Univer sity ,T ianj in,300070;2.Cell Dep ar tment,T hir d H osp ital of W ux i ,W ux i ,Jiangsu ,2140001;3.Dep ar tment of Neurosur gery ,First A f f iliated H osp ital of Suz houUniversity ,Suz hou,Jiangsu ,215006)ABSTRAC T Objective:To investig ate the isolation,purification and culture of hum an umbilical cord blood(HUCB)mesenchymal stem cells(M SCs)in vitro,and to observe the feasibility of using M SCs as seed cells in experiment and clinic.Methods:HUCB w ere collected from full term deliveries scheduled for cesarean section,all specimens w as obtained sterilely w ith preservative free heparin,the cord blood mononuclear cell w as isolated by lymphocyte separation medium,and puri fied and culture with M esencult T M medium and acidic environment to produce adherent layer,the surface antig en ex pression of MSCs was detected by flow cytometry.Results:The UCB derived mononuclear cells,when set in culture,gave rise to adherent cells,w hich ex hibited either an osteo clast or mesenchym al like phenoty pe,cells w ith the M SCs displayed a fibroblast like morpholog y and ex pressed several MSCs related antigens (CD 29,CD 44,CD 166),but did not ex press haematopoi etic cells antigens(CD 34,CD 45),which w as identical to human bone marrow derived M SCs.C on clusion:M SCs in H UCB can culture and expand in vitro,which could be regarded as an alternative source of MSCs for experimental and clinical needs.KEY WORDS umbilical cord blood;mesenchymal stem cells;culture in v itro脐带血(human umbilical cord blood,HUCB)是胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液,含有丰富的干细胞和祖细胞,其主要包含造血干细胞和间充质干细胞(mesenchy mal stem收稿日期:2003-12-16基金项目:国家自然科学基金资助项目(30271325)、江苏省自然科学基金资助项目(BK2001170)作者简介:陈镭(1965-),男,天津市人,在读博士研究生。
临床研究用人间充质干细胞质量评价一、引言人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。
在众多疾病的治疗中，MSCs 都展现出了巨大的潜力。
然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。
本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。
二、MSCs的质量评价标准1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。
纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。
2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。
3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。
因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。
4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。
例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。
同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。
三、MSCs质量评价的方法1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。
2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。
3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs 的纯度和活性。
4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。
5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。
6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。
四、结论人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。
通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。
脐带间充质干细胞脐带间充质干细胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。
目录1概念2优势3分离培养4用途5干细胞研究▪期刊简介▪研究对象▪研究内容1概念脐带间充质干细胞是以人脐带血血清为主体的培养体系的脐带间充质干细胞培养扩增的方法：流式细胞仪检测结果显示，贴壁细胞均表达CD44、CD29，低表达CD106，不表达造血细胞表型CD14、CD34、CD45和内皮细胞表型CD31，也不表达HLA-DR：细胞倍增时间为30h，细胞周期分析表明，G0～G1期和+G2+M期所占比例分别为78.84%和11.16%。
结论：应用灭活脐带血清培养体系可成功扩增人脐带间充质干细胞，培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性，为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据。
2优势脐带间充质干细胞（MSCs）具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。
它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。
有报道从人脐带中分离出MSCs，且细胞含量、增殖能力优于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低[1]，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。
干细胞的培养体系主要应用含动物血清（如胎牛血清）的培养基，在此种环境下生长的干细胞，其内部结构会发生何种变化尚未可知，为避免含动物血清培养中病毒等病原体污染和异种血清所致的过敏反应，课题组进行了以人脐带血血清为主体的培养体系体外培养扩增脐带间充质干细胞的实验研究。
以探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养临床组织工程用干细胞的可行性。
同时研究脐带间充质干细胞形态学、生长特性、细胞周期、免疫表型等特性，旨在建立脐带间充质干细胞的富集方法，为建立脐带间充质干细胞库和临床应用提供有力的理论依据。
[2]3分离培养脐带间充质干细胞的获取主要有组织块贴壁法与酶消化法，由于酶对细胞的损伤较大，且细胞得率较低，费用昂贵，因此大多数实验室采取了组织块贴壁法进行培养。
233CARCINO GENESIS ，TERATO GENESIS &MUTA GENESIS脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景丁赛，张红霞，朱海英*(海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室，上海200433)收稿日期：2021-11-21；修订日期：2022-05-13基金项目：国家自然科学基金(32171387)作者信息：丁赛，E-mail ：。
*通信作者，朱海英，E-mail ：【摘要】间充质干细胞(MSCs)的来源非常广泛。
虽然各种组织来源的MSCs 生物学特性不尽相同，但在标准培养条件下该类细胞均可以贴壁生长；细胞群体中有95%以上的细胞表达典型的间充质标记分子，如CD73、CD90和CD105，但缺乏造血标记分子CD14、CD19、CD34、CD45和CD79a 的表达；特别是均具有分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞的能力。
这些性质是国际细胞治疗协会给出的定义该类细胞的最低标准。
脐带间充质干细胞是指来源于新生儿脐带组织中的多能干细胞。
目前来看，从脐带不同解剖学部位(区室)获得的MSCs 的生物学性质也存在差异，其中从脐带华通氏胶中分离获得的华通氏胶间充质干细胞，在增殖能力、分化潜能、免疫调节能力等方面均明显优于其他区室来源的间充质干细胞，是用于组织器官损伤修复及免疫调节的一种理想的“种子”细胞，被认为具有更好的临床应用前景。
本文围绕近年来华通氏胶间充质干细胞的分离建系、增殖特性、分化潜能以及临床应用方面的研究进展进行了综述，其中重点介绍了化学诱导分化方案的建立和优化，认为与通过遗传改变诱导重编程方法相比，化学诱导分化方法具有更好的临床应用潜力。
【关键词】脐带；华通氏胶；间充质干细胞；分化潜能；分离；增殖特性中图分类号：R329.2+8文献标志码：A文章编号：1004-616X(2022)03-0233-04doi ：10.3969/j.issn.1004-616x.2022.03.011间充质干细胞最早在骨髓中被发现和鉴定，随后在人体胚胎及成体的多种组织中被陆续鉴定出来，这些组织主要包括成体骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带和脐带血等。
复旦学报(医学版)Fudan Univ J Med Sci2007Nov ,34(6)人类脐带血间充质干细胞的培养及鉴定马晓生1 姜建元1△ 吕飞舟1 李小康2(1复旦大学附属华山医院骨科 上海 200040;2日本国立成育医疗中心研究所移植免疫研究室 日本 东京 157-8535)【摘要】 目的 对人类脐带血中的有核细胞进行分离培养及鉴定,观察能否得到间充质干细胞。
方法 抽取人类脐带静脉血,进行细胞分离和培养,并进行荧光激活细胞分析。
结果 脐带血中间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;流式细胞术鉴定结果表明这种细胞能表达CD29、CD44、CD90、CD95、CD105、CD166以及M HC Ⅰ(组织相容性抗原复合体Ⅰ),但不能表达CD14、CD34、CD40、CD45、CD80、CD86、CD117、CD152以及M HC Ⅱ(组织相容性抗原复合体Ⅱ);并且具有分化成骨细胞和脂肪细胞的潜能。
结论 可以从人类脐带血中成功分离培养得到间充质干细胞。
【关键词】 人脐带血; 间充质干细胞; 成骨细胞; 脂肪细胞【中图分类号】 R392.12 【文献标识码】 B 国家自然科学基金项目(333);上海市卫生局基金项目 △通讯作者 2x 83@Cultiva tion a nd identif ica tion of mesenchyma l stem cells f r omhuman umbilical cor d bloodMA Xiao 2Sheng 1,J IAN G Jia n 2Y uan 1△,L V Fei 2Zhou 1,L I X iao 2Kang 2(1D epa rtment of Or thopaedics ,H uashan H o s pita l ,Fudan Univ e rsit y ,S hanghai 200040,China ;2L abor atory of T ra nsplantation Immunity ,J a pa nese Chengyu Resea rch Institute ,Tokyo 157-8535,J a pa n )【Abstract 】 Purpose To cultivat e and identify mesenchymal st em cells (MSCs)fro m h uman umbilicalcord blood. Methods Hu man umbilical cord blood was draw n o ut ,t hen MSCs was sep arat ed and cultivated.They were identified by FA C 2Scan. R esul ts MSCs were fo und in human u mbilical cord bloo d wit h fibro bla st 2li ke ap pearin g.Flow Cyto metry result s showed t hat t hey exp ressed CD29,C D44,CD90,CD95,CD105,CD166and M HC class Ⅰ,but the exp ressio n of CD14,CD34,CD40,C D45,CD80,CD86,CD117,CD152and MH C class Ⅱwas negative.These cell s had t he p otential of differentiatio n i nto o steo blast s and fat cell s. C onclusion s MSCs can be separat ed and culti vated fro m human umbilical cord bloo d.【Key words 】 hu man umbilical co rd blood ; mesenchymal st em cell s ; o st eoblast s ; fat cell s 在骨髓中存在间充质干细胞和造血干细胞早已是被研究者广泛接受的事实。
阿魏酸对间充质干细胞增殖、分泌干细胞因子和成管分化的影响作者：肖慧彭林娟熊武白雪谭梅鑫李叶兰杨莹朱晨鸿邹晓玲来源：《湖南中医药大学学报》2021年第08期〔摘要〕目的探討阿魏酸（ferulic acid， FA）对间充质干细胞（mesenchymal stem cells， MSCs）增殖、分泌干细胞因子（stem cell factor， SCF）和定向内皮细胞成管分化的影响。
方法取足月健康新生儿脐带血10 mL，采用密度梯度离心法得到单个细胞，并鉴定人脐带血间充质干细胞（human umbilical cord blood mesenchymal stem cells， hUCBMSCs）分化能力。
将hUCBMSCs分别用不同浓度梯度的FA（0、1、2、4、8、16 mg/L）干预以确定FA促hUCBMSCs增殖的最佳浓度。
取hUCBMSCs随机分为实验组与对照组，实验组用最佳浓度FA干预，对照组用等体积PBS液处理。
分别采用CCK-8细胞增殖试验、Matrigel体外成管试验及ELISA法检测两组hUCBMSCs增殖、成管及分泌SCF的能力;采用免疫荧光法检测hUCBMSCs向内皮细胞分化后CD31、vWF的表达情况。
结果（1）hUCBMSCs能成功诱导分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞;（2）FA促进hUCBMSCs增殖的最佳浓度为2 mg/L;（3）与对照组相比，实验组hUCBMSCs增殖、成管及分泌SCF能力显著增强，且FA诱导成管分化后CD31和vWF的表达明显增多（P<0.05）。
结论 FA能促进hUCBMSCs增殖及分泌SCF，同时能诱导hUCBMSCs成管分化，进一步证实FA具有促进血管新生的潜能。
〔关键词〕阿魏酸;间充质干细胞;细胞增殖;干细胞因子;成管分化;血管新生〔中图分类号〕R285.5 〔文献标志码〕A 〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.08.005Effects of Ferulic Acid on the Proliferation， Stem Cell Factor Secretion and TubeDifferentiation of Mesenchymal Stem CellsXIAO Hui1， PENG Linjuan1， XIONG Wu2， BAI Xue1， TAN Meixin1， LI Yelan1，YANG Ying1， ZHU Chenhong1， ZOU Xiaoling2*（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007，China）〔Abstract〕 Objective To study the effects of ferulic acid （FA） on the proliferation， the secretion of stem cell factor （SCF） and the differentiation of targeted endothelial cells by mesenchymal stem cells （MSCs）. Methods Single nuclear cells were isolated by density gradient centrifugation from cord blood of full-term healthy newborns， and the differentiation ability of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells （hUCBMSCs） were identified. hUCBMSCs were intervened with FA with different concentration gradients （0， 1， 2， 4， 8， 16 mg/L） to determine the optimal concentration of FA to promote the proliferation of hUCBMSCs. hUCBMSCs were randomly divided into the experimental group and the control group. The experimental group was intervened with the best concentration of FA， the control group was treated with PBS solution of equal volume. CCK-8 cell proliferation test， Matrigel in vitro tube test and ELISA method were used to detect the proliferation， tube formation and SCF secretion ability of the two groups of hUCBMSCs; immunofluorescence method was used to detect the expression of CD31 and vWF after hUCBMSCs differentiated into endothelial cells. Results （1） hUCBMSCs can successfully induce differentiation into bone cells， chondrocytes and adipocytes. （2） The optimal concentration of FA to promote the proliferation of hUCBMSCs is 2 mg/L. （3） Compared with the control group， the ability of hUCBMSCs in the experimental group to proliferate， form tubes and secrete SCF was significantly enhanced， and the expression of CD31 and vWF increased significantly after FA induced tube differentiation （P<0.05）. Conclusion FA can promote the proliferation， the secretion of SCF from hUCBMSCs， and induce the differentiation of hUCBMSCs into tubes， further confirming that FA has the potential to promote angiogenesis.〔Keywords〕 ferulic acid; mesenchymal stem cell; cell proliferation; stem cell factor; tube differentiation; angiogenesis间充质干细胞（mesenchymal stem cells， MSCs）是一类具有自我复制、更新和多向分化潜能的多功能细胞，主要来源于中胚层，可在骨髓、外周血、脐血、脂肪组织中分离提取[1]。
脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定概述脐带血间充质干细胞（Wharton’s jelly mesenchymal stem cells, WJ-MSCs）是一类来源于脐带的干细胞。
WJ-MSCs具有较强的增殖能力、多向分化潜能、免疫调节功能等，是目前研究领域中备受关注的干细胞类型之一。
在该文档中，我们将介绍如何从脐带血样中分离出WJ-MSCs，并进行相关的细胞培养和鉴定。
分离过程脐带血样获取首先需要从人体获得脐带血样。
脐带血样一般可以在婴儿出生后通过脐带穿刺等方式获取。
获取脐带血样需要得到母亲的同意，并通过相关机构进行规范化处理。
分离WJ-MSCs脐带血样获取后，需要将其中的WJ-MSCs进行分离。
具体分离步骤如下： 1.将脐带血样转移至离心管中； 2. 加入相同体积的PBS，并轻轻混合； 3. 通过低速离心分离脐带血样中的血细胞等成分； 4. 取下沉后的WJ组织，加入胶原酶等酶类消化物进行消化，离心分离细胞； 5. 通过细胞培养等方式扩增细胞数量。
细胞培养在分离得到WJ-MSCs之后，需要进行相关的细胞培养。
具体培养步骤如下：1. 将分离得到的WJ-MSCs转移至新的培养皿中； 2. 加入含有10% FBS的DMEM低糖培养基； 3. 定期更换培养基，并记录生长状况。
鉴定方法确定分离的细胞为WJ-MSCs的方法很多，常用的方法如下： #### 形态学鉴定通过显微镜观察细胞形态、吸附能力等，判断细胞是否符合WJ-MSCs的特征。
免疫学鉴定通过使用针对WJ-MSCs标记的分子抗体（如CD73、CD90等）对细胞进行标记，并使用流式细胞仪等方法进行检测。
活力检测通过MTT法、细胞增殖实验等，检测WJ-MSCs是否具备较强的增殖能力。
多向分化鉴定通过对WJ-MSCs进行分化培养，如脂肪细胞培养、软骨细胞培养等，检测WJ-MSCs是否显示多向分化的潜能。
结论通过脐带血样的分离，可以获得WJ-MSCs，并通过相关的培养和鉴定方法，确定其为WJ-MSCs，并进一步应用于生物医学实验中，具有潜在的临床应用前景。
脐带血干细胞的生物学特性及临床应用进展脐带血作为干细胞的主要来源,已经证实其中含有大量造血干细胞、丰富的间充质干细胞。
异体排斥反应小，受病毒感染的风险低等，加之间充质干细胞的免疫调节及加速造血恢复等影响,脐带血的移植成功率较高。
目前脐带血干细胞移植已经在恶性肿瘤、免疫缺陷病、心脏病、神经系统损伤、组织器官修復、糖尿病、血管疾病等的治疗上显示巨大的潜力与优势。
标签：脐带血干细胞；临床移植脐带血干细胞是一类具有多向分化潜能的原始祖细胞,具备自我更新和增殖的能力,在特定条件诱导下可以分化为不同细胞,逐渐作为临床组织工程的来源细胞。
同时也是某些免疫缺陷性疾病，代谢性疾病及部分实体肿瘤的有效治疗手段[1]。
本文从脐血干细胞的生物学特性、与骨髓干细胞的特性比较以及临床应用等方面做一综述。
1脐带血干细胞的概念脐带血是指脐带内连同胎盘近胎儿一侧血管内的血液，目前对提供脐带血的产妇和胎儿有严格的筛选标准，整个脐带血的采集、分离、冻存等技术都形成了相关的国家标准[2]。
昆明医科大学第二附属医院消化内科杨婧2 脐带血干细胞的生物学特性2.1造血干细胞具有高度自我更新能力造血干细胞是尚未分化的原始细胞,在体内数量极少。
99.5%以上的造血干细胞处于静止状态的G0期,不进行DNA 合成和有丝分裂。
正常情况下，造血干细胞在不断产生造血祖细胞的同时，却又使自己的数量保持不变，自身特性也不发生变化，这就是造血干细胞高度的自我更新和自我维持的特性。
2.2造血干细胞具有很强的分化能力造血干细胞在不同的生理条件下，可以向着淋巴细胞或髓系细胞的方向分化，而髓系造血干细胞，又可以向红细胞，粒细胞及巨核-血小板分化。
脐带血中含有大量的造血干细胞、丰富的间充质干细胞，脐带血干细胞具有自我更新及多向分化潜能,在特定因素的诱导下,可以向各组织和器官分化，如软骨细胞系，脂肪细胞系，成骨细胞系，骨髓组织及血液组成成分等。
３脐带血干细胞与自体骨髓干细胞相比优缺点①脐带血来源丰富、采集方便、安全，收集脐带血对产妇及新生儿没有任何危害及损伤，并易于收集、保存；但骨髓采集及利用细胞因子动员外周血获取干细胞都会给捐献者或患者本人带来一定的风险。
间充质干细胞培养步骤一、间充质干细胞的简单介绍间充质干细胞可是超级神奇的哟。
它们就像是身体里的小工匠，可以分化成好多不同类型的细胞呢，在医学研究和治疗领域那可是大明星。
所以学会培养它们是一件超酷的事情。
二、培养间充质干细胞的前期准备1. 细胞来源我们得先有间充质干细胞的来源呀。
可以从骨髓、脂肪组织或者脐带血这些地方获取呢。
骨髓就像是一个细胞的大仓库，从这里获取细胞就像从仓库里挑选宝贝一样。
脂肪组织也很棒，它里面的间充质干细胞数量还不少呢。
脐带血里的间充质干细胞就更厉害了，年轻又有活力。
2. 培养设备和试剂我们需要一个超级干净的培养箱，这个培养箱就像是间充质干细胞的小房子，温度、湿度还有二氧化碳浓度都要调好。
就像我们住房子，环境舒服了才开心嘛。
还有培养皿，这是细胞生长的小床，要选质量好的哦。
试剂方面，培养基是必不可少的，这是细胞的食物呢。
血清也很重要，就像给细胞加个营养包。
三、间充质干细胞的具体培养步骤1. 组织处理如果是从骨髓或者脂肪组织获取的细胞，我们要先把组织处理一下。
比如说从骨髓中抽取出来后，要先过滤掉一些杂质，就像淘米把沙子去掉一样。
把组织切成小块，然后用特殊的酶去消化，这样就能把细胞从组织里释放出来啦。
2. 细胞接种把处理好的细胞接种到培养皿里。
这个过程要很小心，就像把小种子种到土里一样。
要控制好细胞的密度，不能太挤也不能太稀。
太挤了细胞就像住在小房子里的人太多，会不舒服；太稀了又会觉得孤单，不利于生长呢。
3. 培养条件设置前面提到的培养箱的温度要设置在37摄氏度左右，这是间充质干细胞最喜欢的温度啦。
湿度一般保持在95%左右，二氧化碳浓度大概是5%。
这些条件就像给细胞创造了一个温馨的小世界。
4. 细胞观察与换液要经常去看看细胞长得怎么样了。
就像照顾小宠物一样，每天都要关心一下。
如果发现培养基变黄了，那就是细胞的“排泄物”太多啦，要及时换液。
换液的时候也要小心，不能把细胞弄伤了。
5. 细胞传代当细胞长满了培养皿，就像小房间住不下了，就要进行传代啦。
脐带血血清分离培养人胎盘间充质干细胞周心涛;赵黎丙;闵新文;陈娇;郎明健【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2015(40)4【摘要】目的：探讨脐带血清（UCBS）分离、培养人胎盘间充质干细胞（PMSCs）的增殖及分化能力。
方法：将 UCBS 处理后用于分离、培养 PMSCs 作为实验组，同体积 FBS 分离、培养 PMSCs 作为对照组，用相差显微镜观察实验组与对照组 PMSCs 的形态、流式细胞仪检测 PMSCs 表面标志、MTT 法检测PMSCs 的增殖能力。
结果：10％ UCBS 的培养液分离纯化的 PMSCs 成梭形、增殖能力强，具有分化为成骨细胞和脂肪细胞的能力，高表达CD29、CD44及CD105，低表达或不表达 CD34、CD45及 HLA-DR；与对照组相比，UCBS 组细胞增殖能力更强。
结论：脐带血清能分离、培养及扩增 PMSCs，培养的 PMSCs 的增殖能力及分化潜能好于 FBS。
%Objective:To investigate the proliferation and differentiation abilities of human placenta mesenchymal stem cells (PMSCs ) isolated and cultured in human umbilical cord blood serum (UCBS).Methods:PMSCs isolated and cultured in UCBS served as experiment group and the same volume PMSCs isolated and cultured in FBS served as the control.PMSCs cell's morphology were ob-served under phase contrast microscope,flow cytometry were used to detected cell surface markers, MTT were used to test cell proliferationactivity.Results:PMSCs isolated and cultured in 10% UCBS were spindle shaped,having high reproductive activity and could be induced toosteoblasts and adipo-cytes,highly expressed CD29,CD44 and CD105,but lowly expressed or didn't express CD34,CD45 and HLA-DR.The proliferation of experiment group was stronger than that of control group.Conclu-sions:UCBS can be used to isolate and culture PMSCs,and the proliferation and differentiation abili-ties of PMSCs in UCBS are better than those in FBS.【总页数】4页(P373-376)【作者】周心涛;赵黎丙;闵新文;陈娇;郎明健【作者单位】湖北医药学院附属东风医院，湖北十堰 442000;湖北医药学院附属东风医院，湖北十堰 442000;湖北医药学院附属东风医院，湖北十堰 442000;湖北医药学院附属东风医院，湖北十堰 442000;湖北医药学院附属东风医院，湖北十堰 442000【正文语种】中文【中图分类】R329.24;R34-33【相关文献】1.人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养的新方法 [J], 唐书生;孙逊沙;吴洁莹;陆琰;陈劲松;李发涛;唐婕;吴韶清2.脐带血血清培养脐带血间充质干细胞对脐带血CD34+细胞的体外扩增作用 [J], 黄望香;旷文勇;李睿娟3.人脐带血清合用胎牛血清培养人脐血间充质干细胞 [J], 王爽;范振海;王钰莹;喻皇飞;刘祖林;胡锡阶;余丽梅4.脐带血清和成人自体血清体外培养人骨髓间充质干细胞的比较 [J], 旷文勇;周新伏;李睿娟;郑敏翠5.人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养方法研究 [J], 陈凤;卿玲;崔璐;王淼;王菲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
全科口腔医学杂志General Journal Of Stomatology2019 年1月 第6卷/第1期V ol.6, No.1 Jan. 2019146人脐带血来源间充质干细胞的成脂分化杨旭芳1，冯 华1，杨云芳2，陈 培1，李福娟3*（牡丹江医学院1.病理生理教研室；2.数学教研室；3.免疫与病原实验室，黑龙江 牡丹江 157011）【摘要】目的 本文利用Ficoll- Hypague 法自人脐带血中分离、培养及扩增出人脐带血来源间充质干细胞（human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells ，hUCBMSCs ）；并对其成脂分化能力进行鉴定。
方法 显微镜下观察各代hUCBMSCs 的形态学特点；利用流式细胞术检测各代hUCBMSCs 免疫学表型；取P3代细胞进行成脂肪分化，镜下观察细胞形态及是否出现脂滴。
结果 体外分离、培养出形态均一的hUCBMSCs ；流式结果显示hUCBMSCs 具有间充质干细胞的免疫学特征，即CD44、CD73、CD105阳性；成脂诱导后4天细胞形态发生变化，分别于诱导后1周、2周胞浆中出现明显脂滴。
结论 成功的从人脐带血中分离培养出了人脐带血来源间充质干细胞，其具有高效的成脂分化能力，未来在整形医学领域种子细胞的研究中将具有重要的意义。
【关键词】人脐带血来源间充质干细胞；成脂分化【中图分类号】R457.7 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8803.2019.1.146.02细胞治疗被认为是当前攻克难治性组织损伤修复的新型疗法[1]。
因为干细胞具备旺盛的增殖及多向分化能力等生物学特征，细胞治疗常常选其作为种子细胞。
常见的可用于细胞移植治疗的干细胞种类为胚胎干细胞、诱导的多潜能干细胞及骨髓、羊水等多种中胚层来源的组织中的间充质干细胞[2-3]。
但胚胎干细胞的来源受限及所面临的伦理学问题，诱导多潜能性干细胞获取的技术方法复杂，成体干细胞（间充质干细胞）则成为了优质的种子细胞来源，同其他来源的间充质干细胞相比，脐带血中间充质干细胞含量丰富，因细胞更为原始、来源无创（源于生产后废弃的脐带）、供体不会受到损伤，患者容易接受、无免疫原性，故不会引起排斥反应、无社会伦理问题等特点[4-5]，上述特点决定了人脐带血来源的间充质干细胞（human umbilical cord blood-derived stem cells ，hUCBMSCs ）较其他成体干细胞更具有临床应用价值，因此，hUCBMSCs 将会成为组织修复、整形治疗中极具优势的种子细胞。
1 材料与方法1.1 材料脐带血来源于附属医院产科。
低糖DMEM(Hyclone ，USA)，10%胎牛血清（Hyclone ，USA ），0.25%胰酶（Invitrogen ），Ficoll-pague 淋巴细胞分离液（华雅再生医学生物工程技术有限公司），抗CD44、CD73及CD105单克隆抗体购于BioLegend 公司。
1.2 方法1.2.1 脐带血标本采集选取我校附属第一医院妇产科足月自然产的健康孕妇，征求其同意，无菌操作获得脐带血50 mL ，轻摇血袋以防凝血，于2小时内送至实验室，4℃冰箱保存，12小时内进行分离培养。
1.2.2 hUCBMSCs 的分离与培养PBS 缓冲液与脐带血按照1:1混匀稀释，再与Ficoll-pague 淋巴细胞分离液（1.077 g/mL ）按1:1的体积将稀释液缓慢加于其上，2000 r/min 低温下离心20分钟，将云雾状的乳自色单核细胞层轻轻吸出。
PBS 洗涤细胞吸出液2次，1000 r/min 离心5分钟，用条件培养基（LG-DMEM 、10%FBS 、100units/mLpenicillin ，100μg/mLstreptomycin ）重悬位于最下层的片状沉淀[9]，调整细胞密度，每毫升约为1×106个，接种于6孔板中，放置于5%CO2、37℃的孵箱内培养，4天后半量换液，之后每隔3天换液一次，待细胞接近融合（长满80～90%）时，0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA 轻轻消化贴壁细胞，按1:3的比例进行传代培养，镜下观察各代次hUCBMSCs 的形态特点。
1.2.3 流式细胞仪检测hUCBMSCs 表面标志0.25%胰酶-0.02%EDTA 消化收集不同代次细胞，每例样本细胞数为2×105个左右；细胞重悬于1mL0.01M PBS 中洗涤2次，1500 r•min-1，10分钟；弃去PBS ，与一抗孵育液（一抗稀释度为1：100）常温下孵育30分钟；0.01M PBS 洗涤2次后，分别与FITC －二抗（稀释度为1：50）4℃避光孵育30分钟；0.01MPBS 洗涤2次后，弃去PBS ，再加入300 μl 0.01M PBS 重悬细胞，用于流式细胞仪分析。
1.2.4 hUCBMSCs 成脂定向分化消化收集细胞，调整细胞密度为1×105•mL-1,接种于24孔板，实验分两组，即非诱导组（对照组）与成脂诱导组，24小时后成脂诱导组换为脂肪诱导培养基[7]（LG-DMEM ，10%FBS ，1μmo•L-1地塞米松，50μmol•L-1吲哚美辛，0.5mmoL•L-13-异丁基-1-甲基黄嘌呤；10 μmoL•L-1胰岛素），每3天更换培养液1次，分别于诱导1和2周后，0.1moL•L-1 PBS 洗涤，4%多聚甲醛固定20分钟，显微镜下观察照相。
2 结 果2.1 hUCBMSCs 的形态学特点倒置显微镜下可见：hUCBMSCs 形态均一，细胞胞体狭长，呈现成纤维细胞样，细胞接近融合时，则呈现鱼群样或漩涡样排列。
2.2 hUCBMSCs 表面标志利用流式细胞术对P3、P6和P10代hUCBMSCs 的免疫学基金项目：黑龙江省卫生厅科研项目（2011-324）；牡丹江医学院科学技术项目研究（2011-02）作者简介：杨旭芳（1974-），女，黑龙江牡丹江人，博士，副教授，主要从事干细胞组织工程学研究通讯作者：李福娟（1979-），女，黑龙江牡丹江人，实验师，硕士，主要从事免疫学和病原生物学研究2019 年1月第6卷/第1期V ol.6, No.1 Jan. 2019全科口腔医学杂志General Journal Of Stomatology147标志进行了动态检测分析，结果可见各代hUCBMSCs均表现为CD44、CD73及CD105阳性，且均在94%以上，见图1。
图1 流式细胞术动态检测表面标志2.3 hUCBMSCs成脂分化hUCBMSCs成脂肪诱导4天后，可见细胞的长梭形外观消失，呈现为类圆形或多边形改变，1周后，泡样小脂滴出现于多数细胞胞浆中，且随诱导时间延长胞浆内脂滴数量增加。
见图2。
图2 hUCBMSCs成脂分化3 讨 论再生医学是一门研究如何促进创伤后组织再生及功能重建的新兴学科，主要通过干细胞治疗与组织工程来维持、修复、再生或改善损伤组织，改善器官功能，当前该研究领域急需要解决的难题之一就是种子细胞的来源问题[6]。
为了能够提供更可靠，具有优势的种子细胞，我们利用密度梯度离心法[7]分离hUCBMSCs。
本实验成功分离获得了的hUCBMSCs，流式细胞术结果可见hUCBMSCs具有典型的间充质干细胞的表面标志，即CD44、CD73与CD105阳性；体外扩增的hUCBMSCs，P10代内均可见间充质干细胞的特异性标志物的表达；P3代hUCBMSCs可高效的定向分化为脂肪细胞。
综上所述，本方法获得的hUCBMSCs纯度高，具备典型的间充质干细胞的生物学特点，未来可成为整形医学领域优质的种子细胞来源。
参考文献[1] 臧丽,程愈,母义明.我国干细胞治疗糖尿病的基础与临床研究[J].中国科学.2018,48(8):909-916.[2] 柯敏霞,纪猛,王皓,等.干细胞模型研究进展及商业化应用的现状[J].中国组织工程研究.2018,22(5):766-773.[3] Gorskaya YF,Dzharullaeva AS,Onsina DS,et al.Counts ofMSC in the Bone Marrow of Young and Old CBA Miceafter a Single Exposure to Osteogenic Stimuli (Curettage,BMP-2 Injection) or Antigens (S. typhimurium AntigenicComplex) and in Heterotopic Bone Marrow Transplants.[J].Bull Exp Biol Med.2017,163(3):365-369.[4] Lee YS,Sah SK,Lee JH,et al.Human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells ameliorate psoriasis-like skin inflammation in mice[J].Biochem BiophysRep.2016,9(1):281-288.[5] E R I C E S A.M e s e n c b y m a l p r o g e n i t o r c e l l si n h u m a n u m b i l i c a l c o r d b l o o d[J].B r JHaematol,2000,109(1):235-242[6] XU-FANG YANG,XU HE,JIAN HE,et al.High efficientisolation and systematic identification of humanadipose-derived mesenchymal stem cells[J].J BiomedSci.2011,18(1):59.[7] 丁冬,闫鑫,李晓亮,等.密度梯度离心联合传代贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞[J].宁夏医学杂志.2017,39(11):977-979.本文编辑：吴 卫以对肝癌患者的化疗，建议首先做药敏试验，以此结果为依据，制定个体化治疗方案。
对不做药敏试验的患者，可优先考虑使用羟基喜树碱、盖诺治疗。
参考文献[1] 单彬彬,杨卫华,郗彦凤,等.耐药基因检测联合三磷酸腺苷-肿瘤体外药敏试验指导肺鳞状细胞癌二线化疗的临床研究[J].肿瘤研究与临床,2016,28(7):447-451.[2] 罗唯师,罗国轩,张阳,等.体外药敏试验指导恶性脑胶质瘤化疗的临床效果及意义[J].吉林医学,2016,34(1):163-164.[3] 周影.八种化疗药物组合对人类宫颈癌细胞体外药物敏感试验研究[D].苏州大学,2015.本文编辑：吴 卫（上接141页）。
